检验科生化室简介

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釜乔
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1 临床检验通讯 2015 年第 3 期 2015 年 11 月 15 日主编 : 陈葳副主编 : 王亚文检验科新项目介绍一脂蛋白相关磷脂酶 A2(LP-PLA2) 概论 : 动脉粥样硬化是心脑血管中重要首要致死和致残原因, 除血脂异常外, 炎症和氧化应激也是动脉粥样硬化病理生理发生和发展的重要机制目前, 国内外指南均建议采用传统危险因素为基础的模型预测动脉粥样硬化性心脑血管病的短期和长期风险与 C- 反应蛋白 (CRP) 不同, 脂蛋白相关的磷脂酶 A2(LP-PLA2) 是具有血管特异性的炎症标志物, 研究发现 LP-PLA2 是冠心病和缺血性脑卒中的独立危险因素新近美国 FDA 批准其用于预测冠心病和缺血性卒中风险 2015 年 10 月 30 日长城五洲国际心血管病会上发布了脂蛋白相关的磷脂酶 A2 临床应用中国专家建议临床意义 :Lp-PLA2 是独立的心血管疾病风险预测指标, 不受其他生物指标的影响, 该指标比其他传统指标 ( 如 TG LDL HDL 等 ) 更能够准确的反应动脉粥样硬化的发生发展及预后目前, 欧洲心脏病学会 ESC ( European Society of Cardiology ), 美国临床内分泌医师学会 AACE(American Association of Clinical Endocrinologists), 美国心脏病学会基金会 ACCF(American College of Cardiology Foundation) 以及 2015 年 10 月第 26 届长城国际心脏病学会议脂蛋白相关磷脂酶 A2 临床应用中国专家指南等在指南中已将 LP-PLA2 的检测作为心脑血管疾病独立预测指标, 主要应用于 : 1 一级预防 : 利用 Lp-PLA2 预测缺血性脑卒中首发和复发以及冠心病患者主要心血管事件发生率 2 评估硬化程度和动脉粥样斑块稳定性,Lp-PLA2 产生量和动脉粥样硬化的程度和斑块稳定性密切相关 3 他汀类药物降低 Lp-PLA2 疗效监测指标适应人群 : 有脑血栓高血压高血脂症高粘血症糖尿病病史等患者及肥胖烟酒过度缺乏运动等人群的常规检测 1 标本类型 : 血清 ( 红帽管 ) 2 标本采集要求 : 早晨空腹采血 4 送检科室及电话 : 免疫室, 报告时间 : 周五下午 4 点二丙型肝炎病毒核心抗原 (HCV-Ag) 1

