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- 究瓜 谈
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1 2013 绎 Vol.15 No.9 / JZKFY LPS ALI JZKFY g kg h LPS 6 mg kg -1 LPS ALI LPS 16 h MPO MDA SOD TNF- 琢 IL-6 IL-1 茁 JZKFY JZKFY MPO MDA SOD JZKFY TNF- 琢 IL-6 IL-1 茁 JZKFY ALI JZKFY LPS doi: /wst R285.5 A Acute Lung Injury, ALI 1 ALI 1.1 SD 180 依 20 g [1] JZKFY - SCXK [2] 1.2 JZKFY ALI ALI JZKFY ALI LPS Sigma 032M4082V MPO 元 2013ZX 元元 1959
2 绎 TNF- 琢 茁 IL-1 茁 IL MDA SOD PE Mouse Anti -Rat Granulo 原 cytes Clone RP -1 Cat BD Bio 原 sciences FITC Mouse Anti -Rat CD45RA Clone OX-1 Cat BD Biosciences 1.3 Centrifuge 5415D eppendorf TECAN BDFAC 原 SCanto TM 域 BD 酌 ALI [3] SD 2 mg kg -1 JZKFY g kg JZKFY 7 1h 1h LPS 6 mg kg -1 LPS ALI LPS 16 h LPS 16 h rpm 10 min -80 益 TNF- 琢 IL-6 IL-1 茁 益 PBS3mL 16 3 BALF 80 % BALF rpm 4 益 10 min -80 益 -80 益 BALF BALF 4 毅 C 0.2 ml % HE 益 MPO MDA SOD 2.3 SPSS 11.5 依 x 依 s ANOVA t P< JZKFY ALI JZKFY 3.2 JZKFY ALI BALF P<0.05 P<0.05 JZKFY BALF P<0.05 JZKFY JZKFY P< JZKFY ALI BALF 依 /s BALF 依 /s P<0.01 JZKFY 1960
3 2013 第十五卷 第九期 绎Vol.15 No.9 别 为 依 依 依 P<0.05 与正常组相比 模型组大鼠 BALF 中中性 依 个/s 与模型组比较 JZKFY 各剂量组能不同程度地降低 BALF 中白细胞总数 高 中 剂 量组 与模 型组 相比 有 统计 学显 著 性差 异 表1 组别 剂量 BALF 蛋白含量/g L 依0.12 模型组 2.127依 mg kg-1 JZKFY 高剂量组 4.4 g kg-1 JZKFY 中剂量组 2.2 g kg-1 JZKFY 低剂量组 量组为佳 见图 1 JZKFY 对 ALI 大鼠肺通透性的影响 x依s n=10 正常组 阳性对照组 粒细胞百分比明显升高 P<0.05 JZKFY 各剂量组 能不同程度地 降低中性粒细 胞百 分 比 以 高 中 剂 肺通透指数/% 依 依 依 依 依 依 依 依 依 依 g kg-1 血浆蛋白含量/g L 依 依 依 依 依 依0.42 注 与正常对照组比较 P约0.05 P约0.01 P约0.001 与模型组比较 P约0.05 P约0.01 模型组 正常组 JZKFY 高剂量组 JZKFY 中剂量组 图1 阳性药 JZKFY 低剂量组 JZKFY 对 ALI 大鼠 BALF 中中性粒细胞的影响 1961 也W orld Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica页
4 绎 3.4 JZKFY ALI MPO MDA SOD SOD P<0.05 JZKFY SOD P<0.01 MDA MPO P<0.05 JZKFY MDA MPO P< JZKFY ALI TNF - 琢 IL -6 IL - 1 茁 TNF- 琢 IL- 6 IL-1 茁 P<0.05 JZKFY TNF- 琢 IL-6 IL-1 茁 JZKFY P<0.05 耀 JZKFY ALI / JZKFY 依 依 0.74 P<0.01 JZKFY 7.30 依 依 依 依 JZKFY MPO MDA SOD x 依 s n=10 SOD/U mg -1 MDA/nmol mg -1 MPO / 5.45 依 依 依 依 依 依 mg kg 依 依 依 0.02 JZKFY 4.4 g kg 依 依 依 0.02 JZKFY 2.2 g kg 依 依 依 0.03 JZKFY 1.1 g kg 依 依 依 0.03 P 约 0.05 P 约 0.01 P 约 0.05 P 约 JZKFY ALI TNF- 琢 IL-6 IL-1 茁 x 依 s n=10 TNF- 琢 /ng ml -1 IL-6/pg ml -1 IL-1 茁 /ng ml 依 依 依 依 依 依 mg kg 依 依 依 0.01 JZKFY 4.4 g kg 依 依 依 0.01 JZKFY 2.2 g kg 依 依 依 0.01 JZKFY 1.1 g kg 依 依 依 0.02 P 约 0.05 P 约 0.01 P 约 0.05 P 约 0.01 P 约
