350 江苏大学学报 ( 医学版 ) 第 25 卷是 1.1~2.1ng/mL, 上限是 5ng/mL [1-8] 血流中乳糜微粒和极低密度脂蛋白释放出的脂肪酸通过细胞表面的脂肪酸转运蛋白进入细胞内后, 经 H FABP 摄取并转运至线粒体, 从而进入能量代谢体系并最终生成三磷腺苷 (ATP),

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妾裴香
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1 第 25 卷第 4 期 2015 年 7 月江苏大学学报 ( 医学版 ) JournalofJiangsuUniversity(MedicineEdition) Vol.25 No.4 Jul.2015 H FABP 和心肌肌钙蛋白 Ⅰ 二联试纸条的制备顾梅 1, 阮秀清 1, 康淑娟 2, 刘宏飞 1 1, 余江南 ( 江苏大学 1. 药学院,2. 京江学院, 江苏镇江 ) [ 摘要 ] 目的 : 制备能够同时检测心型脂肪酸结合蛋白 (H FABP) 和心肌肌钙蛋白 Ⅰ() 的二联试纸条, 用于急性心肌梗死的早期和中期辅助诊断方法 : 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金, 并对其相关因素进行考察将胶体金分别与 H FABP 和的单克隆抗体结合, 优化胶体金与单克隆抗体结合的影响因素 ; 将胶体金结合物喷于玻璃纤维膜上制成金标垫, 再分别将另一亚型和 H FABP 单克隆抗体和羊抗鼠 IgG 包被检测线 T 1 T 2 和质控线 C, 最后与吸水垫经预处理的样品垫和底板组装成二联试纸条结果 : 制备的二联试纸条检测 H FABP 的灵敏度为 10 ng/ml, 检测的灵敏度为 3.0ng/mL,10min 内可判定结果, 层析速度均匀, 没有背景颜色, 两种蛋白之间无交叉反应, 二联试纸条稳定性好结论 : 成功制备灵敏度高层析速度均匀和稳定性好的 H FABP/ 二联胶体金免疫层析试纸条 [ 关键词 ] 心型脂肪酸结合蛋白 ; 心肌肌钙蛋白 Ⅰ; 试纸条 ; 心肌梗死 ; 胶体金免疫层析 ; 双抗夹心法 [ 中图分类号 ] R541;R [ 文献标志码 ] A [ 文章编号 ] (2015) DOI: /j.isn y Preparationofheart typefatyacid bindingproteinand cardiactroponinⅠ bivalentstrip GUMei 1,RUANXiu qing 1,KANGShu juan 2,LIUHong fei 1,YUJiang nan 1 (1.SchoolofPharmacy,2.JingjiangColege,JiangsuUniversity,ZhenjiangJiangsu212013,China) [Abstract] Objective:Todevelopthebivalentstripofhumanheart typefatyacidbindingprotein(h FABP)andcardiactroponinⅠ()usingcoloidalgoldimmunochromatographytechnologywithprinci plesofdouble antibodysandwichasay,fortheearlyandmid asisteddiagnosisofacutemyocardialinfarc tion.methods:thecoloidalgoldwaspreparedbytrisodiumcitratereductionmethod,anditsrelatedfac torswereinvestigated.coloidalgoldparticleslabeledwithmonoclonalantibodyofh FABPand,re spectively,werecoatedonsomeglasfiberanddried;similarly,itsfactorswereoptimized.theothermono clonalantibodyof,h FABPandgoatanti mouseiggwereblotedonthetestoneline,testtwoline