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1 中 国 修 复 重 建 外 科 杂 志 2010 年 3 月 第 24 卷 第 3 期 287 盐 酸 氨 基 葡 萄 糖 对 兔 膝 骨 性 关 节 炎 的 影 响 陈 德 生 张 志 刚 曹 靖 张 德 新 贾 宝 明 摘 要 目 的 骨 性 关 节 炎 主 要 病 理 变 化 为 关 节 软 骨 的 破 溃 丢 失, 盐 酸 氨 基 葡 萄 糖 (glucosamine hydrochloride capsules,otl) 可 促 进 关 节 软 骨 的 修 复 探 讨 OTL 对 兔 骨 性 关 节 炎 关 节 软 骨 的 作 用 机 制, 为 临 床 应 用 提 供 实 验 依 据 方 法 健 康 成 年 新 西 兰 大 白 兔 36 只, 雌 雄 各 半, 体 重 2.2 ~ 2.6 kg 随 机 分 为 3 组 (n=12): 假 关 节 组 (A 组 ) 前 交 叉 韧 带 切 断 术 (anterior cruciate ligament transection,aclt)/ 生 理 盐 水 组 (B 组 ) ACLT/OTL 组 (C 组 )B C 组 行 右 膝 ACLT 制 备 骨 性 关 节 炎 模 型 ;A 组 只 打 开 右 侧 膝 关 节 腔, 不 切 断 前 交 叉 韧 带 C 组 于 造 模 术 后 第 2 天 开 始 每 天 灌 胃 OTL (150 mg/kg), 连 续 12 周 ;B 组 于 同 一 时 间 点 给 予 等 量 生 理 盐 水 灌 胃 ;A 组 自 由 饮 食 术 后 观 察 动 物 一 般 情 况 ;12 周 后 处 死 动 物, 大 体 观 察 膝 关 节 软 骨 面 关 节 囊 和 滑 膜, 取 股 骨 髁 脱 钙 后, 行 HE 染 色 以 及 和 IL-1β 免 疫 组 织 化 学 观 察, 并 行 Mankin 法 评 分 结 果 各 组 动 物 均 存 活 至 实 验 完 成, 切 口 愈 合 良 好 大 体 观 察,A 组 关 节 滑 液 增 多, 关 节 面 光 滑 完 整 ;B 组 关 节 面 可 见 大 小 不 等 溃 疡 ;C 组 膝 关 节 面 较 光 滑 完 整 ;3 组 软 骨 评 分 比 较 差 异 均 有 统 计 学 意 义 (P < 0.05) 组 织 学 观 察,A 组 关 节 软 骨 结 构 正 常, 细 胞 排 列 整 齐 ;B 组 关 节 软 骨 层 变 薄, 软 骨 有 碎 裂 现 象, 细 胞 排 列 紊 乱 ;C 组 软 骨 细 胞 分 层 清 晰 有 序, 细 胞 形 态 较 规 则 ;A B C 组 Mankin 评 分 分 别 为 (1.04 ± 0.13) (7.97 ± 0.12) (2.81 ± 0.36) 分,3 组 评 分 比 较 差 异 有 统 计 学 意 义 (P < 0.05) 免 疫 组 织 化 学 染 色 观 察 :A B C 组 评 分 分 别 为 (50.62 ± 1.51) (24.81 ± 1.28) (41.57 ± 1.69) 分 ;IL-1β 分 别 为 (13.12 ± 1.21) (62.53 ± 2.37) (30.67 ± 1.28) 分 ;3 组 评 分 比 较 差 异 均 有 统 计 学 意 义 (P < 0.05) 结 论 OTL150 mg/(kg d) 灌 胃 能 部 分 阻 止 兔 骨 性 关 节 炎 关 节 软 骨 退 变, 其 作 用 机 制 可 能 是 下 调 IL-1β 的 表 达, 上 调 的 表 达, 从 而 延 缓 骨 性 关 节 炎 的 进 展 关 键 词 骨 性 关 节 炎 盐 酸 氨 基 葡 萄 糖 IL-1β 兔 中 图 分 类 号 : R684.3 R687.4 文 献 标 志 码 :A EFFECT OF GLUCOSAMINE HYDROCHLORIDE CAPSULES ON ARTICULAR CARTILAGE OF RABBIT KNEE JOINT IN OSTEOARTHRITIS/CHEN Desheng, ZHANG Zhigang, CAO Jing, ZHANG Dexin, JIA Baoming. Department of Joint, Attached