WB画册_180725

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1 访问我们的官网 : 了解更多信息 免疫印迹产品 选择指南 Western Blot Selection Guide 上海翊圣生物科技有限公司 Yeasen Biotech Co., Ltd. 上海市浦东新区国际医学园区天雄路 166 号 1 号楼 302 Service Hotline: Web: Technical Support: techserv@yeasen.com Product consultation: marketing@yeasen.com Yeasen Biotech Co., Ltd

2 目录 & 简介 TABLE OF CONTENTS COMPANY PROFILE 蛋白抽提 03 蛋白定量蛋白电泳 上海翊圣生物科技有限公司 (Yeasen Biotech Co., Ltd.) 成立于 2009 年, 是一家专注于酶制剂和抗原抗体开发的高新技术型企业, 致力于为生命科学研究领域内的科研客户及精准医疗相关行业的工业客户提供高质量的产品和优质的服务 公司现阶段建设有分子 蛋白 细胞和免疫四大技术平台 拥有全面丰富的产品线, 包括 PCR qpcr 高保真 DNA 聚合酶 逆转录相关制剂 克隆试剂盒 高通量 MaxUP 系列 DNA 和 RNA 建库试剂盒 细胞培养 支原体检测 预防 去除试剂, 以及体外诊断相关的酶原料 试剂和磁珠等 3000 多种试剂和试剂盒, 服务于全国各级高校 研究所 医院 第三方检测机构 生物医药公司等 2.5 万家客户, 助力发表高质量 SCI 论文 1000 余篇 转膜与封闭 11 未来, 我们仍将以服务好生命科学领域内每一位客户的理念, 本着诚信 务实 创新 奉献的精 神, 继续为人类生命科学研究提供更好的产品与服务 蛋白检测 抗体剥离与膜再生 常用抗体 附录 :Western Blot 常见问题分析与技巧 客户数量发表论文试剂种类累计影响因子

3 WESTERN BLOT 免疫印迹 Western Blot是对蛋白质分子进行印迹分析的实验 其基本原理是用聚丙烯酰胺 凝胶电泳分离样品中的蛋白质 而后将蛋白质转移到固相载体 如NC膜/PVDF膜 上 固相载体以非共价键形式吸附蛋白质 且能保持电泳分离的多肽类型及生物 学活性不变 以固相载体上的蛋白质作为抗原 与特异性的抗体起免疫反应 再与 酶标记的第二抗体反应 经过底物显色来检测电泳分离的目的蛋白 目的蛋白的抗原性和分子量检测 应用 目的蛋白的磷酸化或糖基化修饰鉴定 目的蛋白的表达量差异分析 目的蛋白与其他蛋白/DNA/RNA相互作用检测 获取更多信息 请登录 page 01/02

4 蛋白抽提 蛋白抽提 细胞裂解液 在提取细胞蛋白的过程中, 常采用匀浆 研磨或超声破碎的方法使细胞裂解, 但往往会因产热 裂解不完全而导致蛋白得率较低 实验重复性较差, 而使用细胞裂解液不仅能够有效防止蛋白降解, 还能够提高蛋白的均一性, 从而获得较高质量的蛋白样品 根据靶蛋白定位选择不同的裂解液蛋白定位裂解液种类全细胞 NP-40 或 RIPA 产品名称 常用浓度 货号 规格 20102ES03 1 g 89 CHAPS 2%-4% 20102ES08 5 g ES25 25 g ES g 5358 SDS 十二烷基硫酸钠 (molecular biology) 10% 20106ES g 188 Triton X-100 曲拉通 X-100 / 20107ES ml 258 Triton X-114 曲拉通 X-114 / 20108ES ml 258 NP-40 (Nonidet P 40) 乙基苯基聚乙二醇 1% 20103ES ml 159 蛋白酶 / 磷酸酶抑制剂 单一蛋白酶抑制剂 细胞质 ( 可溶性蛋白 ) 细胞质 ( 细胞骨架等不溶性蛋白 ) 细胞膜细胞核线粒体 Tris-HCl Tris-Triton NP-40 或 RIPA RIPA RIPA 对细胞进行裂解后, 与目标蛋白一起释放出来的还有蛋白酶和磷酸酶, 它们会水解蛋白为多肽或氨基酸 此过程会导致许多重要蛋白的流失, 进而严重的影响下游实验 因此需要在细胞裂解过程中加入相应的蛋白酶或磷酸酶抑制剂, 从而确保目标蛋白的完整性 抑制剂靶蛋白酶家族溶解货号规格 PMSF 丝氨酸蛋白酶 ( 不可逆型 ) 甲醇 20104ES03 1 g ES g 318 产品名称应用效果适用实验货号规格 RIPA Lysis Buffer (Strong) RIPA 裂解液 ( 强 ) RIPA Lysis Buffer (Weak) RIPA 裂解液 ( 弱 ) RIPA Lysis Buffer (Medium) RIPA 裂解液 ( 中 ) Lysis Buffer for WB/IP Assays 免疫印迹及免疫沉淀用 (WB/IP) 裂解液 强裂解细胞膜蛋白 核蛋白 胞浆蛋白 强裂解细胞膜蛋白 胞浆蛋白 ; 弱裂解核蛋白 强裂解胞浆蛋白 ; 中等裂解细胞膜蛋白 核蛋白 非变性条件下裂解细胞 / 组织, 能够维持蛋白间原有的相互作用 WB/IP 20101ES ml 228 WB/IP 20114ES ml 228 WB/IP 20115ES ml 228 WB/IP/Co-IP 20118ES ml 228 AEBSF Leupeptin 亮抑酶肽 ( 超纯 ) 无毒的 PMSF 替代物, 丝氨酸蛋白酶 ( 不可逆型 ) 丝氨酸 半胱氨酸蛋白酶 ( 可逆型 ) Aprotinin 抑肽酶丝氨酸蛋白酶 ( 可逆型 ) 水 水 20111ES50 50 mg 458 水 20112ES08 5 mg ES50 5 mg ES08 5 mg ES50 50 mg 2098 Pepstatin 胃蛋白酶抑制剂天冬氨酸蛋白酶 ( 可逆型 ) 甲醇 20113ES08 5 mg 288 E-64 蛋白酶抑制剂半胱氨酸蛋白酶 ( 不可逆型 ) 水 20129ES08 5 mg 918 E-64d 蛋白酶抑制剂 Bestatin 贝他定 ( 苯丁抑制素 ) 钙蛋白酶 半胱氨酸蛋白酶和组织蛋白酶 F,K,B, H,L( 不可逆型 ) 亮氨酸氨肽酶氨肽酶 B( 不可逆型 ) DMSO 乙醇 20130ES08 5 mg 1875 DMSO 20132ES10 10 mg 1188 Sodium Orthovanadate 正钒酸钠 碱性磷酸酶 酸性磷酸酶 酪氨酸磷酸酶 ATPase( 不可逆型 ) 水 20133ES10 10 g 87 细胞裂解常备组分 在细胞裂解过程中加入一些表面活性剂 ( 如 CHAPS) 离子去垢剂 ( 如 SDS NP-40) 等成分, 可有效增溶膜蛋白, 裂解蛋白和稳定蛋白, 从而提高目标蛋白的含量 斑蝥素 ( 蛋白磷酸酶 2A 抑制剂 ) 蛋白磷酸酶 2A 蛋白磷酸酶 1 DMSO 丙酮 乙醇 20134ES25 25 mg ES mg ES mg 4167 EDTA, Free Acid 金属蛋白酶 ( 可逆型 ) 水 60126ES g 200 EDTA 二钠盐金属蛋白酶 ( 可逆型 ) 水 60127ES g 180 page 03/04

