Microsoft Word - 國科會第三年期末報告鄭登貴-1(修改過頁碼).doc
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1 行 政 院 國 家 科 學 委 員 會 補 助 專 題 研 究 計 畫 期 中 進 度 報 告 期 末 報 告 豬 卵 母 細 胞 特 異 性 連 接 組 蛋 白 基 因 表 現 調 控 及 其 功 能 之 探 討 計 畫 類 別 : 個 別 型 計 畫 整 合 型 計 畫 計 畫 編 號 :NSC B MY3 執 行 期 間 :99 年 08 月 01 日 至 101 年 07 月 31 日 執 行 機 構 及 系 所 : 東 海 大 學 畜 產 與 生 物 科 技 學 系 計 畫 主 持 人 : 鄭 登 貴 共 同 主 持 人 : 歐 柏 榮 計 畫 參 與 人 員 : 李 彥 勳, 林 維 哲, 周 峻 賢, 陳 冠 彣, 王 愷 雯 本 計 畫 除 繳 交 成 果 報 告 外, 另 含 下 列 出 國 報 告, 共 份 : 移 地 研 究 心 得 報 告 出 席 國 際 學 術 會 議 心 得 報 告 國 際 合 作 研 究 計 畫 國 外 研 究 報 告 處 理 方 式 : 除 列 管 計 畫 及 下 列 情 形 者 外, 得 立 即 公 開 查 詢 涉 及 專 利 或 其 他 智 慧 財 產 權, 一 年 二 年 後 可 公 開 查 詢 中 華 民 國 103 年 01 月 日
2 中 文 摘 要 組 蛋 白 (histone) 為 真 核 生 物 體 細 胞 染 色 質 中 的 基 本 結 構 蛋 白 質, 依 其 所 含 鹼 性 胺 基 酸 相 對 比 例 可 區 分 為 5 種 類 型 組 蛋 白 (H1 H2A H2B H3 和 H4), 其 中 組 蛋 白 H1 又 稱 連 接 組 蛋 白 (linker histone), 在 哺 乳 動 物 細 胞 中 存 在 11 種 亞 單 元, 於 發 育 不 同 時 期 能 組 成 不 同 的 結 合 模 式, 並 在 特 定 階 段 相 互 更 換 卵 母 細 胞 特 異 性 連 接 組 蛋 白 (oocyte-specific linker histone H1, H1Foo) 首 先 於 小 鼠 中 發 現, 已 知 職 司 細 胞 核 內 染 色 質 結 構 之 維 持, 並 可 能 涉 及 卵 母 細 胞 的 成 熟 受 精 後 精 子 染 色 質 重 構 (chromatin remodeling) 胚 原 性 與 母 源 性 基 因 轉 換 調 控, 與 體 細 胞 核 移 植 時 對 體 細 胞 核 的 再 程 序 化 (reprogramming); 惟 豬 卵 母 細 胞 之 該 基 因 全 長 核 苷 酸 序 列 蛋 白 質 分 子 特 性, 及 其 可 能 涉 及 之 生 理 作 用 機 制, 則 迄 未 有 明 鑑 於 豬 隻 繁 殖 過 程 中, 豬 胚 存 活 率 決 定 豬 隻 繁 殖 力, 且 早 期 胚 存 活 之 關 鍵 為 4- 至 8- 細 胞 胚 期 階 段, 即 母 源 性 基 因 停 止 表 現, 胚 原 性 基 因 開 始 轉 錄 或 轉 譯 之 際, 在 此 過 程 中, 除 特 定 轉 錄 因 子 的 數 量 活 性 外, 染 色 質 結 構 成 分 的 變 化 也 扮 演 關 鍵 性 的 角 色 本 研 究 已 針 對 源 自 生 發 泡 (germinal vesicle, GV) 階 段 之 豬 卵 母 細 胞 之 總 RNA 樣 品, 成 功 獲 得 豬 H1Foo(pH1Foo) 完 整 cdna 並 以 此 cdna 構 築 重 組 蛋 白 表 現 載 體, 轉 染 置 豬 內 皮 細 胞 (PEC), 探 討 表 現 H1Foo 重 組 蛋 白 對 基 因 表 現 的 影 響 結 果 顯 示 H1Foo 重 組 蛋 白 表 現 於 細 胞 核 中, 且 對 細 胞 中 oct4,sox2,nanog 及 c-myc 之 表 現 量 有 影 響, 此 結 果 顯 示 H1Foo 蛋 白 質 對 細 胞 的 remodeling 扮 演 重 要 的 角 色 此 外, 透 過 H1Foo 5 調 節 區 報 導 基 因 的 分 析 之 研 究 顯 示 H1Foo 5 調 節 區 的 1.5 Kb 及 0.8 Kb 並 無 法 使 HiFoo 基 因 表 現 於 小 鼠 2-8 細 胞 的 胚 胎 中, 此 結 果 顯 示 豬 和 小 鼠 胚 胎 中 H1Foo 基 因 表 現 的 調 節 有 很 大 的 差 異 關 鍵 字 : 豬 卵 母 細 胞 特 異 性 連 接 組 蛋 白 質 胚 胎 發 育 ABSTRACT Eukaryotic histone proteins are mainly responsible for the nucleosome structure of the chromosomal fiber through package and order the DNA into nucleosome to provide the first level of chromatin organization. Among them, core histones (histones H2A, H2B, H3 and H4) play an essential role in constraining DNA wrapped around the histone octamer to produce a nucleosome core particle, while linker histones (histone H1 family) locate the exterior of the nucleosome core and associate with linker DNA to keep the chromatin in a helical and compact state to regulate gene expression. The oocyte-specific linker histone H1 (H1Foo) is first found in the mouse oocyte and participates in various steps of embryogenesis including oocyte maturation, sperm chromatin remodeling after fertilization and donor cell reprogramming after somatic nuclear transfer. The sequence of full-length H1Foo cdna has been identified in mice, human, bovine and other non-mammalian species, but not in porcine. The objectives of this study were to identify and characterize the porcine specific H1Foo gene for explication of the maternal control of germline development following fertilization. Full length porcine H1Foo cdna was cloned by RT-PCR from oocytes RNA in germinal vesicle. Expression of recombinant H1Foo in porcine endothelium cells showed the recombinant H1Foo protein was I
3 located in nucleus. In addition, expression of H1Foo induced the expression of oct4,sox2,nanog and c-myc reprogramming related genes. To investigate the mechanism of regulation of H1FOO gene expression in early stage of embryo development, 5 regulatory region of H1Foo was cloned into a reporter gene containing plasmid. After microinjection, the reporter gene did not expression in mouse early stage of embryo development. This result indicates that expression of H1Foo gene is regulated differently in different species. Key words: pig, oocyte-specific linker histone H1, embryo development II
4 前 言 真 核 生 物 染 色 質 的 主 要 化 學 成 分 為 去 氧 核 醣 核 酸 (DNA) 與 組 蛋 白 (histone), 其 結 構 單 體 為 核 小 體 (nucleosome), 由 DNA 與 組 蛋 白 以 特 殊 方 式 相 連 組 成, 包 含 核 心 顆 粒 (core particle) 與 連 接 區 DNA(linker DNA) 兩 部 份 (Baake et al., 2001), 在 哺 乳 動 物 基 因 組 中, 組 蛋 白 是 調 控 基 因 表 現 的 重 要 遺 傳 學 機 制, 在 保 持 胚 幹 細 胞 的 全 能 性 與 癌 症 的 病 理 過 程 中 扮 演 重 要 角 色, 其 具 有 多 種 修 飾 形 式, 包 括 : 甲 基 化 (methylation) 乙 醯 化 (acetylation) 磷 酸 化 (phosphorylation) 等, 組 蛋 白 藉 由 這 些 不 同 的 共 價 修 飾 作 用, 不 但 可 以 藉 由 調 控 組 蛋 白 與 DNA 雙 股 的 親 和 性, 進 而 使 染 色 質 結 構 呈 現 疏 鬆 或 凝 集 狀 態, 亦 可 藉 由 這 些 修 飾 作 用 影 響 其 他 轉 錄 因 子 與 結 構 基 因 啟 動 子 的 親 和 性, 調 控 相 關 基 因 表 現 組 蛋 白 中 的 連 接 組 蛋 白 具 有 種 族 與 組 織 特 異 性, 於 染 色 質 結 構 與 功 能 皆 具 重 要 功 能, 與 調 節 染 色 質 纖 維 的 濃 縮 與 解 濃 縮 有 關, 目 前 已 知 連 接 組 蛋 白 不 僅 依 其 所 在 位 置 而 具 有 連 接 及 穩 定 兩 核 心 組 蛋 白 的 八 聚 體 特 性, 尚 能 藉 由 促 進 核 小 體 的 緊 密 折 疊 壓 縮, 使 染 色 質 形 成 高 級 結 構, 且 可 能 涉 及 染 色 質 之 修 飾 基 因 表 達 模 式 與 發 育 調 控 等 相 關 分 子 機 制 與 核 心 組 蛋 白 相 比, 連 接 組 蛋 白 具 有 更 