第 28 卷第 30 期中国现代医学杂志 Vol. 28 No.30 2018 年 10 月 China Journal of Modern Medicine Oct. 2018 DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2018.30.005 文章编号 : 1005-8982(2018)30-0020-06 苦参碱调控结肠癌奥沙利铂耐药性及机制研究 王伟, 郑兵, 任锐, 朱涛 ( 四川省宜宾市第一人民医院, 普外科, 四川宜宾 644000) 摘要 : 目的探讨苦参碱 (Ma) 对人结肠癌耐奥沙利铂 (Oxa) 细胞株 (SW480/Oxa) 的逆转耐药作用及其机制是否与抑制 c-jun 氨基末端激酶 (JNK/SAPK) 信号通路有关 方法采用 MTT 法检测 Ma 对 SW480/ Oxa 细胞增殖的影响, 采用流式细胞术检测 Ma 对 SW480/Oxa 细胞凋亡的影响,qRT-PCR 检测 Ma 对 SW480/ Oxa 细胞 P- 糖蛋白 (P-gp) MDR1 mrna 表达的变化,Western blot 检测 Ma 对 SW480/Oxa 细胞 P-gp 磷酸化 c-jun 氨基末端激酶 (p-jnk) 蛋白表达的变化 结果不同组细胞增殖活性的比较,Oxa 组细胞增殖活性低于 NC 组,Ma+Oxa 组细胞增殖活性低于 Oxa 组 (P<0.05) Oxa 组细胞总凋亡率高于 NC 组 (P <0.05), Ma+Oxa 组细胞总凋亡率高于 Oxa 组 (P <0.05) 与 PPARy+Oxa 组比较,PPARy+Ma+Oxa 组中 P-gp MDR1 mrna 水平均下调, 差异有统计学意义 (P <0.05) 与 SP600125+Oxa 组比较,SP600125+Ma+Oxa 组中 P-gp MDR1 mrna 水平均下调, 差异有统计学意义 (P <0.05) 与 PPARy+Oxa 组比较,PPARy+Ma+ Oxa 组中 P-gp p-jnk 蛋白水平均下调, 差异有统计学意义 (P <0.05) 与 SP600125+Oxa 组比较,SP600125+ Ma+Oxa 组中 P-gp,p-JNK 蛋白水平均下调, 差异有统计学意义 (P <0.05) 结论 Ma 具有调控人结肠癌耐药细胞株耐药性的作用, 可能与抑制 JNK/SAPK 信号通路, 降低 P-pg 表达有关 关键词 : 结直肠癌 ; 耐药 ; 苦参碱 ;JNK/SAPK 信号通路中图分类号 : R735.3 文献标识码 : A Effect of Matrine on drug resistance of human colon cells to Oxaliplatin Wei Wang, Bing Zheng, Rui Ren, Tao Zhu (Department of General Surgery, thefirst People's Hospital of Yibin, Yibin, Sichuan 644000, China) Abstract: Objective To investigate the effects of Matrine (Ma) on drug resistance of human colon cells to Oxaliplatin (Oxa) and potential mechanisms. Methods Cellular proliferation of SW480/Oxa cell line was analyzed by MTT. Cell apoptosis rate was analyzed by Flow Cytometer. Expression of glycoprotein (P-gp), MDR1, P-gp, JNK and phosphorylated c-jun N-terminal kinas (p-jnk) was measured by qrt-pcr and Western blot. Results MTT results showed that cell proliferation in Oxa group was lower than that in NC group (t = 4.032, P = 0.049), while that was higher when compared with Ma+Oxa group (t = 4.132, P = 0.045). Flow cytometer suggested that apoptosis rate in Oxa group was increased compared with NC