andcontrollineofnitrocelulosemembrane,whichwerepreparedwiththeabsorbentpad,thepretreated samplepadandpvfloorintoabivalentstrip.results:theteststripofh FABPand detectionsen sitivitywas10ng/mland3.0ng/ml,respectively,theresultcanbedeterminedwithin10min,thathave uniformspeedchromatography,nobackground,nocrosoverbetweenthetwoproteinsresponseandgood stability.conclusion:itpreparedh FABP/ coloidalgoldbivalentstripofhighsensitivity,uniform speedchromatographyandgoodstability,succesfuly. [Keywords] heart typefatyacid bindingprotein;cardiactroponinⅠ;strip;myocardialinfarction;gold immunochromatography;sandwichmethod 心型脂肪酸结合蛋白 (heart typefatyacid bind ingprotein,h FABP) 是一类低分子质量的新型细胞质蛋白质, 大量存在于心脏, 占胞质蛋白的 15%, 少量存在于血液和心脏以外的组织中, 血浆参考浓度 [ 基金项目 ] 江苏省高等学校大学生创新创业训练计划资助项目 ( X) [ 作者简介 ] 顾梅 (1988 ), 女, 硕士研究生 ; 余江南 ( 通讯作者 ), 教授, 博士生导师,E mail:gm @163.com

2 350 江苏大学学报 ( 医学版 ) 第 25 卷是 1.1~2.1ng/mL, 上限是 5ng/mL [1-8] 血流中乳糜微粒和极低密度脂蛋白释放出的脂肪酸通过细胞表面的脂肪酸转运蛋白进入细胞内后, 经 H FABP 摄取并转运至线粒体, 从而进入能量代谢体系并最终生成三磷腺苷 (ATP), 为心肌收缩提供能量 [9] 急性心肌梗死 (acutemyocardialinfarction, AMI) 或心肌缺血时, 心肌细胞损伤, 细胞膜通透性增加,H FABP 由于相对分子质量小, 且为水溶性, 可迅速被释放进入血液, 在心肌细胞损伤发生 1.5h 后出现在血浆中,6h 浓度达到高峰, 随后逐渐下降,24~30h 后回到基线值 [1,3] H FABP 如此迅速恢复至正常水平得益于其高肾清除率, 因此是 AMI 早期诊断的标志物 [10-11] 心肌肌钙蛋白 Ⅰ(cardiactroponinⅠ,) 具有高度的心肌特异性对心肌损伤程度的高度敏感性及较长的诊断窗口期, 正逐渐取代肌酸激酶 (CK) 同工酶 MB, 成为诊断心肌损伤, 特别是心肌梗死的特异性标志物特异存在于心肌细胞胞质, 在心肌细胞膜完整状态下, 不能通过细胞膜进入血循环, 所以健康人血内不含或含甚少的心肌肌钙蛋白在心肌受损后, 特别是心肌梗死发生后, 能很快地释放入血,3~6h 出现异常增高,11~24h 达峰值, 可超过正常的 40 倍, 持续 7~9d, 检测窗口长 [12] 2007 年 10 月欧洲心脏病学会 (ESC) 美国心脏病学会 (ACC) 美国心脏协会 (AHA) 和世界心脏联盟 (WHF) 组成工作小组发布了心肌梗死全球统一定义标准, 推荐使用 ctn 诊断 AMI 胶体金免疫层析试纸条是将具有特异性的物质和 IgG 分别固定在 NC 膜上作为 T 线和 C 线, 胶体金标记物喷涂在结合物垫上, 与加在样品垫上的待测样品结合, 通过毛细管作用向前移动, 与 NC 膜上的蛋白结合, 形成聚合物, 聚集在相应区域形成视觉可见的红色条带 [13-14] 胶体金免疫层析技术具有检测快速制备简便灵敏度高等优点, 同时 H FABP/ 二联胶体金试纸条可以同时检测 H FABP 和这两种蛋白, 因此可以同时监测 AMI 的早期和中期状况, 配合相关检测仪器, 可以定量检测 