多 的 亞 單 元, 在 哺 乳 動 物 卵 母 細 胞 與 早 期 胚 發 育 過 程 中, 已 經 鑑 定 的 連 接 組 蛋 白 共 有 11 種 亞 單 元, 其 中 包 括 7 種 體 細 胞 型 連 接 組 蛋 白 (H1.1 to H1.5, H10, and H1x) 3 種 精 子 特 異 性 型 連 接 組 蛋 白 (H1t, H1T2, and HILS1) 與 1 種 卵 母 細 胞 特 異 性 連 接 組 蛋 白 (H1Foo)(Wiśniewski et al., 2007), 彼 等 連 接 組 蛋 白 亞 單 元 在 不 同 的 發 育 時 期 能 夠 形 成 不 同 的 結 合 模 式, 並 且 依 照 特 定 方 式 相 互 更 替 H1Foo 是 在 卵 母 細 胞 中 發 現 的 一 種 特 異 性 連 接 組 蛋 白, 於 卵 母 細 胞 的 成 熟 扮 演 重 要 的 角 色, 目 前 已 於 小 鼠 (Tanaka et al.,2001) 人 (Tanaka et al.,2003) 與 牛 (Mcgraw et al.,2006) 等 哺 乳 動 物 中 相 繼 發 現, 其 與 非 哺 乳 動 物 的 cs-h1( 源 自 海 膽 ) B4( 源 自 非 洲 爪 蟾 蜍 ) 等 卵 特 異 性 連 接 組 蛋 白 具 有 同 源 性, 亦 即 其 蛋 白 質 結 構 同 樣 具 有 N 末 端 C 末 端 與 中 央 球 狀 結 構 區 (cebtral globular domain), 在 結 構 上, 小 鼠 人 與 牛 的 H1Foo 均 由 5 個 外 顯 子 (exon) 與 4 個 內 含 子 (intron) 組 成, 此 與 體 細 胞 型 H1s 不 具 內 含 子 與 多 聚 線 苷 酸 (polyadenylation motif) 的 特 性 相 異 目 前 對 於 H1Foo 的 調 控 機 制 仍 迄 未 有 明, 但 諸 多 試 驗 已 對 於 H1Foo 於 早 期 胚 發 育 過 程 中 的 表 現 圖 譜 提 出 討 論 (Fan et al., 2003) 證 明 在 早 期 卵 母 細 胞 原 核 胚 2- 與 4- 細 胞 胚 期 中 只 有 極 少 量 甚 至 幾 乎 不 存 在 的 體 細 胞 H1s, 但 經 過 兩 次 卵 裂 至 4- 細 胞 胚 期 後, 體 細 胞 型 H1s 將 再 次 出 現, 而 與 此 體 細 胞 型 H1s 呈 現 相 反 的 時 空 表 現 則 是 H1Foo, 因 為 其 從 早 期 卵 母 細 胞 到 2- 與 4- 細 胞 胚 期 將 一 直 存 在, 至 4- 細 胞 胚 期 末 期 才 消 失 (Tanaka et al., 2001), 證 明 不 同 亞 單 元 的 連 接 組 蛋 白 在 小 鼠 胚 發 育 之 2- 細 胞 期 發 生 轉 換, 但 其 之 間 的 相 聯 性 則 有 帶 進 一 步 試 驗 之 證 明 此 外,H1Foo 也 被 發 現 可 能 涉 及 體 細 胞 核 的 基 因 組 再 程 序 化 (genomic reprogramming),teranishi et al.(2004) 發 現, 當 體 細 胞 核 移 置 進 入 小 鼠 去 核 卵 母 細 胞 10 分 鐘 後,H1Foo 即 出 現 在 供 核 體 中, 並 且 供 核 體 細 胞 中 的 體 細 胞 型 H1s 會 被 H1Foo 替 換, 於 4- 細 胞 胚 期 後 才 再 度 出 現, 此 種 H1Foo 與 體 細 胞 型 H1s 之 間 的 消 長 趨 勢 與 體 外 受 精 的 合 子 一 致, 推 論 H1Foo 對 於 體 細 胞 的 基 因 組 再 程 序 化 可 能 是 不 可 或 缺 的 重 要 因 子 之 一 綜 合 上 述,H1Foo 其 表 達 方 式 具 有 一 定 的 時 序 性, 不 但 可 能 在 母 源 性 與 胚 原 性 基 因 表 現 轉 換 過 程 中 發 揮 功 能, 於 基 因 組 再 程 序 化 過 程 中 亦 可 能 扮 演 關 鍵 性 調 控 因 子, 因 此 分 析 研 究 H1Foo 將 有 助 於 更 深 入 了 解 染 色 質 的 重 構 基 因 組 再 程 序 化 過 程 以 及 核 移 置 的 分 子 機 制 1
5 早 期 胚 存 活 或 發 育 為 一 複 雜 之 調 控 過 程, 尤 其 卵 母 細 胞 原 本 係 一 種 高 度 分 化 的 生 殖 細 胞, 當 卵 與 精 子 完 成 受 精 作 用 後, 受 精 卵 必 須 在 早 期 胚 發 育 過 程 中, 將 其 原 本 處 於 高 度 分 化 之 細 胞 型 態 轉 化 為 具 有 多 分 化 潛 能 之 分 溝 細 胞 (blastomere), 且 此 一 轉 換 變 化 需 於 胚 埋 植 發 生 之 前 完 成, 而 在 胚 埋 殖 發 生 之 前, 其 發 育 已 知 必 須 經 過 三 個 發 育 轉 換 階 段 始 能 順 利 使 胚 繼 續 存 活 並 埋 植, 其 中 第 一 個 轉 換 階 段 主 要 是 母 源 性 與 胚 源 性 轉 換 (maternal to zygoteic transition), 意 即 在 此 過 程 期 間, 母 源 性 基 因 將 停 止 表 現, 而 胚 源 性 基 因 則 開 始 進 行 轉 錄 或 轉 譯 已 供 胚 後 續 發 育, 第 二 個 轉 換 階 段 為 細 胞 緊 縮 (compaction), 此 階 段 胚 的 發 育 需 要 藉 由 細 胞 與 細 胞 間 的 相 互 作 用 使 克 進 行, 第 三 個 轉 換 階 段 則 位 於 桑 椹 胚 (morula) 期 進 入 囊 胚 期 (trophoblast); 第 一 階 段 有 別 於 其 他 兩 個 階 段, 其 對 於 胚 能 否 存 活 甚 具 關 鍵, 因 此 又 稱 為 哺 乳 動 物 早 期 胚 發 育 得 障 阻 期, 其 發 生 階 段 依 物 種 不 同, 以 豬 胚 為 例, 早 期 胚 存 活 之 關 鍵 為 4- 至 8- 細 胞 期 間 (Telford et al., 1990), 在 此 過 程 中, 除 特 定 轉 錄 因 子 的 數 量 活 性 外, 染 色 質 結 構 成 分 的 變 化 也 扮 演 關 鍵 性 的 角 色 鑑 於 H1Foo 與 體 細 胞 型 H1s 之 轉 換, 於 小 鼠 與 牛 等 物 種 中 洽 處 於 胚 原 性 與 母 源 性 基 因 轉 換 的 時 期, 且 吾 等 希 冀 能 更 深 入 探 討 豬 胚 細 胞 其 基 因 表 現 模 式 於 發 育 過 程 中 產 生 轉 換 的 調 控 機 制, 故 藉 由 本 研 究 室 取 得 之 ph1foo 之 全 長 序 列, 成 功 構 築 可 於 豬 心 血 管 內 皮 細 胞 (procine endothelial cells,pec) 內 單 獨 表 現 H1Foo 蛋 白 質 及 H1Foo 與 EGFP 融 合 蛋 白 之 載 體, 藉 此 探 討 H1Foo 之 表 現 對 於 一 般 體 細 胞 之 影 響 及 其 於 細 胞 內 表 現 之 位 置 2
6 材 料 與 方 法 生 發 泡 (germinal vesicle, GV) 階 段 之 豬 卵 母 細 胞 之 mrna 萃 取 將 數 目 約 50 顆 GV 階 段 之 豬 卵 母 細 胞 以 mrna 萃 取 套 組 處 理 (Dynabeads mrna DIRECT kit Invitrogen); 首 先 將 卵 母 細 胞 置 於 50 µl lysis/binding buffer 中 2 分 鐘,65 C, 後 續 將 含 有 細 胞 之 lysis/binding buffer 轉 移 至 乾 淨 之 微 量 離 心 管 中, 並 加 入 20 µl Dynabeads Oligo(dT)25 magnetic particles 溶 液, 於 室 溫 下 均 勻 混 合 約 5 分 鐘 後, 依 序 已 washing buffer A 及 washing buffer B 處 理 後, 以 100µL 10mM Tris-HCL 回 溶 mrna-bound magnetic particles cdna 末 端 快 速 擴 增 技 術 (rapid amplification of cdna end, RACE) 將 上 一 步 驟 所 得 之 mrna-bound magnetic particles 經 由 calf intestinal phosphatase 及 tobacco acid pyrophosphatase 處 理 後, 使 mrna 可 藉 由 T4 RNA ligase 與 GeneRacer kit(invitrogen) 中 之 GeneRacer RNA Oligo 做 連 結 後, 利 用 GeneRacer oligo dt primer 及 藉 由 已 知 的 基 因 序 列 所 設 計 的 5 端 (5 -CCTGATCAAGAGCAGCATCC) 和 3 端 (5 -GGGTCTTGTTGCCTTTTTGA) 之 引 子 進 行 實 驗, 藉 此 獲 得 基 因 全 長 序 列 之 5 端 和 3 端 之 序 列, 以 利 後 續 獲 得 基 因 全 長 序 列 利 用 RT-PCR 選 殖 豬 H1Foo cdna 以 RACE 所 得 之 實 驗 結 果, 設 計 出 預 測 可 夾 出 全 長 H1Foo 引 子,Forward, 5 -CTGGCAGCTTCAAATTGGTT;Reverse, 5 -CTAGTTCTTGGCCTCAGCCTCC, 並 以 GV- 階 段 之 卵 母 細 胞 萃 取 其 RNA, 以 此 RNA 為 模 板 進 行 RT-PCR, 藉 此 得 到 全 長 之 H1Foo 基 因 序 列 豬 心 血 管 內 皮 細 胞 (porcine endothelial cells, PEC) PEC 細 胞 為 豬 心 臟 主 動 脈 內 皮 細 胞, 係 由 本 實 驗 室 早 期 經 由 初 級 培 養 而 得 豬 主 動 脈 內 皮 細 胞 以 手 術 刀 輕 輕 刮 起, 置 於 含 有 collegenase 的 PBS 中, 置 於 37 培 養 5 分 鐘, 離 心 後 收 取 細 胞, 將 細 胞 培 養 於 含 10% FBS M199 培 養 基, 置 於 5% CO2 37 培 養 箱 培 養, 每 隔 一 天 繼 代 培 養 一 次 細 胞 轉 染 將 PEC 培 養 於 6 公 分 培 養 皿 中 至 八 分 滿, 以 適 量 體 積 之 M199 與 PolyJet 細 胞 轉 染 試 劑 混 合 均 勻 ; 另, 同 樣 以 適 量 體 積 之 M199 與 預 轉 染 之 質 體 混 合 均 勻, 再 將 已 混 合 好 之 PolyJet 細 胞 轉 染 試 劑 與 質 體 混 合 均 勻, 於 室 溫 下 靜 置 15 分 鐘 後, 加 入 細 胞 培 養 液 中, 於 37 C 恆 溫 培 養 箱 中 作 用 6 個 小 時, 將 培 養 液 更 換 為 含 有 10%FBS P/S 與 G418 之 M199 培 養 液, 以 利 後 續 可 篩 選 轉 染 成 功 之 細 胞 RNA 萃 取 分 別 萃 取 一 般 PEC 及 已 轉 染 pegfph1foo 之 PEC 的 RNA 首 先 取 1ml 的 Trizol 加 入 10 公 分 培 養 皿 中, 以 細 胞 刮 杓 將 貼 盤 之 細 胞 刮 起, 收 集 至 1.5ml 微 量 離 心 管 中, 加 入 200µl 的 氯 仿 並 劇 烈 搖 晃 混 合 後, 3