5 蛋白抽提 混合型蛋白酶抑制剂 在检测同一样本的多个蛋白时, 单一蛋白酶抑制剂的作用始终是受限的, 无法完全保证所有目的蛋白活性不受影响 这时, Cocktail - 蛋白酶 / 磷酸酶抑制剂混合物此时就是最佳选择 蛋白抽提试剂盒 细胞核蛋白 细胞膜蛋白 细胞浆蛋白和线粒体在细胞研究和蛋白质组学中具有重要意义, 因此在体外研究中需要将其从细胞或组织中分离 此时选择快速 便捷 高效的蛋白抽提试剂盒便可以达到事半功倍的效果 抑制剂特点货号规格 种类特点货号规格 蛋白酶抑制剂 Cocktail, EDTA-free, 迷你型, 片剂 蛋白酶抑制剂 Cocktail, EDTA-free,100 DMSO 储液 混合型磷酸酶抑制剂 同时持续抑制丝氨酸蛋白酶, 半胱氨酸蛋白酶及金属蛋白酶等在内的多种蛋白酶 ; 可应用几乎所有的组织及细胞提取物, 包括动物, 植物, 酵母, 细菌和真菌样品 ; 1 片可应用于 10 ml 裂解液 ; EDTA-Free, 确保金属依赖性蛋白的有效纯化以及蛋白活性不受影响 广谱抑制来源于动植物 细菌 酵母等组织或细胞内的丝氨酸蛋白酶 半胱氨酸蛋白酶 氨肽酶 酸性蛋白酶等 ; 本品不含 EDTA, 特别适用于活性中心为金属离子依赖的蛋白 ; 兼容后续的固定化金属离子亲和层析凝胶电泳及天然凝胶电泳等蛋白分析实验 20123ES ES50 10 tablets (1 瓶 ) 50 tablets (1 瓶 ) ES ES ES ES ml 细胞核 / 细胞浆蛋白抽提试剂盒 细胞膜 / 细胞浆 蛋白抽提试剂盒 组织 / 细胞线粒体 分离试剂盒 是一种简单方便 高效的蛋白抽提方法, 通过试剂 A 和 B, 在低渗透压下, 使细胞充分膨胀, 释放出细胞浆蛋白, 然后通过离心得到细胞核沉淀 最后通过试剂 C 抽提得到细胞核蛋白 抽提的膜蛋白包括质膜上的蛋白 线粒体膜 内质网膜以及高尔基体膜等上的膜蛋白 ; 整个过程仅需约 90 min 即可完成 ; 抽提得到的蛋白可以用于 SDS-PAGE WB 酶活性测定等后续实验 快速便捷分离组织 / 细胞线粒体, 获得的线粒体纯度较高, 且绝大部分都含有完整的内膜和外膜, 可用于线粒体的生理功能等方面的研究 ; 得到的线粒体也可被相应裂解液裂解得到线粒体蛋白, 从而用于后续 SDS-PAGE WB 双向电泳及免疫共沉淀等分析 20126ES ES ES ES ES ES60 50 T 100 T 50 T 100 T 50 T 100 T 由于组织和细胞中充斥着大量的酶原, 经裂解后释放到体外的酶原被充分激活从而开始消化周围的蛋白 因此, 在研究蛋白磷酸化途径和信号通路的过程中保护蛋白磷酸化状态是极其关键的, 而使用多组分的磷酸酶抑制剂更能有效保护蛋白的磷酸化修饰 抑制剂特点货号规格 磷酸酶抑制剂混合物 (100, 储存液 ) 广谱抑制非特异性的酸性 / 碱性磷酸酶以及特异性的蛋白酪氨酸磷酸酶, 丝氨酸 / 苏氨酸蛋白磷酸酶 (PPA,PP2A); 可用于 WB Co-IP Pull-down assay IF IHC 激酶研究等多种分析 20109ES ES ES70 2 ml 10 2 ml ml 蛋白提取后保存方法和保存时间在不被蛋白酶水解和细菌污染的条件下, 可置 -80 保存一年 2. 如何确保提取的细胞数量能够达到做 WB 的标准? 一般 足矣, 常规 WB 实验, 每个上样孔要 10 5 个细胞, 具体也和靶蛋白及提取方式有关, 如果是提取膜蛋白或某细胞器内蛋白, 则相应增加细胞数 3. 蛋白抽提试剂盒适用对象 裂解液选择小技巧 Yesen 试剂盒目前只针对哺乳动物细胞和组织的提取, 试剂盒中因不含去除细胞壁的成分, 所以不能用于植物蛋白的提取 强 RIPA 裂解液中因含有 SDS Triton X-100 等裂解成分, 对蛋白间形成的复合物有影响, 因此, 对于总蛋白的提取较为适用 ; RIPA 裂解液 ( 中 ) 和 RIPA 裂解液 ( 弱 ) 中含有温和的 NP-40, 对蛋白间形成的复合物影响较小, 适合免疫共沉淀, 可用于研究蛋白间相互作用 page 05/06

6 蛋白定量 & 电泳 蛋白定量 蛋白电泳 蛋白定量目前常用比色法, 将化学试剂加入到蛋白样品溶液中发生颜色变化, 利用分光光度计或酶标仪检测这一变化, 并与已知浓度的蛋白标准曲线做比较从而确定样品的浓度 常规分为两类 : 一类是检测与蛋白螯合后被还原铜离子的间接检测法, 如 BCA 法和改良 Lowry 法一类是使用与蛋白结合的染料, 检测样品中颜色变化的直接检测法, 如考马斯 (Bradford) 蛋白定量法 制胶 蛋白电泳经常使用聚丙烯酰胺凝胶来实现蛋白分离, 此类凝胶一般由浓缩胶和分离胶两部分组成 前者起到将蛋白样品进行浓缩的作用, 后者则是根据凝胶所使用的丙烯酰胺单体和 N,N- 亚甲基双丙烯酰胺 ( 甲叉丙烯酰胺 ) 交联剂的浓度不同从而分离不同大小范围的蛋白质 为了省时 方便 更少接触有毒试剂, 常常使用不同浓度的预制胶进行天然蛋白电泳和变性蛋白电泳, 将目的蛋白进行有效分离 产品名称 适用性分离分子量范围货号规格 产品名称 灵敏度 货号 规格 20201ES T 288 BCA 蛋白浓度测定试剂盒 ( 增强型 ) 最低蛋白检测量可达 0.2 μg 20201ES T ES T ES T 98 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒 最低蛋白检测量可达 1 μg 20202ES T 398 考马斯亮蓝 G250 / 20203ES10 10 g 178 BSA 标准品 (2 mg/ml) / 20204ES10 10 ml 148 / 20204ES50 50 ml 498 聚丙烯酰胺凝胶的配制 SDS-PAGE 凝胶配制试剂 PAGE 凝胶制备试剂盒 (10%) PAGE 凝胶制备试剂盒 (12%) PAGE 凝胶制备试剂盒 (15%) 变性电泳适用 变性 非变性电泳均适用 4 Tris-HCl-SDS 分离胶缓冲液,pH8.8 变性电泳适用 / / / kda kda kda 20328ES ES ES ES ES62 1 kit(30~50 gels) 1 kit (150~250 gels) 125 mini gels 125 mini gels 125 mini gels 4 Tris-HCl 分离胶缓冲液, ph8.8 变性 非变性电泳均适用 / 20321ES ml 4 Tris-HCl-SDS 浓缩胶缓冲液,pH6.8 变性电泳适用 / 20322ES76 4 Tris-HCl 浓缩胶缓冲液, ph6.8 变性 非变性电泳均适用 / 20323ES ES ml ml 500 ml 预制胶 8%-20% 高分辨率梯度预制胶,10 孔 kda 36230ES10 1 盒 (10 块 ) 236 4%-20% 高分辨率梯度预制胶,10 孔 8% 高分辨率梯度预制胶,10 孔 10% 高分辨率梯度预制胶,10 孔 变性 非变性电泳均适用 kda kda kda 36231ES ES ES10 1 盒 (10 块 ) 1 盒 (10 块 ) 1 盒 (10 块 ) 定量方法优点缺点 12% 高分辨率梯度预制胶,10 孔 15% 高分辨率梯度预制胶,10 孔 kda kda 36234ES ES10 1 盒 (10 块 ) 1 盒 (10 块 ) BCA 有良好的线性关系 检测速度慢, 需要 30 min 或更长时间 兼容绝大多数裂解液, 如兼容高达 5% SDS 5% Triton X-100 5% Tween-20/60/80 等去垢剂 易受螯合剂和还原剂影响, 需确保 EDTA 低于 10 mm, 无 EGTA,DTT 低于 1 mm,β- 巯基乙醇低于 0.01% 预制胶缓冲液变性蛋白预制胶缓冲液 ( 粉末 ) 天然蛋白预制胶缓冲液 ( 粉末 ) 变性电泳适用 非变性电泳适用 / / 36236ES ES01 1 包 1 包 Bradford 检测速度极快 能够耐受较高浓度的还原剂 线性关系不如 BCA 好 易受去垢剂, 如高于 0.01% SDS 0.05% Triton X % Tween-20/60/80 等的影响 你不知道的 Yeasen 预制胶 1. 兼容大部分的 mini SDS-PAGE 电泳槽 :Bio-Rad Mini-PROTEAN (II/3 /Tetra System) Life Technology Novex Mini-Cell ( 与特制挡板配合使用 ); 2. Yeasen 预制胶必须搭配 Yeasen 预制胶缓冲液使用 ; 3. Yeasen 预制胶采用 HEPES 电泳缓冲体系, 相比 Tris-Gly 体系, 跑胶时间短 (150 V,40-50 min), 分离蛋白范围宽, 保存时间也较长 page 07/08

