表面多孔增强核技术 为了满足色谱柱的卓越表现不受所用仪器的限制这一需求, 我们应用全新理念, 研发出创新的 Accucore HPLC 色谱柱 表面多孔增强核技术 四大重要特点 表面多孔实心核颗粒.6µm 颗粒包含实心核和表面多孔层, 在常规反压下实现高速高效的分析 严格控制粒径改进的颗粒筛选流程使

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1 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱应用指南 卓越的表面多孔增强核技术让你的投资实现最大价值

2 表面多孔增强核技术 为了满足色谱柱的卓越表现不受所用仪器的限制这一需求, 我们应用全新理念, 研发出创新的 Accucore HPLC 色谱柱 表面多孔增强核技术 四大重要特点 表面多孔实心核颗粒.6µm 颗粒包含实心核和表面多孔层, 在常规反压下实现高速高效的分析 严格控制粒径改进的颗粒筛选流程使粒径分布范围最小, 从而提高柱效 自动装填过程 先进的自动装填过程确保所有色谱柱都有最高的装填质量和优异批次重现性 先进的键合技术优化的固定相键合技术使固定相更加致密和耐用 表面多孔实心核颗粒严格控制粒径先进的键合技术自动装填过程快速分离 峰容量高 提高灵敏度 更低柱压 载样量高 重复的色谱分析结果 使用寿命长 多种键合相, 选择范围广 上表显示了 表面多孔增强核 技术的四大特点如何增进 Accucore HPLC 色谱柱的整体性能

3 目录 填料颗粒演变 快速 HPLC 的理论 表面多孔增强核技术 设计的理论基础 表面多孔增强核技术 的卓越效果 比 µm 和 3µm 颗粒更快速 更短色谱柱, 分离更快 峰容量高于 µm 和 3µm 颗粒 灵敏度高于 µm 和 3µm 颗粒 与亚 µm 颗粒性能相当, 柱压是其一半 载样能力 方法转移简单 在各种仪器上都表现出色 系统条件优化 重现的色谱分析结果 色谱柱使用寿命长 保护柱 多种键合相, 更多选择性 RP-MS C aq Phenyl-Hexyl PFP HILIC 应用食品 环境 临床 法医毒理学 法医学 制药 生物制药 常规应用 适用于快速液相的 Thermo Scientific 产品 订购信息色谱柱及保护柱 方法开发套装 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南

4 填料颗粒演变 自 HPLC 问世以来, 为使分离更好更快, 色谱柱填料的尺寸和形状已经经历了数十年的发展 填料从最初的薄膜大颗粒, 经较小的全多孔型颗粒, 最后发展成为粒径小于 µm 的全多孔球形颗粒 我们的 表面多孔增强核 技术再次引发了一场色谱颗粒技术的革命 此颗粒不属于完全多孔型硅胶, 它们具有实心核结构以及多孔硅胶外层 不规则大颗粒 µm 颗粒 3µm 颗粒 亚 µm 颗粒 表面多孔增强核颗粒 表面多孔实心核颗粒 表面多孔增强核技术 表面多孔增强核 技术具备亚 µm 填料的优势 分离快速, 分离度高 同时不存在使用小颗粒填料所造成的高反压问题 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南

5 快速 HPLC 的理论 以下 Van Deemter 曲线和 kinetic plot 显示了填料粒径和类型对柱效的影响 柱效最高, 且随着流速上升柱效损失最小的是粒径最小的颗粒以及采用 表面多孔增强核 技术的颗粒 全多孔 µm 全多孔 3µm 全多孔.9µm 表面多孔增强核 技术.6µm H µ (mm/s) 通过 Van Deemter 曲线, 我们可以看出, 板高 (H) 在最佳流速时达到最小值 ( 此时柱效最高 ), 之后随着流速的增加而增大 ( 柱效下降 ) 表面多孔增强核颗粒具有更高柱效, 并且能在更高的线速度下工作 全多孔 µm 全多孔 3µm 全多孔.9µm 表面多孔增强核 技术.6µm t/n (s) N opt N 在该 kinetic plot 中, 柱效 (N) 作为塔板生成时间 (t /N) 的函数, 随其下降而下降 其中 t 是化合物的保留时间, 与流速呈反比 表面多孔增强核颗粒能在更短的时间内达到最高柱效 最佳理论塔板点 (N opt ) 如图所示 分离度色谱分离度的方程式表明分离度与柱效的平方根成正比 这意味着使用小粒径和 表面多孔增强核 技术的颗粒时高柱效能带来更好的分离度 分离度较差 分离度良好 a 选择性 N 柱效 k' 容量因子 (a - ) k' R S = N 4 a + k' Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南 3

6 表面多孔增强核 技术设计的理论基础 在 Van Deemter 方程式中, C 项 ( 传质阻力 ) 和 A 项 ( 涡流扩散 ) 是两个显著影响色谱效率的因素 H = A + B u + Cu H 理论塔板高度 ( 柱长 / 柱效 ) A 涡流扩散 B 纵向扩散 C 传质阻力 u 流动相线速度 表面多孔实心核设计能够将传质阻力降至最低, 因为分析物的移动路径只局限于多孔外层 材料平均粒径分布 (D9/) Accucore.6μm. 在 Accucore HPLC 色谱柱中 表面多孔增强核 填料的粒径以及自动装填过程都经过严格控制, 柱床填充紧密, 高度均匀, 从而使涡流扩散最小化 反压更低 L 柱长 (cm) h 流动相粘度 (cp) F 流速 (ml/min) d p 粒径 (μm) d c 柱直径 (cm) LhF DP ~ d p d c 上述方程式表明了反压与粒径的关系 严格控制粒径分布的.6μm 粒径 Accucore 颗粒比常见的亚 μm 填料反压低一倍 4 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南