7 於 冰 上 靜 置 10 分 鐘, 於 4 C 以 12000xg 離 心 15 分 鐘, 取 上 清 液 另 置 於 1,5ml 微 量 離 心 管 中, 添 加 500µl 之 異 丙 醇 並 於 -20 C 靜 置 30 分 鐘 後, 於 4 C 以 15000xg 離 心 15 分 鐘, 去 除 上 清 液 後, 加 入 1ml 75% 酒 精, 於 4 C 以 7500xg 離 心 5 分 鐘, 去 除 上 清 液 後, 留 沉 澱 物 並 將 其 乾 燥, 加 入 25µl 去 核 酸 水 回 溶 後, 放 入 -80 C 備 用 Real time RT-PCR 於 微 管 中 加 入 10X RT Buffer 2µl dntp Mix 0.8µl(10mM) 10X RT Random Primer MultltiScribe Reverse Transcriptase 1.0µl dd water 6.2µl 及 RNA 10 µl 於 25 C 10 分 鐘,37 C 120 分 鐘 及 85 C 5 秒 鐘 於 微 管 中 加 入 TaqMan Fast Universal PCR Master Mix(2X) 10µl 前 端 引 子 1µl 後 端 引 子 1µl 模 板 2µl 及 dd water 於 95 C 10 分 鐘 95 C 15 秒 及 60 C 60 秒 鐘 進 行 40 次 循 環 (Step one Real time PCR system, AB Applied Biosystem) H1Foo 基 因 5 端 調 節 區 報 導 基 因 之 質 體 建 構 豬 隻 H1Foo 基 因 5 端 調 節 區 的 DNA 經 PCR 擴 增 之 產 物 為 1500 bp, DNA 定 序 後 以 電 腦 分 析 軟 體 分 析 cis acting elements 的 位 置, 並 根 據 所 得 重 要 cis acting elements 的 位 置 設 計 引 子, 進 行 PCR 反 應, 以 得 到 1500 及 888 bp 長 短 不 等 之 豬 隻 H1Foo 5 調 節 區 DNA 片 段, 再 將 此 片 段 構 築 於 報 導 質 體 構 築 報 導 質 體 方 法 簡 述 如 下 : 將 商 業 用 表 現 載 體 pgl3-basic 原 有 之 luciferase 報 導 基 因 置 換 成 綠 色 螢 光 蛋 白 報 導 基 因 (GFP), 取 經 限 制 酵 素 處 理 過 之 5 端 調 節 區 的 DNA 與 載 體, 加 入 5 µl 之 2 X ligase buffer, 1 µl T4 DNA ligase(3 U/µl), 加 入 滅 菌 水 至 10 µl, 均 勻 混 合 後, 置 於 4 C 反 應 過 夜 ; 第 2 天 轉 形 至 DH5-α 勝 任 細 胞, 抽 出 質 體, 並 加 以 定 序, 以 確 定 片 段 是 否 正 確 Microinjection DNA 制 備 將 1500 及 888 bp 長 短 不 等 之 豬 隻 H1Foo 5 調 節 區 報 導 基 因 載 體 以 適 當 限 制 酶 酵 素 剪 切 後, 將 其 產 物 以 洋 菜 膠 電 泳 方 式 將 目 標 核 酸 片 段 與 載 體 上 其 他 核 酸 片 段 分 離 後, 將 目 標 核 酸 片 段 連 同 洋 菜 膠 一 同 截 切, 以 膠 上 純 化 之 套 組 回 收 洋 菜 膠 內 目 標 DNA 片 段 後 續 將 此 片 段 進 行 氯 化 銫 密 度 梯 度 超 高 速 離 心, 以 提 高 目 標 核 酸 之 純 度 純 化 後 之 目 標 DNA 回 溶 於 microinjection buffer 中, 放 於 -20 冰 箱 備 用 小 鼠 胚 之 收 集 取 約 6 周 齡 的 ICR 母 鼠 注 射 孕 馬 血 清 激 性 腺 素 (pregnant mare s serum gonadotropin, PMSG), 42~48 小 時 後 注 射 人 類 絨 毛 膜 激 性 腺 素 (human chorionic gonadotropin, HCG), 並 將 其 與 公 鼠 進 行 配 種 配 種 後 隔 天 早 上, 若 在 母 鼠 陰 道 內 發 現 由 公 鼠 精 液 之 膠 質 所 形 成 之 陰 道 栓, 即 可 判 定 母 鼠 已 被 公 鼠 配 上 ; 此 時 將 配 上 之 母 鼠 犧 牲 後, 即 可 由 其 輸 卵 管 得 到 顯 微 注 射 時 須 用 到 之 原 核 期 的 胚 胎 基 因 顯 微 注 射 4
8 將 溶 於 injection buffer 中 之 目 標 核 酸 片 段 注 射 入 原 核 期 的 胚 胎 中, 使 其 有 機 會 鑲 嵌 進 胚 胎 中 原 有 的 基 因 體 序 列 中 結 果 與 討 論 ph1foo 基 因 結 構 藉 由 5'-cDNA 末 端 快 速 擴 增 (rapid amplification of cdna end, 5'-RACE) 技 術, 針 對 源 自 生 發 泡 (germinal vesicle, GV) 階 段 之 豬 卵 母 細 胞 之 總 RNA 樣 品, 透 過 RNA 連 接 酶 仲 介 (RNA ligase mediate, RLM) 策 略, 再 參 考 本 研 究 團 隊 先 前 業 經 建 立 豬 早 期 胚 表 現 序 列 標 籤 序 列 庫 之 資 訊, 完 成 設 計 豬 之 H1Foo (ph1foo) 序 列 之 反 向 引 子, 並 依 其 RNA 寡 核 苷 酸 序 列 設 計 正 向 引 子, 經 由 反 轉 錄 聚 合 酶 連 鎖 反 應 (RT-PCR) 初 步 獲 得 ph1foo 之 cdna 產 物, 再 經 TA cloning 及 定 序, 成 功 選 殖 獲 得 ph1foo 之 5' 端 序 列 ( 圖 一 圖 二 ), 最 後 在 依 據 ph1foo 之 5'- 及 3'- 端 序 列 設 計 引 子, 透 過 RT-PCR 成 功 獲 得 兩 種 不 同 長 度 (1170 bp 及 1215 bp) 之 ph1foo 完 整 cdna, 經 基 因 結 構 分 析 與 定 序 結 果, 證 明 該 二 不 同 長 度 之 ph1foo cdna 產 物, 乃 基 因 轉 錄 後 不 同 選 擇 性 剪 接 (alternative splicing) 所 使 然 ( 圖 三 ) 此 外,pH1Foo 的 胺 基 酸 長 度 與 已 發 表 之 ph1foo 相 比 顯 示 本 研 究 中 所 得 之 胺 基 酸 序 列 較 原 已 知 之 序 列 多 五 個 胺 基 酸, 此 五 個 胺 基 酸 位 於 蛋 白 質 N 端, 與 其 他 動 物 H1Foo 胺 基 酸 序 列 相 比 顯 示 豬 ph1foo 和 其 他 物 種 ( 人 鼠 牛 ) 的 H1Foo 有 很 大 的 差 異 性 ( 表 一 ) ph1foo 蛋 白 質 在 細 胞 的 表 現 將 在 研 究 計 畫 中 所 得 之 H1Foo cdna 基 因 片 段 以 PCR 之 方 式 放 大 並 將 其 放 入 可 在 真 核 生 物 中 表 現 外 來 蛋 白 質 的 pegfp 質 體 中 ( 圖 四 ), 其 中 具 有 H1Foo 基 因 片 段 並 含 有 終 止 密 碼 的 在 質 體 建 構 完 成 後, 稱 為 pegfph1foo, 此 質 體 於 宿 主 細 胞 中 僅 可 表 現 H1Foo 蛋 白 質 另 一 質 體 的 建 構 則 是 將 H1Foo 基 因 片 段 的 終 止 密 碼 去 除, 質 體 建 構 完 成 後 稱 為 pegfph1foo-2, 此 質 體 可 在 細 胞 中 表 現 出 H1Foo 蛋 白 與 綠 色 螢 光 蛋 白 之 融 合 蛋 白 ( 圖 五 ) 將 pegfph1foo-2 轉 染 至 PEC 中, 以 螢 光 顯 微 鏡 觀 察, 結 果 顯 示 H1Foo 蛋 白 與 綠 色 螢 光 蛋 白 之 融 合 蛋 白 出 現 在 細 胞 核 中, 反 之, 轉 染 pegfp 之 PEC 不 僅 可 在 細 胞 核 內 且 細 胞 質 也 可 觀 察 到 綠 色 螢 光 蛋 白 此 結 果 顯 示 ph1foo 蛋 白 和 其 他 組 蛋 白 (histone) 一 樣 只 存 在 於 細 胞 核 ( 圖 七 ), 與 細 胞 核 中 DNA 結 合 此 外, 進 一 步 以 共 軛 焦 顯 微 鏡 觀 察, 顯 示 代 表 H1Foo 蛋 白 質 的 綠 色 螢 光 在 細 胞 核 的 分 布 與 DAPI 染 色 分 布 完 全 一 致 ( 圖 八 ), 顯 示 H1Foo 蛋 白 質 在 細 胞 核 中 直 接 與 DNA 結 合 表 現 ph1foo 蛋 白 質 對 豬 內 皮 細 胞 (PEC) 基 因 表 現 的 影 響 以 未 轉 染 PEC 為 對 照 組, 轉 染 pegfph1foo 並 經 過 G418 抗 生 素 篩 選 過 後 之 PEC 為 處 理 組, 以 Real-time PCR 分 析 oct4,sox2,nanog,c-myc 等 基 因 的 表 現 量 分 析 結 果 顯 示, 處 理 組 其 oct4 表 現 量 約 為 對 照 組 的 1.5 倍,sox2 為 7 倍,nanog 將 近 30 倍,c-myc 則 為 4 倍 ( 圖 六 ) 前 人 研 究 報 告 指 出 轉 染 此 四 個 5
