权利要求书 1/1 页 1. 一种畜禽粪污微生物除臭菌剂, 其特征在于, 其中含有保藏号为 CGMCC NO :5982 的酵母菌种杰丁毕赤酵母 (Pichia jadinii) 和保藏号为 CGMCC NO :5984 的酵母菌种酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) 2.

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1 (19) 中华人民共和国国家知识产权局 (12) 发明专利 *CN B* (21) 申请号 (22) 申请日 (83) 生物保藏信息 CGMCC NO : CGMCC NO : (73) 专利权人中国科学院成都生物研究所地址 四川省成都市武侯区人民南路四段九号 (72) 发明人闫志英刘晓风袁月祥廖银章李志东许力山 (74) 专利代理机构成都赛恩斯知识产权代理事务所 ( 普通合伙 ) 代理人张帆肖国华 (51)Int.Cl. C12N 1/00 ( ) C12N 1/16 ( ) C12N 1/18 ( ) A61L 9/01 ( ) C12R 1/84 ( ) C12R 1/865 ( ) A61L 101/52 ( ) (10) 授权公告号 CN B (45) 授权公告日 (56) 对比文件 CN A, , 全文. CN A, , 全文. CN A, , 全文. 胡尚勤. 微生物除臭牛粪的初步研究. 重庆环境科学.1994, 第 9-11 页. Kurosawa H, et al..stabilization of freeze-dried thiobacillus thiooxidaus cells as a bacterial deodorant for removal of hydrogen sulfide. J Ferment Bioeng.1997,Pages 李彪等. 猪粪中除臭微生物的筛选和鉴定. 家畜生态学报.2008, 第 页. 审查员管冰权利要求书 11 页 4 页 4 页 CN B (54) 发明名称一种畜禽粪污微生物除臭菌剂 其制备方法及其应用 (57) 摘要本发明涉及一种畜禽粪污微生物除臭菌剂 其制备方法及应用 公开了用于公厕除臭的复合生物制剂, 该复合生物制剂含有保藏编号为 CGMCC NO :5983 的乳酸菌种乳杆菌 Lactobacillus sp 保藏编号为 CGMCC NO :5985 的乳酸菌种嗜热链球菌 Streptococcus thermophilus 和桔皮提取液 本发明还公开了上述复合生物制剂的制备方法, 包括液态复合生物制剂和固态复合生物制剂的制备方法 ; 以及该复合生物制剂的用途

2 权利要求书 1/1 页 1. 一种畜禽粪污微生物除臭菌剂, 其特征在于, 其中含有保藏号为 CGMCC NO :5982 的酵母菌种杰丁毕赤酵母 (Pichia jadinii) 和保藏号为 CGMCC NO :5984 的酵母菌种酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) 2. 一种如权利要求 1 所述的畜禽粪污微生物除臭菌剂, 其特征在于, 所述的杰丁毕赤酵母和酿酒酵母的菌液体积比例为 2 :1 3. 一种如权利要求 1 所述的畜禽粪污微生物除臭菌剂的制备方法, 其特征在于, 先将保藏号为 CGMCC NO :5982 的酵母菌种杰丁毕赤酵母 Pichia jadinii 和保藏号为 CGMCC NO : 5984 的酵母菌种酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae 分别在 YPD 固体斜面培养基中活化, 再分别接种到菌剂液体培养基培养 24 小时, 分别调二菌株的含菌量均为 10 8 CFU/mL, 然后将两种菌液进行组合, 制备得到液态微生物除臭菌剂 4. 根据权利要求 3 所述的畜禽粪污微生物除臭菌剂的制备方法, 其特征在于, 两种菌液按体积比例为 2 :1 进行组合 5. 根据权利要求 3 所述的畜禽粪污微生物除臭菌剂的制备方法, 其特征在于, 所述的菌剂液体培养基的配方为 : 蛋白胨 5g 麦芽浸粉 10g 氯化钠 5g 葡萄糖 20g 水 1000mL ph 根据权利要求 3 所述的畜禽粪污微生物除臭菌剂的制备方法, 其特征在于, 将制得的液态微生物除臭菌剂按每升混合菌液加入吸附剂 1 千克的比例, 搅拌混匀, 然后在 40 恒温培养箱中烘干培养 小时, 至含水量为 15-20%, 即为烘干菌剂, 再按每千克烘干菌剂中加入 5g 促进剂, 搅拌均匀, 即为固态微生物除臭菌剂 7. 根据权利要求 6 所述的畜禽粪污微生物除臭菌剂的制备方法, 其特征在于, 所述的吸附剂为经过灭菌处理的干燥麸皮或米糠或木屑或其混合物 ; 所述的促进剂为用于活化菌剂的麦芽浸粉 8. 权利要求 1 所述的畜禽粪污微生物除臭菌剂在畜禽粪污处理的除臭处理中的应用 9. 根据权利要求 8 所述的应用, 其具体使用方法为 : 液态微生物除臭菌剂直接喷洒于畜禽舍和粪污贮存池 ; 固态微生物除臭菌剂先用生理盐水把菌剂调匀, 在 30 环境下活化 3-5 小时, 随后散撒在畜禽舍和粪污贮存池 2

