(2004) 王灏等 (2009) 王凯华等 (2011) 利用 SSR ISSR RAPD 等分子标记对甘蓝型油菜的遗传多样性进行研究, 揭示了不同甘蓝型油菜材料的遗传距离及其亲缘关系, 但他们都没有根据遗传多样性参数评价其遗传多样性水平仅厦国银等 (2009) 根据遗传多样性参数利用

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研究报告 A Letter 31 份甘蓝型油菜品种的遗传多样性研究孙桂林 1, 彭少丹 2, 汪骞 3, 陈升位 1, 朱海平 1. 云南农业大学农学与生物技术学院, 昆明, 650201 2. 云南农业大学农科专业实验教学中心, 昆明, 650201 3. 云南省农业科学院园艺研究所, 昆明, 650205 通讯作者 : linliangbin-63@163.

卷, 第 32 篇收稿日期 :2012 年 05 月 24 日接受日期 :2012 年 06 月 05 日发表日期 :2012 年 06 月 25 日作者 doi: 10.

1 研究报告 A Letter 31 份甘蓝型油菜品种的遗传多样性研究孙桂林 1, 彭少丹 2, 汪骞 3, 陈升位 1, 朱海平 1. 云南农业大学农学与生物技术学院, 昆明, 云南农业大学农科专业实验教学中心, 昆明, 云南省农业科学院园艺研究所, 昆明, 通讯作者 : linliangbin-63@163.com 分子植物育种, 2012 年, 第 10 卷, 第 32 篇收稿日期 :2012 年 05 月 24 日接受日期 :2012 年 06 月 05 日发表日期 :2012 年 06 月 25 日作者 doi: /mpb.cn , 林良斌这是一篇采用 Creative Commons Attribution License 进行授权的开放取阅论文只要对本原作有恰当的引用, 版权所有人允许并同意第三方无条件的使用与传播引用格式 ( 中文 ): 孙桂林等, 2012, 31 份甘蓝型油菜品种的遗传多样性研究, 分子植物育种 (online) Vol.10 No.32 pp (doi: /mpb.cn ) 引用格式 ( 英文 ): Sun et al., 2012, Genetic Diversity of 31 Rapseed Varieties (Brassic napus) Revealed by SSR and ISSR, Fenzi Zhiwu Yuzhong (online) (Molecular Plant Breeding) Vol.10 No.32 pp (doi: /mpb.cn ) 摘要利用 SSR 和 ISSR 分子标记技术对云南湖北湖南四川及浙江的 31 份甘蓝型油菜品种的遗传多样性进行研究, 结果表明 31 份甘蓝型油菜品种的遗传多样性水平较高,SSR 分析的平均期望杂合度为平均 Shannon 多样性指数为多态位点百分率为 63.87%,ISSR 分析的平均期望杂合度为平均 Shannon 多样性指数为多态位点百分率为 64.29%, 说明在这些甘蓝型油菜品种中该两种遗传组成具有相同水平的遗传多态性由 SSR 标记和 ISSR 标记共同聚类分析表明, 在遗传相似系数为 0.64 时,31 份甘蓝型油菜品种被分为四个类群, 同一地区的品种一般聚为一类, 但也有个别例外关键词甘蓝型油菜 ; ISSR; SSR; 遗传多样性 Genetic Diversity of 31 Rapseed Varieties (Brassic napus) Revealed by SSR and ISSR Sun Guilin 1, Peng Shaodan 2, Wang Qian 3, Chen Shengwei 1, Zhu Haiping 1, Lin Liangbin 1 1. College of Agronomy and Biotechnology, Yunnan Agricultural University, Kunming, Experimental Teaching Center for Agricultural Professional Course, Yunnan Agricultural University, Kunming, Horticultural Institute, Yunnan Academy of Agricultural Science, Kunming, Corresponding author, linliangbin-63@163.com; Authors Abstract The genetic diversity of 31 Brassic napus varieties collected from Yunnan, Hubei, Hunan, Sichuan