group (t = 4.342, P = 0.043), while that was decreased when compared with Ma+Oxa group (t = 4.342, P = 0.043). Expressions of P-gp and MDR1 in PPARy+Ma+Oxa group was downregulated when compared with PPARy+Oxa group (P < 0.05), but was upregulated compared with Oxa group (P < 0.05). QRT-PCR also suggested manifested similar alteration of expression of P-gp and MDR1 in SP600125+Ma+Oxa group comparing with those in SP600125+Oxa group (P < 0.05). Western blot showed that expressions of P-gp and p-jnk proteins in PPARy+Ma+Oxa group were lower than PPARy+Oxa group (P < 0.05). 收稿日期 :2018-04-21 20
第 30 期 王伟, 等 : 苦参碱调控结肠癌奥沙利铂耐药性及机制研究 Conclusions Ma can reverse drug resistance of colorectal cancer to Oxa potentially via the JNK/SAPK signaling pathway. Keywords: colorectal cancer; drug resistance; Matrine; JNK/SAPK signaling pathway 结肠癌是临床上常见的消化道疾病之一, 临床上 主要采用手术与化疗联合治疗, 但患者的长期生存率 较低, 且有时不能完全治愈, 甚至化疗药物的耐药性 问题也随着出现, 这是临床上结肠癌治疗失败的主要 [1-2] 原因之一, 故研究结肠癌化疗耐药性尤为重要 研 [3-6] 究显示, 肿瘤对化疗药物多药耐药是影响结肠癌化 疗疗效的主要因素, 耐药基因 MDR1 编码调控 P- 糖 蛋白 (glycoprotein, P-gp), 结肠癌细胞高表达 P-gp 是影响治疗效果的主要障碍之一 众多研究表明 [7-9], JNK/SAPK 信号通路与肿瘤细胞的化疗耐药性密切相 关, 本研究将探讨苦参碱 (matrine, Ma) 对人结肠癌 耐奥沙利铂细胞株 (SW480/Oxa) 耐药性的影响及是 否与 JNK/SAPK 信号通路有关 1 材料与方法 1.1 材料 结肠癌 SW480 细胞购自购自中科院上海细胞库, 环王巴明 二甲基亚砜 (dimethylsulfoxide, DMSO) 四甲基偶氮唑蓝 (methyl thiazolyl tetrazolium, MTT) 均 购自 Sigma 公司,RPMI 1640 培养基 胎牛血清 胰 蛋白酶均购自 Gibco 公司,Annexin-V-FITC/PI 凋亡试 剂盒购自南京生物建成研究所,P-gp c-jun 氨基端激 酶 (c-jun N-terminal kinase,jnk) 磷酸化 c-jun 氨基 端激酶 (phosphorylated c-jun N-terminal kinase, p-jnk) c-jun 磷酸化 c-jun(phosphorylated c-jun, p-c-jun) 抗体购自 Abcam 公司, 过氧化物酶增殖物激活受体 γ (peroxisome proliferator activated receptor gamma, PPARγ) 和 JNK 阻断剂 SP600125 均购自美国 R & D Systems 公 司,Trizol 试剂盒 逆转录试剂盒 PCR 扩增试剂盒 均购自日本 TaKaRa 公司,TGL-16G-A 型高速冷冻离 心机 ( 上海安亭科学仪器厂 ),7300 型实时荧光定量 PCR(qRT-PCR) 仪 ( 美国 Applied Biosystems 公司 ), 基础电泳仪 ( 美国 Bio-Rad 公司 ), 酶标仪 (Thermo 公司 ),EL204- 电子天平 ( 上海特勒 - 托多利多仪器 有限公司 ), 凝胶成像仪 ( 美国 Bio-Rad 公司 ), 电泳 仪 ( 北京六一仪器厂 ) 1.2 方法 1.2.1 细胞培养结肠癌 SW480 细胞, 采用 RPMI 1640 培养液 [ 添加 10%FBS,1% 双抗 ( 链霉素 