Orthopedics Hospital of North China Coal Medical College, Tangshan Hebei, , P.R.China. Corresponding author: ZHANG Zhigang, miles6969@163.com Abstract Objective To access the protective effects of glucosamine hydrochloride capsules (OTL) on articular cartilage in osteoarthritis of rabbit. Methods Thirty-six New Zealand white rabbits were divided randomly into three groups (n=12): sham group (group A), anterior cruciate l igament transection (ACLT)/normal sal ine group (group B), and ACLT/ OTL group (group C). Rabbits in groups B, C received ACLT on the right knee. Rabbits in group A were not given ACLT as control. Group C received a daily administration of OTL at a dose of 150 mg/kg of body weight for 12 weeks; in contrast, group B received normal saline at the same dose. All rabbits were sacrificed after 12 weeks. The right femoral condyle were removed and observed at pathologic changes with HE staining and graded by Mankin s scale, the expression level of transforming growth factor β 1 ( ) and interleukin 1β (IL-1β) were detected by immunohistochemical staining. Results All rabbits survived at the end of experiment and incision healed well. The gross observation showed that joint synovia increased and articular surface was smooth and integrity in group A; that ulcer was observed on the articular surface of group B; and that articular surface was smooth and integrity in group C. There were sigificant differences in articular cartilage scores between 3 groups (P < 0.05). The histological observation showed that the articular cartilage had normal structure and the cells arranged regularly in group A; that the articular cartilage became thin and the cells arranged irregularly in group B; and that the cells arranged with a clear layer and had regular shape in group C. The Mankin scores were 1.04 ± 0.13, 7.97 ± 0.12, and 2.81 ± 0.36 in groups A, B, and