7 表面多孔增强核 技术卓越效果 如下曲线显示了 Accucore HPLC 色谱柱和使用传统的 μm 3μm 以及.9μm 全多孔填料进行装填的色谱柱之间柱效和反压的比较 柱效下降 H µ (mm/s) µm 3µm <μm Accucore RP-MS.6µm Accucore HPLC 色谱柱比 μm 和 3μm 色谱柱的柱效更高, 可与 μm 颗粒相媲美 压力增加 柱压 (bar) 常见 HPLC 柱压限值 流速 (µl/min) µm 3µm <µm Accucore RP-MS.6µm Accucore HPLC 色谱柱在提高柱效的同时避免产生过大反压 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南

8 比 μm 和 3μm 颗粒更快速 使用 Accucore HPLC 色谱柱可在更短的时间实现优异的分离 示例显示如何在增加流速的同时维持分离度, 整个分离所需的时间仅需原来的 /3, 同时溶剂成本可降低 7 倍! Rs=. Rs=.96 Rs=.64 Rs=.64 全多孔 µm x 4.6mm 全多孔 µm x.mm 全多孔 3µm x.mm Accucore RP-MS.6µm x.mm 流动相 : A 相 水 ; B 相 乙腈梯度 : Accucore RP-MS.6µm x.mm = B 相浓度在 3. 内由 3% 上升到 6% 全多孔 3µm x.mm = B 相浓度在 4. 内由 % 上升到 6% 全多孔 µm x.mm = B 相浓度在 6.7 内由 3% 上升到 6% 全多孔 µm x 4.6mm = B 相浓度在. 内由 3% 上升到 6% 流速 : Accucore RP-MS.6µm x.mm = 4µL/min 全多孔 3µm x.mm = 3µL/min 全多孔 µm x.mm = µ/min 全多孔 µm x 4.6mm = µl/min 进样体积 : µl ( 全多孔 µm x 4.6mm = µl) 柱温 : 3 C 检测波长 : 47nm.s 的采集时间间隔,Hz) 分析物 :. 丁噻隆. 甲氧隆 3. 灭草隆 4. 绿麦隆. 敌草隆 6. 利谷隆 Accucore RP-MS,6 µm, x, mm 全多孔 3 µm, x.mm 全多孔 µm, x.mm 全多孔 µm, x 4.6mm 分离度 ( 临界物质对 ) 包括重新平衡在内整个梯度方法的运行时间 (min) 减少分析时间并降低溶剂成本使得分析通量更高, 降低每次分析的成本 6 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南

9 更短色谱柱, 分离更快 Accucore HPLC 色谱柱的出色分离能力意味着使用较小尺寸的色谱柱, 仍可实现可接受的分离度, 同时使分析通量更高, 进一步降低成本 Rs=. Accucore RP-MS.6µm x.mm 流动相 : A 相 水 ; B 相 乙腈梯度 : Accucore RP-MS.6µm x.mm = B 相浓度在.8 内由 3% 上升到 6% Accucore RP-MS.6µm x.mm = B 相浓度在 3. 内由 3% 上升到 6% 流速 : 4µL/min Rs=. Accucore RP-MS.6µm x.mm 节省分析时间和溶剂消耗 Accucore RP-MS,6µm, x,mm Accucore RP-MS.6µm, x.mm 分离度 ( 临界物质对 ).. 包括重新平衡在内整个梯度方法的运行时间 (min) mm 柱长的色谱柱在保证可接受分离度的前提下, 可使分析通量加倍, 溶剂成本减半 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南 7

10 峰容量高于 μm 和 3μm 颗粒 除了加快分析速度,Accucore HPLC 色谱柱的高分离度特点还能体现在增加峰容量, 以改善复杂的分离 n c 峰容量 t g 梯度时间 W 峰宽 (% 峰高处 ) t g n c = + ( ) W 全多孔 µm x. mm 全多孔 3µm x.mm Accucore RP-MS.6µm x.mm... 3 流动相 : A 相 水 ; B 相 乙腈 梯度 :. 内 B 浓度从 6% 升至 9%, 在 9% 浓度持续.4 流速 : 进样体积 : µl 4µL/min 柱温 : 4 C 检测波长 :47nm(.s 的采集时间间隔,Hz) 分析物 :. 乙腈. 苯丙酮 3. 苯丁酮 4. 苯戊酮. 苯己酮 6. 苯庚酮 7. 苯辛酮 峰容量对比 7 6 归一化峰容量 Accucore RP-MS.6µm 全多孔 3µm 全多孔 µm 色谱柱 峰容量 Accucore RP-MS.6µm 8 全多孔 3 µm 3 全多孔 µm 峰容量越高, 单次分析可鉴定的化合物越多 8 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南

11 灵敏度高于 μm 和 3μm 颗粒 正如下述公式所示,Accucore HPLC 色谱柱得到的更尖锐和更高的峰形使得信噪比 (S/N) 更高, 因此灵敏度也更高 c max 峰顶点处浓度 N 柱效 V i 进样体积 L 柱长 d c 柱内径 k' 容量因子 V i N c max L d c ( + k' ) 全多孔 µm x.mm 全多孔 3µm x.mm 流动相 :A 相 水 ; B 相 乙腈梯度 : Accucore RP-MS.6µm x.mm = B 相浓度在 3. 内由 3% 上升到 6% 全多孔 3µm x.mm = B 相浓度在 4. 内由 3% 上升到 6% 全多孔 µm x.mm = B 相浓度在 6.7 内由 3% 上升到 6% 灵敏度 Accucore RP-MS.6µm x.mm 流速 : Accucore RP-MS.6µm x.mm = 4µL/min 全多孔 3µm x.mm = 3µL/min 全多孔 µm x.mm = µl/min 进样体积 :µl 柱温 : 3 C 检测波长 :47nm(.s 的采集时间间隔,Hz) 分析物 :. 丁噻隆. 甲氧隆 3. 灭草隆 4. 绿麦隆. 敌草隆 6. 利谷隆 色谱柱 分析灭草隆时的 S/N (6-sigma) 灵敏度增加 Accucore,6 µm, x, mm % 全多孔 3 µm, x.mm 368 7% 全多孔 µm, x.mm 69 更好的灵敏度可以可靠检测和定量小色谱峰, 如低浓度的杂质检测 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南 9