100 u/ ml, 青霉素 100 u/ml)], 置于 5% 二氧化碳 CO 2,37 的培养箱条件下进行培养 1.2.2 获得性 Oxa 耐药结肠癌 SW480 细胞的建立按照文献 [10], 首先, 采用 0.1 μmol/l 的奥沙利铂 (oxaliplatin, Oxa) 处理 SW480 细胞,Oxa 处理后大部分细胞死亡, 少量细胞存活, 待存活细胞继续生长到融合度达 90% 时, 进行传代 3 代, 之后提高浓度至 0.5 μmol/l 的 Oxa 处理 SW480 细胞, 以此方法再提高到 1.0 μmol/l 的 Oxa 处理 SW480 细胞, 最终获得临床血药浓度 2.0 μmol/l, 传代 5 代, 稳定的耐药细胞 SW480/Oxa 细胞 1.2.3 MTT 法检测 Ma 给药浓度为选择合适的 Ma 浓度进行后续实验, 首先采用 MTT 法检测 Ma 对 SW480/Oxa 耐药细胞的 IC 50 值 取对数生长期的细胞, 以 2 10 4 个 / 孔接种于 96 孔培养板中,37 5% CO 2 培养箱中培养 24 h 贴壁后, 分组进行实验 加入终浓度分别为 0 1 5 10 20 及 30 μmol/l 的 Ma( 含 DMSO 的终浓度为 0.1%); 溶剂对照组调整 DMSO 的终浓度为 0.1% ; 空白对照组不做任何处理 继续培养 24 h 每孔加 20 μl MTT,37 孵育 4 h, 弃上清, 再加入 100 μl DMSO 溶液, 在酶标仪上测定 570 nm 波长各孔吸光度 A 值 (A570) 细胞抑制率(IR):IR(%) =(1- 处理组平均 A 值 / 对照组平均 A 值 ) 100% 1.2.4 MTT 法检测细胞增殖取对数生长期的 SW480/Oxa 细胞, 以 2 10 4 个 / 孔接种于 96 孔培养板中,37 5% CO 2 培养箱中培养 24 h 贴壁后, 分组与给药 :1 NC 组 : 空白对照组 ( 细胞不做任何处理 ); 2 Oxa 组 :Oxa(2 μmol/l);3 Ma+Oxa 组 :Ma(10 μmol/ L)+Oxa(2 μmol/l) 继续培养 24 h 每孔加 20 μl MTT,37 孵育 4 h, 弃上清, 再加入 100μl DMSO 溶液, 在酶标仪上测定 570 nm 波长各孔吸光度 A 值 (A570) 每组设置 3 个复孔 细胞抑制率 (IR):IR(%)=(1- 处理组平均 A 值 / 对照组平均 A 值 ) 100% 1.2.5 流式细胞仪检测细胞凋亡情况取对数生长期的细胞, 以 5 10 3 个 /ml 接种于 6 孔板, 每组设置 3 个复孔 用含 10% 胎牛血清的 RPMl l640 培养基培养在 37 5% CO 2 培养箱中培养 24 h 至贴壁, 实验分 21
中国现代医学杂志第 28 卷 组与给药同 1.2.4 项下, 根据 Annexin-V-FITC/PI 凋亡试剂盒说明书操作, 流氏细胞仪检测细胞凋亡情况 1.2.6 qrt-pcr 检测 P-gp MDR1 mrna 表达水平参照文献 [11], 检测 P-gp MDR1 mrna 取对数生长期的细胞, 以 5 10 3 个 /ml 浓度接种于 6 孔板, 每组设置 3 个复孔 用含 10% 胎牛血清的 RPMI 1640 培养基培养在 37 5% CO 2 培养箱中培养 24 h 至贴壁, 实验分组与给药 :1 NC 组 : 空白对照组 ( 细胞不做任何处理 );2 Oxa 组 :Oxa(2 μmol/l); 3 Ma+Oxa 组 :Ma(10 μmol/l)+oxa(2 μmol/l); 4 PPARγ+Oxa 组 :PPARγ(0.1 μg/l)+oxa (2 μmol/l);5 SP600125+Oxa 组 :SP600125(100 μg/l) +Oxa(2 μmol/l);6 PPARγ+Ma+Oxa 组 :PPARγ (0.1 μg/l)+ma(10 μmol/l)+oxa(2 μmol/l); 7 SP600125+Ma+Oxa 组 :SP600125(100μg/L)+Ma (10 μmol/l)+oxa(2 μmol/l) 根据 Trizol 试剂盒提取组织总 RNA, 采用核酸测定仪测定 RNA 纯度和浓度, 取 1 μg 进行逆转录, 生成 cdna 采用 SYBR green 染料法进行定量检测,P-gp 扩增引物序列为 : P-gp, 正向 5'-TACTCACGCCTCGAAACCT-3', 反向 5'- GTCTGCTTTCCTCCCTGATG-3' ;MDR1, 正向 5'-CCC ATCATTGCAATAGCAGG-3', 反向 5'-GTTCAAACTTC