C, respectively; showing significant difference between 3 groups (P < 0.05). The result of immunohistochemistry showed that the expressions of were ± 1.51, ± 1.28, and ± 1.69 and the expressions of IL-1β were ± 1.21, ± 2.37, and ± 1.28; showing significant differences between 3 groups (P < 0.05). Conclusion A daily administration of OTL at a dose of 150 mg/kg for 12 weeks can partially decrease the expression levels of IL-1β and increase the expression levels of, which delays the development of osteoarthritis. 作 者 单 位 : 华 北 煤 炭 医 学 院 附 属 骨 科 医 院 唐 山 市 第 二 医 院 关 节 病 科 ( 河 北 唐 山,063000) 通 讯 作 者 : 张 志 刚, 教 授, 硕 士 导 师, 研 究 方 向 : 关 节 外 科 及 脊 柱 外 科, miles6969@163.com

2 288 Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery, March 2010, Vol. 24, No.3 Key words Osteoarthritis Glucosamine hydrochloride capsules Transforming growth factor β 1 Interleukin 1β Rabbit 骨 性 关 节 炎 又 称 骨 关 节 病, 是 临 床 常 见 的 慢 性 进 展 性 骨 关 节 疾 病 其 主 要 病 理 学 特 点 为 关 节 软 骨 变 性 糜 烂 溃 疡 和 剥 脱, 软 骨 下 骨 硬 化 以 及 边 缘 性 骨 赘 形 [1] 成 骨 性 关 节 炎 与 外 伤 炎 症 衰 老 代 谢 和 免 疫 因 素 有 关, 与 性 别 亦 有 一 定 关 系, 但 确 切 发 病 机 制 至 今 尚 未 明 确, 也 缺 乏 有 效 治 疗 手 段 研 究 发 现, 盐 酸 氨 基 葡 萄 糖 (glucosamine hydrochloride capsules,otl) 可 提 供 内 源 性 软 骨 成 分 蛋 白 聚 糖 合 成 的 前 体 物 质 氨 基 葡 萄 糖, 促 进 关 节 软 骨 修 复, 改 善 软 骨 组 织 代 谢 功 能, 提 高 滑 膜 液 的 黏 稠 度, 增 加 合 成, 提 供 关 节 润 滑 功 能, 可 能 对 骨 性 关 节 炎 预 防 和 治 疗 有 一 定 影 响 [2] 我 们 实 验 采 用 OTL 治 疗 经 前 交 叉 韧 带 切 断 术 (anterior cruciate ligament transection,aclt) 建 立 的 兔 膝 骨 性 关 节 炎 模 型, 检 测 骨 性 关 节 炎 发 生 保 护 因 子 及 促 进 因 子 IL-1β 的 蛋 白 表 达, 探 讨 OTL 对 骨 性 关 节 炎 关 节 软 骨 的 影 响, 为 临 床 应 用 提 供 实 验 依 据 1 材 料 与 方 法 1.1 实 验 动 物 及 主 要 试 剂 仪 器 健 康 成 年 新 西 兰 大 白 兔 36 只, 雌 雄 各 半, 体 重 2.2 ~ 2.6 kg( 北 京 大 学 医 学 部 实 验 动 物 中 心 提 供 ) OTL( 商 品 名 : 奥 泰 灵, 香 港 澳 美 制 药 有 限 公 司 ) 免 疫 组 织 化 学 试 剂 盒 ( 武 汉 博 士 德 生 物 工 程 有 限 公 司 ) 光 学 显 微 镜 (Leica 公 司, 德 国 ) 1.2 实 验 分 组 及 方 法 将 36 只 兔 随 机 分 为 3 组 (n=12): 假 关 节 组 (A 组 ) ACLT/ 生 