H FABP 和的浓度, 为急性心肌梗死的诊断提供一种快速简便的方法, 有良好的临床应用价值 1 材料与方法 1.1 材料氯金酸枸橼酸三钠牛血清白蛋白 (BSA) 和酪蛋白钠 (CaseinNa) 均购自上海捷宁生物有限公司 ; H FABP 单抗和抗原单抗和抗原均购自海肽生物科技有限公司 ; 羊抗鼠 IgG 胶体金样品垫金标垫 NC 膜吸水垫和底板均购自上海杰一生物有限公司其他试剂均购自国药集团化学试剂有限公司 1.2 方法玻璃器皿的准备将玻璃器皿用双蒸水清洗 3 遍, 放在 100 烘箱里烘干, 再放入王水 (V 浓 HCl V 浓 HNO 3 =3 1) 中浸泡 24h 后, 继续用双蒸水清洗 3 遍, 放在 100 烘箱烘干, 备用胶体金制备条件的优化胶体金的制备需要考察 4 个单因素, 分别是枸橼酸钠的量首次沸腾时间第 2 次沸腾时间和转速实验步骤 : 取 40mL 1% 的氯金酸溶液放入经王水洗净并干燥过的 50 ml 锥形瓶中, 分别置于恒温加热磁力搅拌器上加热, 并精确调节搅拌速度 R(r/min), 在加热沸腾 t 1 (min) 后, 分别一次性快速加入新鲜配制的 1% 枸橼酸三钠 (ml) 溶液的颜色一般由黄色灰色黑色紫黑色紫色酒红色变化, 加入枸橼酸三钠 t 2 (min) 后, 停止加热, 将溶液冷却至室温后, 加双蒸水至溶液体积为 40mL, 最后进行质量鉴定 4 个单因素变量见表 1 单因素枸橼酸钠体积 (V,mL) 表 1 胶体金制备的单因素考察首次沸腾时间 (t 1,min) 0 2 第 2 次沸腾时间 (t 2,min) 转速 (R,r/min) [15-16] 胶体金质量鉴定方法变量肉眼观察胶体金溶液观察制得的胶体金溶液颜色均匀度和透明度, 初步判断其质量, 如 10~20nm 颗粒胶体金是樱桃红,20~40nm 颗粒胶体金是酒红色,40nm 以上的胶体金是紫红色如果出现蓝色白色或者浑浊, 说明制备的胶体金质量差, 或者可能是玻璃器皿未洗干净, 污染了胶体金溶液, 破坏了胶体金的稳定结构紫外光谱扫描鉴定将制备好的胶体金溶液用双蒸水稀释 5 倍, 在 400~600nm 可见光范围内进行紫外可见光扫描一般胶体金的最大吸收峰在 520~530nm, 峰型左右基本对称观察紫外吸收峰的峰形和峰宽大小通过测定最大吸收峰波长, 确定胶体金颗粒的大小

3 第 4 期顾梅, 等.H FABP 和心肌肌钙蛋白 Ⅰ 二联试纸条的制备透射电镜观察透射电镜下分别在 kV 观察胶体金的颗粒形态大小及均匀度等取 10μL 的样品点在铜网上, 放置在培养皿中室温干燥后, 加 1 滴 2% 的磷钨酸, 室温干燥后, 在透射电镜中检测理想的金颗粒大小基本相等均匀一致无椭圆形及多角形的金颗粒存在胶体金和蛋白结合的条件优化将一定量的 20mmol/LK 2 CO 3 溶液滴加到装有 1mL 胶体金的离心管, 混匀后每只离心管各继续加入一定量的单克隆抗体, 稍等片刻 (t 1 ), 混合均匀, 再加入 0.5 ml 的 10% NaCl, 静置片刻 (t 2 ) 观察胶体金颜色变化, 并再加入 3mL 双蒸水稀释, 扫描紫外光谱并在 530nm 测定 D 值, 以单因素和 D 值分别为横纵坐标作曲线, 取曲线斜率最低点处为单因素最适值此实验步骤共考察两个单因素, 分别为最佳 ph 值 (20 mmol/lk 2 CO 3 的量 ) 和最适蛋白量, 其变量见表 2 表 2 胶体金和蛋白结合的单因素考察单因素变量 H FABP 20mmol/LK 2 CO 3 的量 (μl) 最适蛋白量 (μl) 胶体金和蛋白结合物的制备按照上述实验确定好的最佳 ph 值和蛋白量进行标记, 将抗 H FABP 单抗和抗的单抗分别加入胶体金溶液中,30min 后加入 BSA, 继续静置 30min, 将标记好的胶体金蛋白结合物溶液置于恒温离心机中,6000 r/min,4 离心 15min; 吸出上清液再以 8400r/ min,4 离心 30min, 两次都保留金标沉淀金标恢复液的优化将制备的金标沉淀, 按照 30%V 金标沉淀 +70%V 金标恢复液 (V 表示体积 ) 的比例制备喷金液 ( 金标恢复液 1 号是含有 1% BSA 0.05%PEG 和 0.1%Tween 20 的 Tris HCl 液,2 号是 1% 的酪蛋白 15% 的海藻糖和 30% 