7 蛋白电泳 上样缓冲液 电泳缓冲液 染色与脱色 目前常见的蛋白电泳方式为变性还原电泳 非变性还原电泳和非变性非还原电泳, 选择合适的上样缓冲液和电泳缓冲液对实验的成功至关重要 产品名称特点货号规格 DTT 二硫苏糖醇 TCEP Hydrochloride 三 (2- 羧乙基 ) 膦盐酸盐 5 SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液 蛋白 Marker 蛋白分子量标准 (Marker) 不仅具有指示蛋白条带所对应的分子量大小, 还可以检测蛋白转移是否成功或者蛋白 样品在凝胶上的电泳程度等 选择合适的 Marker 不仅方便准确的定性目的蛋白, 还能够很好的监测整个实验体 系, 以便分析可能会遇到的问题 作用与 β- 巯基乙醇类似, 但刺激性和毒性都要低于后者, 且粉末的稳定性高于后者 作用与 DTT 和 β- 巯基乙醇类似, 不含硫醇基且无臭味, 稳定性高 还原性强,pH 工作范围广 ( ) 兼容性广 含有 SDS 和 DTT, 不含 β- 巯基乙醇 20311ES ES ES80 10 g 100 g 1 kg ES03 1 g ES08 5 g ES10 10 g ES ES20 2 ml 10 2 ml 5 非变性蛋白上样缓冲液含有 DTT, 不含 SDS 和 β- 巯基乙醇 20316ES05 2 ml 45 5 非变性非还原蛋白上样缓冲液不含 SDS DTT 和 β- 巯基乙醇 20317ES05 2 ml Tris-Glycine-SDS 电泳缓冲液 / 20319ES ml kda SDS-PAGE 电泳结束后常常通过染色和脱色评定结果的优劣, 一般选择考马斯亮蓝 R-250 进行染胶, 染色灵敏度高 ; 另外也常常对转膜后的凝胶上残余蛋白进行染色, 来分析转膜效果的好坏 产品名称 货号 规格 考马斯亮蓝快速染色液 (8 分钟 ) 20309ES03 8 ml(125x) ES10 10 g 189 Coomassie Brilliant Blue R250 考马斯亮蓝 R ES25 25 g 385 Protein Silver Stain Kit 蛋白质银染试剂盒 36244ES20 20 T ES50 50 T ES g 108 Tris Base 三 ( 羟甲基 ) 氨基甲烷 60102ES80 1 kg ES90 5x1 kg ES96 1 桶 (25 kg) ES g 88 Glycine 甘氨酸 60112ES80 1 kg ES90 5x1 kg ES96 1 桶 (25 kg) ES08 5 g 70 Bromophenol blue 溴酚蓝 60503ES25 25 g 198 WB 专用一抗二抗稀释液 36206ES ml ES ml 538 Unstained 蛋白 Marker 最简单, 最标准的蛋白分子量标准品未带染料分子或标记分子, 所示条带正是蛋白本身的大小 ; 需要印迹前用丽春红等染色显色, 胶上做标记才可分析结果 ; Prestained 蛋白 Marker 可实时监控电泳过程的分子量标准品 如何判断电泳和转膜的好坏? 1. 判断电泳是否正常 ( 间接法 ) a. 可同时跑两块胶, 一块用于考染, 检测蛋白电泳效果 ; 另一块用于后续的 WB 实验 ; b. 可通过预染的蛋白 Marker 跑胶的情况来判断靶蛋白分离的效果 产品名称 货号 规格 Unstained Protein Ladder 未染色蛋白质分子量标准 ( kda) 20312ES76 2x250 µl 786 Unstained Protein Ladder 未染色蛋白质分子量标准 ( kda) 20313ES µl ES μl 386 三色预染蛋白质分子量标准 ( kda) 20351ES μl ES μl 判断转膜的好坏 a. 可将转膜后的蛋白胶进行考染, 通过胶上蛋白条带的有无来判断靶蛋白是否完全转到膜上 ( 间接法 ); b. 可通过预染的蛋白 Marker 转膜是否成功来判断靶蛋白的转膜好坏 ( 间接法 ); c. 可通过可逆的丽春红染色试剂将膜进行染色, 判断转膜的好坏 ( 直接法 ) 三色预染蛋白质分子量标准 ( kda) 20352ES ES μl μl page 09/10

8 转膜与封闭 转膜与封闭 ( 续表 ) 产品名称适用性货号规格 转膜 BSA, 低内毒素 牛免疫球蛋白 G 组织与细胞培养 ; 载体蛋白 ; 敏感性蛋白稳定剂, 也可用于 ELISA 等诊断检测 36106ES25 25 g ES mg 556 电泳结束后需将分离后的蛋白从凝胶体系中转移到固相载体 ( 如 NC 膜 PVDF 膜 ) 上, 之后在膜上进行一抗 二抗的孵育与洗涤, 最后进行显色 转膜的方法主要有半干转和湿转两种, 目前湿转应用较为广泛, 二者除了机械装置上有所不同外, 原理一样, 都需要 三明治 转膜结构 山羊免疫球蛋白 G 人免疫球蛋白 G(10mg/ml) 小鼠免疫球蛋白 G 猪免疫球蛋白 G 兔免疫球蛋白 G 除封闭作用外, 可作为聚乙二醇或硫酸铵免疫沉淀中的共沉淀试剂 ; 可作为蛋白稳定剂 ; 可作为 IP Co-IP 等实验中抗体对照 IgG; 可作为参考抗原 36109ES ES ES ES ES10 10 mg 1 mg 10 mg 10 mg 10 mg 产品名称 货号 规格 Western Blot 电泳电转通用缓冲液 20329ES03 1 L 15 大鼠免疫球蛋白 G 正常驴血清 正常兔血清 正常小鼠血清 (50%) 选用与二抗相同来源的正常血清作为封闭剂, 常用浓度 5% 36114ES ES ES ES03 10 mg 正常山羊血清 36119ES Skim Milk 脱脂奶粉 不适用于磷酸化蛋白的封闭, 常用浓度 5% 36120ES g 109 封闭 Albumin, Chicken Egg 卵清白蛋白 生化实验中可作为一种 Marker 蛋白用于蛋白电泳, 制备哮喘动物模型或作为一种载体蛋白偶联多肽等 36121ES g 129 封闭 (Blocking) 是 Western Blot 以及其他免疫实验中不可或缺的步骤之一, 封闭的好坏直接影响背景高低, 进而决定是否能跑出一张美观的 WB 图 WB 封闭的目的是结合膜上的非特异性位点, 常用的封闭剂有脱脂奶粉,BSA, 吐温 -20 等 Tween-20 常以 0.05% 的浓度用作一种封闭剂 ; 还可以 % 的浓度用于裂解哺乳动物细胞 60305ES ml 319 产品名称适用性货号规格 免疫封闭剂 稀释剂 ; 营养添加物 ; BSA, 标准级别 蛋白 / 酶稳定剂 ; 蛋白定量标准品 36101ES g 649 转膜 : 大蛋白 (>100kDa) 和小蛋白 (<100kDa) 的转膜小技巧 BSA, 诊断级别 载体蛋白 ; 高灵敏度的免疫分析实验 ( 如放射免疫分析 ); 细胞培养 ; 杂交实验 36102ES25 25 g 大蛋白易在凝胶里形成沉淀, 从而影响转膜, 在转膜缓冲液中加入 0.1% SDS, 可增加蛋白的溶解性, 避免上述情况的发生 ; 由于甲醇易使 SDS 从蛋白上脱离, 因此, 可通过降低甲醇的浓度 ( 低至 10% 或更低 ) 来防止蛋白沉淀 2. 由于 SDS 能够阻止蛋白与膜的结合, 因此在对小蛋白转膜时可不加 SDS, 同时甲醇浓度可增加至 20% BSA, 无 DNase 蛋白酶 IgG 组织与细胞培养 ; 低背景免疫稀释剂 封闭剂 36103ES25 25 g 759 封闭 : 并不是所有的实验都可用脱脂奶粉作为封闭液 BSA, 无脂肪酸 载体蛋白 ; 低脂肪酸要求的代谢反应 / 生化测定 36104ES25 25 g 脱脂奶粉因含有生物素, 不能与生物素化或伴刀豆蛋白标记的抗体一起使用 ; 2. 脱脂奶粉中因含有磷酸酶, 可使膜上的磷酸化蛋白去磷酸化, 因此不能用于磷酸化抗体对蛋白磷酸化的检测, 也不能用于碱性磷酸酶 (AP) 的检测 BSA, 无蛋白酶 蛋白酶敏感性蛋白生产 ; 高灵敏度的免疫分析实验, 更适合用于 RIA/ELISA 实验封闭剂以及抗体稀释液 36105ES25 25 g 739 page 11/12