TGCTCCTGA 以 GAPDH 基因为内参, 其引物序列如下 :GAPDH, 正向 5'-CCTAGTTCGTCATGGGTG TGAACCA-3', 反向 5'-GCCAGTAGAGGCAGGGATGA TGTTC-3', 扩增条件及计算方法参考文献 [12] 1.2.7 Western blot 检测 P-gp p-jnk 蛋白的表达水平参照文献 [13] 取对数生长期的细胞, 以 5 10 3 个 /ml 浓度接种于 6 孔板, 每组设置 3 个复孔 用含 10% 胎牛血清的 RPMl 1640 培养基培养在 37 5% CO 2 培养箱中培养 24 h 至贴壁, 实验分组与给药同 1.2.6 项下 常规方法提取组织总蛋白, 二喹啉甲酸 (bicinchoninic acid, BCA) 方法测定蛋白质含量后, 进行凝胶电泳, 每孔上样 20 μg, 电转至聚偏氟乙烯薄膜 (polyvinylidene fluoride, PVDF) 上后,3% 的脱脂奶封闭 2 h, 分别孵育 P-gp p-jnk( 目的蛋白 ) 和 β-actin( 内参蛋白 ) 一抗,4 孵育过夜,TBST 洗膜, 孵育二抗后显影 采用 Quantityone 软件对条带亮度进行分析 1.3 统计学方法数据分析采用 SPSS 17.0 统计软件, 计量资料以均数 ± 标准差 (x±s) 表示, 比较采用方差分析, 两 两比较用 LSD-t 检验,P <0.05 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 Ma 的给药浓度 Ma 对 SW480/Oxa 细胞的 IC 50 浓度为 30 μmol/l 考虑到 Ma 与 Oxa 对癌细胞可能存在协同杀伤癌作 用, 并且为尽量减轻高浓度药物引发的毒副作用, 选 择 IC 50 前一浓度作为 Ma 浓度进行后续实验, 即选择 20 μmol/l 作为后续实验 Ma 的给药浓度 见图 1 细胞活性 /% 100 50 0 图 1 2.2 细胞增殖活性情况 0 5 10 15 20 25 30 Ma 浓度 /(μmol/l) MTT 法检测 Ma 给药浓度 NC 组 Oxa 组和 Ma+Oxa 组细胞增殖活性分别 为 (99.67±2.12) (72.12±1.12) 和 (61.34±1.15), 差异有统计学意义 (F =12.218,P =0.000) 进一步分 析显示,Oxa 组细胞增殖活性低于 NC 组, 差异有统计 学意义 (P <0.05) 而 Ma+Oxa 组细胞增殖活性低于 Oxa 组, 差异有统计学意义 (P <0.05) 2.3 细胞凋亡情况 Oxa 组与 NC 组细胞总凋亡率比较, 采用 t 检验, 差异有统计学意义 (t =4.012,P =0.049),Oxa 组细胞 总凋亡率高于 NC 组 Ma+Oxa 组与 Oxa 组细胞总凋 亡率比较, 采用 t 检验, 差异有统计学意义 (t =4.342, P =0.043),Ma+Oxa 组细胞总凋亡率高于 Oxa 组 见 图 2 2.4 Ma 对 SW480/Oxa 细胞 P-gp MDR1 mrna 表达的影响 研究发现, 在 Ma+Oxa 组 PPARγ+Oxa 组及 PPARγ+ Ma+Oxa 组 3 组间的 P-gp mrna(f =14.315,P = 0.000) 以及 MDR1 mrna(f =16.267,P =0.000) 的相 对表达水平差异有统计学意义 见表 1 在 Ma+Oxa 组 SP600125+Oxa 组以及 SP600125+Ma+Oxa 组 3 组间的 P-gp mrna(f =13.213,P =0.000) 以及 MDR1 mrna (F =15.221,P =0.000) 的相对表达水平差异有统计学 22
第 30 期 王伟, 等 : 苦参碱调控结肠癌奥沙利铂耐药性及机制研究 NC 组 Oxa 组 Ma+Oxa 组 PI PI PI Annexin-V-FITC/PI Annexin-V-FITC/PI Annexin-V-FITC/PI 图 2 流式细胞仪检测细胞凋亡情况 表 1 Ma 对 SW480/Oxa 细胞 P-gp MDR1 mrna 表达的影响 (n =3,x±s) 组别 P-gp F 值 P 值 MDR1 F 值 P 值 Ma+Oxa 组 146.32±4.6 149.31±4.3 PPARγ+Oxa 组 203.19±6.1 1)2) 14.315 0.000 210.45±5.8 1)2) 16.267 13.213 PPARγ+Ma+Oxa 组 176.21±5.3 1) 172.54±4.9 1) Ma+Oxa 组 146.32±4.6 149.31±4.3 SP600125+Oxa 