实 验 LC 条 件 LC 系 统 : Waters ACQUITY UPLC 系 统 色 谱 柱 : 柱 温 : 5 流 速 : 流 动 相 A: 流 动 相 B: 梯 度 : 进 样 体 积 : 1 µl 强 清 洗 液 : ACQUITY UPLC BEH C 18 色 谱 柱 m
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- 阿话 贺
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1 [ 应 用 纪 要 ] 使 用 UPLC/MS/MS 定 量 分 析 血 清 中 的 21 种 苯 二 氮 卓 类 药 物 唑 吡 坦 和 佐 匹 克 隆 JMark Roberts and Michelle Wood. 沃 特 世 公 司 MS 技 术 中 心 ( 英 国 曼 彻 斯 特 ) 目 的 开 发 一 种 用 于 定 量 分 析 人 血 清 中 21 种 苯 二 氮 卓 类 药 物 唑 吡 坦 和 佐 匹 克 隆 的 U PLC/ MS/MS 方 法 简 介 苯 二 氮 卓 类 药 物 ( 图 1) 是 西 方 国 家 最 常 用 的 处 方 药 这 类 药 物 适 用 于 多 种 病 症, 包 括 焦 虑 失 眠 躁 动 不 安 肌 肉 痉 挛 和 酒 精 戒 断 症 状 它 们 的 药 效 主 要 由 与 GABA A 受 体 之 间 的 相 互 作 用 而 产 生 许 多 苯 二 氮 卓 类 药 物 具 有 潜 在 的 成 瘾 性 1, 长 期 使 用 可 导 致 药 物 依 赖 因 此, 这 类 药 物 的 分 析 对 于 临 床 和 法 医 领 域 都 至 关 重 要 这 些 药 物 的 误 用 2 3 在 老 年 人 或 精 神 病 患 者 等 弱 势 群 体 中 十 分 常 见 老 年 人 因 对 苯 二 氮 卓 类 药 物 的 敏 感 程 度 随 着 年 龄 而 增 大, 因 此 风 险 更 高, 一 些 自 身 中 毒 事 件 的 报 道 中 常 常 涉 及 此 类 药 物 4-7 此 外 苯 二 氮 卓 类 药 物 的 娱 乐 用 途 也 会 被 报 道, 它 们 通 常 是 与 其 它 麻 醉 品 合 用, 例 如 增 强 海 洛 因 或 可 卡 因 的 愉 悦 感, 或 用 于 减 轻 LSD 或 安 非 他 命 的 副 作 用 8 因 为 苯 二 氮 卓 类 药 物 具 有 镇 静 和 产 生 失 忆 的 作 用, 所 以 它 们 通 常 与 一 些 药 物 致 使 的 犯 罪 行 为 相 关 9 传 统 的 苯 二 氮 卓 类 药 物 定 量 技 术 包 括 气 相 色 谱 / 质 谱 (GC/MS) 和 高 效 液 相 色 谱 / 质 谱 (HPLC/MS) 前 者 一 般 需 要 增 加 一 个 衍 生 化 处 理 步 骤, 而 此 过 程 中 一 些 分 析 物 的 热 稳 定 性 不 佳 会 导 致 分 析 困 难 相 比 之 下,HPLC/MS 无 需 进 行 衍 生 化 处 理 即 可 分 离 范 围 较 广 的 物 质, 并 且 可 利 用 电 喷 雾 离 子 化 (ESI) 等 软 电 离 技 术 使 质 子 化 分 子 保 持 完 整 UltraPerformance LC (UPLC) 自 24 年 推 出 以 来, 其 相 较 于 HPLC 方 法 的 明 显 优 势 已 多 次 被 证 明, 如 更 高 的 分 辨 率 灵 敏 度 和 通 量 本 文 的 目 的 就 是 利 用 这 项 技 术 进 行 方 法 开 发 本 文 介 绍 了 一 种 基 于 液 / 液 萃 取 (LLE) 和 UPLC 结 合 串 联 质 谱 (MS/MS) 的 定 量 方 法, 并 使 用 真 实 样 品 对 该 方 法 的 性 能 进 行 了 评 估 结 果 数 据 与 经 HPLC/MS/MS 认 证 的 方 法 取 得 的 结 果 进 行 了 比 较 1 图 1. 苯 二 氮 卓 类 药 物 的 核 心 结 构 1
2 实 验 LC 条 件 LC 系 统 : Waters ACQUITY UPLC 系 统 色 谱 柱 : 柱 温 : 5 流 速 : 流 动 相 A: 流 动 相 B: 梯 度 : 进 样 体 积 : 1 µl 强 清 洗 液 : ACQUITY UPLC BEH C 18 色 谱 柱 mm,1.7 µm 4 µl/min.1 甲 酸 的 水 溶 液.1 甲 酸 的 甲 醇 溶 液 时 间 (min) A B 曲 线 流 动 相 B (5 µl) 弱 清 洗 液 : 流 动 相 A (15 µl) 选 择 甲 醇 为 该 UPLC 色 谱 方 法 的 有 机 流 动 相, 未 选 择 乙 腈 的 原 因 是 其 在 全 球 范 围 资 源 短 缺 