9 蛋白检测 蛋白检测 化学显色法 产品选择与特点 特点 Enhanced ECL 增强型 Super ECL 超敏型 SuperDura 持久型 MaxiSignal 最高灵敏度型 适用样本 靶点丰度较高常规蛋白样本 靶点丰度低样本有限 靶点丰度较低样本有限 靶点丰度极低样品珍贵 检测灵敏度中等皮克级低皮克级中等飞克级低飞克级 膜上蛋白检测常用方法 化学发光显色法 信号持续时间 < 2 h < 12 h < 24 h < 8 h 适用检测系统所有试剂均适用 X 射线胶片,CCD 成像仪一抗稀释浓度 1:1000-1:4000 1:1000-1:10,000 1:1000-1:50,000 1:5000-1:100,000 显色方法代表类型特点 化学显色法 DAB 显色法稳定性好, 灵敏度较高 (250 pg), 背景一般, 成像性较差, 药品疑有一定致癌性 化学发光显色法 ECL 发光法稳定性好, 灵敏度高 (1 pg), 背景很低, 成像性好, 且可以重复标记 二抗稀释浓度 1:1000-1:4000 1:2000-1:10,000 1:50,000-1:250,000 1:100,000-1:500,000 推荐用膜 NC 膜 NC 膜或 PVDF 膜 NC 膜或 PVDF 膜 NC 膜或 PVDF 膜 存储稳定性室温 1 年室温 1 年室温 1 年 4 1 年, 室温半年 优势 同一级别灵敏度中信号最强 性价比最高适用于多数 WB 实验 最长信号持续时间极其适用于多次曝光 卓越灵敏度极其适用于痕量蛋白检测 化学显色法 DAB 是过氧化物酶 ( 如 HRP) 的生色底物, 在过氧化氢的存在下失去电子而呈现出颜色的变化和积累, 形成浅棕色不溶物 由于生成的显色产物不溶于乙醇, 因此, 在 DAB 显色后, 还可使用溶于乙醇的染料进行后续染色 产品优势 卓越的灵敏度更高的信噪比 皮克至低飞克级的抗原检测精准发光底物, 降低背景 Yeasen M** BCIP 是碱性磷酸酶 (AP) 的常用显色底物, 常与 NBT 联合使用来增强检测灵敏度 检测原理 ( 以 BCIP/NBT 为例 ) 为 : 在 AP 的催化下,BCIP 首先被水解去 更利节省抗体 优化底物系统, 更高抗体结合力 除磷酸基团产生强反应性的中间产物, 然后进一步氧化和二聚合产生一种靛青染料 (indigo dye), 而二聚合反应中产生的两个还原当量 (-2H) 能够还原 NBT 形成不溶性的 NBT-formazan, 呈深紫色或者蓝紫色, 可用于蛋白印迹和免疫组化等染色 优异的性价比极佳的稳定性 更高的性能, 更低的价格新型氧化剂, 常温下稳定保存 图 Yeasen ECL 超敏型底物 Super 相对品牌 M 同级别底物 Crescendo, 检测灵敏度更高 ( 数据来自于中国医学科学院药物研究所 ) 产品名称底物货号规格 DAB(3,3'- 二氨基联苯胺四盐酸 ) HRP 36201ES03 1 g 180 BCIP, P-toluidine Salt 5- 溴 -4- 氯 -3- 吲哚磷酸, 对甲苯胺盐 AP 36204ES mg 370 NBT 氯化硝基四氮唑蓝 AP 36205ES mg 118 DAB 显色试剂盒棕黄色 (WB) HRP 36202ES01 1 Kit 347 DAB 显色试剂盒紫蓝色 (WB) HRP 36203ES01 1 Kit 347 产品名称 货号 规格 36208ES ml 395 ECL 化学发光超敏显色试剂盒 36208ES ml ES ml 325 增强型 ECL 化学发光检测试剂盒 36222ES ml 1255 化学发光显色法 ECL 化学发光超敏显色试剂盒用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶 (HRP) 的抗体及其关联的抗原,ECL 试剂检测的核心原理为氧化反应发光 : 鲁米诺 (lumino) 作为发光底物的主要成分, 在碱性条件下, 通过 HRP 催化, 被 H 2 O 2 氧化生成 3- 氨基邻苯二酸的激发态中间体, 当其回到基态时发出光子, 最大发射波长为 425 nm, 光子信号可通过 X 射线胶片或 CCD 成像仪被捕获 SuperDura 持久性化学发光底物 MaxiSignal 最高灵敏度化学发光底物 36223ES10 10 ml ES ml ES ml ES ml ES10 10 ml ES ml ES ml ES ml 5857 page 13/14

10 抗体剥离与再生 & 常用抗体 显影必备 将膜用 ECL 室温孵育数分钟后, 用保鲜膜包被粘贴固定于 X 光片曝光暗盒, 然后转入暗室, 将 X 光片压在膜上曝光数秒到数小时, 显影定影后蛋白条带可清晰显示在 X 光片上 显色 产品名称 货号 规格 X 光片 36209ES01 1 盒 (100 片 ) 195 稀土高速增感屏 ( 感蓝, 5 7 英寸 ) 36239ES03 1 片 108 稀土高速增感屏 ( 感蓝, 8 10 英寸 ) 36240ES03 1 片 248 Fixing Powder 定影粉 36210ES01 包 20 Developing Powder 显影粉 36211ES01 包 20 常用抗体 一抗 : 内参抗体 内参即内部参照 (Internal Control), 对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白 (Housekeeping Proteins), 它们在各组织和细胞中的表达相对恒定, 在检测蛋白的表达水平变化时常用做参照物 内参的作用 : 1) 检测整个 WB 流程是否正常, 包括转膜 显色及发光体系等 ; 2) 检测基因表达产物是否正确及比较表达产物微量的相对变化 ; 3) 校正上样误差, 确保蛋白半定量结果的可信度 X 射线摄影暗盒 ( 小号 ) X 射线摄影暗盒 ( 中号 ) 36243ES ES 英寸 8 10 英寸 内参的选择 内参选择标准 内参 根据靶蛋白分子量 一般同内参分子量相差 5 kda 以上 根据靶蛋白种属 哺乳动物 植物 GAPDH, β-actin, β-tublin Plant actin, Rubisco 核定位蛋白 Lamin B, TBP, Histone H3, PCNA 根据靶蛋白定位 膜定位蛋白 线粒体定位蛋白 Na,K ATPase VDAC1, COX IV 胞质定位蛋白 GAPDH, β-actin, β-tublin ( 同样适用于全细胞样品检测 ) 抗体剥离与膜再生 根据内参的丰度 异构体以及具体实验目的选择 肌肉组织凋亡检测 选择除 β-actin 以外的内参选择除 Lamin B TBP 以外的内参 当同一个样本中含有两个或两个以上的蛋白需要检测时, 或当对某一种蛋白的检测结果不理想, 需要调整实验条件重新分析时, 有了抗体剥离试剂, 可 将印迹膜上的抗体进行洗脱, 让您在同一张膜上可以做多次杂交实验, 从而免去重复跑电泳和转膜的繁琐步骤, 大大节省您的时间和成本 产品名称 Actin 反应性应用货号规格 30101ES10 10 µl (>50 次 ) 216 β-actin, Human, Mouse, Rat, Hamster, Zebrafish WB, IP, IHC,IF 30101ES ES60 50 µl (>250 次 ) 100 µl (>500 次 ) 产品名称 Western Blot Antibody Stripping Solution 蛋白印迹膜再生液 特点 无 β- 巯基乙醇, 不影响蛋白的完整性 货号 规格 36215ES ml 177 β-actin, Rabbit pab Human,Mouse,Rat, Zebrafish, Monkey ELISA IF WB IHC 30101ES ES ES ES80 40 µl (>40 次 ) 100 μl (>100 次 ) HRP-conjugated β-actin, Human,Mouse, African green monkeys WB 30103ES μl (>200 次 ) 2397 page 15/16