12 与亚 μm 填料性能相当柱压是其一半 由于采取了表面多孔增强核设计 严格控制粒径分布并且柱床十分均匀, Accucore HPLC 色谱柱的性能与亚 μm 色谱柱总体相当, 而反压是其一半 全多孔.9µm x.mm Accucore RP-MS.6µm x.mm..... 流动相 : A 相 水 ; B 相 乙腈梯度 :.7 内 B 浓度从 6% 升至 9% 在 9% 浓度持续.3 流速 : µl/min 进样体积 : µl 柱温 : 4 C 检测波长 : 47nm(.s 的采集时间间隔,Hz) 分析物 :. 乙腈. 苯丙酮 3. 苯丁酮 4. 苯戊酮. 苯己酮 6. 苯庚酮 7. 苯辛酮 压力 Accucore RP-MS.6µm, x.mm 全多孔 <µm, x.mm 分离度 ( 临界物质对 ) 运行时间 (min) 最大压力 (bar) 更低的反压需求使此色谱柱可与常规液相和超高效液相色谱系统兼容 如果使用超高效液相系统, 更低的反压可减少仪器的磨损 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南

13 载样能力 由于装填紧密, 键合相覆盖率高,Accucore HPLC 色谱柱具有较宽载样量范围 如下示例显示, 在增加分析物浓度时, 保留时间和色谱峰形基本没有改变 峰面积 R² =.9998 色谱柱 : Accucore RP-MS x.mm 流动相 : 水 : 甲醇 =68:3 (v/v) 流速 :.ml/min 柱温 : 4 C 检测波长 : 4nm 进样体积 : µl..... 色谱柱载样量 (µg) 浓度 (ng/μl) 色谱柱载样量 (μg) 数值.6.4. 不对称性 柱效 保留时间.. 3. 色谱柱载样量 (µg) Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南

14 方法转移简单 通常使用低柱体积的色谱柱来实现快速的 HPLC 分离 将方法转移至 Accucore HPLC 色谱柱, 需进行几个简单的步骤 方法转移工具 调整流速在考虑粒径和颗粒形状的前提下, 保持原方法和新方法之间的线速度一致 调整进样量新方法进样量和柱体积的比例与原方法一致 调整梯度曲线使得梯度方法中每个部分所用流动相的柱体积数保持不变 全多孔 μm x 4.6mm Accucore RP-MS.6µm x.mm 流动相 : A 相 水 ; B 相 乙腈 梯度 : 流速 : Accucore RP-MS.6µm x.mm = B 相浓度在 3. 内由 3% 上升到 6% 全多孔 µm x 4.6mm = B 相浓度在. 内由 3% 上升到 6% Accucore RP-MS.6µm x.mm = 4µL/min 全多孔 µm x 4.6mm = µl/min 进样体积 : Accucore RP-MS.6µm x.mm = µl 全多孔 µm x 4.6mm = µl 柱温 : 3 C 检测波长 : 47nm(.s 的采集时间间隔,Hz) 分析物 :. 丁噻隆. 甲氧隆 3. 灭草隆 4. 绿麦隆. 敌草隆 6. 利谷隆 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南

15 在各种仪器上都表现出色 表面多孔增强核 技术使填料反压更低, 意味着 Accucore HPLC 色谱柱可灵活用于 UHPLC 和 HPLC 系统 Thermo Scientific Accela Thermo Scientific Surveyor 色谱柱 : Accucore RP-MS.6µm, x.mm 流动相 : A 相 水 ; B 相 乙腈梯度 :. 内 B 浓度从 6% 升至 9% 在 9% 浓度持续.4 流速 : 4µL/min 进样体积 : µl 柱温 : 4 C 检测波长 : 47nm 紫外波长 (.s 的采集时间间隔,Hz) 分析物 : 苯某酮. 乙腈. 苯丙酮 3. 苯丁酮 4. 苯戊酮. 苯己酮 6. 苯庚酮 7. 苯辛酮 Agilent 系统对比 UHPLC 系统可提供最佳的色谱性能, 而所有 HPLC 系统均能受益于 Accucore HPLC 色谱柱快速 分离度高的优点 在 Surveyor 所观察到的较高分离度是由梯度延时造成的 Accela Surveyor Agilent 运行时间 (min) 在 % 峰高处的平均峰宽 (min)...4 平均分离度 (USP) 为了最好地发挥 Accucore HPLC 色谱柱的优势, 系统应进行优化, 从而实现高效分离 请参见第 4 页的系统优化 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南 3

