1136 现 代 药 物 与 临 床 Drugs & Clinic 第 31 卷 第 8 期 2016 年 8 月 类 风 湿 性 关 节 炎 是 一 种 以 对 称 性 多 关 节 炎 为 主 要 临 床 表 现 的 自 身 免 疫 疾 病, 主 要 特 征 为 大 量 炎 细 胞 浸 润 滑 膜
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- 槌 茹
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1 现 代 药 物 与 临 床 Drugs & Clinic 第 31 卷 第 8 期 2016 年 8 月 1135 紫 雪 散 对 大 鼠 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 的 治 疗 作 用 及 其 机 制 研 究 李 莉 1, 刘 静 2, 张 杰 2, 应 森 林 1. 天 津 中 医 药 大 学, 天 津 天 津 药 物 研 究 院 新 药 评 价 有 限 公 司, 天 津 * 摘 要 : 目 的 研 究 紫 雪 散 对 大 鼠 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 的 治 疗 作 用 及 其 机 制 研 究 方 法 Wistar 大 鼠 随 机 分 为 5 组, 分 别 为 对 照 组 模 型 组 吲 哚 美 辛 片 (2 mg/kg) 组 以 及 紫 雪 散 g/kg 组, 每 组 10 只 建 立 大 鼠 Ⅱ 型 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 模 型 大 鼠 初 次 免 疫 后 第 12 天 开 始 灌 胃 给 药, 给 药 容 量 10 ml/kg,1 次 /d 对 照 组 模 型 组 均 灌 胃 给 予 同 体 积 生 理 盐 水 各 组 均 持 续 给 药 3 周 测 量 大 鼠 左 后 足 踝 宽 度 厚 度 和 周 长, 计 算 关 节 炎 指 数 观 察 大 鼠 踝 关 节 病 理 采 用 ELISA 法 测 定 血 清 炎 症 因 子 血 小 板 活 化 因 子 (PAF) 水 平 环 氧 合 酶 -2(COX-2) 活 性 肿 瘤 坏 死 因 子 α(tnf-α) 水 平, 采 用 比 浊 法 测 定 血 清 循 环 免 疫 复 合 物 (CIC) 水 平 结 果 给 药 7 d, 紫 雪 散 组 踝 关 节 宽 度 厚 度 显 著 低 于 模 型 组 并 能 持 续 到 给 药 21 d 紫 雪 散 组 滑 膜 细 胞 增 生 明 显 减 轻, 滑 膜 组 织 充 血 水 肿 明 显 减 轻 与 模 型 组 比 较, 紫 雪 散 组 全 身 表 现 评 分 关 节 肿 胀 指 数 和 关 节 炎 指 数 均 显 著 降 低 (P< ) 与 模 型 组 比 较, 紫 雪 散 g/kg 组 血 清 PAF 水 平 显 著 减 少,COX-2 活 性 显 著 降 低 (P<0.001) 与 模 型 组 比 较, 紫 雪 散 g/kg 组 血 清 TNF-α CIC 水 平 显 著 减 少 (P< ) 结 论 紫 雪 散 对 大 鼠 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 损 伤 具 有 治 疗 效 果, 其 机 制 可 能 与 紫 雪 散 的 抗 炎 和 抗 氧 化 作 用 有 关 关 键 词 : 紫 雪 散 ; 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 ; 治 疗 作 用 ; 机 制 中 图 分 类 号 :R285.5 文 献 标 志 码 :A 文 章 编 号 : (2016) DOI: /j.issn Therapeutic effect of Zixue Powder on collagen-induced arthritis in rats and its mechanism LI Li 1, LIU Jing 2, ZHANG Jie 2, YING Sen-lin 1 1. Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin , China 2. Tianjin Institute of Pharmaceutical Research New Drug Evaluation Co., Ltd., Tianjin , China Abstract: Objective To investigate the therapeutic effects of Zixue Powder on collagen-induced arthritis in rats and its mechanism. Methods Wistar rats were randomly divided into control group, model