11 常用抗体 ( 续 ) 一抗 : 标签抗体 产品名称 GAPDH GAPDH, (Clone:1A6) 反应性应用货号规格 Human,Mouse, Rabbit, Frog, Fish, Chicken, Rat WB, IHC, IF, ELISA 30201ES ES ES80 20 μl (>50 次 ) 100 μl (>250 次 ) 如果 WB 研究的对象为重组细胞表达的蛋白, 为便于后续的检测及蛋白的纯化, 一般情况它们都带有标签, 如 His Flag HA 等等 标签抗体可特异性识别重组蛋白中的标签抗原, 从而达到对目的蛋白进行鉴定和纯化的科研需求 GAPDH, Rabbit pab HRP-conjugated GAPDH (Clone:1A6), Tubulin β-tubulin, Human, Mouse, Rat, Rabbit Human,Mouse, Rabbit, Frog, Fish, Chicken, Rat Chylamydomonas, Drosophila, Xenopus, mouse, kangaroo rat, human cells, planaria WB WB WB, IHC, IF, IP 30202ES ES ES ES ES ES ES ES80 40 μl (>40 次 ) 100 μl (>100 次 ) 10 μl (>50 次 ) 50 μl (>250 次 ) 40 μl (>20 次 ) 100 μl (>50 次 ) 产品名称 His 标签 His-tag, His-tag, Rabbit mab HRP-conjugated His-tag, Rabbit pab HRP-conjugated His-tag, Flag 标签 应用 货号 规格 ELISA, WB, IP, IF 30401ES50 50 μl (>250 次 ) ES WB 30402ES μl (>50 次 ) 998 WB 30403ES μl (>100 次 ) 688 WB 30404ES µl (>200 次 ) 2527 β-tubulin, Rabbit pab Human, Mouse, Rat, zebrafish WB, IP, IHC, IF 30302ES ES60 20 μl (>50 次 ) 100 μl (>250 次 ) Flag-Tag (DYKDDDDK), Rabbit pab WB 30501ES µl (>100 次 ) 688 HRP-conjugated β-tubulin, α-tubulin, Human,Mouse, Rat very wide; plants, protists,animals (mammals, worms etc.) WB WB, IP, IHC, IF 30303ES10 10 μl (>50 次 ) ES50 50 μl (>250 次 ) ES40 40 μl (>20 次 ) ES μl (>50 次 ) 1356 HRP-conjugated Flag-Tag DYKDDDDK), Flag-Tag (DYKDDDDK), Myc 标签 WB 30502ES μl (>250 次 ) 688 WB, IF, IP, ELISA 30503ES ES ES μl (>250 次 ) (>2,500 次 ) 5 ml (>12,500 次 ) Myc-tag, WB, IF, IP, ELISA 30601ES μl (>250 次 ) HRP-conjugated Myc-tag, WB 30602ES μl (>100 次 ) 988 HA 标签 1. 内参抗体和靶蛋白分子量相差不大时的抗体检测小技巧 可先对靶蛋白进行抗体孵育 显色和检测, 然后通过蛋白印记膜再生液洗掉抗体, 对膜进行再生, 最后再针对内参抗体进行抗体孵育 显色和监测 HA-Tag, WB, IF, IP, ELISA 30701ES μl (>250 次 ) 748 HA-Tag, Rabbit pab WB, IP, IF 30702ES μl (>250 次 ) 868 HRP-conjugated HA-Tag, V5 标签 WB 30703ES μl (>250 次 ) 988 V5-Tag, WB, IP, ELISA 30801ES50 50 μl (>250 次 ) 688 HRP-conjugated V5-Tag, WB 30803ES µl (>200 次 ) 2527 GST 标签 GST-tag, WB, IP, ELISA 30901ES50 50 μl (>250 次 ) 688 GST-tag, Rabbit pab WB 30902ES μl (>200 次 ) 868 HRP-conjugated GST-tag, WB 30903ES50 50 μl (>250 次 ) 688 page 17/18

12 常用抗体 ( 续表 ) 产品名称 应用 货号 规格 酶标二抗 ( 适用单标实验 ) GFP 标签 GFP-tag, WB, IP, IF 31001ES50 50 μl (>250 次 ) 688 GFP-tag, Rabbit pab WB, IP, IF 31002ES μl (>200 次 ) 868 HRP-conjugated GFP-tag, RFP 标签 WB 31003ES50 50 μl (>250 次 ) 688 RFP-tag, WB, IHC, IF 31101ES μl (>250 次 ) 688 MBP 标签 产品名称 JIR 货号大包装价格 Yeasen 货号小包装价格 Peroxidase Goat Anti-Mouse IgG (H+L) 山羊抗小鼠 -HRP 元 /2.0 ml 33201ES 元 /100 µl Peroxidase Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) 山羊抗兔 -HRP 元 /2.0 ml 33101ES 元 /100 µl Peroxidase Goat Anti-Rat IgG (H+L) 山羊抗大鼠 -HRP 元 /2.0 ml 33301ES 元 /100 µl Peroxidase Goat Anti-Guinea Pig IgG (H+L) 山羊抗豚鼠 -HRP 元 /2.0 ml 33401ES 元 /100 µl Peroxidase Goat Anti-Human IgG (H+L) 山羊抗人 -HRP 元 /2.0 ml 33501ES 元 /100 µl Peroxidase Goat Anti-Mouse IgM, µ Chain Specific 山羊抗小鼠 IgM, µ 链特异结合 -HRP 元 /2.0 ml 33220ES 元 /100 µl MBP-tag, Rabbit pab WB 31201ES μl (>250 次 ) 978 Peroxidase Rabbit Anti-Goat IgG (H+L) 兔抗山羊 -HRP 元 /1.5 ml 33701ES 元 /100 µl Peroxidase Rabbit Anti-Sheep IgG (H+L) 兔抗绵羊 -HRP 元 /1.5 ml 33801ES 元 /100 µl 一抗的选择对于一抗的选择, 我们需要根据自己的实验目的和要求来选择特异性高的单克隆抗体或是特异性较低的多克隆抗体, 所谓的单抗, 是针对抗原的单一表位, 而多抗则是针对抗原的多个表位, 有的多抗不仅特异性强, 而且灵敏度比单抗还要好, 因此, 需要我们多查一些资料进行选择 二抗 Alkaline Phosphatase Goat Anti-Mouse IgG (H+L) Alkaline Phosphatase Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) Alkaline Phosphatase Goat Anti-Rat IgG (H+L) Alkaline Phosphatase Rabbit Anti-Goat IgG (H+L) 山羊抗小鼠 -AP 元 /1.0 ml 33202ES 元 /100 µl 山羊抗兔 -AP 元 /1.0 ml 33102ES 元 /100 µl 山羊抗大鼠 -AP 元 /1.0 ml 33302ES 元 /100 µl 兔抗山羊 -AP 元 /1.0 ml 33702ES 元 /100 µl Yeasen 生物提供应用于细胞生物学 免疫学等多个研究领域的抗体, 种类丰富, 性价比优异 每支抗体均经过严格的质控, 具有高度的特异性 优异的灵敏度 最可靠的批间稳定性和全面的应用验证数据, 助力您的蛋白研究 高品质进口 Jackson 二抗权威内参抗体丰富标签抗体多样染料标记应用全面覆盖 酶标二抗 ( 适用多标实验 ) 产品名称 JIR 货号 大包装价格 Yeasen 货号 小包装价格 Peroxidase Donkey Anti-Goat IgG (H+L) 驴抗山羊 -HRP 元 /0.5 ml 34301ES 元 /100 µl Peroxidase Donkey Anti-Mouse