and Zhejiang were studied by the DNA markers of simple sequence repeats (SSR) and Inter-Simple Sequence Repeats (ISSR). The results exhibited that 31 Brassic napus varieties shared high level of genetic diversity. The SSR markers generated of average Nei's genetic diversity (He), Shannon diversity index (I), and 63.87% percentage of polymorphic loci (PPL), while ISSR markers yielded of average genetic diversity, of average Shannon diversity index, 64.29% of average percentage of polymorphic loci, that indicated both of the genetic components should share the same levels of the genetic diversity among the tested germplasms. Clustering analysis based on the data of SSR and ISSR presented that 31 Brassic napus varieties could be divided into four groups at 0.64 of the threshold of the genetic similarity coefficient and some varieties came from the same region could be grouped together in general, except few varieties in this research. Keywords Brassic napus; SSR; ISSR; genetic diversity 研究背景目前我国种植的油菜主要是甘蓝型油菜但我国最先种植的甘蓝型油菜是从日本引进的胜利油菜, 而后从欧洲引进一些甘蓝型油菜品种, 其遗传基础是比较狭窄的我国地大物博, 生态气候多种多样, 经过不同育种单位的油菜育种家们不断 1 地对甘蓝型油菜进行品种改良和引种, 已培育出上千万份适应不同生态气候的高产优质多抗的油菜新品种, 使我国甘蓝型油菜种质资源在不断扩大, 已成为一个巨大的种质资源库为此, 对甘蓝型油菜的遗传多样性及遗传距离进行分析是十分必要的马朝芝等 (2003a; 2003b) 周国岭等

2 (2004) 王灏等 (2009) 王凯华等 (2011) 利用 SSR ISSR RAPD 等分子标记对甘蓝型油菜的遗传多样性进行研究, 揭示了不同甘蓝型油菜材料的遗传距离及其亲缘关系, 但他们都没有根据遗传多样性参数评价其遗传多样性水平仅厦国银等 (2009) 根据遗传多样性参数利用 RAPD 标记评价了云南野生油菜的遗传多样性水平本文作者利用 SSR 和 ISSR 标记对甘蓝型油菜的遗传多样性进行研究, 从而根据遗传多样性参数揭示了我国蓝型油菜的遗传多样性水平及其原因, 为我国甘蓝型油菜的种质资源利用与品种改良提供了依据 1 结果与分析 1.1 甘蓝型油菜的遗传多样性的 SSR 和 ISSR 分析从 40 对 SSR 引物中筛选获得 16 对多态性 SSR 引物 ( 表 1), 每个引物扩增的 DNA 条带数为 1~11 条, 多态性位点数约为 1~8 个, 占所选用引物的 40% 用这 16 对多态性 SSR 引物对 31 份参试材料 DNA 样品进行 PCR 扩增, 结果 ( 图 1) 共检测到 146 个等位位点, 其中多态性位点 119 个, 多态性比率为 81.5%, 每对引物约 4~10 个多态性位点, 平均为 7.4 个根据 146 个标记位点的信息., 采用 POPGENE32 软件分析, 结果表明 ( 表 2) 31 份甘蓝型油菜的平均有效等位基因数杂合度 Shannon 指数分别为 ,0.2563, , 说明它们遗传多样性水平较高从 40 条 ISSR 引物中筛选到 12 条多态性 ISSR 引物 ( 表 3), 每个引物扩增的 DNA 条带数为 2~10 条, 多态性位点数约 1~6 个, 占所选用引物的 30% 用这 12 条多态性 ISSR 引物对 31 份参试材料 DNA 样品进行 PCR 扩增, 结果 ( 