而 较 难 获 得 MS 条 件 MS 系 统 : Waters TQ 检 测 器 (TQD) 电 离 模 式 : ESI+ 毛 细 管 电 压 : 3 kv 脱 溶 剂 气 温 度 : 4 脱 溶 剂 气 : 8 L/h 源 温 度 : 12 采 集 模 式 : 多 反 应 监 测 (MRM) 材 料 样 品 样 品 为 27 个 真 实 血 清 和 血 浆 样 本, 这 些 样 品 此 前 已 通 过 一 种 经 发 表 的 传 统 SPE 1 和 HPLC/MS/MS 方 法 进 行 了 分 析 标 准 品 内 标 和 空 白 血 清 标 准 品 (1 mg/ml) 及 其 氘 代 内 标 (IS)(.1 mg/ml) 均 购 自 LGC Standards( 英 国 特 丁 顿 ) 将 内 标 用 水 配 制 成 5 µg/ml 的 混 合 储 液 空 白 血 清 来 自 Scipac( 英 国 锡 廷 伯 恩 ) 将 药 物 标 准 品 混 合 物 加 入 空 白 血 清, 制 成 血 清 校 准 品 ( 至 1 ng/ml) 样 品 制 备 液 / 液 萃 取 (LLE) 加 标 : 用 1 µl IS 对 3 µl 样 品 / 校 准 品 进 行 加 标, 并 加 入 15µL 硼 酸 盐 缓 冲 液 *, 涡 旋 混 匀 提 取 : 加 入 9 µl 提 取 混 合 液 **, 混 匀 离 心 : 在 3 rpm 下 离 心 5 分 钟 转 移 和 蒸 发 : 将 上 清 液 移 至 洁 净 的 Eppendorf 管 中, 在 4 恒 温 加 热 仪 的 氮 气 气 氛 下 干 燥 复 溶 和 进 样 : 用 5 µl 8 水 和 2 甲 醇 的 混 合 液 对 样 品 进 行 复 溶 (6 x 浓 缩 ), 混 匀 并 进 样 * 硼 酸 盐 缓 冲 液 使 用 十 水 四 硼 酸 钠 饱 和 溶 液 制 备 ** 提 取 混 合 液 使 用 二 氯 甲 烷 / 乙 醚 / 己 烷 (3/5/2) 与.5 异 戊 醇 制 备 结 果 与 讨 论 方 法 验 证 所 有 药 物 及 其 代 谢 物 的 MRM 通 道 和 优 化 条 件 如 表 1 所 示 每 种 分 析 物 都 通 过 两 个 通 道 生 成 的 定 量 和 定 性 离 子 进 行 监 测 内 标 通 过 单 个 通 道 进 行 监 测 为 了 对 所 有 分 析 物 进 行 线 性 研 究, 分 别 平 行 制 备 了 三 份 浓 度 为 和 1 ng/ml 的 加 标 血 清 校 准 品, 并 且 按 上 述 LLE 方 法 进 行 提 取 分 析 完 成 后, 通 过 1/x 加 权 绘 制 校 准 曲 线 r 2 平 均 值 均 大 于.995, 仅 α- 羟 基 三 唑 仑 除 外, 其 在 1-1 ng/ml 范 围 内 为.975 通 过 对 每 种 分 析 物 MRM 谱 线 的 峰 下 方 面 积 进 行 积 分 并 参 照 相 应 的 氘 代 内 标 峰 面 积 进 行 定 量 图 2 列 出 了 1 ng/ml 浓 度 下 所 有 分 析 物 的 定 量 离 子 谱 线 检 测 限 (LOD) 定 义 为 所 得 信 噪 比 (S:N) 大 于 7:1( 对 于 定 性 离 子 和 定 量 离 子 ) 的 浓 度 具 体 数 据 汇 总 于 表 1 中 2
3 化 合 物 母 离 子 (m/z) CV(V) 产 物 离 子 1 (m/z) 表 种 分 析 物 的 MRM 通 道 锥 孔 电 压 (CV) 和 碰 撞 能 量 (CE), 其 中 产 物 离 子 1 为 定 量 离 子, 产 物 离 子 2 为 定 性 离 子 CE (V) 产 物 离 子 2 (m/z) 7- 氨 基 氯 硝 西 泮 氨 基 氟 硝 西 泮 α- 羟 基 阿 普 唑 仑 CE (V) 内 标 (IS) 7- 氨 基 氯 硝 西 泮 d4 7- 氨 基 氟 硝 西 泮 d7 α- 羟 基 阿 普 唑 仑 d5 LOD (ng/ml) 基 质 效 应 RSD 回 收 率 α- 羟 基 咪 达 唑 仑 硝 西 泮 d α- 羟 基 三 唑 仑 α- 羟 基 三 唑 仑 d 阿 普 唑 仑 阿 普 唑 仑 d 溴 西 泮 硝 西 泮 d 氯 氮 卓 硝 西 泮 d 氯 硝 西 泮 氯 硝 西 泮 d 地 西 泮 地 西 泮 d 艾 司 唑 仑 艾 司 唑 仑 d 氟 硝 西 泮 氟 硝 西 泮 d 劳 拉 西 泮 奥 沙 西 泮 d 氯 甲 西 泮 去 甲 地 西 泮 d 咪 达 唑 仑 氨 基 氟 硝 西 泮 d 硝 西 泮 硝 西 泮 d 去 甲 地 西 泮 去 甲 地 西 泮 d 奥 沙 西 泮 奥 沙 西 泮 d 普 拉 西 泮 普 拉 西 泮 d 替 马 西 泮 去 甲 地 西 泮 d 三 唑 仑 三 唑 仑 d 唑 吡 坦 唑 吡 