2 概论 : 丙型肝炎是由 HCV 感染引起的一种全球性传染病, 感染人数超过 2 亿主要通过血液 ( 输血注射 ) 性接触母婴等途径传播, 我国感染率为 3%- 5%, 感染人数 1000 万左右感染 HCV 后病情隐匿, 极易转为慢性, 与肝硬化和原发性肝癌的关系十分密切绝大多数 HCV 感染者未能被诊断, 因此又称为隐形杀手在英国德国美国 HCV 筛查时, 采用 HCV 抗体与 HCV-Ag 联合检测, 缩短窗口期, 避免漏检 1 标本类型 : 血清 ( 红帽管 ) 2 标本采集要求 : 早晨空腹采血 4 送检科室及电话 : 免疫室, 报告时间 : 次日下午 4 点感染者分别有 83% 40% 75% 未能检出 2010 年 CDC 数据显示, 在中国 HCV 漏检率超过 95% HCV 的抗病毒治疗效果远远优于 HBV, 大部分 HCV 患者通过抗病毒治疗可获得治愈因此, 丙型肝炎的早期诊断对于切断 HCV 的传染源早期干预治疗有重要意义. HCV-Ag 检测的意义及优点 : 采用双抗体夹心法, 以抗丙肝病毒核心抗原单克隆抗体包被, 与抗体检测比较, 有以下优点 : (1) 大大缩短窗口期至 14 天左右, 与 HCV-RNA 窗口期相当 (2) 丙肝抗原与 HCV-RNA 有良好的相关性, 可区分既往感染与现症感染 (3) 用于抗病毒治疗病情监测 (4) 可用于免疫功能障碍人群 HCV 感染的辅助诊断 (5) 检测费用较低 (55 元 / 次 ), 适用于临床 HCV 感染的筛查 HCV 检测项目临床建议 : 目前国内很多医院在进行介入性检查或治疗前手术或输血前, 已经将 HCV-Ag 纳入感染性疾病筛查常规实验为了规避医患纠纷, 提高临床用血安全, 建议我院将 HCV-Ag 作为介入性检查或治疗前手术或输血前传染指标常规筛查指标, 在进行丙型肝炎病毒感染 2 三鼻咽癌血清学诊断新组合概论 : 鼻咽癌 (Nasopharyngeal carcinoma,npc) 是发生在鼻腔与咽之间鼻咽部粘膜的恶性肿瘤, 高发于东南亚和我国南方诸省, 与食道癌肝癌并称中国三大肿瘤鼻咽癌 15 年来发病率及死亡率一直居高不下, 为 10~13/10 万由于鼻咽位置深, 在临床常规体检不易发现其中的早期病变, 同时因鼻咽癌早期缺乏特异性的症状, 待癌症显露确诊时已届晚期, 治疗效果极差, 死亡率很高因此鼻咽癌的早期获得诊断以便得到及时治疗显得尤为重要鼻咽癌的病因复杂, 其中遗传因素环境因素微量元素等都参与其中, 而 EB 病毒 (Epstein-Barr Virus,EBV) 感染和反复感染与鼻咽癌密切相关是学界公认的主要因素之一检测病人体内的抗 EBV 抗体的血清学诊断方法已经成为鼻咽癌早期诊断的主要工具, 该类方法无创伤, 成本低, 检测速度快, 适用于常规体检高危人群大规模筛查门诊辅助诊断和对治疗效果进行监测鼻咽癌血清学项目组合 :Rta-IgG VCA-IgA EA-IgA EB 病毒 Rta 蛋白抗体 IgG 检测试剂盒采用间接 ELISA 方法检测人血清中 EB 病毒 Rta 蛋白抗体 IgG, 操作简便, 结果稳定 Rta 蛋白为 EB 病毒 BRLFl 基因表达, 该基因是 EB 病毒裂解期