3 1/4 页 一种畜禽粪污微生物除臭菌剂 其制备方法及其应用 技术领域 [0001] 本发明涉及一种微生物除臭菌剂及其制备方法, 具体涉及根据微生物生态学原理, 利用菌株之间的共生 互生 协同作用等相互作用关系构建成的微生物除臭菌剂及其制备方法 背景技术 [0002] 恶臭污染是世界公认的七大环境公害之一, 随着我国农业和农村经济结构的调整, 畜牧业得到持续健康快速的发展, 但由畜禽粪便引起的恶臭污染已成为恶臭污染的最主要贡献之一, 尤其是随着经济的发展和人们生活水平的逐步提高, 对环境质量的要求也日趋强烈, 由畜禽粪便等所产生的恶臭越来越受到人们的关注 粪便恶臭污染不但给人们生活带来不便, 而且其中含有多种有毒成分, 其中氨气 硫化氢 硫醇和甲硫醇是主要有害气体成分, 给养殖环境带来很大危害, 影响养殖动物的健康生长, 需大量化学消毒剂 抗生素等药物进行场区消毒和卫生防疫, 导致大量化学消毒剂 抗生素等大量有害物质通过食物链进入人体, 严重危及人类健康与食品安全 同时大量的化学有害物质也对水体和土壤造成严重危害 并且臭气气体的排放会对周边环境造成严重污染, 人们长期吸入后对身体健康造成严重伤害 因此实施畜禽粪便恶臭污染控制和管理, 开展脱除恶臭气体的研究具有重要意义 [0003] 目前, 针对畜禽粪便恶臭脱除研究可分为化学除臭和生物除臭两大方面, 化学除臭原理是通过外源强氧化物质对恶臭成份进行氧化降解, 近而消除恶臭, 其虽针对性强, 见效快, 但其应用范围小, 遇到复杂恶臭气体成份时, 除臭效能将失效, 并且使用化学除臭剂后残留的化学物质往往会引起二次污染 生物除臭原理是通过外源功能菌种或生物酶对恶臭的直接降解或对产恶臭微生物的抑制来脱除恶臭 生物除臭能持久消除恶臭, 无二次污染, 使用方便, 成本低廉等特点, 成为恶臭控制的研究热点 [0004] 生物除臭的核心是高效除臭功能微生物菌剂, 通过分离筛选高效除臭功能菌株并优化组合配伍成微生物除臭菌剂, 再接种于畜禽粪便中可以有效降低其释放的恶臭强度, 达到畜禽粪便恶臭原位控制目的 发明内容 [0005] 针对畜禽养殖场畜禽舍 粪污贮存池等主要恶臭释放源, 本发明的目的是提供一种高效微生物除臭菌剂及其制备方法 [0006] 本发明提供一种畜禽粪污微生物除臭菌剂, 该菌剂含有保藏号为 CGMCC NO :5982 的酵母菌种杰丁毕赤酵母 Pichia jadinii 和保藏号为 CGMCC NO :5984 的酵母菌种酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae [0007] 进一步地, 本发明的畜禽粪污微生物除臭菌剂中, 所述的杰丁毕赤酵母 Pichia jadinii 和酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae 的菌液比例为 2 :1( 体积 / 体积 ) [0008] 其中涉及的相关保藏信息为 : 3