坦 d 佐 匹 克 隆 氨 基 氯 硝 西 泮 d 使 用 6 个 不 同 来 源 的 空 白 血 清 评 估 回 收 率 和 基 质 效 应 ( 图 1) 加 标 前 后 的 5 ng/ml 血 清 回 收 率 的 结 果 在 62 至 89 范 围 内 将 加 标 到 提 取 空 白 血 清 的 分 析 物 与 加 标 到 流 动 相 的 分 析 物 的 响 应 进 行 对 比 以 确 定 基 质 效 应 结 果 总 体 令 人 满 意, 范 围 在 -28 抑 制 到 +6 增 强 之 间 ( 表 示 没 有 基 质 效 应 ) 通 过 按 前 述 步 骤 对 16 个 加 标 浓 度 为 5 ng/ml 的 空 白 血 清 样 品 进 行 LLE 提 取, 以 评 估 提 取 样 品 的 稳 定 性 将 复 溶 后 的 提 取 物 收 集 到 一 个 样 品 瓶 中, 在 5 下 置 于 ACQUITY 自 动 进 样 器 中 保 存 11 小 时, 每 45 分 钟 进 样 一 次 在 研 究 过 程 中, 标 准 品 或 IS 都 未 观 察 到 明 显 的 峰 面 积 损 失 3
4 样 品 分 析 对 全 部 27 个 真 实 血 清 和 血 浆 样 品 匿 名 处 理 后 进 行 LLE 提 取, 然 后 使 用 上 述 方 法 进 行 分 析 阳 性 结 果 的 鉴 定 标 准 如 下 : 分 析 物 的 保 留 时 间 必 须 在 预 期 保 留 时 间 的.2 min 误 差 范 围 内, 且 离 子 比 率 在 预 计 比 率 的 15 误 差 范 围 内 这 些 分 析 物 的 预 期 离 子 比 率 分 别 定 义 为 1 1 和 1 ng/ml 下 的 校 准 品 比 率 平 均 值 使 用 TargetLynx TM 应 用 软 件 对 这 些 样 品 的 数 据 进 行 处 理, 将 保 留 时 间 或 比 率 超 出 上 述 设 定 值 的 任 何 分 析 物 设 为 自 动 标 记 这 在 最 大 程 度 上 缩 短 了 用 户 分 析 处 理 数 据 所 需 的 时 间 然 后 将 数 据 与 使 用 之 前 的 方 法 ( 在 其 它 实 验 室 使 用 已 发 表 并 验 证 的 方 法 ) 对 一 小 组 化 合 物 (13 种 苯 二 氮 卓 类 药 物 ) 进 行 分 析 所 取 得 的 结 果 进 行 对 比 这 些 数 据 如 图 3 和 图 4 所 示 总 的 来 说, 新 开 发 的 方 法 与 已 发 表 方 法 之 间 有 着 极 好 的 相 关 性 (r 2 值 大 于.98) 图 5 显 示 了 一 个 阳 性 真 实 样 本 的 示 例, 同 时 还 给 出 一 个 阴 性 对 照 以 便 对 比 12 1 R 2 =.9884 UPLC/MS/MS 图 3. 新 开 发 的 UPLC/MS/MS 方 法 与 已 发 表 方 法 的 数 据 对 比 图 中 的 39 个 结 果 包 含 了 所 有 检 出 分 析 物, 浓 度 以 ng/ml 表 示 12 R 2 = UPLC/MS/MS 图 4. 新 开 发 的 UPLC/MS/MS 方 法 与 已 发 表 方 法 的 数 据 对 比 图 中 仅 绘 出 了 去 甲 地 西 泮 的 9 个 结 果, 浓 度 以 ng/ml 表 示 e e e e e e min min 图 2. 提 取 的 1 ng/ml 血 清 校 准 品 中 所 有 分 析 物 的 定 量 离 子 图 谱 注 : 劳 拉 西 泮 去 甲 地 西 泮 奥 沙 西 泮 和 替 马 西 泮 的 含 量 均 低 于 该 UPLC/MS/MS 方 法 的 检 测 限 图 5. 4 ng/ml 氯 硝 西 泮 的 阳 性 结 果 A 为 空 白 血 清 校 准 品,B 为 真 实 样 品 上 方 谱 线 为 内 标, 中 间 谱 线 为 316>214( 定 性 离 子 ), 下 方 谱 线 为 316>27( 定 量 离 子 ) 峰 上 方 的 数 字 表 示 峰 面 积, 峰 右 侧 的 数 字 表 示 峰 强 度 4
