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1 生物信息学 胡德华 医药信息系 本课程的安排生物信息学概述生物信息学资源及其检索

2 翻译题 : NCBI Map view UCSC Ensembl SCOP KEGG ( Reactome ( DIP(

3 一 定义 生物信息学概述 生物信息学是在生命科学的研究中, 以计算机为工具对生物信息进行储存 检索和分析的科学检索和分析的科学 美国人类基因组计划实施五年后的总结报告中, 对生物信息学作了以下定义 : 生物信息学是一门交叉科学, 它包含了生物信息的获取 处理处理 存储存储 分发分发 分析和解释等在分析和解释等在内的所有方面, 它综合运用数学 计算机科学和生物学的各种工具, 来阐明和理解大量数据所包含的生物学意义

4 二 生物信息学主要研究两种信息载体 DNA 分子 蛋白质分子

5 生物分子至少携带着三种信息 遗传信息 与功能相关的结构信息 进化信息

6 1. 遗传信息 遗传信息的载体主要是 DNA 控制生物体性状的基因是一系列 DNA 片段 生物体生长发育的本质就是遗传信息的传递和表达

7 DNA 通过自我复制, 在生物体的繁衍过 程中传递遗传信息 基因通过转录和翻译, 使遗传信息在生物个体中得以表达, 并使后代表现出与亲代相似的生物性状 基因控制着蛋白质的合成 DNA 转录 RNA 翻译 蛋白质

8 DNA 基因的 DNA 序列 对遗应传关密系码 mrna 前体 RNA 蛋白质序列 多肽链

9 2. 蛋白质的结构信息 蛋白质功能功能取决于蛋白质的空间取决于蛋白质的空间结构 蛋白质结构决定于蛋白质的序列 ( 这是目前基本共认的假设 ), 蛋白质结构的信息隐含在蛋白质序列之中

10 通过比较相似的蛋白质序列, 如肌红蛋白和血红蛋白, 可以发现由于基因复制而产生的分子进化证据 通过比较来自于不同种属的同源蛋白质, 即直系同源蛋白质, 可以分析蛋白质甚至种属之间的系统发生关系, 推测它们共同的祖先蛋白质 3. DNA 分子和蛋白质分子都含有进化信息

11 生物分子数据类型 DNA 序列数据 最基本 生物分子信息 蛋白质序列数据 生物分子结构数据 生物分子功能数据 直观 复杂

12 第一部 遗传密码 第二部 遗传密码? DNA 蛋白质 蛋白质 蛋白质 核酸序列 氨基酸序列 结构结构 功能功能 最基本的 生物信息 生命体系千姿百态的变化 维持生命活动的机器 生物分子数据及其关系

13 三 产生的背景 生物信息学的产生最早可以追溯至 20 世纪 50 年代末期计算机在生物学中的应用 随着计算机技术的快速发展, 使得科学和工程技术的研究手段在过去的实验方法实验方法和理论方法理论方法的基础上的基础上 有了第三种研究手段, 即科学计算方法科学计算方法 科学计算方法是借助于已有实验数据, 通过分析 挖掘其内在的规律性, 以达到对研究对象的认识 通过科学计算来研究和发现其内在的规律的成本远低于实验成本 生物信息学的产生是现代科学技术在生物分子学中应用的必然结果

14 四 生物信息学的发展 生物信息学的发展过程与基因组学研究密切相关, 大致可分为三个阶段, 前基因组时代 基因组时代 后基因组时代

15 (1) 前基因组时代 时期 : 介于 20 世纪 50 年代末至 80 年代末 ( 标志是 HGP 启动 ) 这一时期也是早期生物信息学研究方法逐步形成阶段 生物信息学的早期研究仅限于利用数学模型 统计学方法和计算机处理宏观生物分子数据, 作用的领域主要是生物遗传和进化信息处理, 如基因签名 DNA 克隆 DNA 分子序列比对以解决基因同源性问题 分子生物数据存储和数据库建立等

16 随着 DNA 分子提取和 DNA 分子测序技术的快速发展以及分子生物数据量的不断扩大 1985 年 Mullis K 提出聚合酶链式反应 (PCR) 的 DNA 提取技术 20 世纪 80 年代初 Sanger F 提出链终止法 (chain termination Method) 的 DNA 测序技术 生物信息学逐步形成了自身的一些基本理论 方法方法 模型和软件体系

