大赛璐 手性分析的近期进展 北京金欧亚科技发展有限公司 北京崇文区左安门内大街 8 号伟图大厦 31 室 PC:161 Tel :1-67136152/67178 Fax :1-6711416/67113925 http://www.jinouya.cn E-mail:china.hplc@163.com 1
手性色谱技术的研发动向 更加广泛 对 1% 的责任和挑战 新型固定相 AY,Z,AZ,IC 固定相粒径越来越精细 柱效越来越高 更加快速 3 微米固定相普通系列 H 系列 3 系列 更加稳定 键合型固定相 IA,IB,IC 2
一 新型固定相的开发及应用 四大金刚 直链淀粉 多糖 纤维素 3
一 新型固定相的开发及应用 4
一 新型固定相的开发及应用 选择性差异 5
一 新型固定相的开发及应用 选择性优势 mv Detector A Ch1:22nm 25 2 15 1 7.129 8.466 H 2 N 5 Hexane/EtH/DEA =94/6/.1 (v/v/v) -5. 2.5 5. 7.5 1. 12.5 15. 17.5 2. min 仅 AY-H 可以分 6
一 新型固定相的开发及应用 阿托伐他汀钙 AD-H D-H mv Detector A Ch1:246nm 5 4 mv Detector A Ch2:256nm 5 4 36.465 3 2 16.352 3 2 28.527 1 19.184 1. 5. 1. 15. 2. min 1 2 3 4 min 7
一 新型固定相的开发及应用 阿托伐他汀钙 Z-H 15 125 mv Detector A Ch2:254nm 6.851 12.753 1 75 5 25. 5. 1. 15. 2. min 8
一 新型固定相的开发及应用 H/I/DEA=7/3/.1 ADH mv Detector A Ch1:27nm 5 NH 4 3 H 2 N S N R 2 1. 2.5 5. 7.5 1. 12.5 min 9
一 新型固定相的开发及应用 D-H J-H mv Detector A Ch1:27nm 1 75 5 25 mv 125 Detector A Ch1:27nm 1 75 5 25. 5. 1. 15. 2. 25. min. 5. 1. 15. 2. 25. min 1
一 新型固定相的开发及应用 AY-H Z-H mv 125 Detector A Ch1:27nm 1 75 1 2.7 4 1 6.8 5 5 mv Detector A Ch1:27nm 1 75 1 2.7 1 5 1 6.6 8 4 5 25 5 25. 5. 1. 15. 2. 25. min. 5. 1. 15. 2. 25. min 11
Compound G 结构未知, 含苯基 羟基 羧基 酰胺基 Hexane / IPA / TFA=7/3/.1 IA Z-H 4 一 新型固定相的开发及应用 mv Detector A Ch1:22nm 5 2.654 2.852 mv Detector A Ch1:22nm 1 4.3 7 8 3 2 75 5 3.8 4 2 1 25. 2.5 5. 7.5 1. min. 5. 1. 15. 2. 25. min 12
Compound G 结构未知, 含苯基 羟基 羧基 酰胺基 Hexane / IPA / TFA=7/3/.1 AD-H AY-H 6 5 一 新型固定相的开发及应用 7 mv Detector A Ch1:22nm 2.5 9 3 2.9 2 9 1 mv Detector A Ch1:22nm 75 3.817 4 3 2 1 5 25 15.61. 2.5 5. 7.5 1. min. 5. 1. 15. 2. 25. min 13
一 新型固定相的开发及应用 选择性优势 AY-H Hexane/IPA/DEA 125 1 mv Detector A Ch2:22nm 7.2 9 1 8.2 3 1 98/2/.1 75 5 25-25. 2.5 5. 7.5 1. min 14
一 新型固定相的开发及应用 选择性优势 苯甲酸仲丁酯 Hexane/IPA=99/1 单峰 AY-H EtH/MeH=95/5 分离度 1.8 mv Detector A Ch1:254nm 5 9.78 1.443 25. 2.5 5. 7.5 1. 12.5 min 15
一 新型固定相的开发及应用 选择性优势 阿替洛尔 EtH/DEA=1/.1 16