IgG (H+L) 驴抗小鼠 -HRP 元 /0.5 ml 34101ES 元 /100 µl 200+ 种产品现货供应, 快速到达, 更有小包装二抗产品线, 灵活选择 Actin Tubulin GAPDH 家族常见优质单克隆抗体, 效价高, 特异性强 支持 His Flag GST Myc HA V5 GFP MBP 等多种标签蛋白纯化和检测 酶标记 FITC 罗丹明 C y 系列 DyLight Alexa Fluor 等一应俱全 W B ELISA IHC IF 多标 单标等实验, 品类齐全 Peroxidase Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) 驴抗兔 -HRP 元 /0.5 ml 34201ES 元 /100 µl Alkaline Phosphatase Donkey Anti-Mouse IgG (H+L) 驴抗小鼠 -AP 元 /0.5 ml 34102ES 元 /100 µl 荧光染料选用 荧光染料 发射光颜色 Ex (nm) Em (nm) 相似染料 Alexa Fluor 405 蓝色 DyLight 405, Cascade Blue Alexa Fluor 488 绿色 Dylight 488, Cy2, FITC Alexa Fluor 546 橘色 DyLight 549, Alexa Fluor 555, Cy3, TRITC Alexa Fluor 594 红色 Dylight 594, Texas Red Alexa Fluor 647 远红 Dylight 649, APC, Cy5 Alexa Fluor 680 近红外 Dylight 680, IRDye 680RD, IRDye 680LT, IRDye 700DX Alexa Fluor 790 近红外 Dylight 800, IRDye 800CW 荧光二抗 ( 适用单标实验 ) 产品名称 JIR 货号大包装价格 Yeasen 货号小包装价格 Cy3-Goat Anti-Mouse IgG (H+L) 山羊抗小鼠 元 /2.0 mg 33208ES 元 /100 µl FITC Goat Anti-Mouse IgG (H+L) 山羊抗小鼠 元 /2.0 mg 33207ES 元 /100 µl Rhodamine (TRITC) Goat Anti-Mouse IgG (H+L) Rhodamine Red-X (RRX) Goat Anti-Mouse IgG (H+L) 山羊抗小鼠 元 /2.0 mg 33209ES 元 /100 µl 山羊抗小鼠 元 /2.0 mg 33210ES 元 /100 µl Alexa Fluor 488 Goat Anti-Mouse IgG (H+L) 山羊抗小鼠 元 /1.5 mg 33206ES 元 /100 µl page 19/20

13 常用抗体 Alexa Fluor 594 Goat Anti-Mouse IgG (H+L) 山羊抗小鼠 元 /1.5 mg 33212ES 元 /100 µl Alexa Fluor 647 Goat Anti-Mouse IgG (H+L) 山羊抗小鼠 元 /1.5 mg 33213ES 元 /100 µl DyLight 405 Goat Anti-Mouse IgG (H+L) 山羊抗小鼠 元 /1.5 mg 33204ES 元 /100 µl FITC Goat Anti-Mouse IgM, µ Chain Specific IgM 山羊抗小鼠, µ 链特异结合 元 /2.0 mg 33221ES 元 /100 µl FITC Goat Anti-Rat IgG (H+L) 山羊抗大鼠 元 /2.0 mg 33307ES 元 /100 µl Cy3 Goat Anti-Rat IgG (H+L) 山羊抗大鼠 元 /2.0 mg 33308ES 元 /100 µl FITC Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) 山羊抗兔 元 /2.0 mg 33107ES 元 /100 µl Cy3 Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) 山羊抗兔 元 /2.0 mg 33108ES 元 /100 µl Rhodamine (TRITC) Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) 荧光二抗 ( 适用单标实验 ) 续表 产品名称 JIR 货号大包装价格 Yeasen 货号小包装价格 山羊抗兔 元 /2.0 mg 33109ES 元 /100 µl DyLight 405 Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) 山羊抗兔 元 /1.5 mg 33104ES 元 /100 µl 荧光二抗 ( 适用多标实验 ) 产品名称 JIR 货号 大包装价格 Yeasen 货号 小包装价格 Alexa Fluor 594 Donkey Anti-Rat IgG (H+L) 驴抗大鼠 元 /0.5 mg 34412ES 元 /100 µl DyLight 405 Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) 驴抗兔 元 /0.5 mg 34204ES 元 /100 µl Alexa Fluor 488 Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) 驴抗兔 元 /0.5 mg 34206ES 元 /100 µl Alexa Fluor 594 Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) 驴抗兔 元 /0.5 mg 34212ES 元 /100 µl Alexa Fluor 647 Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) 驴抗兔 元 /0.5 mg 34213ES 元 /100 µl DyLight 405 Donkey Anti-Goat IgG (H+L) 驴抗山羊 元 /0.5 mg 34304ES 元 /100 µl Alexa Fluor 488 Donkey Anti-Goat IgG (H+L) 驴抗山羊 元 /0.5 mg 34306ES 元 /100 µl Alexa Fluor 594 Donkey Anti-Goat IgG (H+L) 驴抗山羊 元 /0.5 mg 34312ES 元 /100 µl Alexa Fluor 488 Donkey Anti-Guinea Pig IgG (H+L) 驴抗豚鼠 元 /0.5 mg 34506ES 元 /100 µl Alexa Fluor 594 Donkey Anti-Guinea Pig IgG (H+L) 驴抗豚鼠 元 /0.5 mg 34512ES 元 /100 µl Alexa Fluor 488 Donkey Anti-Chicken IgG (H+L) 驴抗鸡 元 /0.5 mg 34606ES 元 /100 µl Alexa Fluor 594 Donkey Anti-Chicken IgG (H+L) 驴抗鸡 元 /0.5 mg 34612ES 元 /100 µl Alexa Fluor 680 Goat Anti-Mouse IgG (H+L) 山羊抗小鼠 元 /0.5 mg 33218ES 元 /100 µl 荧光二抗 ( 适用单标实验 ) Alexa Fluor 790 Goat Anti-Mouse IgG (H+L) 山羊抗小鼠 元 /0.5 mg 33219ES 元 /100 µl 产品名称 JIR 货号大包装价格 Yeasen 货号小包装价格 Alexa Fluor 488 Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) 山羊抗兔 元 /1.5 mg 33106ES 元 /100 µl Alexa Fluor 594 Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) 山羊抗兔 元 /1.5 mg 33112ES 元 /100 µl Alexa Fluor 647 Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) 山羊抗兔 元 /1.5 mg 33113ES 元 /100 µl FITC Rabbit Anti-Goat IgG (H+L) 兔抗山羊 元 /1.5 mg 33707ES 元 /100 µl Cy3 Rabbit Anti-Goat IgG (H+L) 兔抗山羊 元 /1.5 mg 33708ES 元 /100 µl 荧光二抗 ( 适用多标实验 ) 产品名称 JIR 货号 大包装价格 Yeasen 货号 小包装价格 Alexa Fluor 680 Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) 山羊抗兔 元 /0.5 mg 33118ES 元 /100 µl Alexa Fluor 790 Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) 山羊抗兔 元 /0.5 mg 33119ES 元 /100 µl Rhodamine (TRITC) Rabbit Anti-Goat IgG (H+L) 兔抗山羊 元 /1.5 mg 33709ES 元 /100 µl DyLight 405 Rabbit Anti-Goat IgG (H+L) 兔抗山羊 元 /1.0 mg 33704ES 元 /100 µl Alexa Fluor 488 Rabbit Anti-Goat IgG (H+L) 兔抗山羊 元 /1.0 mg 33706ES 元 /100 µl Alexa Fluor 594 Rabbit Anti-Goat IgG (H+L) 兔抗山羊 元 /1.0 mg 33712ES 元 /100 µl Alexa Fluor 647 Rabbit Anti-Goat IgG (H+L) 兔抗山羊 元 /1.0 mg 33713ES 元 /100 µl FITC Rabbit Anti-Sheep IgG (H+L) 兔抗绵羊 元 /1.5 mg 33807ES 元 /100 µl Cy3 Rabbit Anti-Sheep IgG (H+L) 兔抗绵羊 元 /1.5 mg 33808ES 元 /100 µl SP 检测法 ( 生物素化二抗 + 链霉亲和素 ) 产品名称 JIR 货号 大包装价格 Yeasen 货号 小包装价格 Biotin-SP AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L) 山羊抗小鼠 元 /1.5 ml 33203ES 元 /100 µl Biotin-SP AffiniPure Goat Anti-Rat IgG (H+L) 山羊抗大鼠 元 /1.5 ml 33303ES 元 /100 µl Biotin-SP AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) 山羊抗兔 元 /1.5 ml 33103ES 元 /100 µl Biotin-SP AffiniPure Donkey Anti-Goat IgG (H+L) 驴抗山羊 元 /0.5 ml 34303ES 元 /100 µl 荧光二抗 ( 适用多标实验 ) 产品名称 JIR 货号 大包装价格 Yeasen 货号 小包装价格 DyLight 405 Donkey Anti-Mouse IgG (H+L) 驴抗小鼠 元 /0.5 mg 34104ES 元 /100 µl Alexa Fluor 488 Donkey Anti-Mouse IgG (H+L) 驴抗小鼠 元 /0.5 mg 34106ES 元 /100 µl Alexa Fluor 594 Donkey Anti-Mouse IgG (H+L) 驴抗小鼠 元 /0.5 mg 34112ES 元 /100 µl Alexa Fluor 647 Donkey Anti-Mouse IgG (H+L) 驴抗小鼠 元 /0.5 mg 34113ES 元 /100 µl Alexa Fluor 488 Donkey Anti-Rat IgG (H+L) 驴抗大鼠 元 /0.5 mg 34406ES 元 /100 µl Streptavidin 链霉亲和素 元 /1.0 mg 35101ES 元 /1 mg Horseradish Peroxidase AffiniPure Streptavidin HRP- 链霉亲和素 元 /1.0 mg 35105ES 元 /100 µl Alkaline Phosphatase AffiniPure Streptavidin AP- 链霉亲和素 元 /1.0 mg 35106ES 元 /100 µl DyLight 405 Conjugated Streptavidin 蓝色 - 链霉亲和素 元 /1.0 mg 35102ES 元 /100 µl Alexa Fluor 488 Conjugated Streptavidin 绿色 - 链霉亲和素 元 /1.0 mg 35103ES 元 /100 µl Alexa Fluor 594 Conjugated Streptavidin 红色 - 链霉亲和素 元 /1.0 mg 35107ES 元 /100 µl Alexa Fluor 647 Conjugated Streptavidin 远红 - 链霉亲和素 元 /1.0 mg 35104ES 元 /100 µl page 21/22

14 常用抗体 & 分析技巧 特别推荐流式二抗 (F(ab ) 2 片段化抗体 ) 产品名称 JIR 货号 大包装价格 Yeasen 货号 小包装价格 Alexa Fluor 488 F(ab')2 Fragment Goat Anti-Mouse IgG (H+L) 元 /0.75 mg 33216ES 元 /100 µl R-PE F(ab')2 Fragment Goat Anti-Mouse IgG (H+L) 元 /1.0 ml 33217ES 元 /100 µl 问题一 : 无信号 附录 :Western Blot 常见问题分析与技巧 R-PE F(ab')2 Fragment Goat Anti-Mouse IgG (H+L), Fcγ Frag Spec 元 /1.0 ml 33215ES 元 /100 µl 可能存在的原因 解决方案 Alexa Fluor 488 F(ab')2 Fragment Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) 元 /0.75 mg 33116ES 元 /100 µl R-PE F(ab')2 Fragment Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) 元 /1.0 ml 33117ES 元 /100 µl Alexa Fluor 488 F(ab')2 Fragment Goat Anti-Rat IgG (H+L) 元 /0.75 mg 33316ES 元 /100 µl 一抗和二抗不匹配二抗需要和一抗宿主的物种相同 ( 如一抗来自兔, 二抗为抗兔抗体 ) 无足够的一抗 / 二抗结合蛋白使用高浓度抗体,4 度延长孵育时间 ( 如过夜 ) 封闭剂与一抗 二抗有交叉反应使用温和的去污剂如吐温 -20, 或更换封闭剂 ( 常用的为脱脂奶粉 BSA 正常血清 ) R-PE F(ab')2 Fragment Goat Anti-Rat IgG (H+L) 元 /1.0 ml 33317ES 元 /100 µl Alexa Fluor 488 F(ab')2 Fragment Donkey Anti-Goat IgG (H+L) 元 /0.3 mg 34316ES 元 /100 µl R-PE F(ab')2 Fragment Donkey Anti-Goat IgG (H+L) 元 /1.0 ml 34315ES 元 /100 µl 产品发表部分参考文献 