5 结 论 法 医 和 临 床 实 验 室 都 需 要 对 苯 二 氮 卓 类 药 物 进 行 监 测, 因 此 需 要 一 种 准 确 可 靠 且 稳 定 的 方 法 对 生 物 样 品 中 的 这 些 药 物 进 行 定 量 分 析 为 此, 我 们 开 发 了 一 种 快 速 灵 敏 的 UPLC/MS/MS 方 法, 以 分 析 各 种 常 用 苯 二 氮 卓 类 药 物 与 GC/MS 不 同, 这 种 技 术 不 需 要 进 行 衍 生 化 处 理, 并 且 由 于 采 用 了 软 电 离, 可 以 监 测 分 析 物 的 质 子 化 分 子 特 定 碎 片 与 HPLC 方 法 相 比, 基 于 UPLC 的 方 法 可 提 供 卓 越 的 色 谱 分 离 度 更 高 的 灵 敏 度 和 更 短 的 运 行 时 间 本 纪 要 中, 使 用 LLE-UPLC/MS/MS 方 法 对 27 种 真 实 血 清 和 血 浆 样 品 进 行 分 析 后, 将 所 得 结 果 与 之 前 使 用 已 认 证 方 法 取 得 的 结 果 进 行 了 比 较 ; 数 据 显 示 出 良 好 的 一 致 性 本 应 用 是 使 用 沃 特 世 系 统 进 行 的 检 测 示 例 完 整 的 验 证 方 法 还 需 用 户 进 一 步 开 发 致 谢 感 谢 Stephanie Marin( 美 国 犹 他 州 盐 湖 城 ARUP 实 验 室 ) 提 供 的 含 苯 二 氮 卓 类 药 物 的 预 分 析 真 实 样 品 参 考 文 献 1. Longo LP and Johnson B. American Academy of Family Physicians afp/241/2121.html (2)61(7) Bogunovic O and Greenfield S. Pyschiatric Services (24)55 (3): Brunette M et al. Pyschiatric Services (23)54(1): McLoone P and Crombie IK. The British Journal of Psychiatry (1996)169: Prescott LF and Highley MS. British Medical Journal (1985)29: Stern TA et al. Annals of Clinical Psychiatry (1991)3(3): Wang H et al. Zhonghua Nei Ke Za Zhi/Chinese Journal of Internal Medicine(22)41 (6) Wood M et al. Journal of Analytical Toxicology(23)27: Dorandeu A et al. Journal of Clinical Forensic Medicine(26)13: Marin SJ et al. Journal of Analytical Toxicology(28)32: 本 方 法 是 本 文 所 述 仪 器 软 件 和 消 耗 品 的 一 个 应 用 示 例 沃 特 世 尚 未 确 认 该 方 法 是 否 可 转 换 到 其 它 仪 器 软 件 或 消 耗 品 应 用 纪 要 作 为 对 概 念 的 验 证, 可 为 最 终 用 户 在 开 发 和 验 证 各 自 的 实 验 室 开 发 测 试 (LDT) 时 提 供 参 考 最 终 用 户 须 自 行 完 成 此 类 LDT 的 方 法 开 发 和 验 证 本 方 法 尚 未 经 任 何 监 管 实 体 许 可 用 于 诊 断 目 的 沃 特 斯 中 国 有 限 公 司 沃 特 世 科 技 ( 上 海 ) 有 限 公 司 Waters,ACQUITY UPLC,UltraPerformance LC 和 The Science of What s Possible 是 沃 特 世 公 司 的 注 册 商 标 Targetlynx 是 沃 特 世 公 司 的 商 标 其 他 所 有 商 标 均 归 各 自 的 拥 有 者 所 有 21 年 沃 特 世 公 司 印 制 于 中 国 21 年 6 月 ZH VW-PDF 北 京 : 上 海 : 广 州 : 成 都 : 香 港 : 免 费 售 后 服 务 热 线 :8 (4)
4.1 液 相 色 谱 - 三 重 四 极 杆 质 谱 联 用 仪 4.2 天 平 4.3 超 声 波 清 洗 仪 4.4 离 心 机 4.5 涡 旋 混 合 仪 5 分 析 步 骤 5.1 标 准 系 列 溶 液 的 制 备 分 别 精 密 吸 取 10.0 µg/ml 的 标 准 工 作 溶 液
附 件 1 化 妆 品 中 丙 烯 酰 胺 的 检 测 方 法 ( 征 求 意 见 稿 ) 1 范 围 本 方 法 规 定 了 化 妆 品 中 丙 烯 酰 胺 的 液 相 色 谱 - 串 联 质 谱 测 定 方 法 本 方 法 适 用 于 液 态 水 基 类 液 态 油 基 类 凝 胶 类 膏 霜 乳 液 类 粉 类 化 妆 品 中 丙 烯 酰 胺 的 测 定 2 方 法 提 要 样 品 提 取 净
材 料 与 方 法 仪 器 ACQUITY UPLC Xevo TQ-S 三 重 四 级 杆 液 质 联 用 仪 ( 美 国 Waters 公 司 ); 电 喷 雾 离 子 源 (ESI), Masslynx 4.1 数 据 处 理 系 统 (Waters);Thermo 低 温 离 心 机 ;KQ
