凉茶中 31 种非法添加药物的快速检测胶体金免疫层析法编制说明

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1 凉茶中 31 种非法添加药物的快速检测胶体金免疫层析法编制说明

2 1. 概况 1.1. 任务来源本标准的编制任务来源于深圳市市场监督管理局于 2018 年 12 月 29 日发布的深市质号附件 2018 年第三批深圳市地方标准计划项目汇总表 1.2. 标准起草单位与主要起草人本标准主要起草单位 : 深圳市标准研究院深圳市易瑞生物技术股份有限公司本标准主要起草人 :XXX 付辉金虹王西丽马涛张美娟杨星星李细清王炳志朱海 XXX 1.3. 目的和意义凉茶是传统中草药植物性饮料的通称广东凉茶是中国传统凉茶文化的代表凉茶是将药性寒凉和能消解人体内热的中草药煎水做饮料喝, 以消除夏季人体内的暑气, 或治疗冬日干燥引起的喉咙疼痛等疾患凉茶属于饮料, 不应添加药品然而, 新闻中报道凉茶中非法添加药物事件屡见不鲜再加上饮用时无医师指导, 饮用添加了药物的凉茶易造成用药过量肝肾功能损害药物依赖并加重病症药源性疾病, 甚至对生命造成威胁目前, 凉茶中非法添加药物的相关标准缺失为提高监管与检验效率, 降低监管部门的经济成本, 急需制定凉茶中非法添加药物的标准, 实现现场稽查人员和基层快检实验室对凉茶的快速筛查检测 1.4. 编制过程 2017 年 5 月深圳市标准研究院及深圳市易瑞生物技术股份有限公司 ( 原名 : 深圳市易瑞生物技术有限公司 ) 接到立项通知后, 成立了标准编制小组小组成 1

3 员主要包括研发核心骨干与标准编制人员 2017 年 6 月 -12 月编制小组检索查询搜集国内外相关标准和文献资料, 对所收集资料进行认真分析总结 2018 年 1 月 -12 月编制小组开始方法标准化研究, 包括方法初始评价参数优化, 实验室内部验证 2019 年 1-3 月编制小组编写标准征求意见稿和编制说明 2. 与国内外有关法律法规和其它标准的关系 2006 年 5 月 20 日, 凉茶经国务院批准列入第一批国家级非物质文化遗产 - 传统手工艺类经检索, 目前国内外尚无专门针对凉茶的相关标准针对 31 种药物的检测方法标准中, 吗啡可待因的检测方法有 2018 年市场监管总局发布的食品中吗啡可待因罂粟碱那可丁和蒂巴因的测定 (BJS201802) 补充验证方法以及两项地方标准补充验证方法及地方标准均适用于固体半固体食品或调味料, 均不适用于凉茶, 且采用的检测方法均液相色谱 - 串联质谱测定方法, 与本标准的胶体金免疫层析法不同针对 31 种药物的检测方法标准中, 对乙酰氨基酚安乃近地塞米松倍他米松氯霉素氧氟沙星诺氟沙星环丙沙星洛美沙星磺胺甲恶唑磺胺嘧啶磺胺甲基嘧啶磺胺噻唑磺胺二甲氧嘧啶 14 种药物有检测方法标准, 但均适用于动物源性食品不适用于凉茶, 且检测方法均与本标准的胶体金免疫层析法不同针对 31 种药物的检测方法标准中, 阿司匹林布洛芬氨基比林异丙安替比林吡罗昔康吲哚美辛双氯芬酸钠氢化可的松甲基泼尼松龙醋酸地塞米松醋酸泼尼松泼尼松氟氢可的松马来酸氯苯那敏枸橼酸喷托维林 15 种药物均未有相关检测标准, 可参照中国药典中的相关方法进行检测但中国药典中的方法均与与本标准的胶体金免疫层析法不同 2