一 新型固定相的开发及应用 Z-H (B-3:EtH/DEA=1/.1; B-4:MeH/DEA=1/.1 ) 苄氟塞嗪阿托品达舒平 17
一 新型固定相的开发及应用 出峰顺序差异 18
一 新型固定相的开发及应用 AY-H 特性 (IPA 损伤 ETH 修复 ) 19
手性色谱技术的研发动向 更加广泛 对 1% 的责任和挑战 新型固定相 AY,Z,AZ,IC 固定相粒径越来越精细 柱效越来越高 更加快速 3 微米固定相普通系列 H 系列 3 系列 更加稳定 键合型固定相 IA,IB,IC 2
二 3 微米固定相 : 快速分析 效率更高 柱效更高 流速更大 适用于快速分析 可承受柱压更高 21
二 3 微米固定相 : 快速分析 效率更高 柱效更高 22
二 3 微米固定相 : 快速分析 效率更高 柱效更高 MP: hexane/2-propanol 9/1 T= 25 C Column size: 4.6x15mm trans-stilbene oxide 26 Peak-1 4 Peak-2 24 Z-H Z-H 22 35 2 3 HETP (µm) 18 16 14 12 Z-3 HETP (µm) 25 2 Z-3 1 15 8 6..5 1. 1.5 2. 2.5 3. 3.5 µ(mm/s) 1.5 1. 1.5 2. 2.5 3. 3.5 µ(mm/s) 23
二 3 微米固定相 : 快速分析 效率更高 柱效更高, 分离度更大 化合物 A Hexane/IPA/HAc=1/1/.1(v/v/v) D-3 (R=2.1) D-H (R=1.3) mv Detector A Ch1:22nm mv 125 Detector A Ch1:22nm 15 13.976 15.178 1 9.852 1.647 1 75 5 5 25-5 5. 7.5 1. 12.5 15. 17.5 min 5. 7.5 1. 12.5 15. 17.5 min 24
二 3 微米固定相 : 快速分析 效率更高 柱效更高 相同保留时间, 分离度更大 N NH CHIRALCEL Z-H 2.3 2.6 Rs=3.8 Mephenytoin 1 2 3 min ACN 1.ml/min, 25 C UV 23nm 4.6x15mm CHIRALCEL Z-3 2.2 2.6 Rs=4.61 1 2 3 25 min
二 3 微米固定相 : 快速分析 效率更高 柱效更高, 分离度更大 Rs=1.68 S CH 3 CH 3 Methyl p-tolyl sulfonate MeH 1.ml/min 25 C, 254nm 4.6x15mm CHIRALCEL Z-H 1 2 3 CHIRALCEL Z-3 min Rs=2.42 1 2 3 min 26
二 3 微米固定相 : 快速分析 效率更高 流速更大 27
二 3 微米固定相 : 快速分析 效率更高 流速更大 28
二 3 微米固定相 : 快速分析 效率更高 快速分析 29
二 3 微米固定相 : 快速分析 效率更高 快速分析 3
二 3 微米固定相 : 快速分析 效率更高 快速分析 (Z-3) 6-Hydroxy-2,5,7,8-tetramethyl Chromane-2-carboxylic acid H CH Thalidomide N N H CH 3 CH 3 N Laudanosine Me Me 12 24 36 48 6 Retention time (second) 12 24 36 48 6 Retention time (second) 12 24 36 48 6 Retention time (second) Hexane-EtH 9:1 (+.1% TFA) Flow rate: 3. ml/min ACN Flow rate: 4. ml/min ACN (+.1% DEA) Flow rate: 3. ml/min 31
二 3 微米固定相 : 快速分析 效率更高 可承受柱压更高 Pressure ratio Z-3/Z-H: 1.58 14 12 Z-3 Hexane-2-propanol 9:1 T= 25 C Column size: 4.6x15mm Column back pressure bar) 1 8 6 4 2 Z-H..5 1. 1.5 2. 2.5 3. 3.5 Flow rate (ml/min) 32