9 基 因 於 成 熟 體 細 胞 可 誘 發 細 胞 reprograming 而 成 為 誘 發 性 多 能 幹 細 胞 (ipsc), 因 此 H1foo 蛋 白 質 基 因 的 表 現 可 能 和 DNA remodeling 有 關 進 而 影 響 到 細 胞 的 reprograming ph1foo 基 因 5 端 調 節 區 報 導 基 因 在 小 鼠 胚 之 表 現 分 別 以 1500 bp 及 888 bp ph1foo 基 因 5 端 調 節 區 報 導 基 因 以 顯 微 注 射 的 方 式 打 入 一 細 胞 期 的 小 鼠 胚, 探 討 H1Foo 基 因 在 不 同 胚 時 期 的 表 現 實 驗 結 果 顯 示 不 論 是 1500 bp 或 888 bp ph1foo 基 因 5 端 調 節 區 均 無 法 在 鼠 胚 中 誘 發 報 導 基 因 的 表 現 ( 圖 九 ), 此 結 果 顯 示 H1Foo 基 因 調 節 在 不 同 物 種 中 有 很 大 的 不 同 結 論 本 研 究 成 功 藉 cdna 末 端 快 速 擴 增 技 術 獲 得 正 確 之 豬 H1Foo 基 因 序 列, 並 發 現 H1Foo 蛋 白 質 比 其 他 文 獻 報 導 多 五 個 胺 基 酸 在 PEC 內 表 現 H1Foo 蛋 白 質 顯 示 可 影 響 oct4,sox2,nanog 及 c-myc 等 幹 細 胞 reprograming 相 關 基 因 之 表 現 量 而 以 H1Foo 及 綠 色 螢 光 蛋 白 之 融 合 蛋 白 顯 示 H1Foo 蛋 白 質 表 現 於 細 胞 核 中 ; 另, 利 用 胚 顯 微 注 射 技 術, 注 入 有 H1Foo 不 同 片 段 長 度 之 啟 動 子 序 列 報 導 基 因 之 小 鼠 胚, 觀 察 報 導 基 因 在 早 期 小 鼠 胚 胎 發 育 期 的 調 控, 結 果 顯 示 不 同 物 種 此 基 因 調 控 機 制 不 同 計 畫 成 果 自 評 本 研 究 順 利 完 成 豬 隻 H1Foo 基 因 的 選 殖 及 功 能 探 討, 將 有 助 於 了 解 豬 胚 中 此 基 因 表 現 調 節 及 功 能 的, 符 合 預 期 參 考 文 獻 [1] Baake, M, M Bäuerle, D Doenecke, and W Albig Core histones and linker histones are imported into the nucleus by different pathways. Eur. J. Cell Biol. 80: [2] Wiśniewski, JR, A Zougman, S Krüger, and M Mann Mass spectrometric mapping of linker histone H1 variants reveals multiple acetylations, methylations, and phosphorylation as well as differences between cell culture and tissue. Mol. Cell Proteomics 6: [3] Tanaka, M, JD Hennebold, J Macfarlane, and EY Adashi A mammalian oocyte-specific linker histone gene H1oo: homology with the genes for the oocyte-specific cleavage stage histone (cs-h1) of sea urchin and the B4/H1M histone of the frog. Development 128: [4] Tanaka, Y, S Kato, M Tanaka, N Kuji, and Y Yoshimura Structure and expression of the human oocyte-specific histone H1 gene elucidated by direct RT-nested PCR of a single oocyte. Biochem Biophys Res. Commun. 304: [5] McGraw, S, C Vigneault, K Tremblay, and MA Sirard Characterization of linker histone H1FOO during bovine in vitro embryo development. Mol. Reprod. Dev. 73:
10 [6] Fan, Y., T. Nikitina, E.M. Morin-Kensicki, J. Zhao, T.R. Magnuson, C.L. Woodcock, and A.I. Skoultchi H1 linker histones are essential for mouse development and affect nucleosome spacing in vivo. Mol. Cell. Biol. 23: [7] Teranishi, T, M Tanaka, S Kimoto, Y Ono, K Miyakoshi, T Kono, and Y Yoshimura Rapid replacement of somatic linker histones with the oocyte-specific linker histone H1foo. Dev. Biol. 266: [8] Telford, N.A., A.J. Watson, and G.A. Schultz Transition frommaternal to embryonic control in early mammalian development: A comparison of several species. Mol. Reprod. Dev. 26:
11 圖 一 5'-cDNA 末 端 快 速 擴 增 H1Foo 結 果 圖 二 5'-cDNA 末 端 快 速 擴 增 之 正 確 性 確 認 8
12 圖 三 H1Foo 於 不 同 物 種 之 基 因 組 分 佈 圖 表 一 ph1foo 蛋 白 質 以 二 序 列 比 對 (pairwise sequence alignment) 所 得 之 結 果 9
13 圖 四 分 別 以 本 實 驗 與 GeneBank 所 預 測 之 pig H1Foo 全 長 序 列 所 設 計 之 引 子 測 試 GV 階 段 卵 母 細 胞 所 表 現 之 H1Foo 基 因,Mr, 100 bp DNA marker;1, pig β-actin;2, 本 實 驗 所 預 測 之 H1Foo 全 長 序 列 ; 3,GenBank (XM_ ) 所 預 測 之 全 長 序 列 圖 五 pegfph1foo 與 pegfph1foo-2 之 質 體 構 圖 (A) pegfph1foo, 其 可 於 真 核 細 胞 內 表 現 H1Foo 蛋 白 質,(B) pegfph1foo-2, 其 可 於 真 核 細 胞 內 表 現 H1Foo 與 EGFP 融 合 蛋 白 10
14 圖六 PEC 與轉染 pegfph1foo 後 PEC 其 oct4 sox2 nanog 及 c-myc 等基因之表現量比較 圖七 pegfph1foo-2及pegfp分別轉染至pec內並於uv顯微鏡光下觀察 (A)PEC 轉染 pegfph1foo-2 (B) PEC 轉染 pegfp 11
15 A B C 圖八 pegfph1foo-2 轉染至 PEC 內並以共軛焦顯微鏡觀察 A: pegfph1foo-2 轉染至 PEC B: DAPI 染色圖 C: A 圖及 B 圖重疊照 12
16 A B 圖九 ph1foo 基因 5 端調節區 GFP 報導基因在小鼠胚之表現 A: 含 1500 bp ph1foo 基因 5 端調節區 GFP 報導基因在小鼠胚之表現 左圖 明視鏡 右圖 螢光鏡 B: 含 800 bp ph1foo 基因 5 端調節區 GFP 報導基因在小鼠胚之表現 左圖 明視鏡 右圖 螢光鏡 13
标题
吉林农业大学学报 ２０１６ ３８ １ ８７ ９１ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｊｉｌｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｈｔｔｐ ｘｕｅｂａｏ ｊｌａｕ ｅｄｕ ｃｎ Ｅ ｍａｉｌ ｊｌｎｄｘｂ ｖｉｐ ｓｉｎａ ｃｏｍ 神 经 生 长 因 子 ｍｒｎａ 在 鹅 等 级 前 卵 泡 中 的 表达 刘璐璐 隋玉健 朱海洋 武惠岩 杨 辉 孙永峰 吉林农业大学动物科学技术学院 长春 １３０１１８
2004级研究生现代免疫学实验技术结业报告
PCR PCR PCR RT-PCR PCR (Polymerase Chain Reaction,PCR) 80 DNA, DNA PCR PCR PCR DNA PCR -- -- DNA DNA 93 DNA PCR DNA DNA ( ) DNA 55 DNA DNA -- TaqDNA dntp DNA -- -- PCR PCR DNA DNA Y (1 X) n Y DNA X (Y)
荧光定量PCR
荧 光 定 量 PCR 荧 光 定 量 PCR 原 理 荧 光 定 量 PCR 最 早 称 TaqMan PCR, 后 来 也 叫 Real-Time PCR, 是 美 国 PE(Perkin Elmer) 公 司 1995 年 研 制 出 来 的 一 种 新 的 核 酸 定 量 技 术 该 技 术 是 在 常 规 PCR 基 础 上 加 入 荧 光 标 记 探 针 或 相 应 的 荧 光 染 料
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Primer3 http://frodowimitedu/cgi-bin/primer3/primer3_wwwcgi Primer5 Oligo665 Primer5 http://wwwbioonnet/dispbbsasp?boardid=25&id=38536 Oligo667 http://wwwbioonnet/dispbbsasp?boardid=25&id=40898 1 PCR 1
（精校版）陕西省语文卷文档版（含答案）-2011年普通高等学校招生统一考试.doc
绝 密 启 封 前 2015 年 普 通 高 等 学 校 招 生 全 国 统 一 考 试 生 物 试 题 ( 江 苏 卷 ) 一 单 项 选 择 题 : 本 部 分 包 括 20 题, 每 题 2 分, 共 计 40 分 1. 下 列 关 于 淀 粉 脂 肪 蛋 白 质 和 核 酸 4 种 生 物 分 子 的 叙 述, 正 确 的 是 ( ) A. 都 能 被 相 应 的 酶 水 解 B. 都 是
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第 六 章 从 细 胞 到 个 体 第 七 章 生 物 的 发 育 第 一 节 生 殖 细 胞 的 形 成 与 受 精 作 用 第 二 节 胚 胎 发 育 过 程 第 三 节 发 育 的 分 子 机 制 生 物 的 生 活 周 期 : 世 代 交 替 (alteration generations): 多 细 胞 生 物 体 的 生 活 史 中, 存 在 双 倍 体 细 胞 和 单 倍 体 细 胞
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性 别 控 制 是 一 项 历 史 悠 久 而 又 朝 气 蓬 勃 的 生 物 技 术 最 早 可 追 溯 到 2500 年 前 古 希 腊 德 谟 克 利 特, 在 20 世 纪, 随 着 孟 德 尔 遗 传 理 论 的 重 新 确 立, 人 们 提 出 性 别 由 染 色 体 决 定 的 理 论
动 物 性 别 控 制 技 术 的 研 究 进 展 李 桂 钊 动 科 1071 [ 摘 要 ] 目 前 在 畜 牧 业 生 产 中 的 性 别 控 制 主 要 是 通 过 XY 精 子 分 离 和 早 期 胚 胎 性 别 鉴 定 来 实 现 的, 人 为 控 制 出 生 家 畜 的 性 别 可 以 降 低 生 产 成 本, 提 高 经 济 效 益 随 着 科 技 的 进 步 和 研 究 的 不 断
2 3 4 5 22 22 23 25 35 38 39 45 46 1