4 3. 标准的制定与起草原则本标准是按 GB/T 标准化工作导则第 1 部分 : 标准的结构和编写给出的规则编写, 技术内容是参照 GB/T 标准编写规则第 4 部分 : 试验方法标准确定 4. 各项技术内容确定的依据 4.1. 凉茶种类的确定目前市场上出售的凉茶主要预防感冒凉茶抗风湿凉茶止咳平喘凉茶抗菌消炎凉茶等不同类别的凉茶易出现不同类别的添加药物 : 声称特效感冒凉茶多添加解热镇痛类化学药物, 如乙酰氨基酚阿司匹林布洛芬安乃近氨基比林异丙安替比林等 ; 声称特效抗风湿凉茶多添加抗炎类药物, 如吡罗昔康吲哚美辛双氯芬酸钠等 ; 声称特效止咳平喘凉茶多添加糖皮质激素抗过敏药物罂粟壳镇咳药, 如地塞米松倍他米松氢化可的松甲基泼尼松龙醋酸地塞米松醋酸泼尼松泼尼松氟氢可的松马来酸氯苯那敏枸橼酸喷托维林吗啡可待因等 ; 声称特效抗菌消炎凉茶多添加抗生素药物, 如氯霉素喹诺酮类 ( 氧氟沙星诺氟沙星环丙沙星 3

5 洛美沙星 ) 磺胺 ( 磺胺甲恶唑磺胺嘧啶磺胺甲基嘧啶磺胺噻唑磺胺二甲氧嘧啶 ) 等故确定, 本标准中需要检测的药物为上述常见的 31 种非法添加的药物 4.2. 测定步骤与结果判读的确定样品的前处理饮用凉茶为液体, 如为需事先冲, 则按样品说明书冲泡方法进行冲泡, 取常温冲泡液为样品进行后续实验综合考虑凉茶基质中可能存在的基质干扰以及检测灵敏度的因素, 样品稀释 10 倍, 将基质干扰的影响减小到 10% 左右, 同时保证了足够的灵敏度样品分析步骤的确定参照国家食药总局已发布的 9 项基于胶体金免疫层析原理的快速检测方法 (KJ KJ KJ KJ KJ201801) 的分析步骤进行分析结果判断方法的确定参照国家食药总局已发布的 9 项基于胶体金免疫层析原理的快速检测方法 (KJ KJ KJ KJ KJ201801) 的结果判断 4.3. 方法性能的确定由于关注的药物为非法添加类别, 故无法采用残留类药物检测方法的性能参数确定的通用方法, 即将药物的检测限设为关注浓度的进行考察本标准采取将胶体金免疫层析试剂盒的检出限定为方法的关注浓度进行方法的性能指标考察 4

6 方法性能确定实验用到的检测试剂盒生产单位 : 深圳市易瑞生物技术股份有限公司试剂盒名称 : 凉茶中非法添加化学药物胶体金免疫层析检测试剂盒, 试剂盒批号 : YR1LC1801 YR1LC1802 YR1LC1803 YR1LC1804 试剂盒标注 31 种药物的检出限为 : 检测药物名称检出限 (μg/kg) 检测药物名称检出限 (μg/kg) 对乙酰氨基酚 3000 氟氢可的松 10 阿司匹林 1000 马来酸氯苯那敏 200 布洛芬 200 吗啡 100 安乃近 800 可待因 100 氨基比林 700 枸橼酸喷托维林 50 异丙安替比林 700 氯霉素 5 吡罗昔康 60 环丙沙星 300 吲哚美辛 300 氧氟沙星 300 双氯芬酸钠 100 洛美沙星 300 地塞米松 10 诺氟沙星 300 倍他米松 10 磺胺甲恶唑 500 氢化可的松 10 磺胺嘧啶 400 甲基泼尼松龙 50 磺胺甲基嘧啶 500 醋酸地塞米松 10 磺胺噻唑 200 醋酸泼尼松 10 磺胺二甲氧嘧啶 300 泼尼松方法性能确定实验用到的样品空白样品 : 经仪器方法确认, 无本标准中 31 种化学药物的样品本标准中涉及四种空白样品空白感冒凉茶空白抗风湿凉茶空白止咳平喘凉茶空白抗菌消炎凉茶验证样品 : 空白样品添加相应化学药物所需验证浓度的标准溶液本标准涉及四类验证样品验证感冒凉茶验证抗风湿凉茶验证止咳平喘凉茶验证 5