的蔗糖,3 号是 1% 的酪蛋白 15% 的蔗糖和 1% 的 PVP), 将已经制备好的胶体金蛋白结合物用移液器均匀涂在经过预处理的结合垫上, 其他条件不变, 将结合垫与 NC 膜样品垫吸水垫和 PVP 板组装, 切成 4mm 宽的试纸条, 按照结合垫在层析 5min 时的层析速度以及残留物的多少选择金标恢复液 NC 膜单克隆抗体的包被将浓度为 0.8 mg/ml 的羊抗鼠 IgG 包被在 C 线上, 浓度为 3mg/ ml 的和 0.2mg/mL 的 H FABP 单抗分别包被在 T 1 线和 T 2 线, 放置在 37 烘箱里 1.5~2h 后取出, 放置在塑封袋内备用 2 结果和讨论 2.1 胶体金的制备条件优化枸橼酸钠量的优化胶体金颗粒的大小主要受柠檬酸三钠量的影响, 枸橼酸钠量越多, 制备所得的胶体金颗粒的粒径越小, 紫外光谱扫描所得的可见吸收峰值越小当加入枸橼酸钠的量从 0.15 ml 逐渐增加到 1mL 时, 制得的胶体金颗粒的颜色从咖啡色玫红色到桃红色变化 ( 图 1) 因此可以通过加入不同量的枸橼酸钠制备不同大小胶体金颗粒本实验需要制备 40nm 的胶体金颗粒, 根据购自上海杰一公司的胶体金颗粒的吸收峰值在 530 nm, 本实验加入 1% 枸橼酸钠的量应选择 0.5mL 来还原 40mL 的 0.01% 的氯金酸溶液 ml 0.2 ml 0.3 ml 0.4 ml 0.44 ml 0.5 ml 0.54 ml 0.64 ml 0.8 ml 1 ml 第 1 次沸腾时间的优化沸腾 2min 后加枸橼酸钠制得的胶体金呈玫红色, 而在氯金酸沸腾 (ml) 图 1 枸橼酸钠量对胶体金颗粒粒径的影响后立刻加枸橼酸钠所制得的胶体金为酒红色, 更加接近购自杰一公司的胶体金颜色紫外扫描光谱图

4 352 江苏大学学报 ( 医学版 ) 第 25 卷中峰半宽越小, 表示制得的胶体金颗粒的粒径分布越均匀, 在氯金酸加热沸腾后立刻加入枸橼酸钠制得的胶体金颗粒的粒径分布更加均匀见图 2 因此第 1 次沸腾时间选择 0min min 0 min min 0 min 图 2 首次沸腾时间对胶体金颗粒粒径的影响第 2 次沸腾时间的优化第 2 次沸腾时间不同所制得的胶体金颜色相差不大 ; 当加入枸橼酸钠后沸腾 10min 时, 所制得的胶体金的半峰宽最小, 此条件下, 胶体金粒径分布更加均匀, 因此第 2 次沸腾时间选择 10min 见图 min 13 min 12 min 10 min min 12 min 13 min 14 min 图 3 第 2 次沸腾时间对胶体金颗粒均匀度的影响转速的优化当转速为 300r/min 时, 半峰宽最小, 胶体金颗粒的粒径分布最均匀 ; 当转速为 100r/min 时, 胶体金的颜色为玫红色 ; 当转速为 300r/min 时, 胶体金颜色为酒红色, 接近杰一公司的产品因此, 应选择 300r/min 的转速见图胶体金颗粒的检验本实验制备的胶体金颗粒的颜色与杰一公司相像, 通过透射电镜可以观察到胶体金颗粒分布均匀, 粒径在 40nm 左右 ( 图 5) r/min 200 r/min 100 r/min r/min 200 r/min 300 r/min 图 4 胶体金制备转速的优化图 5 制备的胶体金颗粒 ( 透射电镜 30 万 ) 综上分析, 经过可见光吸收光谱和透射电镜判断, 选择本实验胶体金制备的最佳条件为 40mL 的 0.01% 氯金酸水溶液在 300r/min 的搅拌速度加热至沸, 沸腾后立即加入枸橼酸钠还原剂, 反应 10min 后停止搅拌, 室温冷却, 并定容至 40mL, 储存备用 2.2 胶体金和蛋白结合最佳 ph 值采用 K 2 CO 3 调节 ph 值, 通过