[ 应 用 纪 要 ] Rapid identification of 5 illegal additives in slimming health food by Xevo TQ-S 郝 刚 苏 州 市 食 品 药 品 检 验 所, 苏 州 15104 关 键 词 超 高 效 液 相 色 谱 - 质 谱, 多 反 应 监 测, 减 肥 类 保 健 食 品 非 法 添 加, 快 速 定 性 定 量
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1993 B1 A [2] 17 B1B2G1 G2M1M2 B1B2G1G2 M1 B1 B1 RNA 1 CH 3 CH 3 CH 3 B 1 B 2 G 1 H H H N H C H3 CH 3 CH 3 Cl H G 2 M1 chratoxin A H H H N N H 3C N H CH 3 H H ST Citrinin VERR H CH3 H3C H H 3 C H H H CH2
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名 稱 : 兒 童 及 少 年 福 利 機 構 專 業 人 員 資 格 及 訓 練 辦 法 修 正 日 期 : 民 國 103 年 01 月 17 日 法 規 類 別 : 行 政 > 衛 生 福 利 部 > 社 會 及 家 庭 目 第 1 條 本 辦 法 依 兒 童 及 少 年 福 利 與 權 益 保 障 法 ( 以 下 簡 稱 本 法 ) 第 七 十 八 條 規 定 訂 定 之 第 2 條 本 法
陕 西 省 城 市 社 区 社 会 管 理 创 新 现 状 困 境 及 建 议 一 陕 西 省 城 市 社 区 管 理 现 状 分 析 ( 一 ) 社 区 社 会 管 理 创 新 的 重 要 举 措 1. 高 度 重 视 社 区 的 社 会 管 理, 积 极 探 索 总 结 经 验 自 2000 年
. 21 田 丽 丽 摘 要 : 社 区 是 社 会 管 理 的 基 石, 加 强 和 创 新 社 区 社 会 管 理 已 成 为 当 前 社 区 建 设 的 重 要 任 务 之 一 陕 西 省 在 推 进 社 会 管 理 创 新 强 化 社 区 建 设 的 过 程 中, 通 过 多 项 举 措, 在 社 区 管 理 模 式 创 新 方 面 取 得 了 初 步 成 效, 但 是 城 市 社 区 形
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第一章 帽 子 问 题 帽子问题又称帽子颜色问题 是比较经典又非常有趣的逻辑问题之一 一个经典的问题原文如下 有 3 顶红帽子和 2 顶白帽子 现在将其中 3 顶给排成一列纵队的 3 个人 每人戴上 1 顶 每个人都只能看到自己前面的人的帽子 而看不到自己和自己后面的人的帽子 同时 3 个人也不知道剩下的 2 顶帽子的颜色 但他们都知道他们 3 个人的帽子是从 3 顶红帽子 2 顶白帽子中取出的 先问站在最后边的人
目 錄 大 會 歡 迎 詞 裁 判 長 的 話 選 手 賽 前 準 備 清 單 賽 事 日 程 表 選 手 報 到 比 賽 日 - 大 會 服 務 關 門 時 間 台 東 關 門 時 間 轉 換 區 須 知 台 東 轉 換 區 須 知 自 行 車 檢 錄 轉 換 袋 台 灣 游 泳 公 里 游 泳
目 錄 大 會 歡 迎 詞 裁 判 長 的 話 選 手 賽 前 準 備 清 單 賽 事 日 程 表 選 手 報 到 比 賽 日 - 大 會 服 務 關 門 時 間 台 東 關 門 時 間 轉 換 區 須 知 台 東 轉 換 區 須 知 自 行 車 檢 錄 轉 換 袋 台 灣 游 泳 公 里 游 泳 攻 略 台 灣 自 行 車 公 里 台 灣 路 跑 公 里 台 灣 補 給 站 台 東 游 泳 公 里
事 業 單 位 改 組 或 轉 讓, 舊 勞 工 不 願 意 續 任 者, 可 否 請 求 資 遣 費? 工 或 與 勞 工 協 商 同 意 後 簽 訂 新 約, 以 穩 固 勞 雇 關 係 至 於 改 組 或 轉 讓 過 程 中, 被 商 定 留 用 之 勞 工, 如 因 其 勞 動 條 件 有
勞 動 基 準 法 常 見 壹 勞 動 契 約 何 謂 雇 主 違 反 勞 動 契 約 或 勞 工 法 令, 致 有 損 害 勞 工 權 益 之 虞 勞 工 可 否 終 止 契 約, 請 求 資 遣 費? 勞 工 法 令 有 強 制 性 質, 勞 動 契 約 不 得 違 反 勞 工 法 令, 團 體 協 約 或 工 作 規 則, 雇 主 是 否 違 反 勞 動 契 約 或 勞 工 法 令, 應 以