97017626 O O 2 3 4 5 22 22 23 25 35 38 39 45 46 1 intrauterine insemination IUI 202 IUI a 24 IUI b 24 IUI c hcg 36 IUI d hcg 24 48 IUI 202 262 30 2 1 27 1 14.9% 11.5% a 122 151 13.9%, 11.3% b 42 46 2.38%,
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动 物 学 研 究 2008,Aug. 29(4):368-372 CN 53-1040/Q ISSN 0254-5853 Zoological Research doi:10.3724/sp.j.1141.2008.04368 利 用 修 饰 的 随 机 引 物 构 建 非 洲 爪 蟾 酵 母 双 杂 交 定 向 cdna 文 库 武 景 阳 1,2, 李 朝 翠 1, 孔 清 华 1,2, 毛
一步一步教你使用NCBI
查 找 DNA mrna cdna Protein promoter 引 物 设 计 BLAST 序 列 比 对 等 作 者 :urbest 2007-8-1 苏 州 大 学 生 命 科 学 学 院 最 近 看 到 很 多 战 友 在 论 坛 上 询 问 如 何 查 询 基 因 序 列 如 何 进 行 引 物 设 计 如 何 使 用 BLAST 进 行 序 列 比 对, 这 些 问 题 在 NCBI
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全 球 科 技 革 命 生 化 科 技 之 衝 擊 劉 承 揚 http://mail.tku.edu.tw/cyliu/ 生 化 科 技 之 衝 擊 基 因 解 碼 基 因 工 程 的 產 物 基 因 療 法 微 生 物 與 複 製 人 奈 米 生 醫 技 術 晶 片 科 技 生 化 科 技 的 衝 擊 1 細 胞 典 型 動 物 細 胞 中 各 個 胞 器 :⑴ 核 仁 ;⑵ 細 胞 核 ;⑶
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中 国 农 业 大 学 学 报 1999, 4(3): 109~113 Journal of China Agricultural University 小 鼠 桑 棍 胚 玻 璃 化 冷 冻 前 后 生 物 频 谱 处 理 对 体 外 发 青 的 影 晌 1 朱 士 恩 2 王 海 彦 曾 申 明 王 永 胜 张 忠 诚 ( 中 国 农 业 大 学 动 物 科 技 学 院 ) 周 林 陈 银 (
绎 阴 元元 510515 Caco-2 Caco-2 P 摘要
中 華 民 國 第 五 十 一 屆 中 小 學 科 學 展 覽 會 作 品 說 明 書 科 別 : 生 物 科 組 別 : 高 中 組 作 品 名 稱 : 不 給 糖 就 搗 蛋 - 蛀 牙 細 菌 的 抑 制 關 鍵 詞 :Bacillus horikoshii 轉 糖 鏈 球 菌 蛀 牙 編 號 : 摘 要 : 本 實 驗 的 目 的 是 希 望 能 找 出 人 類 牙 齒 上 的 主 要 菌
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裂 不 1 女 女 不 sol-sol-sol-mi 令 不 女 不 念 力 沈 異 諾 不 來 倫理 律 兩 Paganini 靈 不 來 了 靈 羅 靈 1 年 62 1 2 La campanella 律 若 說 3 不理 2 說 女 律 理 不 不 了 不 類 律 類 理 歷 3 1860 年 chromosome 葉 1944 年 DNA 良 了 類 2 1 40 3 理 錄 諾 年 4
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医 学 科 研 方 法 主 讲 苏 秀 兰 细 胞 生 物 学 教 授 第 一 讲 绪 论 一 概 念 : 在 医 学 科 学 研 究 活 动 中, 运 用 科 学 的 实 践 和 理 论 思 维 的 技 巧, 充 分 发 挥 自 己 的 智 慧, 去 寻 找 观 念 世 界 与 现 实 世 界 之 间 的 联 系 或 规 律, 从 而 发 现 新 现 象, 提 出 新 理 论 的 手 段 二 医
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2010 Q4 SPL
CELL CULTURE 系列 Flask 系列 25 T 70125 5/200 75T 70175 5/100 175T 72175 5/40 25 T, filter 70025 5/200 75 T, filter 70075 5/100 175 T, Filter 71175 5/40 Cell culture dish 系列 3.5 cm dish 20035 10/500 6 cm dish
100學年度私立醫學校院聯合招考轉學生考試
本 試 題 共 5 頁 : 第 1 頁 注 意 事 項 一 本 試 題 共 50 題, 皆 為 單 選 題, 請 選 擇 最 適 當 選 項, 每 題 2 分, 共 計 100 分, 每 題 答 錯 倒 扣 0.7 分 ; 不 作 答 不 計 分 二 答 題 依 題 號 順 序 畫 記 在 答 案 卡 上, 寫 在 試 題 紙 上 無 效 ; 答 案 卡 限 用 2B 鉛 筆 畫 記, 若 未 按
标题
环 球 中 医 药 2016 年 5 月 第 9 卷 第 5 期 摇 Global Traditional Chinese Medicine, May 2016,Vol 郾 9, No 郾 5 摇 557 两 种 电 针 对 脊 髓 损 伤 14 天 后 大 鼠 运 动 功 能 神 经 元 及 MEK2 p 鄄 ERK1 表 达 的 影 响 论 著 宋 良 玉 摇 吕 威 摇 景 泉 凯 摇 莫 雨
368 detected by Western blot expressed at all phases. The p21 protein was expressed in a few cells by immunohistochemistry, but p21 could not detected
367 (human lens epithelial cells, HLEC) E (cyclin dependent kinase 2, CDK 2 ) (cyclin2 dependent2kinase inhibitor, CKI) p21, HLEC (posterior capsule opacification, PCO) HLEC HLE2B3, ; ; RNA (reverse transcription
626 139 genotype phenotype
thalassemia Watson Crick 1953 neucleic acid 3 10 9 46 mitochondria Mckusick 2208 2136 4344 1988 2208 1433 626 139 genotype phenotype peptide chain 1 2 2 HbA 2 HbA2 thalassemia (1) (2) (3) (4) MCV mean
内 蒙 古 自 然 科 学 基 金 (2011 ) 版 填 报 说 明 一 内 蒙 古 自 治 区 自 然 科 学 基 金 项 目 采 取 网 上 申 报 与 书 面 填 报 并 行 的 方 式, 要 求 网 上 提 交 文 档 与 上 报 纸 质 文 档 具 有 相 同 的 版 本 号 二 自 然
解 除 保 护 项 受 面 目 理 上 类 日 别 期 K 申 医 报 学 学 科 A-PDF WORD TO PDF DEMO: Purchase from www.a-pdf.com to remove the watermark 内 蒙 古 自 治 区 自 然 科 学 基 金 申 请 书 编 号 项 目 名 称 : 联 合 检 测 血 清 抗 心 磷 脂 抗 体 孕 酮 雌 二 醇 及 β-hcg
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2005 Experimental Study about the Effects of the Bone Cement leakage on the Intervertebral Disc in Vertebroplasty () 2005 4 - I - - II - Experimental Study about the Effects of the Bone Cement leakage
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論 : 類 90028 老 寧 : 量 力 狀 力 降 了 力 便 料 不 不 立 不 利 療 了 不 度 狀 不 度 類 狀 up regulate TLR 類 : 葉 Discorea yam 來 神 1 益 益 精 列 料 料 兩 類 1. 來 殺 2. 淋 識 力 B APC macrophage monocyte immature dendritic cell idc 淋 2 Dendritic
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談 鈣 在 人 體 內 的 吸 收 與 代 謝 林 文 彬 林 園 中 醫 診 所 TEL:02-29609611 FAX:02-29694268 E-mail:lin5400@ms19.hinet.net 通 訊 處 : 板 橋 市 林 園 街 24 號 摘 要 成 年 人 骨 含 鈣 量 約 爲 1180g, 鈣 在 人 體 組 織 的 代 謝 過 程 中 主 要 受 副 甲 狀 腺 素 腎 上
Key words: Qi-diffciency syndrome, Cyclophosphamide, Codonopsis pilosula, Shenlinbaizhu Powder, Biochemical study CTX CTX RT-PCR CTX
2002207202 CTX 1 2 CTX 10mg/ml 0.2ml/ /d,2d 1 2 RT-PCR 1 2 1 2 P>0.05) RT-PCR CTX CTX A study on symptom model induced by Cyclophosphamide in mice Effects of Codonopsis pilosula (Dangshen) and Shenlinbaizhu
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年 老 力 類 理 理 行 年 度 易 行 便 念 更 裡 數 不 老 行 理 類 年 了 4 1 年 率 連 葉 令 令 葉 糖 流 4 2 年 老 不 了 歷 年 ~ 年 論 年 了 異 念 不 易 類 類 林 濾 流 理 不 年 年 數 ~ 年 數 ~ 量 年 年 年 年 年 六 理 年 年 類 年 年 年 年 異 年 年 來 念 不 讀 老 不 論 率 理 4 3 年 列 濾 刺 度 濾 刺
第16卷 第2期 邯郸学院学报 2006年6月