5 第 4 期顾梅, 等.H FABP 和心肌肌钙蛋白 Ⅰ 二联试纸条的制备 353 目测法得知, 当 ph 太小或者太大时, 胶体金都会变色原因是 ph 小于单抗的等电点 pi, 单抗带正电荷, 胶体金带负电荷, 两者结合过强形成聚合物而聚沉 ; 当 ph 值远大于单抗的等电点 pi, 溶液碱性太强, 单抗带负电荷, 胶体金也是负电荷, 相互排斥而不能结合在加入 NaCl 盐离子时, 由于单抗不能保护胶体金而使胶体金聚集沉淀变成蓝色 ; 而 ph 值在标记蛋白的等电点或略偏碱性, 与胶体金静电结合, 单抗保护了胶体金, 在加入 NaCl 盐离子时, 颜色不变由图 6 可知,H FABP 的 1,2,5,6,8 号试管变色, 因此检测 3,4 和 7 号试管的 D 值 ; 的 1 号和 5~7 号试管变色, 因此检测 2~4 号管的 D 值由测得的 D 值看, 标记 H FABP 的 20 mmol/l K 2 CO 3 的加入量为 30 μl, 的 20 mmol/l K 2 CO 3 的加入量为 35μL( 表 3), 其 D 值最大, 胶体金和蛋白结合的酸碱环境最佳 H-FABP 加入 K 2 CO 3 的量随试管编号增加而递增图 6 在不同的 ph 值下结合两种蛋白后的胶体金颜色表 3 胶体金溶液的 D 值对应的 K 2 CO 3 体积 H FABP 体积 (μl) D 值体积 (μl) D 值最佳蛋白量当单抗量比较少时, 胶体金变色, 而随着单抗量增加, 胶体金颜色不变, 原理是胶体金是一种带负电的疏水性颗粒, 未加单抗或加入的单抗量不足时, 胶体金和蛋白结合未达到饱和, 蛋白没有完全保护胶体金, 有胶体金结合位点裸露, 当加入 NaCl 后由于盐离子效应, 会改变胶体金的性质, 出现由红变蓝的聚沉现象, 这种情况下试纸条的灵敏度降低甚至出现假阳性由图 7 可知,H FABP 的 1 号和 2 号试管变色, 因此对 3~6 号试管检测紫外吸收峰值 (D 值 ); 的 1 号和 2 号试管变色, 同理检测 3~5 号试管紫外吸收峰值 (D 值 ) 当 H FABP 的单抗量为 3μL, 的单抗量为 2.5μL, 其 D 值最大 ( 表 4) 最佳蛋白量一般在此基础上增加 20%, 因此,H FABP 的最佳蛋白量是 3.6μL,cTn Ⅰ 的最佳蛋白量为 3μL H-FABP 加入蛋白质的量随试管编号的增加而递增图 7 加入不同量蛋白的胶体金颜色表 4 不同蛋白量测得的 D 值 H FABP 体积 (μl) D 值体积 (μl) D 值与图 5 中显示的颗粒比较, 胶体金蛋白结合物 (GNP) 的直径有所增加, 而且在胶体金外围有白色的环 ( 图 8), 表明蛋白已经通过静电吸附在胶体金表面, 胶体金和 H FABP ctni 的偶联率达 100% [17] 2.3 金标恢复液的优化金标恢复液可以使高速离心完的胶体金结合物重悬于液体中, 形成溶液, 在 4 环境下可以长期放

6 354 江苏大学学报 ( 医学版 ) 第 25 卷置, 而且在制成成品试纸条时可以长期保持活性, 延长有效期本实验考察 3 种不同的恢复液, 以稳定性作为标准来确定最终的恢复液扰, 这两种蛋白可以合并在一条试纸条上一起检测这样可以减少取样量, 减少患者的痛苦, 节省检测时间, 减少了 AMI 诊断时间和医疗费用图 8 胶体金蛋白结合物 ( 透射电镜 60 万 ) 由图 9 可知, 试纸条放置 1 周后,1 号的残留物很多,2 号和 3 号残留物明显较少我们在实验中发现,3 号点样后, 液体在结合垫停留的时间很长, 层析效果不好因此, 选择 2 号金标恢复液可能原因是胶体金结合物在干燥过程中与结合垫结合了, 而 2 号的恢复液中有海藻糖或者蔗糖, 在结合垫表面形成一层光滑的薄膜, 防止胶体金结合物缀合在结合点上, 同时, 光滑的薄膜极易水解, 有利于胶体金结合物释放进入样品液中, 并随之层析到 NC 膜中, 因此, 可以提高灵敏度层析速度等 [18] 1 号恢复液中不含有糖类, 不能在结合垫形成一层光滑的薄膜, 因此金标残留物最多 ;3 号恢复液中含有的糖类比 2 号少, 因此金标残留物比 2 号多图 9 3 种金标恢复液的考察结果 2.4 二联试纸条的层析结果由图 10 可知, 阴性样品点样时, 只有 C 线显色, T 1 和 T 2 未显色 ; 当样品中只有 H FABP 时,C 线和 T 2 线显色 ; 当样品中只有时,C 线和 T 1 线显色 ; 当样品中既有 H FABP, 又有时,C 线 T 1 线和 T 2 线都显色这说明 H FABP 和之间没有干图 10 H FABP 和的试纸条 3 结论本实验制备胶体金采用的柠檬酸三钠还原法, 影响胶体金颗粒大小的因素是氯金酸与枸橼酸钠量的比值当氯金酸量一定时, 枸橼酸钠量越多, 制备所得的胶体金颗粒的直径越小 ; 而其他影响因素如磁力搅拌的速度沸腾时间等主要影响胶体金颗粒的质量当这些条件处于最优时, 制备的胶体金颗粒大小均匀, 