图 2) 表明共检测到 77 个 ISSR 标记位点, 其中多态性位点 42 个, 多态率达 54.54%, 每条引物扩增的多态性位点数约 1~6 个, 平均为 3.5 个根据 77 个标记位点的信息, 采用 POPGENE32 软件分析, 结果表明 ( 表 2) 31 份甘蓝型油菜的平均有效等位基因数杂合度 Shannon 指数分别为 ,0.2672, , 同样说明它们遗传多样性水平较高 1.2 甘蓝型油菜品种间的遗传距离利用 NTSYSpc2.10 软件分析甘蓝型油菜品种间的遗传距离 SSR 揭示品种间遗传相似系数介于表 1 SSR 引物的扩增多态性 Table 1 Polymorphism amplified by the SSR primers used in the experiment 引物 Primer 总带数 Total bands 多态性条带数 Polymorphic bands 多态率 (%) Polymorphic rate (%) 引物 Primer 总带数 Total bands 多态性条带数 Polymorphic bands CB CB PMR CB BRMS CB BrGMS NG14-G CN CN CN CB CN BRMS CB CB 多态率 (%) Polymorphic rate (%) 图 1 引物 CB10028 的扩增电泳图注 : 1-31 为品种, 同表 4; M 为 DL2000 marker Figure 1 Electrophoretic banding pattern amplified by SSR primer CB10028 Note: 1-31 indicates the No. of varieties same as number listed table 4, M: DL 2000 marker 1228

3 表 2 31 份甘蓝型油菜的遗传多样性分析 Table 2 Genetic diversity of 31 varieties of Brassic napus analyzing by SSR and ISSR markers 标记 Marker Number 有效等位基因数 Ne 杂合度 H Shannon 指数 I 多态位点 Polymorphic loci SSR Ⅰ ISSR Ⅱ 多态位点率 (%) The percentage of polymorphic loci (%) 表 3 所用 ISSR 引物的多态性扩增 Table 3 Polymorphism amplified by the ISSR primers used in the experiment 引物 Primer 总带数 Total bands 多态性条带数 Polymorphic bands 多态率 (%) Polymorphic rate (%) 引物 Primer 总带数 Total bands 多态性条带数 Polymorphic bands Pr Pr Pr Pr 多态率 (%) Polymorphic rate (%) 图 2 甘蓝型油菜品种的 ISSR 引物 807 扩增注 : 1-31 为品种, 同表 4; M 为 DL2000 marker Figure 2 Electrophoretic banding pattern amplified by ISSR primer 807 Note: 1-31 Indicates the No. of varieties same as number listed table 4, M: DL 2000 marker ~ 之间, 其中 31 号和 20 号的遗传 1.3 UMPGA 聚类分析相似系数最小, 为 , 即它们的亲缘关系最根据 SSR ISSR 揭示的 31 份甘蓝型油菜品种间远, 而 16 和 17 号间遗传相似系数最大, 为 , 遗传相似系数, 利用 NTSYSpc 2.10 软件构建品种间说明湘杂油 748 与湘杂油 613 很可能具有共同的杂 UPGMA 聚类图 ( 图 3), 从图 3 可以看出, 在遗传相似交亲本或杂交亲本的亲缘关系很近而 ISSR 揭示品系数为 0.64 时,31 份甘蓝型油菜, 被分成 4 个大类群 : 种间的遗传相似系数介于 ~ 之第 Ⅰ 类包括号品种 ; 第 Ⅱ 类包括间, 其中 30 号和 31 号间遗传相似系数最大, 为号品种 ; 第 Ⅲ 类包括 , 说明云油杂 2 号与云双油 2 号亲缘关系最近, 可能在品种选育中选用了相同的亲本, 或者育号品种 ; 第 Ⅳ 类包括 6,10,15 号品种种亲本的亲缘关系较近其次,1 号与 2 号,17 号与而且同一地区或同一育种单位提供的品种一般聚 18 号,19 号与 20 号间的遗传相似系数较大, 为为一类, 说明它们的遗传基础相近, 其育种亲本有 , 即它们的亲缘关系较近 10 号与 1 号 2 一定的共同来源, 而不同单位选育的品种其遗传背号的遗传相似系数最小, 为 , 即它们的亲景差异较大, 往往被分配到不同的类群中但也有缘关系最远不同地区的某些油菜品种聚在一起例如, 湖南的 1229