一抗不识别待检物种的蛋白抗原量不足转膜不充分过度封闭使目标蛋白不能显色一抗失效二抗受叠氮钠抑制问题二 : 背景高 参考说明书, 比对免疫原序列和蛋白序列以确保抗体和目的蛋白会发生反应, 设阳性对照 各泳道上样量不少于 ug, 使用蛋白酶抑制剂并设置阳性对照 使用可逆染色剂如丽春红 S 检测转膜效果, 检测转膜操作是否正确 PVDF 膜需预先浸在甲醇中, 然后浸到转移缓冲液中 使用 0.5% 奶粉或无奶粉代替 5% 奶粉的抗体稀释液, 或更换封闭液, 减少封闭时间 使用新鲜抗体, 重复使用有效浓度会降低 避免叠氮钠和 HRP 标记抗体一起使用 1.BCA 蛋白定量 [1].Ni, L., et al., The histone deacetylase inhibitor valproic acid inhibits NKG2D expression in natural killer cells through suppression of STAT3 and HDAC3[J]. Sci Rep, : p [2].Wang, P., et al., Mitochondrial Ferritin Deletion Exacerbates beta-amyloid-induced Neurotoxicity in Mice[J]. Oxid Med Cell Longev, : p [3].Jin, X. and J.Y. Gou, A rapid and cost-effective fluorescence detection in tube (FDIT) method to analyze protein phosphorylation[j]. Plant Methods, : p. 43. [4].Wang, Y., et al., Temperature-sensitive albino gene TCD5, encoding a monooxygenase, affects chloroplast development at low temperatures[j]. J Exp Bot, (17): p [5]. Qiu J, Kong L, Cao X, et al. Dendrimer-entrapped gold nanoparticles modified with β-cyclodextrin for enhanced gene delivery applications[j]. RSC Advances, 2016, 6(31): [6].Gou, J.Y., et al., Wheat Stripe Rust Resistance Protein WKS1 Reduces the Ability of the Thylakoid-Associated Ascorbate Peroxidase to Detoxify Reactive Oxygen Species[J]. Plant Cell, (6): p 预制胶 [1]. Lai, W., et al., Interaction of gold and silver nanoparticles with human plasma: Analysis of protein corona reveals specific binding patterns[j]. Colloids Surf B Biointerfaces, : p [2]. Ding, M.H., et al., The transducible TAT-RIZ1-PR protein exerts histone methyltransferase activity and tumor-suppressive functions in human malignant meningiomas[j]. Biomaterials, : p BSA [1]. Wang M, Rong S, Tian P, et al. Bacterial surface-displayed GII. 4 human norovirus capsid proteins bound to HBGA-like molecules in Romaine lettuce[j]. Frontiers in microbiology, 2017, 8. [2]. Ren L, Liu X, Wang Q, et al. Facile fabrication of a magnetically smart PTX-loaded Cys Fe 3 O 4/CuS@ BSA nano-drug for imaging-guided chemo-photothermal therapy[j]. Dalton Transactions, 2017, 46(7): [3]. Dai Z, Yu X, Hong J, et al. Development of a novel CsA-PLGA drug delivery system based on a glaucoma drainage device for the prevention of postoperative fibrosis[j]. Materials Science and Engineering: C, 2016, 66: ECL [1].Zhu, T., et al., The Staphylococcus epidermidis gdps regulates biofilm formation independently of its protein-coding function[j]. Microb Pathog, : p [2]. Ren, C.F., et al., Expression of soluble programmed death-1 protein in peripheral blood regulatory T cells and its effects on rheumatoid arthritis progression[j]. Mol Med Rep, (1): p [3]. Wei W, Wang P, Wei Y, et al. Characterization of Panax ginseng UDP-Glycosyltransferases Catalyzing Protopanaxatriol and Biosyntheses of Bioactive Ginsenosides F1 and Rh1 in Metabolically Engineered Yeasts[J]. Molecular Plant, 2015: p 可能存在的原因 解决方案 未进行非特异性封闭或封闭不充分增加封闭液孵育时间, 或者提高温度 选择合适的封闭试剂 ( 脱脂奶粉,BSA 等 ) 一抗浓度过高 抗体与封闭蛋白有交叉反应 检测过程中膜干燥 选膜不当产生的高背景 未结合蛋白质洗涤不充分 膜干燥 问题三 : 多带现象 可能存在的原因 细胞传代次数过多, 蛋白表达不同 体内表达的蛋白样本具有多种修饰形式如乙酰化 甲基化 烷基化 磷酸化 糖基化等 蛋白样本降解 ( 蛋白质分子量降低 ) 检测到未经报道过的新蛋白或统一蛋白家族中具有相似表位而结构不同的蛋白 一抗浓度过高, 高浓度时常出现多条蛋白带 稀释抗体至合适浓度以更高稀释抗体, 延长孵育时间 选择无交叉反应的封闭剂 洗涤液中加入 Tween-20 可减少交叉反应 保证充分的反应液, 避免出现干膜现象 NC 膜比 PVDF 膜背景低 增加洗涤次数 孵育过程中防止膜变干, 每一步都要保证膜有充分的反应液 解决方案 使用原代细胞株, 和现在的细胞株一起做平行对照实验 参考文献, 使用试剂使样品去磷酸化 去糖基化来证明翻译后的修饰 在样品缓冲液中加入足够的蛋白酶抑制剂 查阅其他文献或 BLAST 搜寻, 使用说明书推荐的细胞株或组织 降低抗体浓度和 / 或孵育时间 二抗浓度过高, 产生非特异性降低抗体浓度, 加入二抗对照 ( 不加一抗 ) 条带为非特异性条带 目标蛋白形成多聚体 应用封闭多肽来区分特异性和非特异性条带, 只有特异性条带能被封闭而消失 SDS-PAGE 电泳加样前, 煮沸 10 min 而不是 5 min, 使蛋白质解聚 page 23/24