3 ( 诱导癌变时期 ) 立即早期基因,Rta 是 EB 病毒进入裂解期, 诱导癌变最早表达的蛋白质经 1026 例临床试验证明,EB 病毒 Rta 蛋白抗体 IgG 检测试剂盒检测鼻咽癌的灵敏度为 81%, 特异性为 92%, 截至目前是唯一由 CFDA 批准可用于鼻咽癌的辅助诊断及相应临床管理与传统 EB 病毒检测方法, 其靶标更加准确, 适于鼻咽癌早期辅助诊断因此由于 EBV RTA 蛋白产生早于 EA 和 VCA 抗原, 用于鼻咽癌早期血清学诊断更有临床意义, 所以单独采用 Rta/IgG 抗体较适合于健康人群的鼻咽癌体检筛查工作 Rta/IgG 抗体 VCA/IgA 抗体 EA/IgA 抗体联合检测可更大范围的反应 EB 病毒溶解感染期及潜伏感染期的抗原表达, 具有很好的互补作用, 可提高阳性检出率是鼻咽癌血清学诊断的合适组合 1 标本类型 : 血清 ( 红帽管 ) 2 标本采集要求 : 早晨空腹采血 4 送检科室及电话 : 免疫室, 报告时间 : 每周四下午 4 点四呼吸道病毒抗原七项检测概论 : 呼吸道病毒是指一大类能侵犯呼吸道引起呼吸道局部病变或仅以呼吸道为侵入门户引起呼吸道外组织器官病变, 最常见的几种呼吸道病毒为呼吸道合胞病毒流感病毒和腺病毒据统计, 70%~80% 的上呼吸道感染是由病毒引起 ;90% 的急性支气管炎由病毒引起,10% 由细菌引起 ; 成人中 15-56% 肺炎由病毒引起, 而在儿童感染中,43-67% 由病毒引起, 其中儿童中有 45% 的病毒与细菌的混合感染, 而成人中为 15% 几年来新的致病性病毒还在不断地被发现, 给临床疾病诊断和治疗造成极大的困难因此, 在呼吸道病毒高发季节, 需要使用一种快速简便的方法来对大量的患者进行筛查实验, 以达到疫情监测的需求临床意义 :1 病毒治疗针对性强金刚烷乙胺瑞乐沙奥司他韦 ( 达菲 ) 等是抗流感病毒的特效药 RSV 和副流感病毒可以使用利巴韦林和免疫球蛋白进行治疗目前对于抗腺病毒的治疗主要采取支持疗法 2 病毒治疗有时效性大部分呼吸道病毒越早治疗效果越好比如, 奥司他韦在体内的活性形式是一种强效的高选择性的流感病毒 NA 抑制剂, 它主要通过干扰病毒从被感染的宿主细胞中释放, 从而减少甲型或乙型流感病毒的传播因此, 在出现流感症状的 48 小时内使用奥司他韦才有用, 过了这个时间段后疗效甚微 3 避免抗生素的滥用病毒不同于细菌衣原体支原体等原核生物, 其对抗生素不敏感, 不能使用抗生素进行治疗准确的诊断能帮助医生确定是否使用抗生素来治疗病人 4 减少患者看病负担合理准确的用药能帮助患者更快地痊愈, 同时减少开支 5 监控疾病的大规模传染呼吸道病毒相对其它病原体更容易在人群中大规模传播因此, 对于危害性较大传播速度快范围广的呼吸道病毒有必要进行监控, 从而防止疾病扩散和减少损失 1 标本类型 : 鼻咽拭子 2 标本采集要求 : 样本采集后保存于生理盐水试管中送检 4 送检科室及电话 : 免疫室, 报告时间 : 次日下午 4 点 3

4 检验与临床影响酶联免疫吸附试验实验的因素酶联免疫吸附试验 ( Enzyme-Linked ImmunosorbentAssays,ELISA) 是将抗原抗体的特异性免疫反应和酶的高效催化作用有机结合起来的一种免疫分析方法,1971 年最先应用该法进行了 IgG 定量测定, 目前被广泛应用于临床免疫中抗原或抗体的检测 ELISA 有三个必要的试剂 :(1) 固相的抗原或抗体, 即 " 免疫吸附剂 "(2) 酶标记的抗原或抗体, 称为 " 结合物 "(3) 酶反应的底物一 ELISA 试验主要的影响因素 (1) 溶血 : 红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质, 以 HRP( 辣根过氧化物酶 ) 为标记的 ELISA 测定中, 溶血标本可能会增加非特异性显色导致假阳性 (2) 细菌污染 : 菌体中可能含有内源性 HRP, 也会产生假阳性反应 (3) 过量的抗原或抗体造成的假阴性类风湿因子 (RF) 的干扰导致的假阳性二钩状效应 (hookeffect) 在一步法中当受检抗原 / 抗体的含量过高时, 抗原抗体结合反应不匹配, 因带现象导致检验结果为假阴性, 这种现象被称为钩状效应 (hook effect) 影响的项目: 包括 HBsAb HBeAg HBeAb HBcAb 三类风湿因子 (RF) 的干扰用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有 RF, 它可充当抗原成份, 同时与固相抗体和酶标抗体结合, 表现出血清类风湿因子可能导致假阳性结果影响的项目 :HBeAg HBsAg 四乙肝表面抗原 (HBsAg) 假阳性原因乙肝血清标志物检测中经常会出现 HBsAg 假阳性的结果, 其特点主要表现为 : 乙肝模式中单独 HBsAg 阳性, 其余均为阴性, 检测结果 S/CO 值接近临界值, 经过重新采血或随访后复检后往往会为阴性, 患者临床表现和其他检测指标均不支持乙型肝炎病毒感染对假弱阳性产生主要原因包括 :1 目前国内乙肝表面抗原检测试剂盒多选用鼠抗人肝表面抗体进行包被微孔板, 人体内有与鼠抗人抗体发生交叉反应的抗体存在 ;2 溶血 ;3 高浓度的 RF 存在五中和确认试验 : 在用 HBs 抗体 ( 鼠抗人 ) 包被微孔中分别加入含人特异性 HBs 抗体试剂和待测血清, 试剂中的特异性 HBs 抗体与固相 HBs 竞争结合血清中的 HBsAg, 从而使结合到固相上并与酶标 HBs 结合形成夹心复合物的 HBsAg 量减少, 最后显色反应较浅, 计算抑制率并与对照孔比较, 可以判断血清中是否存在 HBsAg 乙肝表面抗原 ELISA 检测为筛查试验, 全国临床检验操作规程建议必要时应采用中和试验进行确认细菌耐药监测一细菌分布 2015 年第 3 季度我院共送检份标本, 分离出非重复病原菌 2707 株, 分离率 18.82%, 其中肠杆菌科细菌 988 株, 占 36.50%, 非发酵菌 607 株, 占 22.42%, 葡萄球菌属 349 株, 占 %, 肠球菌属 320 株, 占 %, 念珠菌 200 株, 占 7.39 % 其中位于前十位的细菌为大肠埃希菌 4