16 系统条件优化 Accucore HPLC 色谱柱的峰形极其尖锐 为了保持高柱效, 需要对 HPLC 系统进行优化, 以减少任何造成峰展宽的潜在原因 造成峰展宽的系统潜在原因包括 : 柱外峰展宽描述柱外峰展宽的下述公式表明必须控制进样体积, 减少流通池体积并保证使用较短 较细的管路 K 常数 V inj 进样体积 V cell 流通池体积 F 流速 r c 管道半径 l c 管道长度 D m 在流动相中的扩散系数 检测器响应较慢为了实现尖锐的峰形, 必须对检测器的时间常数和采样频率进行优化 如果不进行上述操作, 则强度会降低, 峰宽增加 Hz Octanophenone RT: 数据点 * 峰宽 4σ (s) 峰面积 峰高 (mau) Hz Hz Hz Hz * 4σ 以上位置采集的数据点 Hz Hz Hz 快速梯度为了实现快速梯度, 必须使泵的延迟体积最小, 从而保证梯度以最快的速度到达色谱柱.4 达到所需梯度 泵的延迟体积 8µL 8µL. 达到所需梯度 色谱柱 : 全多孔 <µm, x.mm 流动相 : A 相 水 +.% 甲酸 B 相 乙腈 +.% 甲酸梯度 : 内 B 浓度从 % 升至 % 流速 :.ml/min 柱温 : C 检测波长 : 紫外波长 7nm( 流通池体积为 µl) 管柱 检测器 :." 内径进样体积 :.µl 分析物 :. 磺胺咪. 磺胺甲基嘧啶 3. 磺胺间甲氧嘧啶 4. 磺胺喹噁林 4 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南

17 重复的色谱分析结果 Accucore HPLC 色谱柱采用的先进的键合技术和自动装填过程使得色谱结果的重现性极佳 填料分析 我们会对生产的每批 Accucore 填料进行分析, 与标准参数进行比较并出具分析报告 填料特性和基于 Tanaka 测试的分析 硅胶基质特性键合相特性疏水相互作用次级相互作用酸性相互作用 HILIC 相互作用 比表面积碳载量疏水保留碱活性 与酸性物质相互作用 HILIC 保留 & 选择性 HR BA AI 离子交换容量 孔径 疏水选择性 螯合作用 (ph.6) 粒径 HS 空间选择性 C 离子交换容量 (ph 7.6) IEX(.6) 粒径分布 SS 氢键结合能力 IEX(7.6) HBC 色谱柱测试 每根 Accucore HPLC 色谱柱会在装填后进行测试, 然后与标准参数相比较并出具测试报告 保留时间容量因子柱效对称反压 每根 Accucore HPLC 色谱柱都经过以上所有测试, 保证柱与柱之间, 批次与批次之间的高度重现性 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南

18 色谱柱使用寿命长 当今的色谱工作者对色谱柱使用寿命有较高要求 颗粒机械稳定性和键合相的稳定性 对填料粒径的严格控制和自动装填过程使得 Accucore HPLC 色谱柱的填料床高度均匀, 并具备极佳的机械稳定性 Accucore HPLC 色谱柱采用的先进的键合技术使得键合相十分牢固, 对 ph 和温度的影响有高度的耐受性 Accucore HPLC 在 ph < 的情况下稳定性极佳 容量因子 8 4 Injection 4 6 Injection 8 4 Injection 柱体积 色谱柱 : 流动相 : Accucore C8.6µm, x.mm A 相 水 +.% 三氟乙酸 B 相 甲醇 +.% 三氟乙酸 梯度 : 时间 (min) % B 流速 : 进样体积 : µl 4µL/min 柱温 : 3 C 检测波长 : 4nm(.s 的采集时间间隔,Hz) 洗脱顺序 :. 尿嘧啶 (t ). 对乙酰氨基酚 3. 对羟基苯甲酸 4. 邻羟基苯甲酸. 阿米替林 6. 去甲替林 7. 邻苯二甲酸二异丙酯 8. 邻苯二甲酸二丙酯 Accucore HPLC 色谱柱坚固耐用, 使用寿命长 6 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南

19 Accucore HPLC 在 ph > 的情况下也可保持稳定 容量因子 8 Injection 4 4 Injection 6 Injection 柱体积 色谱柱 : 流动相 : Accucore C8.6µm, x.mm A 相 水 +.% 氨水 B 相 甲醇 +.% 氨水 梯度 : 时间 (min) % B 流速 : 进样体积 : µl 4µL/min 柱温 : 3 C 检测波长 : 4nm(.s 的采集时间间隔,Hz) 洗脱顺序 :. 尿嘧啶 (t ). 对氯肉桂酸 3.Procainamite 4.4- 正戊基苯甲酸.N- 乙酰基普鲁卡因胺 6. 邻苯二甲酸二异丙酯 7. 邻苯二甲酸二丙酯 在较高温度下也可保持稳定 Injection 4 Injection 3 Injection 色谱柱 : 流动相 : 流速 : 进样体积 : Accucore C8.6µm, x.mm 水 : 甲醇 =3:6 (v/v) 4µL/min.µL 柱温 : 7 C 检测波长 : 洗脱顺序 : 4nm(.s 的采集时间间隔,Hz). 茶碱 / 咖啡因 (t ). 苯酚 3. 丁苯 4. 邻三联苯. 戊基苯 / 苯并菲 容量因子 柱体积 6 8 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南 7

20 保护柱 设计保护柱的目的是为了保护您的色谱柱免受基质或仪器引入的颗粒以及进样样品中任何可强烈保留组分的影响 Thermo Scientific 保护柱芯专为快速 高效的分离而设计 反压 v 进样次数 反压 (Bar) 进样次数 7 8 使用保护柱不使用保护柱新保护柱 Accucore C8.6μm, mm x.mm mm x.mm 保护柱芯流动相 : 乙腈 : 水 =3:6 (v/v) 流速 : μl/min 柱温 : 4 C 检测波长 : 4nm 进样体积 : µl 蛋白沉淀样品 : 大鼠血浆以 4 倍体积的乙腈进行沉淀蛋白 次进样混合物标准品后, 再进行 9 次血浆蛋白沉淀样品进样 保护柱可延长 Accucore HPLC 色谱柱的使用寿命 响应 (MilliVolts) 使用保护柱芯 不使用保护柱 Accucore C8.6μm, mm x.mm mm x.mm 保护柱芯流动相 : 乙腈 : 水 =: (v/v) 流速 : 4μL/min 柱温 : 3 C 检测波长 : 4nm 进样体积 : μl 分析物 :. 茶碱. 对硝基苯胺 3. 苯甲酸甲酯 4. 苯乙醚. 邻二甲苯 参数 不使用保护柱 使用保护柱 选择性.8.8 柱效 (N/m) 拖尾.8.7 保留时间 ( ) 反压 (bar) 8 6 保护柱对色谱柱性能的影响极小 8 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南