组 134.21±3.4 1)3) 13.213 0.000 140.15±3.8 1)3) 15.221 13.213 SP600125+Ma+Oxa 组 123.16±2.3 1) 131.15±3.1 1) 注 :1) 与 Ma+Oxa 组比较,P <0.05;2) 与 PPARy+Ma+Oxa 组比较,P <0.05;3) 与 SP600125+Ma+Oxa 组比较,P <0.05 意义 2.5 P-gp p-jnk 蛋白的表达水平研究发现, 在 Ma+Oxa 组 PPARγ+Oxa 组以及 PPARγ+Ma+Oxa 组 3 组间的 P-gp 蛋白 (F =12.315, P =0.000) 以及 p-jnk 蛋白 (F =15.267,P =0.000) 的 相对表达水平差异有统计学意义 见图 3 和表 2 在 Ma+Oxa 组 SP600125+Oxa 组以及 SP600125+Ma+Oxa 组 3 组间的 P-gp 蛋白 (F =13.213,P =0.000) 以及 p-jnk 蛋白 (F =15.221,P =0.000) 的相对表达水平差异有统计学意义 见图 3 和表 2 表 2 Western blot 检测 P-gp,p-JNK 蛋白的相对表达水平 (n =3,x±s) 组别 P-gp F 值 P 值 p-jnk F 值 P 值 Ma+Oxa 组 0.489±0.052 0.221±0.031 PPARγ+Oxa 组 0.867±0.077 1)2) 12.315 0.000 0.434±0.042 1)2) 15.267 0.000 PPARγ+Ma+Oxa 组 0.576±0.056 1) 0.284±0.033 1) Ma+Oxa 组 0.489±0.052 0.221±0.031 SP600125+Oxa 组 0.369±0.027 1)2) 13.213 0.000 0.246±0.019 1)2) 15.221 0.000 SP600125+Ma+Oxa 组 0.298±0.024 1) 0.135±0.013 1) 注 :1) 与 Ma+Oxa 组比较,P <0.05;2) 与 PPARγ+Ma+Oxa 组比较,P <0.05;3) 与 SP600125+Ma+Oxa 组比较,P <0.05 23
中国现代医学杂志第 28 卷 图 3 3 讨论 中药苦参为豆科多年生落叶灌木植物苦参的干 燥根 苦参性苦 寒, 具清热燥湿 杀虫 利尿等功效, 用于热痢 便血 黃疸尿闭 赤白带下 湿疹等 苦参 碱是苦参中的抗癌有效成分, 对肝癌 胃癌 肺癌 乳 腺癌和直肠癌等细胞均具有生长抑制作用 奥沙利铂能 够通过作用于 DNA 形成链内和链间交联来抑制 DNA 的 [14] 合成, 产生抗肿瘤活性以及细胞毒作用 由于因个 体基因遗传差异, 结肠癌患者对于奥沙利铂化疗敏感 性存在较大的差异, 其中产生奥沙利铂的耐药性是导 致患者化疗失败的主要原因 肿瘤细胞多药耐药 (multi drug resistance, MDR) 机制复杂, 如 MDR 基因过多表 达 DNA 拓扑异构酶 Ⅱ 活性降低或含量减少 谷胱 甘肽解毒酶系统活性增高 MDR 相关蛋白基因表达 增高等 其中 P-gp 和 LRP 介导的 MDR 研究较多, 是机制最为明确的 MDR 产生途径 P-gp 和 LRP 在 细胞的表达水平与细胞耐药程度呈正相关 最近已经 有多项研究表明苦参碱能够抑制结肠癌细胞的生长 FOFARIA [15] 研究发现,2.0 mg/ml 苦参碱能够抑制结肠 癌细胞 HT-29 的生长并且能够抑制 COX-2 的表达 ; NIU 等 [16] 也观察苦参碱能够抑制结肠癌细胞 SW116 的增殖, 并且抑制细胞端粒酶的活性 ;CHANG 等 进一步深入研究发现苦参碱通过上调 Bax 的表达以及 下调 Bcl-2 的表达来诱导 HT-29 细胞的调亡, 从而起 到抑制结肠癌细胞 HT-29 增殖的作用 众多研究表 明 p-jnk P-gp β-actin Ma - - - + + - + Oxa - + + + + + + PPARγ - - + + - - - SP600125 - - - - - + + 51 kd 170 kd 42 kd Western blot 检测 P-gp,p-JNK 蛋白的相对表达 [18-20],JNK/SAPK 信号通路与肿瘤细胞的化疗耐药 性密切相关, 本研究为了尽量减轻高浓度药物引发的 毒副作用, 笔者选择 IC 50 前一浓度作为 Ma 浓度进行 后续实验, 即选择 10 μmol/l 作为后续实验 Ma 的给 药浓度 结果发现,Ma 可抑制其增值, 促进其凋亡, Ma 可降低 P-gp,MDR1 mrna 表达, 还可降低 P-gp p-jnk 蛋白的表达, 提示 Ma 具有调控人结肠癌耐药 [17] 细胞株耐药性的作用, 可能与抑制 JNK/SAPK 信号通路, 降低 P-pg 表达有关 本研究结果提示,Ma 对调控结肠癌化疗耐药性有一定效果, 研究结果为应用苦参碱干预结肠癌机制提供实验依据,Ma 有望成为改善结肠癌化疗耐药性的新药物, 但还需大量的基础实验和临床实验深入研究 综上所述,Ma 具有调控人结肠癌耐药细胞株耐药性的作用, 可能与抑制 JNK/SAPK 信号通路, 降低 P-pg 表达有关 参考文献 : [1] 张玥, 石菊芳, 黄慧瑶, 等. 