group, Indometacin Tablets (2 mg/kg) group, and Zixue Powder (0.5 and 1.0 g/kg) groups, and each group had 10 mice. Type Ⅱ collagen-induced arthritis model in rats was established. Rats were ig administered from 12th day after the first immunization, and the volume was 10 ml/kg, 1 time/d. Rats in the control group and model group were given the same volume of normal saline. All animals were treated for 3 weeks. Left ankle joint width, thickness, and perimeter were determined, and arthritis indexes were calculated. Pathology of rat ankle joint was observed. The lever of PAF, COX-2, and TNF-α were determined by ELISA method, and level of circulating immune complex was determined by turbidimetry method. Results Treatment for 7 d continue to 21 d, ankle joint width and thickness of rats in the Zixue Powder groups were lower than those of rats in model group. The proliferations of synovial cells were significantly reduced in the Zixue Powder groups, and synovial tissue edema was also significantly reduced. Compared with model group, systemic manifestations score, joint swelling index, and arthritis index in the Zixue Powder group were significantly decreased (P < 0.05, 0.01, and 0.001). Compared with model group, levels of serum PAF in the Zixue Powder groups were significantly reduced, activities of COX-2 were significantly decreased (P < 0.01), and levels of CIC and TNF-α were significantly decreased (P < 0.05, 0.01, and 0.001). Conclusions Zixue Powder has therapeutic effects on collagen-induced arthritis in rats, which may be in regard to the antiinflammatory properties and anti-oxidant activity. Key words: Zixue Powder; collagen-induced arthritis; therapeutic effects; mechanism 收 稿 日 期 : 作 者 简 介 : 李 莉 (1986 ), 女, 博 士 生, 研 究 方 向 为 中 医 药 抗 肿 瘤 的 基 础 研 究 Tel: august-rush2009@163.com * 通 信 作 者 应 森 林 (1961 ), 男, 教 授, 硕 士 生 导 师, 研 究 方 向 为 中 医 药 治 疗 风 湿 免 疫 学 研 究 yingsl888@163.com