21 多种键合相, 更多选择性 Accucore HPLC 色谱柱系列有 6 种不同键合相可供选择, 提供丰富的选择性 每种键合相都使用先进的键合技术制备而成, 并使用基于 Tanaka 测试的测试方法进行选择性表征 关于这些测试的更多详情, 请参见第 页 下面的雷达图显示了 Accucore 键合相特性测试的结果, 可以快速简便地比较不同键合相的选择性 Accucore RP-MS 特别优化用于 MS 检测, 出色的分离速度和分离能力 Accucore C8 最常用的键合相, 对非极性分析物具有最好的保留 Accucore aq 与 % 水流动相兼容, 对极性分析物具有独特的选择性 Phenyl-Hexyl 对芳香族和中等极性分析物提供独特的选择性 Accucore PFP 与 C8 具有不同的选择性, 尤其适合卤化分析物和其他取代的芳香类化合物 HILIC Accucore HILIC 对极性和亲水性分析物具有更高的保留 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南 9

22 Thermo Scientific Accucore RP-MS to 9 4 8Å 3 7.6µm 特别优化用于 MS 检测 卓越的峰形 出色的分离速度和分离能力 Accucore RP-MS 使用优化的长链烷基, 从而更好地覆盖硅胶表面 这种高覆盖率使得次级相互作用显著降低, 从而使峰形更好, 拖尾减少 RP-MS 的保留能力几乎与 C8 相当, 加上高柱效和低拖尾, 使其成为用于 MS 检测的首选键合相 Accucore RP-MS 色谱柱的选择性与 C8 色谱柱相同 碱性化合物分析 Tf = Accucore RP-MS.6µm, mm x.mm 流动相 : 6:3 (v/v) 甲醇 /mm 磷酸钾缓冲液 ph7. 流速 : µl/min 柱温 : 3 C 检测波长 : nm 进样体积 : µl 反压 : 3 bar 分析物 :. 尿嘧啶. 普萘洛尔 3. 羟苯丁酯 4. 萘. 二氢苊 6. 阿米替林 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南

23 Thermo Scientific Accucore C8 to 4 8Å 3 9.6µm USP L 对非极性化合物具有最好的保留 疏水相互作用机制 最通用的键合相, 分离范围广泛 Accucore C8 键合相主要通过疏水相互作用机制实现对非极性分析物的较强保留 Accucore C8 键合相的高保留能力可将其用于各种不同性质分析物的分离 三嗪类化合物分析 Accucore C8.6µm, mm x.mm 9 3 流动相 : A 相 水 ; B 相 乙腈 8 梯度 : 时间 (mins) % B 流速 : 6µL/min 柱温 : C 4 检测波长 : 8nm 3 进样体积 : µl 反压 : 98 bar 分析物 :. 西玛津. 西草净 3. 阿特拉津 莠灭净. 扑灭津 6. 扑草净 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南

24 Thermo Scientific Accucore aq to 9 4 8Å 3 9.6µm USP L 对极性分析物有更高的保留和分离度 极性封端的 C8 固定相提供不同的选择性 非常适用于高水溶液流动相 Accucore aq 键合相用极性官能团封尾, 提供了另一种可控的相互作用机制, 从而对极性较大化合物进行保留和分离, 这使得 Accucore aq 键合相成为对痕量水平的较大极性分析物进行定量分析的理想选择 极性官能团的引入将增加反相基质的亲水能力 Accucore GOLD aq 的极性封端基团同样使其可用于 % 水溶液流动相, 而不会损失性能或降低稳定性 拉米夫定分析 (USP) Accucore aq.6µm, mm x.mm 流动相 : 乙酸铵,pH 3.8 / 甲醇 =9: (v/v) 流速 : µl/min 柱温 : 3 C 检测波长 : 77nm 进样体积 : µl 分析物 : 拉米夫定 Tr 的 %RSD. 峰面积的 %RSD.7 (6 次重复进样的 %RSD) USP 标准 :RSD % ( 保留时间, 峰面积 ) <. Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南

25 Thermo Scientific Accucore Phenyl-Hexyl to 8 4 8Å 3.6µm USP L 对芳香族和中等极性分析物提供混合模式的选择性 与芳香族化合物具有加强的 Pi-pi 相互作用 中等疏水性 Accucore Phenyl-Hexyl 键合相中的 C6 链具有经典的反向保留能力和选择性, 而苯环则可通过与溶质中的极性基团发生相互作用而增加特殊的选择性 这形成了一种混合模式的分离机制 Phenyl-Hexyl 键合相适用于可使用传统烷基键合相分离一部分化合物, 另一部分化合物需要用苯基键合相分析的复杂混合物组分 Beta- 受体激动剂分析 Terbutaline Cimaterol Salbutamol Ractopamine Clorprenaline Clenbuterol NL: 9.E m/z = NL: 6.E m/z = MS NL: 3.E6 m/z = NL:.3E6 m/z = MS NL:.E6 m/z = MS NL:.7E6 m/z = MS Accucore Phenyl-Hexyl.6µm, mm x.mm 流动相 : A 相 mm 乙酸铵溶液,pH 4 B 相 乙腈梯度 : 时间 (min) % B 流速 :.ml/min 柱温 : 4 C 质谱参数 : +ESI-MS (4ºC, 4.kV, 6V, scan 3) 进样体积 : µl 反压 : bar Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南 3