7 抗菌消炎凉茶方法性能确定实验中用到的标准品标准品用甲醇溶解标准品粉末, 用水稀释序号标准品中文名称标准品英文名称品牌及编号 1 对乙酰氨基酚 Acetaminophen 中国食品药品检定研究院阿司匹林 Aspirin 中国食品药品检定研究院布洛芬 Ibuprofen 中国食品药品检定研究院安乃近 Analgin 中国食品药品检定研究院氨基比林 Aminophenazone 中国食品药品检定研究院异丙安替比林 Propyphenazone 中国食品药品检定研究院吡罗昔康 Piroxicam 中国食品药品检定研究院吲哚美辛 Indomethacin 中国食品药品检定研究院双氯芬酸钠 Diclofenac sodium 中国食品药品检定研究院地塞米松 Dexamethasone 中国食品药品检定研究院倍他米松 Betamethasone 中国食品药品检定研究院氢化可的松 Hydrocortisone 中国食品药品检定研究院纯度 (HPLC 测定或特性量值 ) 99.9% 99.8% 99.9% 94.5% 99.7% 100% 99.5% 99.9% 100% 99.8% 99.3% 99.2% 13 甲基泼尼松龙 Methylprednisolon e 中国食品药品检定研究院 % 14 醋酸地塞米松 Dexamethasone acetate 中国食品药品检定研究院 % 15 醋酸泼尼松 Prednisone acetate 中国食品药品检定研究院 % 6

8 序号标准品中文名称标准品英文名称品牌及编号 16 泼尼松 Prednisone 中国食品药品检定研究院氟氢可的松 Fludrocortisone 中国食品药品检定研究院纯度 (HPLC 测定或特性量值 ) 99.6% 99.8% 18 马来酸氯苯那敏 Chlorpheniramine maleate 中国食品药品检定研究院 % 19 吗啡 Morphine Sigma-Aldrich cerilliant M 可待因 Codeine Sigma-Aldrich cerilliant C-006-1ML 21 枸橼酸喷托维林 Pentoxyverine 中国食品药品检定研究院氯霉素 Chloramphenicol 国家标准品网 YJ 环丙沙星 Ciprofloxacin 国家标准品网 BW A 24 氧氟沙星 Ofloxacin 国家标准品网 SYH 洛美沙星 Lomefloxacin 中国食品药品检定研究院诺氟沙星 Norfloxacin 国家标准品网 SYH 磺胺甲恶唑 Sulfamethoxazole 国家标准品网 YJ 磺胺嘧啶 Sulfadiazine 国家标准品网 SYH 磺胺甲基嘧啶 Sulfamerazine 国家标准品网 GBW(E) 磺胺噻唑 Sulfathiazole 国家标准品网 GBW(E) 磺胺二甲氧嘧啶 Sulfadimethoxine 国家标准品网 % 99.7% 99.8% 99.8% 100% 99.5% 90.4% 99.4% 99.6% 99.5% 99.8% 99.9% 98% 7

9 方法性能确定实验方案检出限涉及的计算因关注药物为非法添加药物, 故以试剂盒的检出限为关注浓度进行验证在经确认的空白感冒凉茶空白抗风湿凉茶空白止咳平喘凉茶空白抗菌消炎凉茶样品中, 分别添加对应类别相应化学药物的标准溶液, 添加水平为倍关注浓度 1 倍关注浓度 2 倍关注浓度, 每个浓度水平, 做 20 次平行测试计算 4 种基质每个浓度水平的阳性检出率式中 : POD 阳性结果检出率 ; X 检出阳性结果数 ; N 检测样品数 ; POD = χ Ν 100%... 公式灵敏度的计算出率在添加的 1 倍关注浓度的验证样品中考察灵敏度, 即阳性样品中阳性结果检式中 : p+ 灵敏度 ; p+= Ν11 Ν1 100%... 公式 2 N11 阳性样品中检出阳性结果数 ; N1 总阳样品数 ; 特异性的计算在空白样品中考察特异性, 即阴性样品中阴性结果检出率 8

10 p = Ν22 Ν2 100%... 公式 2 式中 : p- 特异性 ; N11 阴性样本中检出阴性结果数 ; N1 总阴性样本数 ; 假阴性率的计算在添加的 1 倍关注浓度的验证样品中考察假阴性率, 即阳性样品中阴性结果检出率式中 : pf = Ν12 Ν1 100%... 公式 3 Pf- 假阴性率 ; N12 阳性样本中检出阴性结果数 ; N1 总阳性样本数 ; 假阳性率的计算在空白样品中考察特假阳性率, 即阴性样品中阳性结果检出率式中 : pf+= Ν21 Ν2 100%... 公式 4 Pf- 假阴性率 ; N21 阴性样本中检出阳性结果数 ; N2 总阴性样本数 ; 9