4 湘杂油系列品种与云南花油系列品种聚在一起, 可能是湘杂油系列选用了云南花油系列品种或亲缘关系较近的材料作为杂交亲本 ; 德油杂 988 湘杂油 763 与浙双 72 聚在一起, 很可能是德油杂 988 湘杂油 763 的亲本与浙双 72 有一定的亲缘关系 ; 华丰油杂 8 号与德油杂 999 聚在一起, 可能是它们选用了共同杂交亲本或杂交亲本有较近的亲缘关系 ; 湘油 15 号和浙双 758 聚在一起, 而湘油 15 号的父母本分别为湘油 11 号湘油 10 号, 浙双 758 的父母本分别为 S7, 可能是其育种亲本有较近亲缘有关这些结果说明了来自不同地区的材料却很有可能具有共同的血缘在当前油菜育种中, 种质资源的相互交流引进利用越来越频繁, 很多种质资源公共化, 对增加油菜遗传多样性水平有明显的作用, 表现出基因融合区域弱化等趋势图 3 基于 ISSR 标记和 SSR 标记的遗传相似性数据的 31 份甘蓝型油菜品种的聚类分析 Figure 3 The dendrogram of 31 rapeseed varieties based on data of the genetic similarity coefficient generated by ISSR and SSR markers 2 讨论遗传多样性是生物多样性的重要组成部分, 反映了生物对环境的适应能力和对环境变迁的进化能力 ( 厦国银, 2009; 伍宁丰等, 1997) 本研究表明 31 份甘蓝型油菜品种在 SSR 标记和 ISSR 标记揭示的这两种遗传组成具有相同的遗传多样性, 并且遗传多样性水平较高但对 6 个省份的甘蓝型油菜品种的遗传多样性进行单独分析时, 发现不同省份的差异较大 ( 未示出 ), 这可能与研究材料的多少类型及材料的代表性有关 SSR 与 ISSR 共同聚类分析表明, 在遗传相似系数为 0.64 时,31 份甘蓝型油菜, 被分成 4 个大类群一般同一地区或同一育种单位而来的品种聚为一类, 比如云南省的花油系列湖北省地区的油菜品种 ( 包括中国农业科学院油料作物研究所和华中农业大学提供的 ) 各单独聚为一类伍宁丰等 (1997) 用 RAPD 方法对我国 7 省市和国外引进的总计 40 份甘蓝型油莱品种的遗传多样性进行了研究, 从西德引进的 Ledis 聚集在一起, 由胜利油菜系选得到的湘油 2 号湘油 3 号湘油 4 号和潭油 3l 号聚集在一起 ; 何余堂等 (2002) 对我国 23 个省市的 172 份白菜型油菜资源进行了遗传多样性分析, 结果来源相同的聚为一类王璐璐 (2009) 选取 136 份贵州省白菜型油菜, 利用 RAPD 分子标记进行遗传多样性分析, 发现来源相同或相近地区的种质基本上能聚为一类但也有不同地区的某些油菜品种聚在一起, 例如湖南的湘杂油系列品种与云南花油系列品种德油杂 988 湘杂油 763 与浙双 72 华丰油杂 8 号与德油杂 999 湘油 15 号和浙双 758 聚在一起, 说明了来自不同地区的材料却很有可能具有共同的血缘在当前油菜育种中, 种质资源的相互交流引进利用越来越频繁, 很多种质资源公共化, 对增加油菜遗传多样性水平有明显的作用, 表现出基因融合区域弱化等趋势但 Ofori 等 (2008) 研究认为品种改良对油菜遗传多样性没有影响, 不会降低其遗传多样性水平王灏等 (2009) 对来自我国 19 个省市和国外 8 个油菜主产国的 104 份不同类型不同性状的甘蓝型油菜种质资源进行了 RAPD 分析, 研究结果表明目前甘蓝型油菜育种资源间材料的遗传关系已明显的表现出遗传多样基因融合区域弱化等复杂状态 ; 王凯华等 (2011) 用 SSR 分子标记对国内外 48 份甘蓝型油菜品种进行遗传多样性分析, 发现划分的 3 大类群间相对独立 1230