手性色谱技术的研发动向 更加广泛 对 1% 的责任和挑战 新型固定相 AY,Z,AZ,IC 固定相粒径越来越精细 柱效越来越高 更加快速 3 微米固定相普通系列 H 系列 3 系列 更加稳定 键合型固定相 IA,IB,IC 33
三 键合型固定相 : 更稳定 IA: 直链淀粉 - 三 (3,5 二甲苯基氨基甲酸酯 ) IB: 纤维素 - 三 (3,5 二甲苯基氨基甲酸酯 ) IC: 纤维素 - 三 (3,5- 二氯苯基氨基甲酸酯 ) 34
三 键合型固定相 : 更稳定 流动相范围增大, 成功分离把握增加 普通流动相 : 正己烷 异丙醇 乙醇特殊流动相 : 乙酸乙酯 二氯甲烷 四氢呋喃 甲基叔丁基醚等反相流动相 : 水 乙腈 甲醇 改善溶解度, 提高制备效率 IC 新型固定相 可修复再生 35
三 键合型固定相 : 更稳定 36
5 mv 三 键合型固定相 : 更稳定 Analysis condition :H9I1 AD AS D Detector A Ch2:254nm 2.413 3 mv Detector A Ch2:254nm 2.595 mv 15 Detector A Ch2:254nm 2.332 2 1 25 1 5. 5. 1. min. 5. 1. min. 5. min 5 mv IA Detector A Ch2:254nm 2.792 mv IC 2 Detector A Ch2:254nm 15 5.476 IC:H95THF5 75 mv 5 Detector A Ch2:254nm 4.244 25 2.329. 5. 1. min 1 5. 5. 1. min 25 7.789. 5. 1. min 37
Hexobarbital N N H CHIRALPAK IA 分离实例 Cl Lorazepam --- 中性样品 -- N Cl H Glutethimide N H 4-Benzoyloxy- 2-azetidinone N H 1..1 4 3.8.6.8.6.8.6 2.4.4.4 1.2.2.2... 1 2 3 4 5 6 7 8 9 2 4 6 8 1 12 14 16 18 2 4 6 8 1 12 14 16 18 2 4 6 8 112141618222242628 甲基叔丁基醚 =1 k 1 =.31, =2.94 正己烷 / 丙酮 =6/4 k 1 =1.75, =1.47 正己烷 /1,4- 二氧环乙烷 =7/3 k 1 =1.65, =2.19 正己烷 / 二氯甲烷 =25/75 k 1 =3.93, =1.5238
CHIRALPAK IA 分离实例 --- 碱性样品 --- Bupivacaine Hydroxyzine Disopyramide Indapamide Cl N H.8.7 N N H.2 N.4 H 2 N N N N NH S Cl NH2.6.5.4.3.15.1.3.2 2 15 1.2.1.5.1 5. 5 1 15 2 25 3 35 Hex/THF/DEA =9/1/.1 k 1 =3.94, =1.55. 2 4 6 8 112141618222242628 Hex/EtAc/DEA =4/6/.1 k 1 =2.9, =2.22. 2 4 6 8 112141618222242628 Hex/Acetone/DEA =8/2/.1 k 1 =3.36, =1.37 2 4 6 8 1 MTBE/EtH/DEA =8/2/.1 k 1 =.67, =1.75 39
CHIRALPAK IA 分离实例 --- 酸性样品 --- Suprofen Flurbiprofen Sulindac Tropic acid H F H H S 1. 1. S.6 F.3 H H.8.6.4.8.6.4.5.4.3.2.25.2.15.1.2.2.1.5. 2 4 6 8 1 12 14 16 18 2 Hex/EtAc/TFA =7/3/.1 k 1 =2.83, =1.18. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 11112131415 Hex/EtH/TFA =85/15/.1 k 1 =.74, =1.37... 1 2 3 4 5 6 7 8 9 11112131415 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 MeH/EtH/TFA =5/5/.1 k 1 =.59, =1.45 Hex/THF/TFA =65/35/.1 k 1 =1.1, =1.14