11 4.4. 方法性能验证结果检出限感冒凉茶添加药物 (μg/kg) (N=20) POD 对乙酰氨基酚 (+), 10(-) 50% (+), 0(-) 100% (+), 0(-) 100% 阿司匹林 (+), 10(-) 50% (+), 0(-) 100% (+), 0(-) 100% 布洛芬 (+), 10(-) 50% (+), 0(-) 100% (+), 0(-) 100% 安乃近 (+), 10(-) 50% (+), 0(-) 100% (+), 0(-) 100% 氨基比林 (+), 10(-) 50% (+), 0(-) 100% (+), 0(-) 100% 异丙安替比林 (+), 10(-) 50% (+), 0(-) 100% (+), 0(-) 100% 据上表可知, 胶体金免疫层析检测快速检测方法对对乙酰氨基酚的检出限为 3000μg/kg; 对阿司匹林的检出限为 1000μg/kg; 对布洛芬的检出限为 200μg/kg; 对安乃近的检出限为 200μg/kg; 对氨基比林的检出限为 700μg/kg; 对异丙安替比林的检出限为 700μg/kg 10

12 抗风湿凉茶添加药物 (μg/kg) (N=20) POD 吡罗昔康 30 10(+), 10(-) 50% 60 20(+), 0(-) 100% (+), 0(-) 100% 吲哚美辛 (+), 10(-) 50% (+), 0(-) 100% (+), 0(-) 100% 双氯芬酸钠 50 10(+), 10(-) 50% (+), 0(-) 100% (+), 0(-) 100% 据上表可知, 胶体金免疫层析检测快速检测方法对吡罗昔康的检出限为 60μg/kg; 对吲哚美辛的检出限为 300μg/kg; 对双氯芬酸钠的检出限为 100μg/kg 止咳平喘凉茶添加药物 (μg/kg) (N=20) POD 地塞米松 5 10(+), 10(-) 50% 10 20(+), 0(-) 100% 20 20(+), 0(-) 100% 倍他米松 5 10(+), 10(-) 50% 10 20(+), 0(-) 100% 20 20(+), 0(-) 100% 氢化可的松 5 10(+), 10(-) 50% 10 20(+), 0(-) 100% 20 20(+), 0(-) 100% 甲基泼尼松龙 25 10(+), 10(-) 50% 50 20(+), 0(-) 100% (+), 0(-) 100% 醋酸地塞米松 11

13 添加药物 (μg/kg) (N=20) POD 5 10(+), 10(-) 50% 10 20(+), 0(-) 100% 20 20(+), 0(-) 100% 醋酸泼尼松 5 10(+), 10(-) 50% 10 20(+), 0(-) 100% 20 20(+), 0(-) 100% 泼尼松 5 10(+), 10(-) 50% 10 20(+), 0(-) 100% 20 20(+), 0(-) 100% 氟氢可的松 5 10(+), 10(-) 50% 10 20(+), 0(-) 100% 20 20(+), 0(-) 100% 马来酸氯苯那敏 (+), 10(-) 50% (+), 0(-) 100% (+), 0(-) 100% 吗啡 50 10(+), 10(-) 50% (+), 0(-) 100% (+), 0(-) 100% 可待因 50 10(+), 10(-) 50% (+), 0(-) 100% (+), 0(-) 100% 枸橼酸喷托维林 25 10(+), 10(-) 50% 50 20(+), 0(-) 100% (+), 0(-) 100% 据上表可知, 胶体金免疫层析检测快速检测方法对地塞米松的检出限为 10μg/kg; 对倍他米松的检出限为 10μg/kg; 对氢化可的松的检出限为 10μg/kg; 对甲基泼尼松龙的检出限为 50μg/kg; 对醋酸地塞米松的检出限为 10μg/kg; 对醋酸泼尼松的检出限为 10μg/kg; 对泼尼松的检出限为 10μg/kg; 对氟氢可的松的检出限为 10μg/kg; 对马来酸氯苯那敏的检出限为 200μg/kg; 对吗啡的检出限为 100μg/kg; 对可待因的检出限为 100μg/kg; 对枸橼酸喷托维林的检出限为 50μg/kg 12