5 又有一定程度的渗透, 说明材料之间存在不同程度的亲缘关系 3 材料与方法 3.1 材料研究所用的油菜品种是从云南, 湖北, 四川, 湖南等地区搜集的 31 份甘蓝型油菜品种 ( 表 4),SSR 引物 ( 表 5) ISSR 引物 ( 表 6) 是由上海生工合成 3.2 方法甘蓝型油菜的种植与取样将 31 份甘蓝型油菜品种分别种植在云南农业大学后山农场, 每个甘蓝型油菜品种随机取样 5 株, 每株取 1 片嫩叶用于基因组 DNA 的提取甘蓝型油菜基因组 DNA 的提取甘蓝型油菜基因组的提取参照由 Murray 和 Thompson (1980) 修改而成的简便 CTAB 法提取叶片总 DNA 将提取的同一品种 DNA 样品混匀, 然后分装, 置于 4 冰箱中保存备用 SSR 多态性引物的筛选选取性状和生育期差异最大的 2 个品种华油杂 9 号和云花油 3 号的 DNA 样品为模板, 用于 SSR 表 4 31 份甘蓝型油菜品种 Table 4 31 varietes of Brassic napus employed in this research NO. 品种 Variety 1 中油杂 12 Zhongyouza 12 2 华油杂 9 号 Huayouz No.9 3 华油杂 7 号 Huayouza No.7 4 富油 668 Fuyou 华丰油杂 8 号 Huafengyouza No.8 选育单位 Released organization 中国农科院油料作物研究所 Oil Crops Research Institute Chinese Academy Of Agricultural 华中农业大学 Huazhong Agricultural University 华中农业大学国家油菜武汉改良分中心 The Wuhan Research Branch Of The National Rapeseed Genetic Improvement Center, Huazhong AU 湖北富悦农业集团有限公司 Hubei Fuyue Agricultural Development Co.,Ltd. 湖北丰农种业有限责任公司 Hubei Feng agricultural Seedindustry limited liability company NO. 品种 Variety 17 湘杂油 613 Xiangzayou 湘杂油 563 Xiangzayou 湘杂油 499 Xiangzayou 湘杂油 Xiangzayou 湘杂油 591 Xiangzayou 591 选育单位 Released organization 6 德油杂 988 Deyouza 中双 9 号 Zhongshuang No.9 8 中双 8 号 Zhongshuang No.8 9 浙双 758 Zheshuang 758 湖北富悦农科所与四川德阳什邡科技园 Hubei Fuyue Institute of Agricultural, and Technology park of Shifang, Deyang, Sichuan 中国农科院油料作物研究所 Oil Crops Research Institute Chinese Academy of Agricultural 中国农科院油料作物研究所 Oil Crops Research Institute Chinese Academy of Agricultural 浙江省农科院作物所 Zhejiang Academy of Agricultural Crops Research Institute 湘杂油 753 Xiangzayou 云花油 5 号 Yunhuayou No.5 24 云花油 6 号 Yunhuayou No.6 25 云花油 8 号 Yunhuayou No.8

6 NO. 品种 Variety 10 浙双 72 Zheshuang 陕油 8 号 Shanyou No 德油杂 518 Deyouza 德油杂 999 Deyouza 湘油 15 号 Xiangyou No 湘杂油 763 Xiangzayou 湘杂油 748 Xiangzayou 748 选育单位 Released organization 浙江省农科院 Zhejiang Academy of Agricultural 西北农林科大农科院 Northwest A&F University Academy of Agricultural 四川隆平高科种业有限公司 Sichuan Longping High-Tech Seed Industry Co.,Ltd 四川隆平高科种业有限公司 Sichuan Longping High-Tech Seed Industry Co.,Ltd NO. 