2 1136 现 代 药 物 与 临 床 Drugs & Clinic 第 31 卷 第 8 期 2016 年 8 月 类 风 湿 性 关 节 炎 是 一 种 以 对 称 性 多 关 节 炎 为 主 要 临 床 表 现 的 自 身 免 疫 疾 病, 主 要 特 征 为 大 量 炎 细 胞 浸 润 滑 膜 组 织 异 常 增 生 以 及 关 节 软 骨 和 骨 进 行 性 破 坏, 是 最 常 见 的 自 身 免 疫 性 疾 病 [1] 类 风 湿 性 关 节 炎 反 复 发 作, 迁 延 不 愈, 其 中 活 动 期 类 风 湿 性 关 节 炎 的 病 理 改 变 与 中 医 热 毒 痹 的 病 机 相 似 中 医 认 为, 活 动 期 类 风 湿 性 关 节 炎 是 由 于 内 外 邪 热 阻 滞 气 机, 酿 为 热 毒 而 致 病, 临 床 可 见 关 节 肿 痛, 病 变 局 部 皮 色 红 或 黯 红 皮 温 高, 舌 红 苔 黄 腻, 脉 弦 数, 治 疗 以 清 热 解 毒 祛 风 通 络 为 主 现 代 医 学 认 为 类 风 湿 性 关 节 炎 典 型 的 病 理 改 变 是 滑 膜 组 织 的 增 生 和 侵 蚀 性 生 长, 对 关 节 软 骨 组 织 进 行 破 坏, 导 致 关 节 畸 形 和 功 能 障 碍 [2] 由 于 对 类 风 湿 性 关 节 炎 的 发 病 机 制 尚 不 明 确, 临 床 治 疗 缺 乏 有 效 的 措 施 和 根 治 方 案 目 前 治 疗 类 风 湿 性 关 节 炎 的 药 物 主 要 有 非 甾 体 抗 炎 药 改 变 病 情 抗 风 湿 药 糖 皮 质 激 素 生 物 制 剂 等 紫 雪 散 为 凉 开 三 宝 之 一, 由 石 膏 寒 水 石 滑 石 磁 石 等 16 味 中 药 组 成 在 凝 结 过 程 中, 由 于 朱 砂 等 色 泽 的 反 应 以 及 硝 石 等 溶 解 后 的 再 凝 结, 形 成 了 紫 色 之 霜 雪 状 物 质 ; 又 因 药 性 大 寒 冷 若 霜 雪, 故 称 为 紫 雪 紫 雪 散 的 清 热 镇 痉 力 强, 具 有 清 热 解 毒 熄 风 止 痉 的 功 效 Ⅱ 型 胶 原 免 疫 大 鼠 诱 发 的 关 节 炎 模 型 为 接 近 人 类 类 风 湿 性 关 节 炎 的 关 节 炎 模 型 之 一 [3] 为 了 研 究 紫 雪 散 对 大 鼠 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 损 伤 关 节 的 治 疗 作 用 机 制, 本 实 验 观 察 紫 雪 散 对 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 大 鼠 足 肿 胀 及 踝 关 节 局 部 病 理 损 伤 的 治 疗 作 用, 对 紫 雪 散 治 疗 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 的 作 用 机 制 进 行 了 探 讨 1 实 验 材 料 1.1 实 验 动 物 健 康 雄 性 Wistar 大 鼠 50 只,SPF 级, 体 质 量 120~140 g, 由 天 津 市 山 川 红 实 验 动 物 科 技 有 限 公 司 提 供, 实 验 动 物 生 产 许 可 证 SCXK( 津 ) , 适 应 性 饲 养 1 周 后 用 于 实 验 1.2 药 品 与 试 剂 紫 雪 散 由 天 津 宏 仁 堂 药 业 有 限 公 司 提 供, 规 格 1.5 g/ 瓶, 产 品 批 号 , 临 用 前 用 蒸 馏 水 配 制 成 所 需 浓 度 ; 吲 哚 美 辛 由 厦 门 中 药 厂 有 限 公 司 提 供, 批 号 ; 弗 氏 完 全 佐 剂 ( 批 号 050M8702) 鸡 源 性 Ⅱ 型 胶 原 ( 批 号 020M4059) 购 自 Sigma 公 司 ; 冰 乙 酸 ( 分 析 纯, 天 津 市 凯 信 化 学 工 业 有 限 公 司 生 产, 批 号 ); 大 鼠 血 清 TNF-α ELISA 测 定 试 剂 盒 ( 批 号 T041-40) COX-2ELISA 测 定 试 剂 盒 ( 批 号 RT110371) PAF ELISA 测 定 试 剂 盒 ( 批 号 P007-10) 均 购 自 美 国 Groundwork Biotechnology Diagnosticate 公 司 ; 氟 化 钠 ( 天 津 市 瑞 金 特 化 学 品 有 限 公 司 ); 硼 酸 ( 天 津 威 晨 化 学 试 剂 科 贸 有 限 公 司, 批 号 ); 四 硼 酸 钠 ( 硼 砂, 天 津 市 风 船 化 学 试 剂 科 技 有 限 公 司, 批 号 ); 聚 乙 二 醇 ( 天 津 市 瑞 金 特 化 学 品 有 限 公 司 ) 1.3 主 要 仪 器 T2000 型 电 子 天 平 [ 美 国 双 杰 兄 弟 ( 集 团 ) 有 限 公 司 ];PL203 型 电 子 天 平 [ 梅 特 勒 托 利 多 仪 器 ( 上 海 ) 有 限 公 司 ]; 游 标 卡 尺 ( 上 海 测 绘 仪 器 厂 ); EG1160 型 自 动 包 埋 机 RM2135 型 石 蜡 切 片 机 (Leica 公 司 );BH-2 型 光 学 显 微 镜 (Olympus 公 司 ); 实 验 室 专 用 超 纯 水 系 统 ( 北 京 中 盛 茂 源 科 技 发 展 有 限 公 司 );Sunrise Remot 酶 标 仪 Columbus 洗 版 机 ( 奥 地 利 Tecan 公 司 ) 2 方 法 [4] 2.1 Ⅱ 型 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 