17 主要表现在 : PAM 打分矩阵模型 Needleman Wunsch 全局序列比对的动态规划算法 Smith Waterman 局部比对算法 建立在序列比对基础之上的 BLAST 和 FASTA 进行数据库搜索方法 发展了生物序列信息分析方法 : 生物统计方法 基因组中 CC 含量的统计分析 基因替换与突变的替换模式研究中的 Jukes Cantor 模型 Kimura 的双参数模型 进行基因数据分析方面的研究 基于距离或特征系统发生分析方法以进行基因组的分子进化等

18 所起的作用 为高度自动化大规模测序 基因数据的提取 序列片断的拼接序列片断的拼接 新基因的发现提供了技术支撑, 并为 HGP 顺利实施奠定了基础

19 (2) 基因组时代 时期 : 介于 20 世纪 80 年代末 ( 标志是 HGP 启动 ) 至 2003 年的 HGP 顺利完成 这是生物信息学真正兴起并形成了一门多学科的交叉 边缘学科边缘学科 生物信息学在 HGP 实施过程中起到了非常重要的作用, 从高度自动化的大规模测序 DNA 分子数据的获取与分析处理 序列片断的拼接 新基因的发现新基因的发现 基因组结构与基因组结构与功能预测到基因组进化等研究的各个环节都与生物信息学密不可分, 为 HGP 的顺利完成奠定了技术支撑

20 发展 : 前基因组时代的一些研究方法得到了继续发展和完善 还发展了诸如网络模型 (Network Model) 方法和基于隐马尔可夫模型 (Hidden Markov Model,HMM) 的机器学习方法 基因组间关联程度分析及结构分析预测方面的研究

21 (3) 后基因组时代 时期 : 自 2003 年 HGP 完成开始 随着 HGP 的胜利完成及各种 DNA 分子数据库的建立,DNA 分子数据提取技术得到了较快的发展, 涌现出海量的生物分子数据 充分利用这些数据, 通过分析, 挖掘这些数据的内涵, 获得对人类有用的遗传信息 进化信息及功能相关的结构信息, 造福于人类社会, 这是后基因组时代的核心内容之一, 同时也是生物信息学的全部内涵

22 生物信息学产生和发展的推动因素主要有以下三个方面 : 人类社会发展的需要 ; 人类基因组计划的顺利实施 ; 信息技术在生物学中的大规模应用

23 生物信息学研究现状 1. 功能 ( 或结构 ) 基因组信息学 功能 ( 或结构 ) 基因组信息学是在全基因上对基因及其表达产物进行全面分析, 其目的在于探索基因的时空表达差异, 包括基因功能发现 基因表达分析及突变检测基因表达分析及突变检测

24 目前基因组功能研究的有基因表达分析系统 (serial analysis of gene expression, SAGE) cdna 微阵列 (cdna microarray) DNA 芯片 (DNA chip) 等技术, 使用的方法有聚类, 分类分析与模式识别 几何分形等多元数据统计方法及代数的结构分析的方法等 功能表达谱网络分析

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27 2. 蛋白质组信息学 蛋白质组信息学重点研究蛋白质的空间结构, 主要有两类研究方法 : 其一是同源类建模方法, 包括比较建模 折叠识别 (Fold recognition) 网络模型方法和基于隐马尔可夫模型的机器学习方法等 ; 其二是 从头预测 (Ab initio) 方法, 它先利用相似性聚类 (Clustering) 方法建立蛋白质的空间外形分类数据库, 再通过蛋白质天然构成对应于热力学上最稳定 自由能最低的构像预测蛋白质的空间结构, 研究方法如 Monte Carlo 模拟退火模拟退火 遗传算法等

28 蛋白质组信息学的目的就是利用这些方法研究蛋白质的空间结构以揭示蛋白质的结构与功能的关系 总结蛋白质结构的构成规律 预测蛋白质肽链折叠和蛋白质的结构等

29 3. 比较基因组信息学 比较基因组信息学也称为系统生物学 (System Biology) 比较基因组信息学主要通过模式生物基因组之间的比较与鉴别, 为研究和理解生物的进化 人类遗传病候选基因的分离以及新的基因功能预测提供重要依据 它的主要使用方法有分类方法和比对技术 ( 序列比较 结构部件的比较等 )