第 18 卷 第 4 期 邯 郸 学 院 学 报 2008 年 12 月 Vol.18 No.4 Journal of Handan College Dec. 2008 赵 文 化 研 究 论 赵 都 邯 郸 与 赵 国 都 城 研 究 问 题 朱 士 光 ( 陕 西 师 范 大 学 历 史 地 理 研 究 所, 陕 西 西 安 710062) 摘 要 : 战 国 七 雄 之 一 的 赵 国 都 城
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Syngene GBOXHR Retsch MM400 KQ DE Eppendorf Table 1 The sources of Astragali Radix and Hedysarum Radix No. 1 AMM2011_NMGTY Astr
PCR 龙平, 崔占虎, 李虔全, 徐建平, 张春红, 周立社 * *, 李旻辉 ( 包头医学院, 内蒙古包头 014060) DNA 30 28 DNA trnl-trnf PCR PCR 136 bp 323 bp 10% PCR PCR Astragalus membranaceus Fisch. Bge. var. mongho- licus Bge. Hsiao A. membranaceus
1269 malondialdehyde (MDA) were significantly decreased, while oxygen partial pressure (PaO 2 ), ph value, superoxide dismutase (SOD) and glutathione
1268 维 生 素 A 联 合 牛 肺 表 面 活 性 物 质 治 疗 新 生 儿 呼 吸 窘 迫 综 合 征 的 临 床 研 究 朱 琼 1, 陈 小 利 2, 叶 华 2 1. 重 庆 市 合 川 区 妇 幼 保 健 计 划 生 育 服 务 中 心 儿 科, 重 庆 401520 2. 重 庆 市 合 川 区 妇 幼 保 健 计 划 生 育 服 务 中 心 内 儿 科, 重 庆 401520
SDS 1.3
Applied Biosystems 7300 Real-Time PCR System (With RQ Study) SDS 1.3 I. ~ I. 1. : Dell GX280 2.8GHz with Dell 17 Flat monitor 256 MB RAM 40 GB hard drive DVD-RW drive Microsoft Windows XP Operating System
Hyperimmune blood (Table 1) Hamster-to-rat (Table 2) anti-hamster antibody anti-idiotypic antibody Hyperimmune Hepatocyte transfection to donor antige
Hyperimmune blood (Table 1) Hamster-to-rat (Table 2) anti-hamster antibody anti-idiotypic antibody Hyperimmune Hepatocyte transfection to donor antigen (Table 3) CsA 2.5 5 10mg/kg/day CsA 10 mg/kg/day
g kg - 1 decoction respectively 10 ml kg - 1 once a day for 10 weeks during making model. After 10 weeks according to the method of
19 7 LDL-C LDL-R 谢慧臣 1, 刘芬 1*, 田春漫 1, 向靖 2 2, 杨强 ( 1. 湖北民族学院医学院中西医结合教研室, 湖北恩施 445000; 2. 湖北民族学院医学院附属医院中西医结合科, 湖北恩施 445000) LDL LDL-R Wistar 60 7. 2 10-4 g kg - 1 0. 25 0. 5 1. 0 g kg - 1 10 1 10 10 LDL
3 461 DNA lx PDV PDV 2 10% ~ 15% PDV PDV 1 PDV PDV PDV Tagashira PDV d 5 Co
Chinese Bulletin of Entomology 2010 47 3 460 ~ 466 檻檻 檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻 * 450002 Parasitic effects on host Plutella xylostella testes by two endoparasitoids. HE Fan BAI Su-Fen LI Xin CHAO Yun-Fei College of
Supplemental information Exome sequencing identifies truncating mutations in the PRRT2 gene that cause paroxysmal kinesigenic dyskinesia Wan-Jin Chen
Supplemental information Exome sequencing identifies truncating mutations in the PRR gene that cause paroxysmal kinesigenic dyskinesia Wan-Jin hen,, Yu Lin, Zhi-Qi Xiong 3, Wei Wei, Wang Ni,, uo-he an
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梽 / 8 min min doi:.8/wst... R8. [ ] [ ] [] [6] [7] [8] [9~] [ ] [] min t /. min [] 元元元 --9 --7 ZX9-- BLP. ICR ~8 g SCXK -. nanas comosus L. Bolo Leaf Phenols BLP p - coumaric cid.% 巿
, GC/MS ph GC/MS I
S00017052 O O , GC/MS ph GC/MS I Abstract Drug abuse is a serious issue throughout the world. Amphetamine-type stimulants (ATS) are substances frequently used by drug abusers. There are significant needs
% 8. 48% 3 80 Alcalase Novozymes Alcalase 2. 4 L Bacillus licheniformis 2. 4 AU /g 1. 2 Hitachi S-4700 JEOL JEM-1200EX Olympus Bu
2011 33 6 1117-1121 http / /xuebao. jxau. edu. cn Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis E - mail ndxb7775@ sina. com * 311400 Alcalase 2. 4 L TS225. 1 + 6 A 1000-2286 2011 06-1117 - 05 A Study on
240 生 异 性 相 吸 的 异 性 效 应 [6] 虽 然, 心 理 学 基 础 研 [7-8] 究 已 经 证 实 存 在 异 性 相 吸 异 性 相 吸 是 否 存 在 于 名 字 认 知 识 别 尚 无 报 道 本 实 验 选 取 不 同 性 别 的 名 字 作 为 刺 激 材 料, 通
![240 生 异 性 相 吸 的 异 性 效 应 [6] 虽 然, 心 理 学 基 础 研 [7-8] 究 已 经 证 实 存 在 异 性 相 吸 异 性 相 吸 是 否 存 在 于 名 字 认 知 识 别 尚 无 报 道 本 实 验 选 取 不 同 性 别 的 名 字 作 为 刺 激 材 料, 通](/thumbs/42/22943812.jpg "240 生 异 性 相 吸 的 异 性 效 应 [6] 虽 然, 心 理 学 基 础 研 [7-8] 究 已 经 证 实 存 在 异 性 相 吸 异 性 相 吸 是 否 存 在 于 名 字 认 知 识 别 尚 无 报 道 本 实 验 选 取 不 同 性 别 的 名 字 作 为 刺 激 材 料, 通")
2011 年 Journal of Capital Medical University 4月 第2 期 Apr 2011 Vol 32 No 2 基础研究 doi: 10 3969 / j issn 1006-7795 2011 02 015 人脑识别不同性别名字反应时的差异研究 高迎霄 陈昭燃 * 张明霞 ( 首都医科大学神经生物系高级脑功能中心) 摘要 目的 探讨男女对不同性别名字认知加工速度是否存在差异
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南 華 大 學 生 死 學 研 究 所 碩 士 論 文 屏 東 地 區 孕 婦 實 施 胎 教 的 經 驗 歷 程 之 探 討 An Enquiry into Pregnant Women s Pre-natal Training Experiences at Pintung Area 研 究 生 : 莊 秀 全 撰 指 導 教 授 : 許 秀 月 博 士 中 華 民 國 九 十 四 年 十 二 月
2 1. (a Unit of Inheritace) RNA DNA 2. (Nature of gene) heredity heredity & variation variation
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2006中國文學研究範本檔
中 國 文 學 研 究 第 三 十 九 期 2015 年 01 月 頁 223~258 臺 灣 大 學 中 國 文 學 研 究 所 由 心 到 腦 從 腦 的 語 義 脈 絡 論 晚 清 民 初 的 文 化 轉 型 * 徐 瑞 鴻 提 要 傳 統 的 中 醫 理 論 以 心 為 神 明 之 主, 掌 管 思 維 記 憶 與 情 感, 此 一 觀 點 在 近 現 代 受 到 西 方 解 剖 學 的 巨
2 cdna ~ Bt ~ Zhao 1. 2 CrylC 3l 8 Bt First-Strand Synthesis System Invitrogen Bt 9 ~ 11 PCR DNA N Invitrogen peasy-t1 aminopept
Chinese Bulletin of Entomology 2010 47 2 270 ~ 274 檻檻 檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻 cdna * 1 2 1 2 2 2 1. 410128 2. 100081 Cloning and sequence analysis of alkaline phosphatase gene in the diamondback mothplutella xylostella.