理 盐 水 组 (B 组 ) ACLT/OTL 组 (C 组 ) B C 组 动 物 以 10% 水 合 氯 醛 (30 mg/kg) 腹 腔 注 射 麻 醉, 经 右 膝 关 节 内 侧 髌 腱 旁 作 1.0 ~ 1.5 cm 直 切 口, 沿 髌 腱 旁 切 开 关 节 囊 向 外 侧 推 离 髌 骨 造 成 脱 位, 屈 曲 膝 关 节, 直 视 下 切 断 前 交 叉 韧 带 抽 屉 试 验 确 认 前 交 叉 韧 带 完 全 断 裂 后, 生 理 盐 水 冲 洗 关 节 腔,1 号 丝 线 逐 层 闭 合 关 节 腔 A 组 动 物 同 上 法 麻 醉 后, 只 打 开 右 膝 关 节 腔, 不 切 断 前 交 叉 韧 带 术 后 5 d 每 天 肌 肉 注 射 40 万 U 青 霉 素 预 防 感 染 术 后 1 周 开 始 每 天 驱 赶 行 [3] 走 30 min 根 据 Meeh-Rubner 公 式 计 算 兔 OTL 给 药 剂 量 C 组 于 造 模 术 后 第 2 天 开 始 每 天 灌 胃 OTL (150 mg/kg), 连 续 12 周 ;B 组 于 同 一 时 间 点 给 予 等 量 生 理 盐 水 灌 胃 ;A 组 自 由 饮 食 1.3 观 察 指 标 一 般 情 况 观 察 各 组 动 物 肢 体 活 动 情 况 及 切 口 愈 合 情 况 大 体 观 察 给 药 12 周 后, 采 用 耳 缘 静 脉 空 气 栓 塞 法 处 死 3 组 动 物, 按 原 切 口 入 路, 大 体 观 察 膝 关 节 关 节 囊 滑 膜 关 节 软 骨 及 关 节 液 是 否 清 澈 按 以 下 标 准 [4] 进 行 软 骨 评 分 :0 分, 关 节 面 平 整, 色 泽 正 常 ;1 分, 关 节 面 粗 糙, 有 裂 隙, 色 泽 灰 暗 ;2 分, 关 节 面 糜 烂, 软 骨 缺 损 达 软 骨 表 中 层 ;3 分, 关 节 面 溃 疡 形 成, 软 骨 缺 损 达 软 骨 深 层 ;4 分, 软 骨 剥 脱, 软 骨 下 骨 暴 露 组 织 学 观 察 大 体 观 察 后, 取 右 侧 股 骨 髁 置 于 4% 多 聚 甲 醛 固 定,15%EDTA-2Na 溶 液 脱 钙, 石 蜡 包 埋, 作 4 μm 厚 连 续 切 片, 取 部 分 切 片 行 常 规 HE 染 色, 采 用 Mankin 法 [5] 对 关 节 软 骨 组 织 进 行 评 分 免 疫 组 织 化 学 染 色 观 察 按 照 免 疫 组 织 化 学 试 剂 盒 说 明 进 行 染 色 取 其 余 切 片 置 于 多 聚 赖 氨 酸 防 脱 处 理 的 载 玻 片 上, 烤 片 过 夜, 切 片 脱 蜡 至 水,3%H 2O 2 冲 洗 10 min,pbs 冲 洗 3 次, 每 次 5 min, 复 合 消 化 液 修 复 抗 原 活 性,37 修 复 10 min 滴 加 抗 兔 和 IL- 1β 多 克 隆 一 抗 抗 体,37 湿 盒 孵 育 2 h 滴 加 生 物 素 化 二 抗 高 敏 过 氧 化 物 酶 复 合 物,DAB 显 色, 苏 木 素 复 染, 脱 水 透 明, 中 性 树 胶 封 片 光 镜 下 观 察 和 IL-1β 在 关 节 滑 膜 组 织 中 的 表 达, 并 采 用 Mankin 法 [5] 进 行 评 分 1.4 统 计 学 方 法 采 用 SPSS12.5 统 计 软 件 包 进 行 分 析 数 据 以 均 数 ± 标 准 差 表 示, 组 间 比 较 采 用 单 因 素 方 差 分 析, 两 两 比 较 采 用 SNK 检 验,P 值 < 0.05 为 有 统 计 学 意 义 2 结 果 2.1 一 般 情 况 各 组 动 物 均 存 活 至 实 验 完 成 术 后 肢 体 活 动 受 限, 1 周 后 恢 复 正 常 活 动 ; 切 口 均 愈 合 良 好 2.2 大 体 观 察 A 组 : 关 节 滑 液 增 多, 关 节 面 光 滑 完 整, 有 光 泽 ;B 组 : 关 节 面 可 见 大 小 不 等 溃 疡, 软 骨 下 骨 暴 露, 以 股 骨 内 侧 髁 为 著 ;C 组 : 膝 关 节 面 较 光 滑 完 整, 色 泽 稍 暗 3 组 软 骨 评 分 比 较, 差 异 均 有 统 计 学 意 义 (P < 0.05) 见 表 组 织 学 观 察 A 组 : 关 节 软 骨 结 构 正 常, 细 胞 排 列 整 齐, 无 裂 隙 ; 软 骨 基 质 着 色 均 匀, 呈 粉 红 色, 软 骨 细 胞 胞 核 呈 深 蓝 色, 胞 浆 呈 粉 红 色 ; 软 骨 细 胞 分 3 层, 表 层 软 骨 细 胞 呈 梭 形, 形 似 纤 维 细 胞, 其 长 轴 呈 水 平 排 列 ; 中 间 层 软 骨 细 胞 呈 圆 形, 排 列 无 规 律, 背 靠 背 现 象 较 少 ; 柱 状 细