品种 Variety 26 云花油 3 号 Yunhuayou No.3 27 云花油 9 号 Yunhuayou No.9 28 云花油早熟 1 号 Yunhuayouzaoshu No.1 29 云花油 7 号 Yunhuayou No.7 30 云油杂 2 号 Yunyouza No.2 31 云双油 2 号 Yunshuangyou No.2 选育单位 Released organization 续表 4 Continuing table 4 表 5 SSR 多态性引物 Table 5 SSR polymorphic primer 引物 Primer number 上游引物序列 The upstream primer sequence 1232 下游引物序列 The downstream primer sequence CB10369 CATTCCAGGACCAGAGG CAAAGCCAAGACAACCA BRMS-026 CCTATCCTCGGACTAATCAGAA GTGCTTGATGAGTTTCACATTG CN5 CGTTGGCAAAAAGCCTACTC CTCAGGGACGTCGTAAGAGC CB10427 TCCCAACAAAAGAGTCCA CAGCGAACCGAGTCTAAA CN52 CCGGCTTGGTTCGATACTTA TTGCGAATCTTTAAGGGACG BRMS-008 AGGACACCAGGCACCATAA CATTGTTGTCTTGGGAGAGC PMR181 AGATTTGCATGTGGTTTGC ATTGCTTANTGATGTTGGGAA BrGMS171 GATACACAACCAGCCAACACAA GGATTTGCATGTTCCTGACTG CB10172 ATTGGTCTCTTAACCCGC TTC TCG AAT CCC TCG AA CB10373 GCCATCTCA GAG ACG ACA CGGTCA GAT TCC AAC AGA CB10330 AGGCGA GTT TAC GAG GAT ACC TGC ACC AGT CAT TTG CN48 GCGATCTCCTCAGGCTAGT CCACGCAAGCTGAAACATAA CN57 CACACCCTTACCACGTTCCT GCAACAAAGCATACTTCGCA CB10364 GAGACGATGCAAAGATCG TGCAGACACATTCGA ACA CB10028 CTG CAC ATT TGA AAT TGG TC AAATCA ACGCT ACCCAC T NG14-G10 ACG AAG TGG GTT AGT AGG CG GAA GCC TTT CTC CAC CAT TG

7 表 6 ISSR 多态性引物 Table 6 ISSR polymorphic primers 引物 Primer number 引物序列 Primer sequence 引物 Primer number 引物序列 Primer sequence 807 AGA GAG AGA GAG AGA GT Pr6 GAG AGA GAG AGA GAG ACC 814 CTC TCT CTC TCT CTC TA 816 CAC ACA CAC ACA CAC AT 823 TCT CTC TCT CTC TCT CC Pr8 CACGAGAGA GAG AGA GA Pr5 GAG AGA GAG AGA GAG ACT Pr10 ACAACACACACACAC AC 888 BDB CAC ACA CAC ACA CA 880 GGA GAG GAG AGG AGA 889 DBD ACA CAC ACA CAC AC 866 CTC CTC CTC CTC CTC CTC 注 : N=(A,G,C,T), R = (A, G), Y= (C, T), B=(C, G,T) (I,e,not A). D, D=(A,G,T), (I,e,not C), H=(A,C,T) (I.E,not G), V=(A,C,G), (I, e.not.t) Note: N=(A,G,C,T), R = (A, G), Y= (C, T), B=(C, G,T) (I,e,not A). D, D=(A,G,T), (I,e,not C), H=(A,C,T) (I.E,not G), V=(A,C,G), (I, e.not.t) 多态性引物的筛选, 其扩增体系和 PCR 反应程序参照 ( 沈金雄等, 2004) 程序运行在 Bio-rad PCR 仪 (Mycycler) 上进行然后用 8% 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 ISSR 多态性引物的筛选取材如同 SSR 多态性引物的筛选 ISSR 扩增体系和热循环程序参照 ( 沈金雄等, 2004) 程序运行在 Bio-rad PCR 仪 (Mycycler) 上进行产物用 1.5% 琼脂糖凝胶进行电泳检测甘蓝型油菜的 SSR ISSR 分析利用筛选出的多态性引物 (16 对 SSR 引物和 12 条 ISSR 引物 ), 对来自云南湖南湖北等地的共 31 份甘蓝型油菜品种进行 SSR ISSR 分析其扩增体系如同多态性引物筛选的扩增体系读带与数据处理根据 DNA Marker 的片段大小, 对扩增结果人工统计, 在同一位置的有带片段记为 1, 无带记为软件分析本实验数据用 