4 2/4 页 [0009] 保藏单位 : 中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 ; 地址 : 北京市朝阳区北辰西路 1 号院, 中国科学院微生物研究所 ; 保藏日期 :2012 年 4 月 10 日 ; 保藏编号 :CR (CGMCC NO :5982) 和 NR(CGMCC NO :5984); 分类名 :CR 为杰丁毕赤酵母 Pichia jadinii, NR 为酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae [0010] 本发明可以通过以下方式来实现 : [0011] 1 所用的菌株为二株酵母菌, 分别是 : [0012] CR(CGMCC NO :5982) 和 NR(CGMCC NO :5984), 其中 CR 为杰丁毕赤酵母 Pichia jadinii,nr 为酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae [0013] 2 二株酵母菌的优化配伍比例为 : [0014] CR :NR=2:1( 体积 / 体积 ), 其中 CR 和 NR 分别为二株酵母菌发酵后的菌液, 其菌液浓度均为 108CFU/mL [0015] 3 培养基 [0016] (1)YPD 固体培养基, 用于菌种活化, 其配方为 : [0017] 蛋白胨 20g 牛肉膏 10g 葡萄糖 20g 水 1000mL 琼脂 15-20g ph [0018] (2) 用于微生物除臭菌剂发酵的液体培养基配方为 : [0019] 蛋白胨 5g 麦芽浸粉 10g 氯化钠 5g 葡萄糖 20g 水 1000mL ph [0020] 固体菌剂所用吸附剂为经过灭菌处理的干燥麸皮或米糠或木屑或其混合物, 其用量为每升混合菌液 ( 微生物除臭菌剂 ) 加入吸附剂 1 千克 ; 用于活化菌剂的促进剂为麦芽浸粉, 其用量为每千克烘干菌剂中加入促进剂 5g [0021] 4 菌剂的制备方法 [0022] 液态微生物除臭菌剂的制备方法为 : [0023] (1) 将两种菌种分别接入 YPD 固体斜面培养基活化备用 [0024] (2) 将灭菌处理过的液体培养基定量备用 [0025] (3) 将活化后的菌种分别接入灭菌处理过的液体培养基中培养 24 小时 [0026] (4) 分别将培养好的各菌液计数调节 ( 优选分别调二菌株的含菌量均为 10 8 CFU/ ml), 然后将两种菌液进行组合 ( 优选按比例为 2 :1( 体积 / 体积 ) 进行组合 ), 即为液态微生物除臭菌剂 [0027] 固态微生物除臭菌剂的制备方法为 : [0028] (1) 将灭菌处理过的麸皮或米糠或木屑或其混合物干燥定量, 作吸附剂用 [0029] (2) 每升混合菌液 ( 上面制备得到的液态微生物除臭菌剂 ) 加入吸附剂 1 千克, 搅拌混匀, 然后在 40 恒温培养箱中烘干培养 小时, 至含水量为 15-20%, 即为烘干菌剂, 在按每千克烘干菌剂中加入 5g 促进剂, 搅拌均匀, 即为固态微生物除臭菌剂, 定量封包低温保存 [0030] 所述的吸附剂为经过灭菌处理的干燥麸皮或米糠或木屑或其混合物 ; 所述的促进剂为用于活化菌剂的麦芽浸粉 [0031] 上述制备的微生物除臭菌剂的主要指标为 : [0032] 液态微生物除臭菌剂 : 活菌数大于等于 1 亿 CFU/mL ;ph 6-7 ; 悬液 颜色微红 [0033] 固态微生物除臭菌剂 : 活菌数大于等于 1 亿 CFU/g ; 颗粒干燥 表面乳白 [0034] 5 使用方法及条件 4