30 人类基因组与其它生物基因组比较

31 例 : 人与鼠染色体的差别

32 4. 药物基因组信息学 尽管人类的基因比较基因组信息学 99.99% 是相同的, 但在药物的作用机制 药物代谢转化药物代谢转化 药物毒副作用等方面都存在着个体差异 药物基因组学以提高药物疗效与安全性为目的, 研究影响药物作用 吸收吸收 转运转运 代谢代谢 清除等过程中基因差异, 通过疾病相关基因 药物作用靶点 药物代谢酶谱药物代谢酶谱 药物转运蛋白质多肽性等药物转运蛋白质多肽性等研究, 进行新的医药开发 药物基因组信息学通过蛋白质结构与功能的研究及相互间构成的代谢网络和调控网络的研究, 以达到对生命过程的理解

33 在后基因时代, 生物信息学的主要研究内容转向基因组的结构分析 代谢网络分析代谢网络分析 基因表达谱的网络分析 蛋白质组数据分析处理 蛋白质结构与功能分析以及药物靶点筛选分析等, 即系统研究基因组 蛋白质组的功能 以高通量以高通量 大规模试验方法及计算分析为基本特征

34 生物信息数据库及其检索一 概述 1 定义 生物学数据库是指在计算机存储设备上合理存放的相互关联的生物信息集合体, 是生物信息学的重要组成部分, 是非常重要的生物信息学资源

35 2 类型 生物学数据库种类繁多 归纳起来, 大体可以分为 4 个大类, 即基因组数据库基因组数据库 核酸和蛋白质一级结构数据库一级结构数据库 生物大分子 ( 主要是蛋白质 ) 三维空间结构数据库, 以及由上述 3 类数据库和文献资料为基础构建的二次数据库二次数据库 基因组数据库来自基因组作图, 序列数据库来自序列测定, 结构数据库来自 X 射线衍射和核磁共振等结构测定 这些数据库是分子生物学的基本数据资源, 通常称为基本数据库 初始数据库, 也称一次数据库一次数据库

36 根据生命科学不同研究领域的实际需要, 对基因组图谱 核酸和蛋白质序列核酸和蛋白质序列 蛋白质结构以及文献等数据蛋白质结构以及文献等数据进行分析 整理整理 归纳归纳 注释, 构建具有特殊生物学意义和专门用途的二次数据库二次数据库 一般说来, 一次数据库的数据量大, 更新速度快, 用户面广, 通常需要高性能的计算机服务器 大容量的磁盘空间和专门的数据库管理系统支撑 ; 二次数据库的容量则小得多, 更新速度也不像一次数据库那样快, 也可以不用大型商业数据库软件支持, 这类针对不同问题开发的二次数据库的最大特点是使用方便, 特别适用于计算机使用经验不太丰富的生物学家 序列数据库是分子生物信息数据库中最基本的数据库, 包括核酸和蛋白质两类, 以核苷酸碱基顺序或氨基酸残基顺序为基本内容, 并附有注释信息

37 染色体染色体染色体染色体基因组图谱基因组图谱基因组图谱基因组图谱基因组基因组基因组基因组数据库数据库数据库数据库核酸核酸核酸核酸 DNA 序列序列序列序列核酸序列核酸序列核酸序列核酸序列数据库数据库数据库数据库蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质序列蛋白质序列蛋白质序列蛋白质序列蛋白质序蛋白质序蛋白质序蛋白质序列数据库列数据库列数据库列数据库蛋白质结构蛋白质结构蛋白质结构蛋白质结构蛋白质结蛋白质结蛋白质结蛋白质结构数据库构数据库构数据库构数据库基因组作图基因组作图基因组作图基因组作图序列测定序列测定序列测定序列测定结构测定结构测定结构测定结构测定生物信息学生物信息学生物信息学生物信息学数据库工具数据库工具数据库工具数据库工具生物信息学生物信息学生物信息学生物信息学数据库工具数据库工具数据库工具数据库工具二次数据库复合数据库 Fig 2.1 生物学数据库