模 型 的 建 立 50 只 Wistar 大 鼠 中 随 机 挑 选 40 只 用 于 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 造 模 溶 解 于 冰 醋 酸 的 鸡 源 性 Ⅱ 型 胶 原 加 入 等 体 积 的 弗 氏 完 全 佐 剂, 在 冰 浴 条 件 下 使 二 者 充 分 乳 化 ( 以 乳 化 液 滴 入 水 中 不 扩 散 为 度 ), 鸡 源 性 Ⅱ 型 胶 原 最 终 质 量 浓 度 为 1 mg/ml 在 大 鼠 背 部 尾 部 多 点 皮 内 注 射 乳 剂 0.5 ml/ 只 初 次 免 疫 7 d 后 加 强 免 疫, 在 鼠 背 部 尾 部 右 后 足 趾 多 点 皮 内 注 射 乳 剂 0.5 ml 通 过 观 察, 鸡 源 性 Ⅱ 型 胶 原 致 敏 大 鼠 在 免 疫 后 3~4 d 出 现 继 发 性 关 节 炎 症 状, 四 肢 ( 尤 为 双 后 肢 ) 出 现 发 红 肿 胀, 关 节 炎 指 数 增 高, 提 示 造 模 成 功 于 再 次 免 疫 后 第 4 天 测 量 大 鼠 左 后 足 踝 ( 注 射 足 对 侧 ) 的 宽 度 厚 度 及 周 长, 模 型 组 大 鼠 体 质 量 减 轻 左 侧 足 踝 关 节 肿 胀 踝 关 节 周 长 > 2.5 cm 的 认 为 是 造 模 成 功 大 鼠 2.2 分 组 与 给 药 紫 雪 散 的 用 法 用 量 为 口 服 1.5~3 g/ 次,2 次 /d; 大 鼠 体 表 等 效 剂 量 为 0.5 g/kg, 因 此 实 验 选 用 紫 雪 散 g/kg 两 个 剂 量 吲 哚 美 辛 的 有 效 剂 量 参 考 文 献 报 道 选 择 2 mg/kg [4], 配 成 混 悬 液 选 取 造 模 成 功 的 40 只 大 鼠 随 机 分 为 模 型 组 吲 哚 美 辛 2 mg/kg 组 以 及 紫 雪 散 g/kg 组, 每 组 各 10 只 造 模 前 剩 余 的 10 只 大 鼠 作 为 对 照 组 大 鼠 初 次 免 疫 后 第 12 天 开 始 灌 胃 给 药, 给 药 容 量 10 ml/kg,1 次 /d 对 照 组 模 型 组 均 灌 胃 给 予 同 体 积 生 理 盐 水 各 组 均 持 续 给 药 3 周
3 现 代 药 物 与 临 床 Drugs & Clinic 第 31 卷 第 8 期 2016 年 8 月 指 标 测 定 足 肿 胀 度 的 测 量 从 加 强 免 疫 后 第 4 天 起, 用 游 标 卡 尺 测 量 大 鼠 左 后 足 踝 宽 度 厚 度 和 周 长,2 次 / 周, 连 续 测 量 6 次, 以 左 后 足 踝 宽 度 厚 度 和 周 长 作 为 肿 胀 度 观 察 指 标 [4] 关 节 炎 指 数 的 计 算 于 给 药 后 第 21 天 对 全 身 继 发 性 病 变 进 行 评 分, 计 算 关 节 炎 指 数 每 个 足 趾 计 1 个 踝 关 节 和 5 个 指 ( 趾 ) 关 节, 每 鼠 最 多 24 个 关 节 肿 胀 每 只 动 物 的 评 分 加 和 得 全 身 表 现 评 分 见 表 1 表 1 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 模 型 继 发 性 病 变 全 身 表 现 评 分 标 准 Table 1 Secondary lesions systemic performance criteria of collagen-induced arthritis model 项 目 评 分 0 分 1 分 2 分 耳 无 结 节 和 发 红 症 状 1 只 耳 朵 有 结 节 和 发 红 症 状 2 只 耳 朵 有 结 节 和 发 红 症 状 鼻 无 结 缔 组 织 的 肿 胀 强 烈 的 结 缔 组 织 肿 胀 尾 无 结 节 有 结 节 前 爪 无 肿 胀 1 个 前 足 趾 肿 胀 2 个 前 足 趾 肿 胀 后 爪 无 肿 胀 1 个 后 足 趾 肿 胀 2 个 后 足 趾 肿 胀 关 节 炎 指 数 正 常 踝 关 节 出 现 红 斑 和 轻 微 肿 胀 ; 踝 关 节 到 趾 掌 关 节 出 现 红 斑 和 轻 微 肿 胀 踝 关 节 出 现 红 斑 和 轻 微 肿 胀 ; 踝 关 节 到 趾 掌 关 节 出 现 红 斑 和 重 度 肿 胀 2.4 关 节 病 理 观 察 于 末 次 给 药 后 1 h, 大 鼠 麻 醉, 腹 主 动 脉 取 血 后, 取 所 有 大 鼠 的 左 后 足 踝 关 节,12% 甲 醛 溶 液 固 定, 脱 钙, 酒 精 逐 级 脱 水, 二 甲 苯 透 明, 石 蜡 包 理, 切 片,HE 常 规 染 色 光 镜 下 观 察 滑 膜 软 骨 骨 的 病 理 改 变 2.5 大 鼠 血 清 指 标 PAF COX-2 TNF-α 和 CIC 的 测 定 于 末 次 给 药 后 1 h, 各 组 大 鼠 40 mg/kg 