14 抗菌消炎凉茶添加药物 (μg/kg) (N=20) POD 氯霉素 (+), 10(-) 50% 5 20(+), 0(-) 100% 10 20(+), 0(-) 100% 氧氟沙星 (+), 10(-) 50% (+), 0(-) 100% (+), 0(-) 100% 诺氟沙星 (+), 10(-) 50% (+), 0(-) 100% (+), 0(-) 100% 环丙沙星 (+), 10(-) 50% (+), 0(-) 100% (+), 0(-) 100% 洛美沙星 (+), 10(-) 50% (+), 0(-) 100% (+), 0(-) 100% 0 0(+),20(-) 0 磺胺甲恶唑 (+), 10(-) 50% (+), 0(-) 100% (+), 0(-) 100% 磺胺嘧啶 (+), 10(-) 50% (+), 0(-) 100% (+), 0(-) 100% 磺胺甲基嘧啶 (+), 10(-) 50% (+), 0(-) 100% (+), 0(-) 100% 磺胺噻唑 (+), 10(-) 50% (+), 0(-) 100% (+), 0(-) 100% 磺胺二甲氧嘧啶 13

15 添加药物 (μg/kg) (N=20) POD (+), 10(-) 50% (+), 0(-) 100% (+), 0(-) 100% 据上表可知, 胶体金免疫层析检测快速检测方法对氯霉素的检出限为 5μg/kg; 对氧氟沙星的检出限为 300μg/kg; 对诺氟沙星的检出限为 300μg/kg; 对环丙沙星松龙的检出限为 300μg/kg; 对洛美沙星的检出限为 300μg/kg; 对磺胺甲恶唑的检出限为 500μg/kg; 对磺胺嘧啶的检出限为 400μg/kg; 对磺胺甲基嘧啶的检出限为 500μg/kg; 对磺胺噻唑的检出限为 200μg/kg; 对磺胺二甲氧嘧啶的检出限为 300μg/kg 灵敏度特异性假阳性率假阴性率感冒凉茶添加药物对乙酰氨基酚阿司匹林布洛芬安乃近氨基比林异丙安替比林 (μg/kg) (N=20) (+), 0(-) (+), 0(-) (+), 0(-) (+), 0(-) (+), 0(-) (+), 0(-) 灵敏度特异性假阴性率假阳性率抗风湿凉茶添加药物添加浓度 (μg/kg) 检测结果 (N=20) 灵敏度特异性假阴性率假阳性率吡罗昔康 14

16 吲哚美辛双氯芬酸钠 60 20(+), 0(-) (+), 0(-) (+), 0(-) 止咳平喘凉茶添加药物地塞米松倍他米松氢化可的松甲基泼尼松龙醋酸地塞米松醋酸泼尼松泼尼松氟氢可的松马来酸氯苯那敏吗啡可待因枸橼酸喷托维林 (μg/kg) (N=20) 10 20(+), 0(-) 10 20(+), 0(-) 10 20(+), 0(-) 50 20(+), 0(-) 10 20(+), 0(-) 10 20(+), 0(-) 10 20(+), 0(-) 10 20(+), 0(-) (+), 0(-) (+), 0(-) (+), 0(-) 50 20(+), 0(-) 灵敏度特异性假阴性率假阳性率 15

17 抗菌消炎凉茶添加药物氯霉素氧氟沙星诺氟沙星环丙沙星洛美沙星磺胺甲恶唑磺胺嘧啶磺胺甲基嘧啶磺胺噻唑磺胺二甲氧嘧啶 (μg/kg) (N=20) 5 20(+), 0(-) (+), 0(-) (+), 0(-) (+), 0(-) (+), 0(-) (+), 0(-) (+), 0(-) (+), 0(-) (+), 0(-) (+), 0(-) 灵敏度特异性假阴性率假阳性率 4.5. 方法性能验证结论本研究采用胶体金免疫层析方法对凉茶中 31 种非法添加药物进行检测检测结果表明该方法对 31 种药物的检出限灵敏度假阴性率假阳性率均与标准一致, 标准方法有效 16

标准名称

标准名称 ICS 31.260 L 51 DB 深圳市地方标准 DB XX/ XXXXX XXXX 凉茶中 31 种非法添加药物的快速检测胶体金免疫层析法 Rapid detection of 31 illegally added drugs in herbal tea by colloidal gold immunochromatography ( 征求意见稿 ) - XX - XX 发布 XXXX - XX

凉茶中 31 种非法添加药物的快速 检测胶体金免疫层析法 编制说明

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