26 Thermo Scientific Accucore PFP to 8 4 8Å 3.6µm USP L43 与 C8 具有不同的选择性 对卤化物提供额外的保留 对非卤化极性化合物具有独特的选择性 将含氟基团引入 Accucore PFP( 五氟苯基 ) 固定相使溶质 - 固定相相互作用发生了显著变化 这将实现对卤化物位置异构体的保留和选择性 PFP 色谱柱同时也适合非卤化物的选择性分析, 尤其是包含羟基 羧基 硝基或其他极性基团的极性化合物 当这些官能团位于芳香或其他刚性环上时,PFP 键合相对其有选择性保留 位置异构体分析 7 Accucore PFP.6µm, mm x.mm 流动相 : A 相 水 +.% 甲酸 6 B 相 乙腈 +.% 甲酸 梯度 : 7 内 B 浓度从 % 升至 3% 流速 : 6µL/min 4 柱温 : C 7 检测波长 : 7nm 3 进样体积 : µl ,4- 二甲氧基苯酚.,6- 二甲氧基苯酚 ,6- 二氟苯酚 ,- 二甲氧基苯酚.,4- 二氟苯酚 6.,3- 二氟苯酚 7. 3,4- 二氟苯酚 8. 3,- 二甲基苯酚 ,6- 二甲基苯酚.,6- 二氯苯酚. 3- 甲基 -4- 氯苯酚. - 甲基 -4- 氯苯酚 3. 3,4- 二氯苯酚 4. 3,- 二氯苯酚 4 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南

27 Thermo Scientific Accucore HILIC (%) HILIC to 8 4 8Å 3.6µm USP L3 对极性和亲水性分析物具有更高的保留 无需离子对试剂和衍生化方法, 就能保留极性化合物 改善 MS 检测的灵敏度 分析物在 Accucore HILIC 键合相中的保留取决于决定氢键结合能力的酸 / 碱性和决定偶极 - 偶极作用的极化度两个因素 与 Accucore HILIC 配合使用的高比例有机流动相能保证在 ESI MS 检测中的有效去溶剂化, 从而提高检测灵敏度 儿茶酚胺类分析 Accucore HLIC.6µm, x 4.6mm 流动相 : 乙腈 /mm 甲酸铵,pH 3.=8: (v/v) 流速 : ml/min 柱温 : 4 C 检测波长 : 8nm 进样体积 : µl 反压 : 7 bar 分析物 :. 儿茶酚.- 羟吲哚乙酸 3. 二羟苯乙酸 4. 羟色胺.L- 酪氨酸 6. 多巴胺 7. 左旋多巴 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南

28 应用 食品 偶氮染料 Accucore RP-MS.6µm, mm x 4.6mm 流动相 : A 相 水 +.% 三氟乙酸 B 相 乙腈 +.% 三氟乙酸 梯度 : 时间 (min) % B 流速 :.8mL/min 柱温 : C 检测波长 : nm 进样体积 : µl 分析物 :. 枣红色基. 酸性橙 II 3. 二甲基黄 4. 苏丹红 G. 苏丹红 I 6. 苏丹红 II 7. 苏丹红 IV 三聚氰胺和氰尿酸 m/z = Accucore HILIC.6µm, mm x 4.6mm 流动相 : 乙腈 /mm 乙酸铵,pH =9: (v/v) 流速 : ml/min 柱温 : 4 C 质谱参数 : MS, 质荷比 m/z 7, 8, 68 ( 负离子模式 -3 mins, 正离子模式 3- mins) 进样体积 : µl 反压 : 7 bar 分析物 : 氰尿酸 :m/z 8. (-) 三聚氰胺 :m/z 7. (+), 68.( 乙腈加合物时,+) 6 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南

29 环境 脲类除草剂 Accucore RP-MS.6µm, mm x.mm 流动相 : A 相 水 ; B 相 乙腈梯度 : 3. 内 B 浓度从 3% 升至 6% 流速 :.43mL/min 柱温 : C 检测波长 : 4nm 进样体积 : 3µL 分析物 :. 灭草隆. 甲氧隆 3. 利谷隆 4. 敌草隆. 特丁噻草隆 6. 绿麦隆 禁用芳香胺 Accucore PFP.6µm, mm x.mm 流动相 : A 相 mm 乙酸铵溶液,pH. B 相 乙腈梯度 :. 内 B 浓度从 % 升至 % 流速 :.6mL/min 柱温 : 4 C 检测波长 : 4nm 进样体积 : µl 反压 : 3 bar 分析物 :.,4- 二氨基甲苯.4,4'- 二氨基二苯醚 3. 邻氨基甲苯 4.- 甲氧基 -- 甲基苯胺.,4,- 三甲基苯胺 6.4,4'- 二氨基 -3,3'- 二氯二苯甲烷 碱性极性化合物, 流动相中有挥发性缓冲液 Accucore 色谱柱表现出优异峰型 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南 7

30 临床 肾上腺素和去甲肾上腺素 Accucore HILIC.6µm, mm x 4.6mm 流动相 : 乙腈 /mm 甲酸铵,pH 3.=9:8 (v/v) 流速 : 3.mL/min 柱温 : 4 C 检测波长 : 3nm 进样体积 : µl 反压 : bar 分析物 :. 肾上腺素. 去甲肾上腺素 Accucore aq.6µm, mm x.mm 流动相 : mm 甲酸铵,pH3. 流速 :.6mL/min 柱温 : 3 C 检测波长 : 3nm 进样体积 : µl 分析物 :. 去甲肾上腺素 (.33 min). 肾上腺素 (.37 min).. 与反相模式的 aq 色谱柱相比, 两种分析物在 HILIC 中具有更好的保留和分离度 8 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南