呈类似圆形或者椭圆形胶体金与蛋白结合的 ph 值应处于蛋白的 pi 或者略大于 pi 值, 此时因为静电吸附, 蛋白包裹在胶体金的周围形成稳定的结构胶体金免疫层析技术是以双抗夹心法为原理, 如果待测样品中有 H FABP 和的抗原时, 当液体层析到结合垫时, 两种抗原分别与相应的胶体金结合物特异性结合的结合物在 NC 膜上通过毛细管作用层析到 T 1 线, 又与包被在 T 1 线的单克隆抗体特异性结合, 形成类似三明治的结构, 因此出现肉眼可识别的红色条带样本中的浓度越高, 检测线区出现红色带的时间越短显色越深 [3] T 2 线同理不论待测样本中是否存在 H FABP 或者, 当层析液继续迁移至 C 线 ( 包被羊抗鼠 IgG 抗体 ) 时, 在该区出现另一条红色带,C 线的条带颜色不会随着抗原浓度的增加而增加, 只跟包被在 C 线的羊抗鼠 IgG 的浓度有关该二联试纸条具有检测准确快速等特点, 不仅适合于医院的急诊室及床边检测, 而且也适合家庭等任何场所的检测, 可用于早期和中期 AMI 的辅助诊断, 并为定量诊断提供了前期基础

7 第 4 期顾梅, 等.H FABP 和心肌肌钙蛋白 Ⅰ 二联试纸条的制备 355 [ 参考文献 ] [1] AlhadiHA,FoxKA.Doweneedadditionalmarkersof myocytenecrosis:thepotentialvalueofheartfatyacid bindingprotein[j].qjm,2004,97(4): [2] NakataT,HashimotoA,HaseM,etal.Humanheart typefatyacid bindingproteinasanearlydiagnosticand prognosticmarkerinacutecoronarysyndrome[j].car diology,2003,99(2): [3] 彭林峰, 罗广, 席仲兴, 等. 心肌型脂肪酸结合蛋白胶体金检测试纸条的制备和初步应用 [J]. 微生物学免疫学进展,2013,41(6): [4] 康可人, 吴培钿, 李悦琳, 等. 抗心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体制备鉴定和在侧向免疫层析方法中的应用 [J]. 中国生物工程杂志,2013,33(1): [5] SchaapFG,BinasB,DannebergH,etal.Impaired long chainfatyacidutilizationbycardiacmyocytesiso latedfrommicelackingtheheart typefatyacidbinding proteingene[j].circres,1999,85(4): [6] TanakaT,HirotaY,SohmiyaK,etal.Serumanduri naryhumanheartfatyacid bindingproteininacutemy ocardialinfarction[j].clinbiochem,1991,24(2): [7] GhaniF,WuAH,GrafL,etal.Roleofheart type fatyacid bindingproteininearlydetectionofacutemy ocardialinfarction[j].clinchem,2000,46(5): [8] TrifonovIR,KatrukhaAG,DeevAD,etal.Heartfaty acidbindingproteininpatientswithst elevationacute coronarysyndromehospitalizedwithin6hoursafteronset ofpain[j].kardiologia,2002,42(6): [9] 袁劲松, 张邦熙, 王晓蓉. 血清心肌型脂肪酸结合蛋白快速检测急性心肌梗死的敏感度和特异度分析 [J]. 微循环学,2012,22(2): [10] 刘筱泉, 白峰, 李天成, 等. 人心脏型脂肪酸结合蛋白快速检测试剂盒的临床验证性研究 [J]. 微生物学免疫学进展,2012,40(4): [11] 吕娇凤, 谢爱民, 姚全良. 心脏型脂肪酸结合蛋白定性检测对急性心肌梗死早期诊断的价值 [J]. 