戊 巴 比 妥 钠 麻 醉, 腹 主 动 脉 取 血,3 000 r/min 离 心, 分 离 血 清, 20 保 存 备 用 采 用 ELISA 法 测 定 血 清 炎 症 因 子 血 小 板 活 化 因 子 (PAF ) 环 氧 合 酶 -2 (COX-2) 肿 瘤 坏 死 因 子 α(tnf-α) 水 平 ; 采 用 比 浊 法 测 定 吸 光 度 (A) 值 表 示 血 清 循 环 免 疫 复 合 物 (CIC) 水 平 2.6 统 计 方 法 所 有 计 量 数 据 以 x±s 表 示, 应 用 SPSS 13.0 软 件 做 统 计 分 析 采 用 t 检 验 和 方 差 分 析 3 结 果 3.1 紫 雪 散 对 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 大 鼠 足 肿 胀 程 度 的 影 响 与 对 照 组 比 较, 模 型 组 大 鼠 注 射 足 对 侧 在 加 强 免 疫 后 第 4 天 ( 给 药 0 d) 即 出 现 明 显 的 肿 胀, 稍 后 出 现 了 严 重 的 踝 关 节 和 趾 关 节 肿 胀 变 形, 踝 关 节 宽 度 厚 度 均 显 著 增 加, 提 示 造 模 成 功 给 药 7 d, 紫 雪 散 组 踝 关 节 宽 度 厚 度 显 著 低 于 模 型 组 并 能 持 续 到 给 药 21 d, 见 表 2~4 提 示 紫 雪 散 对 对 侧 足 的 踝 关 节 肿 胀 有 显 著 的 抑 制 作 用, 对 大 鼠 类 风 湿 性 关 节 炎 具 有 显 著 的 治 疗 作 用 3.2 紫 雪 散 对 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 大 鼠 关 节 炎 指 数 的 影 响 模 型 组 大 鼠 耳 鼻 尾 前 爪 及 后 爪 有 显 著 的 继 发 性 病 变, 耳 廓 有 显 著 的 结 节 发 红, 鼻 端 结 缔 组 织 肿 胀 明 显, 尾 部 有 结 节, 前 爪 发 红, 部 分 前 爪 趾 关 节 肿 胀, 后 爪 肿 胀 明 显 ; 紫 雪 散 组 耳 廓 结 节 红 肿 鼻 端 结 缔 组 织 肿 胀 尾 部 结 节 程 度 减 轻, 前 爪 及 部 分 前 爪 趾 关 节 后 爪 肿 胀 明 显 减 轻 与 对 照 组 比 较, 模 型 组 全 身 表 现 评 分 关 节 肿 胀 指 数 关 节 炎 指 数 均 显 著 升 高 (P<0.001); 与 模 型 组 比 较, 紫 雪 散 组 全 身 表 现 评 分 关 节 肿 胀 指 数 和 关 节 炎 指 数 均 显 著 降 低 (P< ), 提 示 紫 雪 散 能 够 显 著 改 善 大 鼠 耳 鼻 尾 爪 等 部 位 的 继 发 性 病 变, 对 大 鼠 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 具 有 显 著 的 治 疗 作 用 见 表 关 节 病 理 观 察 与 对 照 组 比 较, 模 型 组 可 见 明 显 的 滑 膜 细 胞 增 生, 滑 膜 组 织 增 生 覆 盖 于 关 节 软 骨 上, 软 骨 组 织 破 坏, 关 节 软 骨 面 完 全 被 破 坏 ; 部 分 关 节 软 骨 破 坏,
4 1138 现 代 药 物 与 临 床 Drugs & Clinic 第 31 卷 第 8 期 2016 年 8 月 表 2 紫 雪 散 对 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 大 鼠 左 后 足 踝 关 节 宽 度 的 影 响 ( x ± s,n = 10) Table 2 Effect of Zixue Powder on left ankle joint width of collagen-induced arthritis rats ( x ± s, n = 10 ) 给 药 后 不 同 时 间 左 后 足 踝 关 节 宽 度 /cm 基 础 阈 值 /cm 3 d 7 d 10 d 14 d 18 d 21 d 对 照 0.61± ± ± ± ± ± ±0.02 模 型 0.72±0.05 ### 0.79±0.05 ### 0.81±0.05 ### 0.85±0.06 ### 0.85±0.04 ### 0.86±0.03 ### 0.85±0.03 ### 吲 哚 美 辛 ± ±0.03 *** 0.66±0.04 *** 0.66±0.03 *** 0.68±0.03 *** 0.69±0.03 *** 0.69±0.02 *** 紫 雪 散 ± ± ± ±0.05 * 0.77±0.07 ** 0.77±0.04 *** 0.76±0.05 *** ± ± ± ±0.06 *** 0.74±0.07 *** 0.71±0.09 * 0.78±0.07 * 表 3 紫 雪 散 对 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 