38 3 数据来源 一些主要的生物学数据库, 如 GenBank EMBL DDBJ PIR SWISS-PROT 等, 在建库的初期主要靠人工搜索科学期刊中核酸和蛋白质序列数据, 然后录入到数据库中 这种收集方式不仅费时费力, 而且不能直接用于计算机分析, 显然不能满足科研工作的需要 从 1988 年开始, 序列数据库与经常刊登序列数据的科学期刊合作, 要求作者在论文发表之前必须将序列数据发送到某个数据库中, 并从后者获得一个序列存取号 (Accession Number), 该存取号可随论文发表, 代表该序列数据 从此作者的直接发送成了生物信息学数据库的一个主要来源

39 从 1998 年开始, 人类基因组计划重点已从基因作图转向大规模基因组测序, 一些专门的基因组测序中心, 如 Sanger 中心和一些专门的商业性测序中心相继成立, 一些大的制药公司为了争夺新药开发的制高点, 不惜斥巨资投入人类基因组和病原生物基因组的测序 这些测序中心和制药公司测序产生了大量的核酸和蛋白质序列数据, 它们向数据库成批地发数据, 成了数据库数据的另一个主要来源 数据库之间的数据交换也是生物信息学数据库的一个重要来源

40 4 序列数据提交 1.The Web-based submission systems include: BankIt at the NCBI. WebIn at EBI Sakura ( cherry blossoms ) at DDBJ 2.Some 75 80% of individual submissions to NCBI are done via the Web.

41 GenBank Address GenBank, National Center for Biotechnology Information, National Library of Medicine, National Institutes of Health, Building 38A, Room 8N805, Bethesda MD Telephone ;Fax Submissions EST/GSS/STS Updates Information World Wide Web Home page Submissions BankIt Sequin

42 BankIt

43 Sequin( 实际操作 )

44 EMBL Address EMBL Outstation, EBI, Wellcome Trust Genome Campus, Hinxton Cambridge, CB10 1SD, United Kingdom Voice Fax Submissions Updates Information World Wide Web Home page Submissions WebIn

45 DDBJ Address DDBJ, 1111 Yata, Mishima, Shiznoka 411, Japan Fax Submissions Updates Information World Wide Web Home page Submissions

46 There are three major public DNA databases EMBL Housed at EBI European Bioinformatics Institute GenBank Housed at NCBI National Center for Biotechnology Information DDBJ Housed in Japan Page 16

47 5. 生物信息学数据库的查找 查专业杂志 : 从 1994 年开始, 核酸研究 (Nucleic Acids Research) 每年第一期是生物信息学数据库专集 ; 详细介绍最新版本的各种数据库 从 2000 年开始, 出版 核酸研究 的牛津大学出版社设立了一个数据库目录 (NAR Database Categories List ) 共 1176 个数据库 查询著名的生物信息学中心, 如 NCBI EBI

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60 二 GenBank 1. 特点 a database consisting of most known public DNA and protein sequences In addition to storing these sequences, GenBank contains bibliographic and biological annotation. Data from GenBank are available free of charge from the National Center for Biotechnology Information (NCBI)

61 2. 序列数据总量 每 30 个月翻一番 收录了 9200 万条序列,950 亿个碱基 2008 年, 新增 1600 多万条序列

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63 3.GenBank 中的物种数 Over named species are represented in GenBank and new species are being added at the rate of over 2200 per month. About 12% of the sequences in GenBank are of human origin and 9% of all sequences are human ESTs. The top species in GenBank in terms of number of bases are Homo sapiens (13.1 billion bases), Mus musculus (8.4 billion), Rattus norvegicus (6.0 billion), Bos taurus (5.2 billion), Zea mays (4.6 billion), Sus scrofa (3.1 billion), Danio rerio (2.9 billion), Oryza sativa (1.5 billion), Strongylocentrotus purpuratus (1.4 billion), Nicotania tabacum (1.1 billion) and Xenopus tropicalis (1.0 billion).