3 中 国 修 复 重 建 外 科 杂 志 2010 年 3 月 第 24 卷 第 3 期 289 表 1 各 组 12 周 时 关 节 软 骨 评 分 (n=12) Tab.1 Score system of cartilage of each group at 12 weeks(n=12) 组 别 Group A B C 胞 层 软 骨 细 胞 呈 柱 状 排 列, 与 软 骨 表 面 垂 直, 细 胞 间 质 较 多, 可 见 潮 线 ; 软 骨 钙 化 层 的 细 胞 肥 大 B 组 : 软 骨 染 色 不 均 匀, 裂 隙 多, 关 节 软 骨 层 变 薄, 软 骨 有 碎 裂 现 象 ; 软 骨 细 胞 克 隆 增 殖, 呈 巢 状 ; 细 胞 排 列 紊 乱, 软 骨 内 细 胞 密 度 不 均 一, 部 分 区 域 细 胞 密 度 增 加 或 减 少, 以 表 层 和 移 行 层 显 著 C 组 : 软 骨 基 质 着 色 较 均 匀, 软 骨 细 胞 分 层 清 晰 有 序, 细 胞 形 态 较 规 则 ( 图 1)A B C 组 Mankin 评 分 分 别 为 (1.04 ± 0.13) (7.97 ± 0.12) (2.81 ± 0.36) 分,3 组 评 分 比 较 差 异 均 有 统 计 学 意 义 (P < 0.05) 2.4 免 疫 组 织 化 学 染 色 观 察 :A 组 关 节 软 骨 全 层 软 骨 细 胞 胞 浆 中 均 有 棕 黄 色 颗 粒, 细 胞 排 列 规 则 ;B 组 关 节 软 骨 阳 性 细 胞 较 A 组 减 少, 染 色 较 浅 ;C 组 关 节 软 骨 阳 性 细 胞 表 达 增 多, 阳 性 细 胞 染 色 较 深 ( 图 2)A B C 组 Mankin 评 分 分 别 为 (50.62 ± 1.51) (24.81 ± 1.28) (41.57 ± 1.69) 分, 3 组 评 分 比 较 差 异 均 有 统 计 学 意 义 (P < 0.05) IL-1β:A 组 仅 在 软 骨 表 层 和 中 上 层 见 少 量 关 节 软 骨 阳 性 细 胞 ;B 组 在 关 节 软 骨 各 层 结 构 中 均 可 见 软 骨 阳 性 细 胞, 呈 棕 褐 色 颗 粒, 以 表 层 及 中 上 层 显 著 ;C 组 软 骨 阳 性 细 胞 较 少 ( 图 3)A B C 组 Mankin 评 分 分 别 为 (13.12 ± 1.21) (62.53 ± 2.37) (30.67 ± 1.28) 分, 3 组 评 分 比 较 差 异 均 有 统 计 学 意 义 (P < 0.05) 3 讨 论 骨 性 关 节 炎 病 因 较 多, 是 老 年 最 常 见 的 一 种 骨 关 节 疾 病, 软 骨 细 胞 外 基 质 的 分 解 代 谢 增 强 是 最 终 导 致 图 1 各 组 12 周 时 组 织 学 观 察 (HE 200) a A 组 b B 组 c C 组 图 2 各 组 12 周 时 免 疫 组 织 化 学 染 色 观 察 (SABC 400) a A 组 b B 组 c C 组 图 3 各 组 12 周 时 IL-1β 免 疫 组 织 化 学 染 色 观 察 (SABC 400) a A 组 b B 组 c C 组 Fig.1 Histological observation of each group at 12 weeks (HE 200) a Group A b Group B c Group C Fig.2 Immunohistochemical observation of of each group at 12 weeks (SABC 400) a Group A b Group B c Group C Fig.3 Immunohistochemical observation of IL- 1β of each group at 12 weeks (SABC 400) a Group A b Group B c Group C