大 鼠 左 后 足 踝 关 节 厚 度 的 影 响 ( x ± s,n = 10) Table 3 Effect of Zixue Powder on left ankle joint thickness of collagen-induced arthritis rats ( x ± s, n = 10 ) 给 药 后 不 同 时 间 左 后 足 踝 关 节 厚 度 /cm 基 础 阈 值 /cm 3 d 7 d 10 d 14 d 18 d 21 d 对 照 0.52± ± ± ± ± ± ±0.02 模 型 0.64±0.02 ### 0.75±0.08 ### 0.77±0.07 ### 0.80±0.07 ### 0.79±0.10 ### 0.85±0.08 ### 0.87±0.09 ### 吲 哚 美 辛 ± ±0.03 *** 0.54±0.05 *** 0.54±0.05 *** 0.56±0.04 *** 0.57±0.02 *** 0.56±0.04 *** 紫 雪 散 ± ±0.05 * 0.75±0.05 *** 0.70±0.10 * 0.69±0.12 ** 0.70±0.08 *** 0.69±0.09 *** ± ±0.09 ** 0.75±0.08 *** 0.62±0.07 *** 0.67±0.07 ** 0.71±0.09 *** 0.72±0.10 *** 表 4 紫 雪 散 对 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 大 鼠 左 后 足 踝 关 节 周 长 的 影 响 ( x ± s,n = 10) Table 4 Effect of Zixue Powder on left ankle joint perimeter of collagen-induced arthritis rats ( x ± s, n = 10 ) 基 础 阈 值 /cm 给 药 后 不 同 时 间 左 后 足 踝 关 节 周 长 /cm 3 d 7 d 10 d 14 d 18 d 21 d 对 照 2.23± ± ± ± ± ± ±0.04 模 型 2.62±0.09 ### 2.86±0.21 ### 2.91±0.26 ### 3.02±0.21 ### 2.99±0.22 ### 3.13±0.17 ### 3.14±0.17 ### 吲 哚 美 辛 ± ±0.15 *** 2.29±0.14 *** 2.36±0.15 *** 2.38±0.12 *** 2.36±0.08 *** 2.39±0.10 *** 紫 雪 散 ± ± ± ± ± ± ± ± ±0.21 * 2.88±0.19 ** 2.67± ± ± ±0.28 表 5 紫 雪 散 对 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 大 鼠 继 发 全 身 性 病 变 的 影 响 ( x ± s,n = 10) Table 5 Effect of Zixue Powder on secondary systemic disease of collagen-induced arthritis rats ( x ± s, n = 10 ) 全 身 表 现 评 分 / 分 关 节 肿 胀 指 数 / 分 关 节 炎 指 数 / 分 对 照 0.0± ± ±0.0 模 型 6.6±1.3 ### 21.1±4.2 ### 13.8±1.8 ### 吲 哚 美 辛 ±0.9 *** 5.3±3.0 *** 2.1±1.1 *** 紫 雪 散 ±1.8 * 3.5±1.8 *** 5.0±1.7 *** ±1.7 ** 4.6±3.6 *** 5.6±3.1 ***
5 现 代 药 物 与 临 床 Drugs & Clinic 第 31 卷 第 8 期 2016 年 8 月 1139 被 纤 维 组 织 替 代, 关 节 面 黏 连, 大 部 分 骨 组 织 破 坏 紫 雪 散 g/kg 组 滑 膜 细 胞 增 生 明 显 减 轻, 滑 膜 组 织 充 血 水 肿 明 显 减 轻, 少 量 关 节 软 骨 破 坏, 被 纤 维 组 织 替 代, 软 骨 下 骨 排 列 正 常 ; 部 分 骨 组 织 破 坏, 骨 小 梁 间 填 充 以 纤 维 组 织, 部 分 形 成 类 骨 质 见 图 1 对 照 模 型 吲 哚 美 辛 2 mg kg 1 紫 雪 散 0.5 g kg 1 紫 雪 散 1.0 g kg 1 图 1 大 鼠 踝 关 节 病 理 图 (HE 染 色 ) Fig. 1 Pathology of rat ankle joint (HE staining) 3.4 紫 雪 散 对 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 大 鼠 血 清 PAF COX-2 的 影 响 与 对 照 组 比 较, 模 型 组 大 鼠 血 清 PAF 水 平 显 著 增 加,COX-2 活 性 显 著 升 高 (P<0.001) 与 