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1 2 小 引 江 湖 百 态, 五 行 八 作, 七 十 二 行, 是 我 国 自 古 以 来 小 生 产 经 济 的 产 物 工 匠 作 坊 商 贾 服 务 行 业 艺 人 江 湖 术 士 帮 会 匪 盗 娼 妓 形 形 色 色, 五 花 八 门 这 种 带 有 宗 法 式 的 行 业, 是 一 个 个 神 秘 的 王 国, 它 们 分 别 有 着 自 己 的 信 奉, 有 着 不 同 的 规
关于印发《实验室骨干教师评聘及管理办法》的通知
关 于 印 发 实 验 室 骨 干 教 师 评 聘 及 管 理 办 法 的 通 知 院 教 发 [2001]051 号 各 系 ( 部 ): 为 了 更 好 地 加 强 实 验 室 建 设, 保 证 实 验 设 备 的 完 好 运 行, 提 高 实 验 室 设 备 的 使 用 效 益, 为 突 出 学 科 特 色 和 教 学 科 研 工 作 的 发 展 提 供 良 好 的 服 务, 并 做 好 实
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壹 基 礎 篇 ( 修 辭 學 教 學 ) 教 學 設 計 : 廖 文 毅 老 師 一 譬 喻 法 ( 明 喻 法 暗 喻 法 借 喻 法 ) ( 一 ) 明 喻 法 : 在 詩 裡 面 運 用 -- 甲 像 乙 -- 這 樣 的 比 喻, 就 是 明 喻 法 例 如 : 一 鞭 炮 像 個 留 著 長 髮 的 小 妹 妹 二 風 真 像 位 舞 蹈 家 三 白 雲 像 一 位 魔 術 師 作 品
105年公務員申領或侵占小額款項
公 務 員 詐 領 或 侵 占 小 額 款 項 宣 導 教 材 中 華 民 國 中 華 民 國 105 年 4 月 壹 前 言... 1 貳 案 例 類 型 分 析... 2 一 詐 領 差 旅 費... 2 二 詐 領 加 班 費... 4 三 詐 領 油 料 費... 8 四 詐 領 國 民 旅 遊 卡 休 假 補 助 費... 10 五 詐 領 鐘 點 費... 13 六 侵 占 公 用 財
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示 例 十 三 審 題 和 立 意 四 年 級 學 習 單 元 審 題 和 立 意 ( 東 華 三 院 王 余 家 潔 紀 念 小 學 ) 一 學 習 目 標 透 過 閱 讀 不 同 類 型 的 文 章, 掌 握 審 題 和 立 意 的 方 法, 增 強 寫 作 及 說 話 的 能 力 ; 培 養 虛 心 謙 遜 關 懷 他 人 的 態 度, 以 及 肯 定 自 我 價 值 二 學 習 重 點 聆
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作 品 來 源 : 仁 濟 醫 院 王 華 湘 中 學 學 生 指 導 老 師 : 傅 潤 偉 老 師 報 告 目 錄 第 一 章 : 引 言 1.1. 研 究 背 景 及 目 的 ----------------------------------------------------------------P.3-4 1.2. 研 究 對 象 及 原 因 ----------------------------------------------------------------P.5
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舟 办 通 报 第 8 期 中 共 舟 山 市 委 办 公 室 2016 年 4 月 29 日 按 : 现 将 周 江 勇 同 志 在 2016 年 4 月 28 日 在 全 市 两 学 一 做 专 题 党 课 暨 学 习 教 育 部 署 会 上 的 讲 话 予 以 印 发, 请 认 真 贯 彻 落 实 学 党 章 党 规 学 系 列 讲 话, 做 合 格 党 员 学 习 教 育, 是 党 中 央
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上 海 浦 发 银 行 参 与 高 等 职 业 教 育 人 才 培 养 年 度 报 告 ( ) 一 校 企 合 作 概 况 ( 一 ) 企 业 简 介 上 海 浦 东 发 展 银 行 股 份 有 限 公 司 ( 以 下 简 称 : 浦 发 银 行 ) 是 1992 年 8 月 28 日 经 中 国 人 民 银 行 批 准 设 立 1993 年 1 月 9 日 开 业 1999 年 在 上 海 证 券
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...2...3...4...6...6...8...11...14...18...19...20...22...22...23...25...26...27...28...29...29...29 4-1 - ( ) 88 37 88 37 200121 2003 4 18 [2003]48 1.5 4-2 - ( ) 25 1 1 100032 2004 09 17 [1998]12 ( ) (