CHIRALPAK IB 分离实例 Mephobarbital trans-stilbene oxide 2,2,2-Trifluoro-1- (9-anthryl)ethanol NH CH 3 --- 中性样品 -- F 3 C H N CH 3 2 4 6 8 1 12 14 Minutes 22 2 18 16 14 5.36 6.72 12 1 8 6 4 2-2. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 12 1 8 1.1 18.81 6 4 2 2 4 6 8 1 12 14 16 18 2 22 24 26 正己烷 / 三氯甲烷 =5/5 =1.12 正己烷 / 二氯甲烷 =8/2 k 1 =.69, =1.62 正己烷 / 四氢呋喃 =9/1 k 1 =2.28, =2.26 41
CHIRALPAK IB 分离实例 Laudanosine N --- 碱性样品 -- H Terfenadine N H xprenolol H H N 6 8 Minutes 2 4 6 8 2 4 6 8 min Minutes 正己烷 /THF/EDA =7/3/.1 k 1 =.67, =2.68 正己烷 /CHCl 3 /EtNA =65/35/.1 k 1 =1.2, =1.33 MTBE/EtH/EDA =95/5/.1 k 1 =.45, =2.98 42
CHIRALPAK IB 分离实例 --- 酸性样品 -- Warfarin H N-Benzyloxycarbonylvaline H N H 35 3 25 2 15 1 5 11.39 16.29 12 11 1 9 8 7 6 5 4 3 2 1-1 7.79 8.47 2 4 6 8 1 12 14 16 18 2 22 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 11 正己烷 / 乙酸乙酯 /TFA =7/3/.1 k 1 =2.69, =1.59 正己烷 /CHCl 3 / 甲醇 /TFA =7/3/1/.1 k 1 =1.52, =1.14 43
Compound B CHIRALPAK IC 分离实例 --- 中性样品 -- 三唑酮 5 5 mv Detector A Ch1:22nm 275 25 225 2 14.238 16.16 175 mv 25 25 15 mv 125 1 75 5 25 2 4 6 8 1 Minutes. 5. 1. 15. 2. 25. min 甲醇 / 二氧化碳 =4/6 R=5.4 正己烷 / 异丙醇 =95/5 R=3.13 44
CHIRALPAK IC 分离实例 --- 碱性样品 -- Compound C Compound D 4 3 mv Detector A Ch1:22nm 9.774 12.312 75 mv Detector A Ch1:22nm 1.628 2 1 5 2.115-1 -2 25-3. 2.5 5. 7.5 1. 12.5 15. min. 5. 1. 15. 2. min 正己烷 / 异丙醇 /DEA =9/1/.1 R=4.66 正己烷 / 异丙醇 /DEA =9/1/.1 R=11.75 45
CHIRALPAK IC 分离实例 --- 酸性样品 -- Compound E Compound F mv Detector A Ch1:22nm 75 5 6.698 1.186 55 mv Detector A Ch1:22nm 5 45 4 35 4.622 25. 2.5 5. 7.5 1. 12.5 min 3 25 2 15 1 5 5.827. 2.5 5. 7.5 min 正己烷 / 异丙醇 /TFA =5/5/.1 R=5.75 二氯甲烷 / 四氢呋喃 /TFA =9/1/.1 R=3.64 46
IA,IB,IC 柱的修复再生 样品 新色谱柱 柱性能受损 ( 如受强吸附杂质的影响 ) 修复再生后 ( 可使用各种强极性溶剂 ) F H H 流动相 : n-hexane/eth 9/1 1 ml/min, 25 C 47
北京金欧亚科技发展有限公司 北京崇文区左安门内大街 8 号伟图大厦 31 室 PC:161 Tel :1-67136152/67178 Fax :1-6711416/67113925 http://www.jinouya.cn E-mail:china.hplc@163.com 48