5 2013 第十五卷 第九期 绎Vol.15 No.9 图2 JZKFY 对 ALI 大鼠肺组织病理形态学的影响 HE 染色 伊200 注 A.正常组 B.模型组 C.阳性对照组 D.JZKFY 高剂量组 E. JZKFY 中剂量组 F. JZKFY 低剂量组 比较 JZKFY 能不同程度地减轻肺部炎症的病变 各 剂量组比较 以高 中剂量组减轻肺部炎症的效果最 好 与模型组相比有统计学显著性差异 P< 多少 反映肺损伤的严重程度 故测定肺泡灌洗液 蛋白含 量和 肺 通透 性 指数 可在 一 定程度 上评 价 肺 微血管通透性损伤 [4] 本研究结果表明 模型组大鼠 BALF 中蛋 白含 量 及肺 通透 性 指数 均显著 增 加 血 讨论 资料表明 G 菌感染是导致 ALI 的首要原因 占 - 检出病菌 70%~80% 内毒素 LPS 是 G 菌的主要致 病物质 故利用 LPS 复制急性肺损伤动物模型是国 原 内外学者广泛使用的方法 静脉注射 腹腔注射 气 浆蛋白含量显著降低 JZKFY 高 中 低剂量组上述 指标均改善 表明 JZKFY 能有效抑制 ALI 肺通透性 增加 对改善 ALI 的肺水肿有一定积极作用 ALI 时 肺微血管通透性增加的机制涉及到多种因素 多个环节 JZKFY 抑制血管通透性的增加主要是通 道 内滴 注或 雾 化吸入 LPS 均 可 造成急 性 肺损 伤 动 过改善 内皮 屏 障功 能性 的 障碍 或血 管壁 功能 性 的 方法之一 故本实验采用一次性气管内滴注 LPS 复 过度 失控的炎症反应是各种病因所致 ALI 的 根本原因 其中绝大部分表现为中性粒细胞 PMN 物模型 而气道内滴注是研究中最接近临床的造模 制 大鼠 急性 肺 损伤模 型 本 实验 大鼠 气 管内 滴入 LPS 后 可见肺内大量的炎症细胞浸润 以中性粒细 胞为主 出现了肺泡壁增厚 伴有轻 度 到 重度 充 血 和/或出血及炎细胞浸润 部分大鼠局部呈现 肺泡 炎 肺泡腔内有炎性渗出物 与正常组相比 ALI 组 肺组织病理评分 肺通透指数 白细胞 血清细胞因 子等均显著升高 提示造模成立 为确保实验的可 靠性 本研究还采用地塞米松作为阳性对照药来验 损伤还是其它机制有待后续研究 依赖性 PMN 聚集和激活是引起肺部毛细血管和肺 泡损害的主要原因 [5 6] PMN 于肺内大量扣押是 ALI 的基本病理特征 检测支气管 BALF 中的 PMN 数量 可以直接地反映 PMN 浸润的程度 而髓过氧化物 酶 MPO 是 PMN 的标志酶 主要存在于 PMN 在嗜 天青颗粒中 该酶具有使过氧化氢还原的能力 其 活性高低反映组织中 PMN 扣押与聚集程度 [7] 鉴于 证 我 们所 制的 动 物模型 是 可以 作 为 ALI 治 疗 药 物 流式细胞仪技术较传统光镜下计数 PMN 等其他方 ALI 的一个重要病理标志为肺微血管通透性增 高 肺内液体渗出 与吸收动 态 平衡 遭到 破 坏 表现 胞仪观察 BALF 中白细胞及 PMN 百分比 发现 ALI 的验证模型 为大量富含蛋白质的液体渗入组织间隙 引起肺水 肿 BALF 上 清液 中 蛋白含 量 高低 表明 肺 泡 渗 漏 的 法具有更高的灵敏度与准确性 本实验采用流式细 模型大量 PMN 浸润 与病理结果相一致 说明肺部 因 PMN 激 活 引 起 严 重 损 害 而 JZKFY 可 以 降 低 BALF 中白细胞及 PMN 百分比 减轻大量 PMN 聚集 1963 也W orld Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica页
6 绎 MPO JZKFY PMN ALI ALI ALI [8] ALI MAD SOD ALI JZKFY MDA SOD JZKFY MDA ALI SOD ALI 40 TNF - 琢 IL -6 IL -1 茁 ALI [9] TNF- 琢 IL-1 茁 [10] TNF- 琢 IL-1 茁 LPS 2~4 h TNF- 琢 IL-1 茁 JZKFY TNF- 琢 IL-1 茁 ALI ARDS IL-6 PMN ALI [11] IL-6 JZKFY IL-6 JZKFY TNF- 琢 IL-1 茁 IL-6 ALI JZKFY ALI JZKFY LPS PMN 1,..,2008,20(1) 颐 76~77. 2,,,. SARS.,2008,24(5) 颐 343~ Fu P K, Wu C L, Tsai T H, et al. Anti-Inflammatory and Antico 原 agulative Effects of Paeonol on LPS -Induced Acute Lung Injury in Rats. Evid Based Complement Alternat Med, 2012 颐 doi: /2012/ , Abraham E, Carmody A, Shenkar R, et al. Neutrophils as early im 原 munologic effectors in hemorrhage - or endotoxemia -induced acute lung injury. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol, 2000, 279(6) 颐 L1137~ L Abraham E. Neutrophils and acute lung injury. Crit Care Med, 2003, 31(4 Suppl) 颐 S195~S199. 7,,,. B1.,2010,27(1) 颐 27~ ,2002,22(6) 颐 310~ Waage A, Brandtzaeg P, Halstensen A, et al. The complex pattern of cytokines in serum with meningococcal septic shock, Association between interleukin 6, interleukin 1 and fatal outcome.j ExpMed, 1989, 169(1) 颐 333~ ,,,. TNF - 琢 IL -1 茁., 2007,28(4) 颐 248~ ,,, ,2008,12(1) 颐 51~54. Experimental Study of Jinzhen Koufuye on Acute Lung Injury Induced by Lipopolysaccharide in Rats 1964