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語 音 型 血 糖 機 使 用 說 明 書 版 本 3.0 發 行 日 期 :2010/01 311-4227500-003 目 錄 使 用 之 前 4 前 言 4 適 用 對 象 4 注 意 事 項 5 健 康 資 訊 6 認 識 產 品 7 系 統 組 成 內 容 7 採 血 器 具 8 採 血 深 度 選 擇 8 按 鍵 功 能 及 外 觀 9 螢 幕 顯 示 說 明 10 血 糖 試 片 11
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6 9 Vol. 6 No. 9 2015 9 Journal of Food Safety and Quality Sep., 2015-6 王 建 凤 1, 刘 艳 1*, 杨 一 帆 2, 贾 丽 1, 黄 华 3, 杜 振 霞 2, 范 筱 京 1, 张 经 华 (1.,, 100089; 2., 100029; 3., 100041) 1 摘 要 : 目 的 (SPE-UPLC-MS/MS)
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贵 州 大 学 文 件 贵 大 发 2015 40 号 贵 州 大 学 关 于 2015 年 申 报 专 业 技 术 三 级 岗 位 的 通 知 各 学 院 校 直 各 单 位 : 根 据 省 教 育 厅 省 人 力 资 源 和 社 会 保 障 厅 关 于 做 好 2015 年 省 属 高 等 学 校 专 业 技 术 三 级 岗 位 聘 用 评 议 工 作 的 通 知 ( 黔 教 师 发 2015
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第 六 章 灰 分 及 几 种 重 要 矿 物 元 素 含 量 的 测 定 第 一 节 灰 分 的 测 定 一 概 述 食 品 的 组 成 十 分 复 杂, 除 含 有 大 量 有 机 物 质 外, 还 含 有 丰 富 的 无 机 成 分, 这 些 无 机 成 分 包 括 人 体 必 须 的 无 机 盐 ( 或 称 矿 物 质 ), 其 中 含 量 较 多 的 有 Ca Mg K Na S P C1
2003 年 浦 江 教 育 大 事 记 1 月 2 日, 金 文 体 训 2003 10 号 通 知, 市 文 体 局 市 教 育 局 联 合 公 布 金 华 市 第 四 届 体 育 科 学 论 文 评 比 结 果 其 中 我 县 获 奖, 二 等 奖 : 傅 光 辉 ( 县 少 体 校 ) 江
浦 江 县 教 育 局 大 事 记 起 止 年 度 :2003 年 1 月 2014 年 12 月 全 宗 号 :J028 编 制 单 位 : 浦 江 县 教 育 局 编 制 时 间 :2015 年 6 月 1 2003 年 浦 江 教 育 大 事 记 1 月 2 日, 金 文 体 训 2003 10 号 通 知, 市 文 体 局 市 教 育 局 联 合 公 布 金 华 市 第 四 届 体 育 科
兽医临床诊断学实验指导
兽 医 临 床 诊 断 学 实 验 指 导 河 北 科 技 师 范 学 院 动 物 科 学 系 临 床 兽 医 学 实 验 室 2009 年 2 月 目 录 学 生 实 验 守 则... 3 实 习 一 动 物 的 接 近 保 定 和 基 本 检 查 法...4 实 习 二 临 床 基 本 检 查 法 及 一 般 检 查...10 实 习 三 循 环 系 统 的 临 床 检 查...15 实 习 四
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Δ UPLC-MS/MS 法 同 时 测 定 沙 参 麦 冬 汤 中 9 种 成 分 的 含 量 1* 吴 茵, 王 蕊 2, 任 炳 楠 1, 孙 源 1, 刘 勇 1 1, 张 黎 媛 (1. 河 北 省 人 民 医 院 药 学 部, 石 家 庄 050051;2. 河 北 中 医 学 院 中 医 诊 断 教 研 室, 石 家 庄 050071) 中 图 分 类 号 R917 文 献 标 志 码
12 12 1 30 40 20 30 10 20 6 10 10 2 34.8 56.1 18.0 20.9 3.8 0.4 17.9 18.3 11.7 9.1 9.1 8.3 9.2 6.3 10.8 8.0 3 1949 1952 1957 1965 1975 1980 1985 100 100 100 100 100 100 100 11.0 19.4 26.1 26.2