5 3/4 页 [0035] 该微生物除臭菌剂用于畜禽养殖场畜禽舍 粪污贮存池等臭气释放场所 其使用方法为 : 液态微生物除臭菌剂直接喷洒于畜禽舍和粪污贮存池 ; 固态微生物除臭菌剂先用生理盐水把菌剂调匀, 在 30 环境下活化 3-5 小时, 随后散撒在畜禽舍和粪污贮存池 [0036] 本发明的优越之处在于 : [0037] (1) 菌剂微生物可以在粪污中良好生长, 占据有利生态位, 抑制了产恶臭微生物生长繁殖, 降低恶臭释放强度, 实现了恶臭原位源头控制 [0038] (2) 菌剂由有益微生物酵母菌构成, 酵母菌在粪污中的生长繁殖, 构建充满有益微生物的养殖环境, 有效改善了养殖环境, 提高了养殖动物免疫力, 减少了抗生素使用量, 保证了养殖动物食用安全 [0039] (3) 实现了菌株的有效组合, 组合后的菌剂比单菌除臭效果明显提高 [0040] (4) 改进了菌剂的保藏方法, 延长了产品的使用寿命 [0041] (5) 符合生物安全法规, 菌剂中包含的菌株均从被畜禽粪便污染长期胁迫选择环境中筛选得到, 不会对周围环境和生态平衡造成危害 [0042] (6) 使用方面, 包装 运输便利, 易形成商品化 具体实施方式 [0043] 以下结合实施例详细地说明本发明 实施方案为便于更好的理解本发明, 但并非对本发明的限制 [0044] 一 微生物除臭菌剂的制备 [0045] 实施例 1 : [0046] (1) 将高温灭菌处理( 分钟 ) 的 YPD 固体培养基定量备用, 固体 YPD 培养基的配方为蛋白胨 20g 牛肉膏 10g 葡萄糖 20g 水 1000mL 琼脂 15-20g ph [0047] (2) 将菌种 CR 和 NR 分别接入灭菌处理过 ( 分钟 ) 的 YPD 固体斜面培养基中活化备用 [0048] (3) 将高温灭菌处理过( 分钟 ) 的液体培养基定量备用, 液体培养基配方为蛋白胨 5g 麦芽膏 10g 葡萄糖 20g 水 1000mL ph [0049] (4) 将活化的菌种分别接入到液体培养基中振荡( 转 / 分钟 ) 培养 24 小时 [0050] (5) 将培养好的菌液计数, 调二菌株的含菌量为 10 8 CFU/mL, 在按 CR :NR=2:1 的体积比进行组合成混合菌液, 即为液态微生物除臭菌剂 [0051] (6) 将定量的混合菌液 ( 液态微生物除臭菌剂 ) 加入吸附剂中, 加入量为 : 混合菌液 1L+ 吸附剂 1Kg, 然后在 40 的恒温培养箱中烘干 ( 含水量为 15%~ 20%), 在按每千克烘干菌剂中加入 5g 促进剂, 搅拌均匀, 最后封包低温保存 (4-10 ) [0052] 二 微生物除臭菌剂的应用 [0053] 实施例 2 : [0054] 向装有 200g 新鲜猪粪的烧杯 (1L) 中加入 10ml 液态微生物除臭菌剂, 保鲜膜密封烧杯 ; 同时做不加菌剂的对照, 每组实验设置三个重复,15 天后测定恶臭强度 氨气浓度 硫化氢浓度, 测定结果如下表 1 : [0055] 表 1 : 菌剂除臭效果 5

6 [0056] 4/4 页 [0057] 由上表可知, 猪粪中添加菌剂后, 臭气强度 氨气浓度和硫化氢浓度均比对照明显降低, 其中臭气强度降低 38.8% 氨气浓度降低 44.3% 硫化氢浓度降低 33.8% [0058] 实施例 3 : [0059] 向装有 1000g 新鲜猪粪的烧杯 (2L) 中加入 100g 固态微生物除臭菌剂 ( 活化后 ), 和猪粪混匀后, 保鲜膜密封烧杯 ; 同时做不加菌剂的对照, 每组实验设置三个重复,15 天后测定恶臭强度 氨气浓度 硫化氢浓度, 测定结果如下表 2 : [0060] 表 2 : 菌剂除臭效果 [0061] [0062] 由上表可知, 猪粪中添加固态菌剂作用 15 天后, 臭气强度 氨气浓度和硫化氢浓度均比对照明显降低, 其中臭气强度降低 36.1% 氨气浓度降低 51.2% 硫化氢浓度降低 38.4% [0063] 实施例 4 : [0064] 向装有 5Kg 新鲜猪粪的塑料桶 (10L) 中加入 500g 固态微生物除臭菌剂 ( 活化后 ), 和猪粪混匀后, 盖盖密封 ; 同时做不加菌剂的对照, 每组实验设置三个重复,30 天后测定恶臭强度 氨气浓度 硫化氢浓度, 测定结果如下表 3 : [0065] 表 3 : 菌剂除臭效果 [0066] [0067] 由上表可知, 在放大规模 10L 的塑料桶中, 猪粪中添加固态菌剂作用 30 天后, 臭气 强度 氨气浓度和硫化氢浓度均比对照明显降低, 其中臭气强度降低 34.8% 氨气浓度降低 43.8% 硫化氢浓度降低 35.1%, 与上述示例 2 3 小试规模降低效果相当 6

武洪庆 田 黎 张久明 温占波 用 方法对黄杆菌属产红色素菌株 的培养基进行了优化 首先用部分重复因子实验对培养基组分蛋白胨 酵母粉 葡萄糖及 浓度对菌株产红色素的影 响进行评价 找出主要影响因子为葡萄糖和 浓度 两者均为正影响 其他组分对色素含量的 影响不显著 第二步用最陡爬坡路径逼近最大响应区域 最后用中心组合设计及响应面分析确定主 要影响因子的最佳浓度 菌株在优化培养基中培养较初始培养基色素含量提高

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