模 型 组 比 较, 紫 雪 散 g/kg 组 血 清 PAF 水 平 显 著 减 少,COX-2 活 性 显 著 降 低 (P<0.001), 见 表 6 结 果 表 明 紫 雪 散 对 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 大 鼠 关 节 肿 胀 有 显 著 的 治 疗 作 用, 可 能 与 其 减 少 PAF 水 平 抑 制 COX-2 活 性 从 而 发 挥 抗 炎 作 用 有 关 表 6 紫 雪 散 对 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 大 鼠 血 清 PAF COX-2 的 影 响 ( x ± s,n = 10) Table 6 Effect of Zixue Powder on PAF and COX-2 in serum of collagen-induced arthritis rats ( x ± s, n = 10 ) PAF/(pg ml 1 ) COX-2/(ng ml 1 ) 对 照 ± ±1.345 模 型 ± ### ±1.348 ### 吲 哚 美 辛 ± ±0.695 *** 紫 雪 散 ±9.816 *** 7.891±1.266 *** ± *** 6.931±1.622 *** 与 对 照 组 比 较 : ### P<0.001; 与 模 型 组 比 较 : *** P<0.001 ### P < vs control group; *** P < vs model group 3.5 紫 雪 散 对 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 大 鼠 血 清 TNF-α CIC 的 影 响 与 对 照 组 比 较, 模 型 组 大 鼠 血 清 TNF-α CIC 水 平 显 著 增 加 (P<0.001), 表 明 模 型 组 大 鼠 免 疫 功 能 亢 进 与 模 型 组 比 较, 紫 雪 散 g/kg 组 血 清 TNF-α CIC 水 平 显 著 减 少 (P< ), 表 明 紫 雪 散 对 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 大 鼠 滑 膜 增 生 关 节 变 形 有 显 著 的 治 疗 作 用, 可 能 与 其 调 节 亢 进 的 免 疫 系 统, 减 少 TNF-α CIC 水 平, 减 少 CIC 在 滑 膜 组 织 沉 积 有 关 见 表 7 表 7 紫 雪 散 对 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 大 鼠 血 清 TNF-α CIC 的 影 响 ( x ± s,n = 10) Table 7 Effect of Zixue Powder on TNF-α and CIC in serum of collagen-induced arthritis rats ( x ± s, n = 10 ) TNF-α/(pg ml 1 ) CIC 对 照 ± ±0.003 模 型 ± ### 0.061±0.006 ### 吲 哚 美 辛 ± ±0.006 ** 紫 雪 散 ± * 0.049±0.004 *** ± ** 0.037±0.003 *** 与 对 照 组 比 较 : ### P<0.001; 与 模 型 组 比 较 : * P<0.05 ** P<0.01 *** P<0.001 ### P < vs control group; * P < 0.05 ** P < 0.01 *** P < vs model group 4 讨 论 现 代 研 究 发 现 类 风 湿 性 关 节 炎 是 一 种 慢 性 系 统 性 自 身 免 疫 疾 病 [5], 临 床 上 常 因 反 复 急 性 发 作 而 处 于 活 动 期, 属 于 中 医 学 的 热 痹 范 畴, 有 白 虎 [6] 病 历 节 病 之 称 张 永 红 认 为 痹 证 多 与 热 毒 有 关, 以 类 风 湿 性 关 节 炎 急 性 发 作 期 关 节 的 红 肿 热 痛 最 为 典 型 紫 雪 散 源 于 传 统 名 方, 方 中 羚 羊 角 水 牛 角 粉 凉 血 止 血 ; 生 石 膏 滑 石 清 热 解 毒 ; 麝 香 木 香 芳 香 走 窜, 诸 药 合 用, 具 有 清 热 解 毒, 消 肿 止 痛 的 功 效