报 告 简 要 丽 江 古 城 位 于 云 南 省 西 北 部, 始 建 于 宋 末 元 初 古 城 西 北 方 30 公 里 处 是 海 拔 5596 米 的 玉 龙 雪 山 及 第 四 世 冰 川 遗 迹 丽 江 古 城 在 南 宋 时 期 就 初 具 规 模, 已 有 八 九 百 年 的 历
丽 江 古 城 托 管 挂 牌 可 行 性 分 析 报 告 上 海 文 化 产 权 交 易 所 申 江 文 化 商 品 运 营 服 务 平 台 二 零 一 六 年 七 月 报 告 简 要 丽 江 古 城 位 于 云 南 省 西 北 部, 始 建 于 宋 末 元 初 古 城 西 北 方 30 公 里 处 是 海 拔 5596 米 的 玉 龙 雪 山 及 第 四 世 冰 川 遗 迹 丽 江 古 城 在
有 不 良 企 图 时, 就 要 立 即 躲 开 他 当 你 实 在 难 以 分 辨 对 方 是 真 心 实 意 还 是 虚 情 假 意 时, 可 向 父 母 老 师 或 周 围 较 成 熟 和 亲 近 的 朋 友 请 教, 请 他 们 帮 你 分 析 情 况, 做 出 判 断 此 时, 拒 绝 帮
第 一 章 女 生 安 全 2009 年 11 月 2 日 深 夜,51 岁 的 农 民 李 某 翻 墙 进 入 某 中 学 行 窃, 他 悄 悄 来 到 一 小 屋 前, 并 无 所 获 见 屋 内 3 名 少 女 都 已 熟 睡, 便 生 邪 念, 欲 行 不 轨 3 少 女 慷 醒 后, 遭 李 某 的 殴 打 和 猥 亵, 其 中 一 名 16 岁 女 生 乘 机 溜 出 房 外, 将 房
內 容 及 試 題 範 例 術 科 評 量 規 範 評 分 標 準 一 (, 工 具 與 材 料 由 本 校 提 供, 考 生 無 須 自 備 ) ( 一 ) 基 本 焊 接 工 具 操 作 及 辨 識 基 本 手 工 具 設 備 ( 二 ) 測 驗 時 間 50 分 鐘 ( 三 ) 工 具 與 材
104 學 年 度 高 級 中 等 學 校 特 色 招 生 職 業 類 科 甄 選 入 學 內 容 審 查 表 學 校 名 稱 ( 全 銜 ) 私 立 治 平 高 中 日 期 104 年 4 月 25 日 ( 六 ) 科 班 名 資 訊 科 特 色 班 項 目 基 本 焊 接 工 具 操 作 辨 識 基 本 手 工 具 設 備 一 可 聯 接 性 : 術 科 命 題 規 範 命 題 內 容 基 本
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宜蘭縣風景區管理所五峰旗風景特定風景區開放行動咖啡車作業投標須知
宜 蘭 縣 礁 溪 鄉 湯 圍 溝 公 園 委 託 經 營 管 理 契 約 書 立 契 約 書 人 宜 蘭 縣 政 府 ( 以 下 簡 稱 甲 方 ) 為 充 分 利 用 湯 圍 溝 公 園 空 間 效 益, 並 提 昇 遊 憩 服 務 品 質, 特 委 託 ( 以 下 簡 稱 乙 方 ) 經 營 管 理, 特 訂 定 本 契 約, 契 約 內 容 如 后 : 第 一 條 : 一 契 約 文 件 及
第 二 十 七 章 一 夜 苦 熬 第 二 十 八 章 租 房 同 居 第 二 十 九 章 二 人 世 界 第 三 十 章 取 消 面 试 第 三 十 一 章 中 暑 卧 床 第 三 十 二 章 找 到 工 作 第
商 场 风 月 之 新 欢 旧 爱 七 寸 明 月 / 著 第 一 章 凌 晨 惊 梦... 4 第 二 章 前 台 MM... 7 第 三 章 陪 赌 陪 嫖... 11 第 四 章 淫 声 荡 语... 15 第 五 章 孤 儿 报 恩... 19 第 六 章 一 招 断 腕... 21 第 七 章 惹 毛 警 察... 26 第 八 章 痛 扁 犯 人... 29 第 九 章 薄 惩 邢 科...
美 国 研 究
1991 2 1991 3 1991 4 1991 5 1991 6 1991 7 1991 8 1991 9 1991 10 1991 11 1991 12 1991 13 1991 14 1991 15 1991 16 1991 17 1991 18 1991 19 1991 20 1991 21 1991 22 1991 23 1991 24 1991 25 1991 26 1991 27 1991
《垓下歌》 項羽
1. 2. 3. 4. MM1 1 5. 6. 7. 8. MM1 2 9. ( ) 爲 10. 11. MM1 3 12. 13. 14. 15. 縧 16. MM1 4 17. 18. 19. MM1 5 20. 21. 22. 23. 24. 25. MM1 6 26. 27. 28. 29. 30. 31. MM1 7 32. 爲 33. 34. 35. 36. MM1 8 37. 38.