4 290 Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery, March 2010, Vol. 24, No.3 骨 性 关 节 炎 关 节 软 骨 退 变 的 主 要 病 理 过 程 骨 性 关 节 炎 的 发 生 机 制 较 为 复 杂, 一 般 认 为 是 多 因 素 综 合 所 [2] 致 关 节 稳 定 性 是 保 持 其 正 常 结 构 和 功 能 的 一 个 重 要 因 素, 若 发 生 关 节 不 稳, 关 节 各 结 构 的 动 态 平 衡 将 失 调, 从 而 使 关 节 发 生 退 变 在 继 发 性 骨 性 关 节 炎 中, 关 节 应 力 的 改 变 是 其 退 变 的 重 要 原 因 因 此, 采 用 使 关 节 失 稳 或 改 变 应 力 的 方 法 可 造 成 与 临 床 相 似 的 骨 性 关 节 炎 模 型 骨 性 关 节 炎 动 物 模 型 的 建 立 是 研 究 骨 性 关 节 炎 病 理 机 制 及 防 治 的 必 要 手 段, 由 于 兔 的 膝 关 节 结 构 与 人 类 的 接 近, 而 且 兔 骨 性 关 节 炎 模 型 软 骨 的 生 化 指 标 也 与 人 类 骨 性 关 节 炎 一 致, 所 以 相 关 实 验 多 选 用 兔 膝 关 节 行 骨 性 关 节 炎 模 型 的 制 备, 为 实 验 提 供 病 理 [5-7] 基 础 我 们 实 验 采 用 新 西 兰 大 白 兔 成 功 复 制 了 骨 性 关 节 [8-9] 炎 模 型 实 验 观 察 显 示 B 组 兔 膝 关 节 呈 典 型 的 骨 性 关 节 炎 表 现, 组 织 学 Mankin 评 分 结 果 明 显 高 于 A 组, 表 明 造 模 成 功 3.1 OTL OTL 主 要 成 分 是 2- 氨 基 -2 脱 氧 - 葡 萄 糖 盐 酸 盐 它 是 一 种 小 分 子 氨 基 多 糖, 经 口 给 予 后 通 过 小 肠 被 动 吸 收, 然 后 在 肠 黏 膜 细 胞 内 水 解 去 掉 盐 酸 根, 以 氨 基 葡 萄 糖 的 形 式 进 入 血 液 氨 基 葡 萄 糖 是 蛋 白 多 糖 的 构 成 [10-11] 成 分, 它 可 同 时 促 进 关 节 软 骨 基 质 中 胶 原 的 合 成, 刺 激 软 骨 细 胞 产 生 有 正 常 多 聚 体 结 构 的 蛋 白 多 糖, 提 高 软 骨 细 胞 的 修 复 能 力, 抑 制 损 伤 软 骨 的 酶, 如 胶 原 酶 和 磷 脂 酶 A2, 防 止 糖 皮 质 激 素 对 软 骨 细 胞 的 损 害, 避 免 产 生 损 伤 细 胞 的 超 氧 化 自 由 基, 促 进 软 骨 基 质 的 修 复 和 重 建, 从 而 延 缓 骨 关 节 疼 痛 的 病 理 过 程 和 疾 病 的 进 程, 改 善 关 节 活 动 度, 缓 解 疼 痛, 延 缓 和 改 变 骨 性 关 节 炎 的 病 理 进 程 OTL 具 有 抗 炎 作 用, 刺 激 软 骨 细 胞 产 生 的 蛋 白 多 糖 可 稳 定 细 胞 膜, 使 之 不 易 被 炎 性 因 子 破 坏 另 外, OTL 形 成 的 蛋 白 聚 糖 胶 体 复 合 物 附 着 在 基 质 胶 原 网 架 上, 与 胶 原 网 架 结 构 共 同 构 成 一 个 弹 性 体, 起 承 载 压 力 传 导 和 缓 冲 应 力 保 护 软 骨 结 构 和 软 骨 下 骨 的 作 [12] 用 OTL 可 抑 制 因 免 疫 反 应 造 成 的 蛋 白 多 糖 降 解, 并 修 复 受 损 的 关 节 软 骨, 全 面 恢 复 受 损 关 节 功 能, 为 关 节 软 骨 提 供 良 好 的 保 护 作 用 软 骨 是 由 细 胞 外 基 质 和 软 骨 细 胞 组 成 其 中 细 胞 外 基 质 是 由 软 骨 细 胞 合 成, 含 有 胶 原 纤 维 和 蛋 白 多 糖, 蛋 白 多 糖 和 Ⅱ 型 胶 原 是 关 节 软 骨 基 质 的 重 要 成 分, 对 维 持 软 骨 的 生 物 学 性 能 