7 2013 绎 Vol.15 No.9 Li Sujun, Han Zhaozhong, Qin Ping, Zhou Jun, Wang Zhenzhong, Xiao Wei (Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co. Ltd. / State Key Laboratory of New-tech for Chinese Medicine Pharmaceutical Process, Lianyungang , China) Abstract: This study was aimed to explore effects of Jinzhen Koufuye (JZKFY) on acute lung injury (ALI) induced by lipopolysaccharide (LPS) in rats. Rats were randomly divided into the normal group, model group, positive control group, and three JZKFY groups with the drug dosage of 4.4, 2.2, 1.1 g 窑 kg -1, respectively. Intragastric administration was given to animals for 7 consecutive days. One hour after the last administration, ALI model was induced by the injection of LPS (6 mg 窑 kg -1 ), and then rats were killed at 16 h after saline (control) or LPS injection. Histological examinations were performed on the lungs. At the same time, the lung permeability index, activities of MPO, MDA and SOD in lung tissues, contents of TNF- 琢, IL-6 and IL-1 茁 in serum were measured, respectively. The results showed that JZKFY of high -, medium -, or low -dosage can significantly reduce JZKFY lung permeability index. JZKFY of high- and medium-dosage can obviously regulate activities of MPO, MDA and SOD in lung tissues, re 鄄 duce contents of TNF- 琢, IL-6 and IL-1 茁 in serum, as well as significantly improve lung tissue lesions in ALI. It was concluded that JZKFY might improve ALI induced by LPS through inhibiting lung vascular permeability, reduc 鄄 ing the lung neutrophil aggregation, improving the ability of antioxidative stress and lowering inflammatory response. Keywords: Jinzhen Koufuye, acute lung injury, lipopolysaccharide, inflammatory cytokines 1965
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绎 1 援 401331 2. 400030 3. 400020 4. 400080 5. 400012 88 44 44 猿 孕 约 0.05 ESR 悦 CRP RF 孕 约 0.05 doi: 10.11842/wst.2014.04.018 R593.22 A Rheumatoid Arthritis RA 44 19 25 32 耀 75 47.71 依 8.53 5 耀 28 4.39
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绎 1. 110032 2. 100029 3. 100045 4. 300193 5. 116023 6. 510120 7. 110004 8. 250011 9. 210029 10. 200032 11. 510405 12. 210008 13. 201102 14. 300074 13 3 1~2 doi: 10.11842/wst.2013.05.039 R725.6 A World
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