64 数据来源 :

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66 - the BCT division is now comprised of 24 files (+2) - the CON division is now comprised of 82 files (+74) - the EST division is now comprised of 635 files (+26) - the GSS division is now comprised of 264 files (+3) - the ENV division is now comprised of 6 files (+1) - the HTG division is now comprised of 98 files (+2) - the INV division is now comprised of 11 files (+1) - the PAT division is now comprised of 30 files (+1) - the PLN division is now comprised of 26 files (+1) - the PRI division is now comprised of 34 files (+1) - the ROD division is now comprised of 26 files (+1) - the SYN division is now comprised of 5 files (+4) - the VRL division is now comprised of 8 files (+1) - the VRT division is now comprised of 14 files (+1)

67 4. GenBank 数据类型

68 其它专门数据库 Genomic DNA Databases cdna Databases Corresponding to Expressed Genes Protein Databases Expressed Sequence Tags (ESTS) ESTs and UniGene Sequence-Tagged Sites (STSs) Genome Survey Sequences (GSSs) High-Throughput Genomic Sequence (HTGS)

69 三 生物信息学数据库的检索 Entrez SRS ExPASy Sequence Retrieval System

70 1 NCBI National Center for Biotechnology Information (NCBI) Established in 1988 as a national resource for molecular biology information,

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72 NCBI's mission is to develop new information technologies to aid in the understanding of fundamental molecular and genetic processes that control health and disease.

73 NCBI creates public databases, conducts research in computational biology, develops software tools for analyzing genome data, disseminates biomedical information - all for the better understanding of molecular processes affecting human health and disease.

74 All databases(entrez) integrates the scientific literature; DNA and protein sequence databases; 3D protein structure data; population study data sets; assemblies of complete genomes

75 2. Entrez Entrez is a search and retrieval system that integrates NCBI databases

76 From the NCBI home page, type rbp4 and hit Go

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80 By applying limits, there are now just five entries

81 Note that links to many other RBP4 database entries are available

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92 NCBI s important RefSeq project: best representative sequences RefSeq (accessible via the main page of NCBI) provides an expertly curated accession number that corresponds to the most stable, agreed-upon reference version of a sequence. RefSeq identifiers include the following formats: Complete genome NC_###### Complete chromosome NC_###### Genomic contig NT_###### mrna (DNA format) NM_###### e.g. NM_ Protein NP_###### e.g. NP_006735

93 NCBI s RefSeq project: accession for genomic, mrna, protein sequences Accession Molecule Method Note AC_ Genomic Mixed Alternate complete genomic AP_ Protein Mixed Protein products; alternate NC_ Genomic Mixed Complete genomic molecules NG_ Genomic Mixed Incomplete genomic regions NM_ mrna Mixed Transcript products; mrna NM_ mrna Mixed Transcript products; 9-digit NP_ Protein Mixed Protein products; NP_ ProteinCuration Protein products; 9-digit NR_ RNA Mixed Non-coding transcripts NT_ Genomic Automated Genomic assemblies NW_ Genomic Automated Genomic assemblies NZ_ABCD Genomic Automated Whole genome shotgun data XM_ mrna Automated Transcript products XP_ Protein Automated Protein products XR_ RNA Automated Transcript products YP_ Protein Auto. & Curated Protein products ZP_ Protein Automated Protein products

94 2.EBI 与 SRS the European Bioinformatics Institute established in

95 EBI Mission To provide freely available data and bioinformatics services to all facets of the scientific community in ways that promote scientific progress To contribute to the advancement of biology through basic investigator-driven research in bioinformatics To provide advanced bioinformatics training to scientists at all levels, from PhD students to independent investigators To help disseminate cutting-edge technologies to industry

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97 SRS SRS(Sequence Retrieval System, 序列检索系统 ) 是由欧洲分子生物学实验室研制开发的, 现由 Lion Bioscience 公司继续开发, 而成为一个商业软件, 不过科研单位只要与它签订协议即可免费获得该软件的使用权 SRS 是一个开放式的, 即 SRS 可以根据需要安装不同的数据库 目前共有 655 个数据库安将在世界各地的 SRS 服务器上

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107 3.ExPASy Sequence Retrieval System

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110 四 如何获取序列数据 :HIV-1 pol There are many possible approaches. Begin at the main page of NCBI, and type an Entrez query: hiv-1 pol

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112 Searching for HIV-1 pol: Following the genome link yields a manageable five results

113 For the Entrez query: hiv-1 pol there are about 80,000 nucleotide or protein records (and >200,000 records for a search for hiv-1 ),but these can easily be reduced in two easy steps: --specify the organism, e.g.hiv-1[organism] --limit the output to RefSeq!