实用医学杂志,2012,28(4): [12] 郝建秀, 张春明, 王沂, 等. 人心肌肌钙蛋白 Ⅰ 胶体金免疫层析试纸条的研制 [J]. 生物医学工程与临床, 2010,14(6): [13] 贾娟娟, 刘一兵, 冯婷婷, 等. 心肌肌钙蛋白 Ⅰ 免疫层析试纸条的研制 [J]. 检验医学与临床,2012,9(22): [14] PatarawarapanM,NangolaS,CreseyTR,etal.De velopmentofaone stepimmunochromatographicstrip testfortherapiddetectionofnevirapine(nvp),acom monlyusedantiretroviraldrugforthetreatmentofhiv/ AIDS[J].Talanta,2007,71(1): [15] 邹明静, 王英玲, 李刚. 胶体金免疫分析中的研究进展 [J]. 菏泽医学专科学校学报,2009,4(21): [16] 徐欢. 胶体金免疫层析方法快速检测食品中氯霉素的残留研究 [D]. 广州 : 广东药学院,2010. [17] GuoH,HeN,GeS,etal.MCM 41mesoporousmateri almodifiedcarbonpasteelectrodeforthedetermination ofcardiactroponinibyanodicstrippingvoltammetry [J].Talanta,2005,68(1): [18] 郭勤. 基于量子点标记的层析试纸条与配套分析仪的研制 [D]. 上海 : 上海交通大学,2009. [ 收稿日期 ] [ 编辑 ] 陈海林 ( 上接第 348 页 ) [7] FeranteP,FusiML,SareselaM,etal.Cytokinepro ductionandsurfacemarkerexpresioninacuteandsta blemultiplesclerosis:alteredil 12productionandaug mented signaling lymphocytic activation molecule (SLAM) expresinglymphocytesinacutemultiplescle rosis[j].jimmunol,1998,160(3): [8] IsomakiP,AversaG,CocksBG,etal.Increasedex presionofsignalinglymphocyticactivationmoleculein patientswithrheumatoidarthritisanditsroleintheregu lationofcytokineproduction in rheumatoid synovium [J].JImmunol,1997,159(6): [9] CarbalidoJM,AversaG,KaltoftK,etal.Reversalof humanalergicthelper2responsesbyengagementof signalinglymphocyticactivationmolecule[j].jimmu nol,1997,159(9): [10] WangN,SatoskarA,FaubionW,etal.Thecelsur facereceptorslamcontrolstcelandmacrophagefunc tions[j].jexpmed,2004,199(9): [ 收稿日期 ] [ 编辑 ] 刘星星

材料方法

材料方法生物技术通报姜燕采用鼠抗人血红蛋白单克隆抗体和胶体金标记鼠抗人血红蛋白单克隆抗体及对照抗体羊抗鼠利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原在内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克隆一步法胶体金检测试卡用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白抗体方法检测效价免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡法检测效价的结果显示鼠抗人