中国人群结直肠癌疾病负担分析 [J]. 中华流行病学杂志, 2015, 36(7): 709-714. [2] 李道娟, 李倩, 贺宇彤, 等. 结直肠癌流行病学趋势 [J]. 肿瘤防治研究, 2015, 42(3): 305-310. [3] 袁斐, 白钢钢, 苗筠杰, 等. 中药逆转肿瘤细胞多药耐药的研究进展 [J]. 中草药, 2014, 45(6): 857-863. [4] 左陵君, 张耘新, 段建敏, 等. 苦参碱对人膀胱癌 BIU-87/ADM 细胞多药耐药的影响 [J]. 中国中医药信息杂志, 2016, 23(2): 73-75. [5] 刘劲松, 李丽萍, 刘俊, 等. 复方苦参注射液联合化疗治疗对结直肠癌患者血清血管内皮生长因子的影响 [J]. 中国老年学杂志, 2014, 34(2): 333-334. [6] LI Y J, HUANG G L, SUN X L, et al. The combination therapy of high-intensity focused ultrasound with radiotherapy in locally advanced pancreatic carcinoma[j]. World J Surg Oncol, 2016, 14(1): 1-5. [7] KHOKHLOVA T D, HWANG J H. HIFU for palliative treatment of pancreatic cancer[j]. Adv Exp Med Biol, 2016, 880(3): 83-95. [8] ROMBOUTS SJE, VOGEL J A, SANTVOORT H C, et al. Systematic review of innovative ablative therapies for the treatment of locally advanced pancreatic cancer[j]. Br J Surg, 2015, 102(3): 182-193. [9] HIJNEN N, LANGEREIS S, GRÜLL H, et al. Magnetic resonance guided high-intensity focused ultrasound for image-guided temperature-induced drug delivery[j]. Adv Drug Deliv Rev, 2014, 72(6): 65-81. [10] LAM M K, HUISMAN M, NIJENHUIS R J, et al. Quality of MR thermometry during palliative MR-guided high-intensity focused ultrasound (MR-HIFU) treatment of bone metastases[j]. J Ther Ultrasound, 2015, 3(1): 1-15. [11] WOLFRAM F, REICHENBACH J R, LESSER T G, et al. An exvivo,human lung model for ultrasound-guided high-intensity focused ultrasound therapy using lung flooding[j]. Ultrasound Med Biol, 2014, 40(3): 496-503. [12] PATEL K, KOLLORY A, TAKASHIMA A, et al. MicroRNA let-7 downregulates STAT3 phosphorylation in pancreatic cancer cells by increasing SOCS3 expression[j]. Cancer Lett, 2014, 347(1): 54-64. 24
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