4期
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斑马鱼研究报告
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Invitrogen 1.4 pet-gr, ICE-LGR, PCR TA, pmd18-t/gr pet-21a(+) (Nde I Xho I), E. coli DH-5,,,, pet-gr GR ORF cdna, GR, : PU: 5 -GGAATTCCAT
42 6 Vol.42, No.6 2011 11 OCEANOLOGIA ET LIMNOLOGIA SINICA Nov., 2011 南极衣藻 (Chlamydomonas sp. ICE-L) 谷胱 * 甘肽还原酶基因的原核表达及其条件优化 1 1 燏 1 1 2 (1. 524025; 2. 266061) RT-PCR GR ORF cdna, ; IPTG,, pet-gr BL21,
48 5 ( Pinctada) ( P. fucata ), 3 [ 7 ] ( P. maxima ) ( P. albina), ( P. margaritifera) ( P. nigra) RAPD, ( P. chemnitzi), ( Pteria penguin) [ 1-2 ] [
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5 6 2 00 9 1 2 South China Fisheries Science Vol. 5, No. 6 Dec., 2009 doi: 10. 3969/ j. issn. 1673-2227. 2009. 06. 009 16S rrna,,, (, 510300) : PCR ( Pinctada fucata) ( P. chemnitzi) ( Pteria penguin)
The initial study of F10 gene up-regulated in the hydatidiform mole 510515 The initial study F10 gene up-regulated in the hydatidiform mole 3047065830672234 I II PCR; PCR; III IV ; F10 ; NF-κB; AP 1
(Microsoft Word - 001\253\312\255\261.doc)
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01-0982.doc
第 32 卷 第 7 期 岩 土 工 程 学 报 Vol.32 No.7 2010 年 7 月 Chinese Journal of Geotechnical Engineering July 2010 沿 海 碎 石 回 填 地 基 上 高 能 级 强 夯 系 列 试 验 对 比 研 究 年 廷 凯 1,2, 水 伟 厚 3, 李 鸿 江 4, 杨 庆 1,2, 王 玉 立 (1. 大 连 理 工
ABSTRACT This research was mainly about the traditional Hakka Ba-Yin music developed in Hsin-Chu area, where the musician Chin-Ho Yeh (1936~ ) played a pivotal role. Some musicians had suggestions about
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i ii Abstract The most important task in human resource management is to encourage and help employees to develop their potential so that they can fully contribute to the organization s goals. The main
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实 时 荧 光 定 量 TPC 检 测 不 同 鸡 种 肉 品 质 相 关 功 能 基 因 AFABP 和 HFABP 的 表 达 屠 云 洁, 高 玉 时, 王 克 华, 陈 宽 维, 窦 套 存, 唐 修 君 中 国 农 业 科 学 院 家 禽 研 究 所 ( 中 国 农 业 科 学 院 家 禽 研 究 所, 扬 州 225003) 摘 要 : 本 研 究 以 如 皋 黄 鸡 和 安 卡 红 鸡
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MTT cell viability assay 1 [45] succinate dehydrogenase MTT Kreb s cycle 2 MTT 3-[4,5-Dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide DMSO 570 nm 15 3 MTT solution MTT Sigma Cat. M-2128 ( PBS ) 5
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I...1...3...6...7...12...13...13 7700...16...16...19...24...24...28...32...36...39...41...45...45...52...53...53...54...59 II...61...63...64...66...68...70 DNA 50...71...75 ----...75...76...78...80...81...83...85...86...88...91
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103 學 年 度 技 術 校 院 四 年 制 與 專 科 學 校 二 年 制 統 一 入 學 測 驗 衛 生 與 護 理 類 ( 專 一 ) 試 題 試 題 分 析 : 今 年 衛 護 類 專 一 ( 基 礎 生 物 ) 部 分, 考 題 概 念 簡 單, 選 項 敘 述 也 不 繁 瑣, 且 大 部 分 皆 為 考 古 題 相 關 概 念, 要 拿 高 分 甚 至 滿 分 都 不 是 太 困 難
High-Throughput Protein Production and Functional Screening Although recombinant technologies are well developed, there remain many intrinsic limitati
CellFree Sciences Co., Ltd. 75-1, Ono-cho, Leading Venture Plaza 201, Tsurumiku,Yokohama, 230-0046 JAPAN Japan TEL +81-45-500-2115 USA: +1-408-834-8626 www.cfsciences.com Technology Application Note: High-Throughput
中 药 混 悬 型 乳 房 注 射 剂 ( 吉 林 大 学 实 验 室 自 制 ), 批 号 45; 注 射 用 生 理 盐 水 ( 长 春 豪 邦 药 业 有 限 公 司 生 产 ), 批 号 为 4;,4 二 硝 基 氯 苯 ( 石 家 庄 莫 高 化 学 试 剂 有 限 公 司 ), 批 号
第 8 卷 第 期 期 年 月 Journal of Heilongjiang Bayi Agricultural University 8():9~4 Feb. doi:.99/j.issn.9...5 治 疗 奶 牛 乳 房 炎 中 药 混 悬 型 注 射 剂 安 全 性 试 验 李 诗 莹, 邹 晓, 许 启 有, 刘 瑶, 付 世 新 ( 黑 龙 江 八 一 农 垦 大 学 动 物 科 技
Gene Diagnosis E-mail: haiyanhuang@shmu.edu.cn Central Dogma of Biology Disease Definition of Gene Diagnosis Analysis of DNA and RNA in order to detect heritable disease-related genotypes, mutations,
SARS-CoV 1-3 RNA HCoV-229E 1 HCoV-OC SARS-CoV 5 [rep] [S] [E] [M] [N] 3 rep 2/3 rep 4 S E M N 1 SARS GenBank 16 2 IBV IBV BCK 4 BCo
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* 100850 2003 3 SARS-CoV 2002 Severe Acute Respiratory Syndrome SARS SARS-CoV SARS-CoV 5 S E M N SARS-CoV SARS-CoV IBV TGV IBV E M SARS Severe Acute Respiratory Syndrome 2002 * 30080017,30270315 1 2003
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中 国 环 境 科 学 2012,32(5):933~941 China Environmental Science 系 统 动 力 学 在 空 港 区 域 规 划 环 境 影 响 评 价 中 的 应 用 刘 慧 1,2, 郭 怀 成 1*, 盛 虎 1, 都 小 尚 1,3, 李 娜 1 1, 杨 永 辉 (1. 北 京 大 学 环 境 科 学 与 工 程 学 院, 北 京 100871; 2.