6 1140 现 代 药 物 与 临 床 Drugs & Clinic 第 31 卷 第 8 期 2016 年 8 月 本 研 究 观 察 到 紫 雪 散 能 明 显 减 轻 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 大 鼠 踝 关 节 肿 胀 程 度 和 关 节 炎 指 数, 在 病 理 切 片 观 察 中 也 得 到 证 实 同 时 能 减 少 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 大 鼠 血 清 中 炎 性 介 质 PAF 水 平 抑 制 COX-2 活 性, 通 过 炎 症 通 路 减 轻 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 大 鼠 关 节 肿 痛 程 度 和 关 节 滑 膜 炎 性 病 变, 发 挥 解 热 镇 痛 作 用, 达 到 治 疗 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 引 起 的 细 胞 和 组 织 的 炎 症 损 伤 TNF-α 是 类 风 湿 性 关 节 炎 发 病 机 制 中 重 要 的 促 炎 细 胞 因 子 之 一 [7], 作 为 类 风 湿 性 关 节 炎 病 变 的 病 理 基 础 和 发 病 的 启 动 细 胞 因 子 之 一, 其 作 用 贯 穿 于 整 个 炎 症 发 展 过 程 可 促 进 成 纤 维 样 滑 膜 细 胞 的 活 化 破 坏 关 节 组 织 以 及 参 与 关 节 炎 性 破 坏 过 程 [8] [9] 已 有 研 究 发 现,TNF-α 与 类 风 湿 性 关 节 炎 患 者 血 管 翳 的 形 成 有 关, 在 类 风 湿 性 关 节 炎 发 病 中 发 挥 重 要 的 作 用 紫 雪 散 组 的 TNF-α CIC 水 平 均 有 显 著 减 少, 提 示 紫 雪 散 能 有 效 缓 解 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 大 鼠 滑 膜 增 生 关 节 变 形 等 炎 症 反 应 和 组 织 损 伤, 可 能 与 其 调 节 亢 进 的 免 疫 系 统, 减 少 CIC 在 滑 膜 组 织 中 的 沉 积 有 关 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 大 鼠 踝 关 节 肿 胀 关 节 炎 指 数 和 病 理 观 察 结 果 也 证 实, 紫 雪 散 能 不 同 程 度 地 减 轻 关 节 炎 性 细 胞 浸 润 及 滑 膜 炎 性 增 生, 抑 制 血 管 翳 的 形 成, 阻 止 软 骨 的 破 坏, 减 轻 关 节 的 损 伤 程 度 综 上 所 述, 紫 雪 散 对 大 鼠 胶 原 诱 导 性 关 节 炎 损 伤 具 有 治 疗 效 果, 其 机 制 可 能 与 紫 雪 散 的 抗 炎 和 抗 氧 化 作 用 有 关, 可 为 其 临 床 用 于 活 动 期 类 风 湿 性 关 节 提 供 了 科 学 依 据 参 考 文 献 [1] Komatsu N, Takayanagi H. Autoimmune arthritis: the interface between the immune system and joints [J]. Adv Immunol, 2012, 115: [2] 陈 成 妹, 陈 瑞 林. 益 赛 普 治 疗 类 风 湿 关 节 炎 病 人 的 效 果 观 察 [J]. 护 理 研 究, 2011, 25(8): [3] 王 淑 月. 抗 类 风 湿 性 关 节 炎 的 药 物 研 究 [J]. 中 国 组 织 工 程 研 究, 2004, 8(27): [4] 魏 伟, 吴 希 美, 李 元 建. 药 理 实 验 方 法 学 [M]. 第 4 版. 北 京 : 人 民 卫 生 出 版 社, 2010: 750 [5] 夏 燕, 冯 佳, 陈 安 平, 等. 类 风 湿 关 节 炎 外 周 血 lncrna 差 异 表 达 研 究 [J]. 中 国 免 疫 学 杂 志, 2016, 32(1): [6] 张 永 红, 王 笑 青. 活 动 期 类 风 湿 性 关 节 的 治 疗 应 注 重 热 毒 与 瘀 毒 [C]. 河 南 省 中 医 中 西 医 结 合 骨 伤 科 学 术 年 会 暨 学 习 班 资 料 汇 编. 洛 阳 : 河 南 省 科 学 技 术 协 会, 2009: [7] 王 志 中, 王 勇, 牟 方 祥, 等. 血 小 板 TNF-α 及 IL-1β 与 活 动 期 类 风 湿 关 节 炎 的 相 关 性 研 究 [J]. 第 三 军 医 大 学 学 报, 2011, 33(5): [8] 李 燕, 胡 俊 平, 巫 婷 婷. 青 蒿 联 合 甲 氨 蝶 呤 对 类 风 湿 性 关 节 炎 患 者 血 TNF-α IL-10 水 平 的 影 响 [J]. 河 南 中 医, 2012, 32(4): [9] Matsuyama Y, Okazaki H, Tamemoto H, et al. Increased levels of interleukin 33 in sera and synovial fluid from patients with active rheumatoid arthritis [J]. J Rheumatol, 2010, 37(1):
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