31 类固醇 Accucore RP-MS.6µm, mm x.mm 流动相 : 水 : 乙腈 =: (v/v) 流速 :.6mL/min 柱温 : 4 C 检测波长 : nm 进样体积 : µl 分析物 :. 雌二醇. 雌酚酮 快速 小于 Accucore RP-MS.6µm, mm x.mm 流动相 : A 相 水 ; B 相 乙腈梯度 : 4 内 B 浓度从 % 升至 7% 流速 :.6mL/min 柱温 : C 检测波长 : 4nm 进样体积 : µl 分析物 :. 氢化可的松. 可的松 3. 皮质酮 4. α- 羟孕酮.7 α- 羟孕酮 6. 孕酮 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南 9

32 法医毒理学 睾酮 Accucore RP-MS.6µm, mm x.mm 流动相 : 水 : 乙腈 =6:4 (v/v) 流速 :.6mL/min 柱温 : 4 C 检测波长 : 4nm 进样体积 : µl 分析物 :.- 酮基睾酮.9- 去甲睾酮 ( 诺龙 ) 3. 表睾酮... 法医学 爆炸物 PFP Accucore PFP.6µm, mm x.mm Accucore C8.6µm, mm x.mm 流动相 : 水 : 甲醇 =6:4 (v/v) 流速 :.4mL/min 柱温 : 4 C 检测波长 : 4nm 进样体积 : µl 反压 : 6 bar 分析物 :.,3,- 三硝基苯. 硝基苯 3.,3- 二硝基苯 4.,4,6- 三硝基苯.,4- 二硝基苯 4 C PFP 键合相上的碳 - 氟键比 C8 键合相上的碳 - 氢键极性更强, 从而对这些含有硝基的极性取代芳香化合物有更强的保留和不同的选择性 3 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南

33 制药 酸性和中性药物 Accucore C8.6µm, mm x.mm 流动相 : A 相 水 +.% 磷酸 B 相 乙腈 +.% 磷酸 梯度 : Min % B 流速 :.4mL/min 柱温 : C 检测波长 : nm 进样体积 :.µl 分析物 :. 氢氯噻嗪. 泼尼松龙 3. 普伐他汀 4. 卡马西平. 双氯芬酸 6. 布洛芬 7. 孕酮 优异的分离度 齐多夫定 (USP) 3 3 Accucore C8.6µm, mm x.mm 流动相 : 水 : 甲醇 =8: (v/v) 流速 :.ml/min 柱温 : C 检测波长 : 6nm 进样体积 : µl 分析物 :. 齐多夫定 USP 标准 对称因子.3 <. %RSD t r. <. %RSD 峰面积.34 < Accucore C8 色谱柱在分析齐多夫定时表现优异 其表现超出了 USP 标准 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南 3

34 布洛芬 8 7 Accucore C8.6µm, mm x 4.6mm 流动相 : 磷酸水溶液,pH. : 乙腈 =66.3% :33.7% 6 流速 :.ml/min 柱温 : 3 C 4 检测波长 : 4nm 3 进样体积 : µl 反压 : 76 bar 分析物 :. 苯戊酮 (USP 等级 ). 布洛芬 (USP 等级 ) 在使用 USP 方法对布洛芬进行分析时, Accucore C8 色谱柱表现优异 非诺洛芬和吉非贝齐 (USP) 4 Accucore RP-MS.6µm, mm x.mm 流动相 : 乙腈 : 水 : 磷酸 =:49.6:.4 (v/v/v) 流速 :.4mL/min 柱温 : 3 C 检测波长 : 7nm 进样体积 : 3µL 分析物 :. 非诺洛芬. 吉非贝齐 USP 标准 对称因子.3. < RSD% 保留时间 < RSD% 峰面积.39. < 分离度 > 8 柱效 > 3 3 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南

35 赖诺普利 Accucore RP-MS.6 µm, mm x. mm 流动相 : A 相.6M 磷酸二氢钠, 用磷酸调 ph 为 3.7 B 相 流动相 A : 乙腈 =8: (v/v) 梯度 : 时间 (min) % B 流速 :.4 ml/min 柱温 : C 检测波长 : nm 进样体积 : µl 反压 : 9 bar 分析物 :. 杂质.- 氨基 -4- 苯基丁酸 3. 赖诺普利 4. 赖诺普利 R,S.S 异构体 分析物 : 赖诺普利 USP 标准 分离度, 4.7 >. 分离度,3.7 >. 分离度 4,3 4.7 >. 赖诺普利的峰面积 RSD%.74 < % Accucore RP-MS 色谱柱在分析赖诺普利时表现优异 其表现优于 USP 标准 生物制药 肽混合测试物 Accucore C8.6 µm, mm x. mm 流动相 : A 相 水 +.% 三氟乙酸 B 相 乙腈 +.% 三氟乙酸梯度 : 6 内 B 浓度从 % 升至 7% 流速 :. ml/min 柱温 : 4 C 检测波长 : nm 进样体积 : µl 分析物 :. 甘氨酰 -L- 酪氨酸 (MW=38.3). 缬氨酸 - 酪氨酸 - 缬氨酸 (MW=379.) 3. 蛋氨酸脑啡肽 (MW=73.7) 4. 亮氨酸脑啡肽 (MW=.6). 核糖核酸酶 A (MW=37) 6. 胰岛素 (MW=733.) Accucore C8 色谱柱可用于分析分子量最高达 37 的小肽段 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南 33