POPGENE32 软件计算品种间的多态位点百分率 (P) 有效等位基因数 (Ne), 期望杂合度 (H) shannon 指数 (I) 等数据 ; 并利用 NTSYSpc 2.10 软件 (Rohlf, 2000) 构建品种间基于 Nei's 遗传一致度的 UPGMA 聚类图作者贡献林良斌孙桂林本研究的实验设计和实验研究的执行人 ; 林良斌是项目的构思者和负责人, 指导实验设计, 论文写作与修改 ; 孙桂林完成实验和实验数据分析彭少丹汪骞陈升位参与本研究的实验数据和结果的分析全体作者都阅读并同意最终的文本致谢本研究由国家 863 计划 (2011AA10A104) 和云南省财政 1233 厅专项 ( 云南省油菜产业体系建设 ) 资助作者感谢湖南农业大学陈社员老师提供油菜品种, 感谢华中农业大学陈磊同学帮忙收集湖北的油菜品种感谢云南农业大学农学与生物技术学院黄丽成晟廖红同学在实验中的帮助感谢云南农业大学农科基础实验中心提供帮助的诸位老师参考文献 Ofori A, Becker H.C., and Kopisch-Obuch F.J., 2008, Effect of crop improvement on genetic diversity in oilseed Brassica rapa (turnip-rape) cultivars, detected by SSR markers, J. Appl. Genet., 49(3): ) F PMid: He Y.T., Tu J.X., Fu T.D., Li D.R., and Chen B.Y., 2002, Genetic diversity of germplasm resources of Brassica campestris L. in China by RAPD markers, Zuowu Xuebao (Acta Agronomica Sinica), 28(5): ( 何余堂, 涂金星, 傅廷栋, 李殿荣, 陈宝元, 2002, 中国白菜型油菜种质资源的遗传多样性研究, 作物学报, 28(5): ) Ma C.Z., Sakai T., Fu T.D., Meng J.L., Yang G.S., and Tu J.X., 2003a, Genetic diversity of parents for hybrid breeding in Brassica napus L. detected by RAPDs and RFLPs, Zuowu Xuebao (Acta Agronomica Sinica) 29(5): ( 马朝芝, Sakai T., 傅廷栋, 孟金陵, 杨光圣, 涂金星, 2003a, RAPDs 和 RFLPs 分析甘蓝型杂交油菜亲本的遗传多样性, 作物学报, 29(5): ) Ma C.Z., Fu T.D., Stine T., and Bo G., 2003b, Genetic diversity of Chinese and swedish rapeseed (Brassica napus L.) analysed by inter-simple sequence repeats (ISSRs), Zhongguo Nongye Xuebao (Scientia Agricultura Sinica), 36(11): ( 马朝芝, 傅廷栋, Stine T., Bo G., 2003b, 用 ISSR 标记技术分析中国和瑞典甘蓝型油菜的遗传多样性, 中国农业科学, 36(11): ) Murray M.G., and Thompson W.F., 1980, Rapid isolation of high molecular weight plant DNA, Nucleic Acids Res., 8(19):

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AFLP % 1. 1 DNA 5 RAPD DNA 0. 1g % ~ ph 6 10 DNA 9 40μl TE SSR STS 20ng /L

AFLP % 1. 1 DNA 5 RAPD DNA 0. 1g % ~ ph 6 10 DNA 9 40μl TE SSR STS 20ng /L 2012 13 2 201-206 Journal of Plant Genetic Resources / 071001 41 SSR 21 SSR 41 52 2 ~ 4 2. 5 Shannon 0. 21 ~ 1. 40 0. 73 5. 54 3 7 9 13. 16% ~ 186. 49% 5. 48 6 11 SSR Genetic Diversity of Peanut Arachis