10384 200326107 UDC Cloning and Expression of Genes from Venom Gland of Bungarus multicinctus 2006 7 1 2 V 1 1 2 C 4 α- P22-A31 0 11 1 11 2 11 13 α- 13 2 α- 14 3 α- 15 4 α- 15 17 α cdna 21 1 21 2 23 24
标题
Vol. 36 高 等 学 校 化 学 学 报 No. 5 2015 年 5 月 摇 摇 摇 摇 摇 摇 CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 摇 摇 摇 摇 摇 摇 886 ~ 892 摇 摇 doi: 10. 7503 / cjcu20140965 一 种 新 的 混 合 斑 精 子 分 离 方 法 伍 贤 军 1,2, 赵 摇 兵 2, 缪 摇 璇
2008 GUANGDONG WEILIANG YUANSU KEXUE : g/ d a : b : a/ b Ag As Au Cd Ce 1817
2008 GUANGDONG WEILIANG YUANSU KEXUE 15 2 : 1006 2 446X (2008) 02 2 00152 17. (, 201800) :,, ;, : ; ; ; ; : R 15313 : A, () () ( ) () () () [ 1 ],, 1,, ( ) 1996 1997, 4 ( ), 12 42 [ 2 ], (1) 1, 36, 17
2015 Intellectual Sensitive 30 Physical A T G C DNA
2015 Intellectual Sensitive 30 Physical A T G C DNA DNA 7 24 Zemin Ning Kai Ye BIG BIG 1 104 100101 010-84097548 www.big.ac.cn zhouml@big.ac.cn REV1 FANCD2 DNA 6 18 50 聚 焦 70 88 7 22 20 7 3 complex indels
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中 国 农 学 通 报 2014,30(5):23-27 Chinese Agricultural Science Bulletin 大 肠 杆 菌 生 物 膜 的 筛 选 及 生 长 曲 线 测 定 喻 华 英, 李 启 峰 ( 塔 里 木 大 学 动 物 科 学 学 院, 新 疆 阿 拉 尔 843300) 摘 要 : 为 探 究 犊 牛 腹 泻 病 中 大 肠 杆 菌 生 物 膜 的 形 成
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農 業 群 專 業 科 目 ( 二 ) 1. 有 關 生 命 現 象 之 配 對, 下 列 何 者 錯 誤? (A) 光 合 作 用 - 新 陳 代 謝 (B) 金 蟬 脫 殼 - 繁 殖 (C) 趨 光 性 - 感 應 (D) 狗 急 跳 牆 - 運 動 2. 下 列 何 者 是 膜 狀 構 造 的 胞 器? (A) 粒 線 體 (B) 核 糖 體 (C) 中 心 粒 (D) 染 色 體 3. 下
2010/
Abstract T his paper discusses the composition mutual relationship and changing characteristics of individual family network family and kinship circle family. According to this study individual family
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JOURNAL OF NATIONAL MUSEUM OF CHINA 149
148 A Preliminary Analysis of Bronzes and Ironware Unearthed from Ancient Tombs at Yongzhi Li XiaocenYun Yali He Guihua 11Cu-SnCu-As-Pb AsCu-As-Pb2 Abstract: Deqin county, located in the Hengduan Mountains
化学实验基本操作-加热、干燥和冷却.doc
1 [ ] [ ] 1 2 1 2 3 4 5 6 [ ] 7 2 [ ] [ ] 8 9 10 [ ] 3 [ ] [ ] 1 2-2 11 12 13 14 15 16 17 [ ] g) = 100% 5.0g 18 19 4 [ ] [ ] 20 21 [ ] 22 23 24 25 5 [ ] [ ] 26 27 [ ] - 28 6 [ ] [ ] 29 30 31 32 33 34 2-31
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Yearbook of Chinese Medicine and Pharmacy, 23(6),303-320,2005 中 醫 藥 年 報 第 23 期 第 6 冊 編 號 :CCMP93-CT-107 補 中 益 氣 湯 抑 制 多 種 惡 性 細 胞 腫 瘤 生 長 機 轉 的 體 外 細 胞 與 肺 氣 虛 老 鼠 模 型 之 先 驅 研 究 沈 建 忠 長 庚 大 學 中 醫 系 摘 要
2
ISSN 0255-6162 GPN 2006900031 287 93 11 20 161-2 02 26531318 http://www.nlfd.gov.tw 1 2 3 287 4 287 5 44 93 13 1 monocrotophos 0.40 ppm 105 1300 99% 6 3 44 106 93 13 1 0.40 ppm 403 40 7 DNA (HPLC) DNA
864 现 代 药 物 与 临 床 Drugs & Clinic 第 31 卷 第 6 期 2016 年 6 月 of apoptosis related factors, decrease the incidence of adverse reactions, which is of great
现 代 药 物 与 临 床 Drugs & Clinic 第 31 卷 第 6 期 2016 年 6 月 863 曲 妥 珠 单 抗 联 合 多 西 紫 杉 醇 治 疗 Her-2 阳 性 乳 腺 癌 的 临 床 研 究 * 周 永 安, 刘 训 碧 黄 石 市 中 心 医 院 ( 普 爱 院 区 ) 乳 腺 肿 瘤 外 科, 湖 北 黄 石 435000 摘 要 : 目 的 探 析 注 射 用 曲
CD + 4 CD + 25 T The role of CD + 4 CD + 25 Regulatory T cells in the pathogenesis of vitiligo CD + 4 CD + 25 T The role of CD + 4 CD + 25 Regulatory T cells in the pathogenesis of vitiligo 7000064 2008
witch the old woman red eyes 1 Strega Nona Grandma Witch 2 Strega Nona old woman 132
205 2015. 6 ACADEMICS No. 6 Jun. 2015 100875 The Riddle stepmother wicked arts ill - disposed 131 2015. 6 witch the old woman red eyes 1 Strega Nona Grandma Witch 2 Strega Nona old woman 132 8 5 4 3 3
度 身 體 活 動 量 ; 芬 蘭 幼 兒 呈 現 中 度 身 體 活 動 量 之 比 例 高 於 臺 灣 幼 兒 (5) 幼 兒 在 投 入 度 方 面 亦 達 顯 著 差 異 (χ²=185.35, p <.001), 芬 蘭 與 臺 灣 幼 兒 多 半 表 現 出 中 度 投 入 與 高 度
臺 灣 與 芬 蘭 幼 兒 園 室 內 自 由 遊 戲 內 涵 之 探 討 林 昭 溶 毛 萬 儀 經 國 管 理 暨 健 康 學 院 幼 兒 保 育 系 副 教 授 joyce@ems.cku.edu.tw 吳 敏 而 國 家 教 育 研 究 院 研 究 員 rozwu@mail.naer.edu.tw wanyi@ems.cku.edu.tw 摘 要 自 由 遊 戲 被 視 為 是 幼 兒 的
OncidiumGower Ramsey ) 2 1(CK1) 2(CK2) 1(T1) 2(T2) ( ) CK1 43 (A 44.2 ) CK2 66 (A 48.5 ) T1 40 (
35 1 2006 48 35-46 OncidiumGower Ramsey ) 2 1(CK1) 2(CK2) 1(T1) 2(T2) (93 5 28 95 1 9 ) 94 1-2 5-6 8-10 94 7 CK1 43 (A 44.2 ) CK2 66 (A 48.5 ) T1 40 (A 47.5 ) T2 73 (A 46.6 ) 3 CK2 T1 T2 CK1 2006 8 16
黑面琵鷺2015
PG10402-0124 104-01-01 104 年 度 台 江 國 家 公 園 黑 面 琵 鷺 族 群 生 態 研 究 及 其 棲 地 經 營 管 理 計 畫 台 江 國 家 公 園 管 理 處 委 託 研 究 報 告 (104 年 ) ( 本 報 告 內 容 及 建 議, 純 屬 研 究 小 組 意 見, 不 代 表 本 機 關 意 見 ) 中 華 民 國 104 年 12 月 PG10402-0124
20 2 CJITWN November. 2 No. 959 not markedly changed in two treatment groups in this experiment. 3. It is possible that addition an subtraction of Fan
958 20 2 CJITWN November 20 Vol. 2 No. * MCP - - MCP - AIN SD 4 + A - + B ADR 6. 5 mg /kg 2 24 h > 00 mg A B + - + 2 8 24 h 4 8 MCP - 2 24 h P < 0. 05 6. 5 mg /kg MCNS 2 RT - PCR MCP - MCP - MCP - A B
中 草 药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 9 期 2015 年 5 月 1339 非 酒 精 性 脂 肪 性 肝 病 (nonalcoholic fatty liver disease,nafld) 是 一 种 与 胰 岛 素 抵 抗 遗
1338 中 草 药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 9 期 2015 年 5 月 九 味 肝 泰 胶 囊 对 高 脂 饮 食 诱 导 大 鼠 非 酒 精 性 脂 肪 肝 的 治 疗 作 用 陈 菲 1 2,, 艾 国 3, 盛 柳 青 1, 麻 佳 蕾 1, 黄 正 明 1. 金 华 职 业 技 术 学 院 医 学 院, 浙 江 金 华
2015医学版第四期
第 41 卷 第 4 期 2015 年 8 月 兰 州 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) Journal of Lanzhou University(Medical Sciences) Vol.41 No.4 Aug. 2015 文 章 编 号 :1000-2812 (2015) 04-0048-05 子 痫 前 期 患 者 髓 过 氧 化 物 酶 和 水 通 道 蛋 白 的 表 达 及 其 与
國立中山大學學位論文典藏
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1 2 20 3 4 5 6 1 2006 1 2 3 21 2004 6 101 4 () () 5 ( ) 6 86 4 30 1( ) 166
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1/10 HH 5 6-1 I II. NEDO 2/10 sirna sirna RNA mirna RNA non-coding RNA 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 RNA Noncoding RNARNARNA) 3/10 4/10 5/10 RNA 6/10 7/10 RNA BI RNA
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民 国 时 期 国 人 对 电 视 的 认 知 谢 鼎 新 ( 安 徽 大 学 新 闻 传 播 学 院 副 教 授 博 士 ) 摘 要 : 在 现 有 的 电 视 史 研 究 中, 都 是 以 1958 年 北 京 电 视 台 ( 中 央 电 视 台 的 前 身 ) 成 立 为 中 国 电 视 史 的 起 点, 在 此 之 前 国 人 对 电 视 的 认 知 如 何 还 是 个 盲 点 本 文 试
细 胞 生 物 学 实 验 指 导 细 胞 生 物 教 研 室 目 录 实 验 一 动 物 细 胞 的 基 本 形 态 观 察 和 显 微 测 量 1 实 验 二 线 粒 体 的 活 体 染 色 及 电 镜 照 片 观 察 4 实 验 三 液 泡 系 的 活 体 染 色 及 电 镜 照 片 观 察 6 实 验 四 细 胞 生 理 活 动 的 观 察 7 实 验 五 细 胞 组 分 的 化 学 反 应
mode of puzzle-solving
91 12 145 174 * * 146 1 1 mode of puzzle-solving 91 12 147 83-105 148 2 3 2 3 151 91 12 149 150 4 4 101-104 91 12 151 identity 5 6 7 5 6 7 100 140 152 8 9 10 8 31-32 9 27-29 10 sense of political efficacy
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天 主 教 輔 仁 大 學 社 會 學 系 學 士 論 文 指 導 老 師 : 翁 志 遠 百 善 孝 為 先? 奉 養 父 母 與 接 受 子 女 奉 養 之 態 度 及 影 響 因 素 : 跨 時 趨 勢 分 析 Changes in attitude toward adult children's responsibility to financially support and to live