114 over 200,000 nucleotide entries for HIV-1 only 1 RefSeq

115 五 以丙型肝炎研究为例, 探讨生物信息学在科学研究中的应用 丙型肝炎是全球范围内影响人民生命健康的传染性肝脏疾病 由于其发病隐匿 病原体是 RNA 病毒 在病原体检测及临床确诊方面均较乙型肝炎难, 导致丙型肝炎的早期诊断 病程监测以及疗效观察等方面尚存在诸多未解问题 当前对乙型肝炎病毒感染的检测, 除了血清病毒抗原 DNA 检测外, 对病变肝组织采用免疫组织化学技术定位病毒抗原也在临床广为应用 而丙型肝炎病毒 (HCV) 为 RNA 病毒, 其分子本身就不稳定 较之 DNA 病毒检测存在难度 同时在检测技术上也较 DNA 病毒烦琐 而血清抗体滴度检测因不同的病程发展阶段 体内病毒含量以及检测试剂灵敏度等因素, 致使检测结果不稳定 国内外肝病

116 概括起来存在如下问题 : 1 肝脏组织学检测结果与血清学检测结果符合率不高 ; 2 不同试剂公司生产抗体的阳性检出率不一致 目前商品化的抗 HCV 抗体有针对病毒非结构蛋白 (NS3 NS4 或 NS5), 也有针对结构蛋白 (E1,E2,Core), 临床检验与研究中如何选择 HCV 抗体是广大医务工作者面临的问题 ; 3HCV 抗原的阳性定位部位不统一, 有些为肝细胞浆定位, 也有表现为肝细胞核定位 鉴于以上所述 能否将肝组织病毒免疫组织化学阳性检测结果作为诊断丙型肝炎的依据一直存在争议 对这种 实践中产生的课题 开展研究有时比盲目追逐 热点 随波逐流更有现实意义 在此可以借助生物信息学资源为有关 HCV 检测深层次研究提供一些有价值的参考

117 利用 Entrez 了解丙型肝炎研究全景

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119 HCV 病毒全基因组信息 HCVpg2 HCVpg1

120 列出两种 HCV 病毒编码蛋白的详情, 如名称 翻译起止点位置翻译起止点位置 蛋白分子长度蛋白分子长度 数据库链接等

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125 针对 HCV 病毒的以上数据库查询为研究人员带来如下启示 : HCV 编码产物 HCV gpl 的非结构蛋白 NS3 区为保守区, 与多种人类解旋酶具有同源性 ; 其余各编码区未检测到与人类同源性 ; 而解旋酶在细胞核参与核酸复制与 DNA 修复 故针对 HCV NS3 抗原的检测有可能与人类解旋酶起交叉反应 ; 宿主免疫系统针对 NS3 蛋白产生免疫反应的同时, 有可能破坏自身的肝细胞结构 对 HCV 病毒的上述发现提示 : 在丙型肝炎疫苗设计以及临床检验试剂选择中应当避开选择针对 HCVgpl 的 NS3 序列

126 书名 : 生物信息学与功能基因组学 本 课教学参 作者 :( 美 ) 乔纳森.佩夫斯纳 译者 : 孙之荣出版社 : 化学工业出版社出版日期 :2006 年 6 月版次 :1 ISBN: 页数 :706 开本 :16 开包装 : 平装原价 : 95.0 考 书

127 书名 : 生物信息学 ( 中文版 ) 作者 :( 美国 ) 芒特著 // 钟扬出版社 : 高等教育出版社出版日期 : ISBN: 原价 : 56.0

128 书名 : 生物信息学 : 序列与基因组分析 -( 第二版 )( 含光盘 ) 作者 : 曾志伟出版社 : 科学出版社出版日期 : ISBN: 原价 : 75.0

129 书名 : 生物信息学概论 ( 北京大学生命科学译丛 )1 作者 : T K Attwood & D J Parry-Smith 罗静初出版社 : 北京大学出版社出版日期 : ISBN: 原价 : 16.0 蔚蓝价 : 14.4

130 书名 : 生物信息学 (21 世纪高等院校教材生物科学系列 ) : 张阳德出版社 : 科学出版社出版日期 : ISBN: 原价 : 35.0 蔚蓝价 : 32.9

131 书名 : 生物信息学 - - 基因和蛋白质分析的实用指南作者 : AndreasD.Baxevanis/B.F.FrancisOuellette 出版社 : 清华大学出版社出版日期 : ISBN: 原价 : 39.0

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