36 常规分析 酮类高通量分析 Accucore C8.6 µm, mm x.mm 流动相 : A 相 水 ; B 相 乙腈 梯度 : Min % B 流速 :. ml /min 柱温 : 4 C 检测波长 : 8 nm 进样体积 : µl 反压 : 3 bar 分析物 :.- 戊酮. 乙腈 3.- 庚酮 4. 苯丁酮. 苯己酮 6. 苯辛酮 7. 癸酮 全多孔 C8 µm, mm x 4.6 mm 流动相 : A 相 水 ; B 相 乙腈 梯度 : 时间 % B 流速 :. ml/min 柱温 : 4 C 检测波长 : 8 nm 进样体积 : µl 压力 : 47 bar 分析物 :.- 戊酮. 乙腈 3.- 庚酮 4. 苯丁酮. 苯己酮 6. 苯辛酮 7. 癸酮 Accucore HPLC 色谱柱的分离速度比 x 4.6mm, µm 的全多孔色谱柱快 6 倍 34 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南

37 适用于快速液相的 Thermo Scientific 产品 Thermo Scientific 是市场上独一无二的, 能够为色谱工作者提供三种实现快速 HPLC 分离色谱柱的供应商 全多孔.9 µm 和 Syncronis.7 µm 小颗粒优势 当与 UHPLC 系统配合使用时, 全多孔.9µm 和 Syncronis.7µm HPLC 色谱柱在一定的流速范围内能保证最佳的柱效 高柱效可提高分析通量, 改善分离度, 从而降低单次分析成本 Accucore 表面多孔增强核 技术 Accucore HPLC 色谱柱使用的 表面多孔增强核 技术, 与 µm 和 3µm 的色谱柱相比, 分离速度更快, 灵敏度更高, 分离能力更强 与亚 µm 填料相比, 有可以与之媲美的柱效, 但是反压大大下降 Accucore HPLC 色谱柱灵活用于各种 HPLC 和 UHPLC 系统 Hypercarb 高温 HPLC Hypercarb 是一种多孔石墨化碳填料, 可在高达 C 的温度下使用 因此, 它尤其适用于高温 HPLC 高温可以提升 HPLC 柱效, 降低反压并减少分析时间 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南 3

38 订购信息 Accucore HPLC 色谱柱 描述粒径柱长 (mm).mm 内径 3.mm 内径 4.6mm 内径 Accucore RP-MS Accucore C8 Accucore aq Accucore Phenyl- Hexyl Accucore PFP Accucore HILIC.6µm.6µm.6µm.6µm.6µm.6µm Accucore 保护柱 (4 个 / 包 ) 描述 粒径 柱长 (mm).mm 内径 3.mm 内径 4.6mm 内径 Accucore RP-MS.6µm Accucore C8.6µm Accucore aq.6µm Accucore Phenyl-.6µm Hexyl Accucore PFP.6µm Accucore HILIC.6µm UNIGUARD 直连式保护柱柱套 描述.mm 内径 3.mm 内径 4.6mm 内径 UNIGUARD 直连式保护柱柱套 标准替换组件 8-RT 8-RT 8-RT 36 Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南

39 Accucore 方法开发套装 Accucore 方法开发套装帮助您更加快速有效进行方法开发 Accucore 方法验证套装 验证 Accucore HPLC 色谱柱的重现性 包括 3 根 Accucore C8 色谱柱 描述 粒径 柱长 (mm).mm 内径 Accucore 方法.6µm V 验证套装 V V Accucore 方法开发套装 - 窄选择范围 提供三款选择性差别较小的 Accucore HPLC 色谱柱, 供方法开发中选择 包括 Accucore C8 色谱柱 RP-MS 色谱柱和 aq 色谱柱各 根 描述粒径柱长 (mm).mm 内径 Accucore 方法开发套装 - 窄选择范围.6µm 7X6-3-3VA 7X6-3-3VA 7X6-3-3VA Accucore 方法开发套装 - 宽选择性范围 提供三款选择性差别较大的 Accucore HPLC 色谱柱, 供方法开发中选择 包括 Accucore C8 色谱柱 Phenyl-Hexyl 色谱柱和 PFP 色谱柱各 根 描述粒径柱长 (mm).mm 内径 Accucore 方法开发套装 - 宽选择性范围.6µm 7X6-3-3VB 7X6-3-3VB 7X6-3-3VB Accucore 方法开发套装 - 用于极性化合物 提供三款专用于分析极性化合物的 Accucore HPLC 色谱柱, 用于方法开发 包括 Accucore aq 色谱柱 PFP 色谱柱和 HILIC 色谱柱各 根 描述粒径柱长 (mm).mm 内径 Accucore 方法开发套装 - 用于极性化合物.6µm 7X6-3-3VC 7X6-3-3VC 7X6-3-3VC Thermo Scientific Accucore HPLC 色谱柱 应用指南 37

40 资源供色谱工作人员使用 Thermo Scientific 色谱柱和耗材产品目录 这本全面的产品目录提供了多达 4 页的经实践证明的色谱工具及产品选择指南 可在线获取, 配有强大的搜索工具, 并针对 ipad 应用进行了优化 请访问 了解更多信息 色谱资源中心 我们基于网络的资源中心可为您提供技术支持 应用 技术指导以及文献, 以帮助您改善色谱分离 请访问 了解更多信息 更多信息, 请访问 : Thermo Fisher Scientific Inc. 保留所有权利 ipad 属于 Apple Inc. 在美国和其它国家的注册商标 Agilent 属于 Agilent Technologies Inc. 的一个注册商标 所有其他商标均为 Thermo Fisher Scientific Inc. 及其子公司的财产 规格 条款和价格可能随时更改 并非在所有国家 ( 地区 ) 都能获得全部的产品 有关详细信息, 请联系您本地的销售代表 赛默飞世尔科技 ( 中国 ) 有限公司 BRCCSACCUCORE ZH 7 上海上海浦东新区新金桥路 7 号 7 号楼邮编 :6 电话 : 传真 : 北京北京安定门大街 8 号雍和大厦西楼 7 层 7-7 室邮编 : 7 电话 : 传真 : 广州广州东风中路 4-4 号时代地产中心 3-34 邮编 : 3 电话 : 传真 : ( 英文 ) 中文 )

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