5 铜绿假单胞菌鲍曼不动杆菌肺炎克雷伯菌肺炎亚种屎肠球菌金黄色葡萄球菌白色念珠菌表皮葡萄球菌粪肠球菌嗜麦芽窄食单胞菌细菌分布与去年同期相比, 大肠埃希菌依然位于首耐碳氢酶烯类药物的鲍曼不动杆菌 ( 即 CR-AB) 的检出率高达 76.3%, 比起上季度 85.4% 的检出率略有下降, 但相比去年同期的 66.3% 有较为明显的上升趋势位鲍曼不动杆菌从第 8 位上升到第 3 位, 上升趋势明显肺炎克雷伯菌肺炎亚种从第 2 位下降到第 4 位, 其余细菌分布变化不大二耐药性分析根据统计分析, 我院耐药形势依然严峻, 主要体现在以下几个方面 :1. 耐碳氢酶烯类药物的肠杆菌科细菌检出率的上升 ;2. 金黄色葡萄球菌 MRSA 检出率的上升 ;3. 耐碳氢酶烯类药物的铜绿假单胞菌 ( 即 CR-PA) 检出率的上升 ;4. 耐碳氢酶烯类药物的鲍曼不动杆菌 ( 即 CR-AB) 检出率的居高不下且依然有上升的趋势具体分析如下 : 肠杆菌科细菌中, 大肠埃希菌 ESBLs 检出率 69.2%, 比起上季度略有上升, 比起去年同期的 66.2 % 略有上升耐碳氢酶烯类药物的大肠埃希菌检出率为 1.6%, 上季度未检出, 相比去年同期的 1.2% 略有升高肺炎克雷伯菌 ESBLs 检出率 48.3%, 比起上季度略有上升, 但比起去年同期的 54.5 % 有下降趋势耐碳氢酶烯类药物的肺炎克雷伯菌检出率为 2% 与上季度的 2.2% 基本相同, 与去年同期的 0.6% 相比上升还是较大葡萄球菌中金黄色葡萄球菌 MRSA 检出率为 41.5%, 与上季度基本相同, 但相比去年同期的 27.9 % 有明显的上升, 应引起临床及院感高度重视表皮葡萄球菌 MRS 的检出率为 78.6%, 和去年同期的 79.5% 基本相同耐碳氢酶烯类药物的铜绿假单胞菌 ( 即 CR-PA)43.6%, 比起上季度有上升趋势, 相比去年同期的 33.6 % 有较明显的上升非发酵菌中, 5

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7 责任编辑 : 袁莉王林川马晨 7

材料方法

材料方法生物技术通报姜燕采用鼠抗人血红蛋白单克隆抗体和胶体金标记鼠抗人血红蛋白单克隆抗体及对照抗体羊抗鼠利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原在内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克隆一步法胶体金检测试卡用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白抗体方法检测效价免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡法检测效价的结果显示鼠抗人