起 重 要 作 用 胶 原 中 主 要 成 分 是 Ⅱ 型 胶 原 纤 维, 不 同 方 向 的 纤 维 共 同 组 成 网 状 拱 型 结 构, 维 持 软 骨 的 构 形, 并 赋 予 组 织 一 定 的 抗 张 强 度, 对 应 力 传 导 作 用 显 著 合 成 类 因 子 TGF-β 在 软 骨 修 复 中 起 重 要 的 作 用, 调 节 细 胞 外 胶 原 分 子 和 蛋 白 多 糖 的 表 达, 同 时 在 转 录 水 平 上 激 活 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 型 胶 原 的 表 达 Ⅱ 型 胶 原 是 软 骨 细 胞 的 标 志, 也 是 构 成 软 骨 基 质 胶 原 的 主 要 成 分 TGF-β 可 以 刺 激 细 胞 的 增 殖 和 胶 原 的 合 成, 提 示 它 在 软 骨 修 复 中 起 重 要 作 用 [13-14] ; 并 与 骨 形 成 密 切 相 关, 在 骨 形 成 和 修 复 过 程 中 促 进 软 骨 细 胞 和 成 骨 细 胞 的 增 殖 和 分 化, 并 能 诱 导 软 骨 和 骨 基 质 的 合 成 [15] 3.2 炎 性 因 子 致 炎 因 子 IL-1β 抑 制 合 成 关 节 软 骨 : 促 进 软 骨 破 坏, 在 降 解 软 骨 细 胞 基 质, 改 变 软 骨 细 胞 正 常 结 构 和 功 能, 参 与 滑 膜 炎 性 病 变 及 影 响 代 谢 等 方 面 [16-17] IL-1β 通 过 多 种 途 径 影 响 软 骨 代 谢 : 上 调 基 质 金 属 蛋 白 酶 的 表 达, 加 速 基 质 降 解 ; 减 少 基 质 金 属 蛋 白 酶 抑 制 物 的 合 成, 延 缓 基 质 的 修 复 ; 促 进 滑 膜 细 胞 释 放 前 列 腺 素 NO 等 炎 性 因 子, 介 导 炎 性 反 应, 最 终 导 致 关 节 软 骨 退 化 而 发 病 IL-1 亦 可 引 发 蛋 白 多 糖 的 降 解 和 软 骨 细 胞 的 破 坏, 抑 制 软 骨 细 胞 合 成 具 有 软 骨 特 性 的 蛋 白 聚 糖 和 Ⅱ 型 胶 原, 促 进 生 成 有 成 纤 维 细 胞 特 性 的 Ⅰ 型 胶 原, 从 而 使 软 骨 细 胞 变 性, 引 起 软 骨 缺 损, 导 致 骨 性 关 节 炎 的 进 一 步 发 展 我 们 在 实 验 中 观 察 到 OTL 通 过 上 调 关 节 软 骨 和 下 调 关 节 软 骨 IL-1β 的 表 达, 防 止 胶 原 纤 维 和 蛋 白 多 糖 的 降 解, 来 保 护 关 节 软 骨 TGF-β 可 以 通 过 调 节 IL-1 受 体 以 减 少 其 引 起 的 软 骨 基 质 破 坏 作 用, 刺 激 胶 原 和 蛋 白 聚 糖 核 心 蛋 白 的 转 录, 抑 制 滑 膜 细 胞 和 软 骨 细 胞 中 基 质 金 属 蛋 白 酶 mrna 水 平, 还 可 诱 导 合 成 基 质 金 属 蛋 白 酶 组 织 抑 制 因 子 1 和 IL-1 受 体, 并 刺 激 软 骨 细 胞 增 生, 实 现 其 对 软 骨 的 保 护 作 用 [18] 可 以 促 进 细 胞 外 基 质 重 塑, 促 进 骨 连 接 素 合 成, 增 强 基 质 钙 化 进 程, 有 利 于 保 持 软 骨 必 要 的 刚 性 和 结 构 的 完 整 性, 对 软 骨 细 胞 有 一 定 保 护 作 用 另 外, 也 能 上 调 基 质 金 属 蛋 白 酶 抑 制 物 的 表 达, 减 少 IL-1 受 体 在 细 胞 膜 上 的 数 量, 从 而 逆 转 IL-1β 介 导 的 破 坏 作 用 有 研 究 表 明,OTL 能 高 效 抑 制 IL-1β 介 导 的 NO 前 列 腺 素 E2 的 生 成 及 基 质 金 属 蛋 白 酶 3 mrna 的 表 达, 从 而 抑 制 IL-1β 介 导 的 蛋 白 聚 糖 分 解, 达 到 保 护 关 节 软 骨 的 作 用 [19-20] 其 作 用 机 制 可 能 是 通 过 减 少 NFκB 的 主 要 依 赖 性 基 因 环 氧 化 酶 2 的 表 达 [21], 即 可 以 降 低 NF-κB 的 活 性 而 IL-1β 主 要 依 靠 NF-κB 的 机 制 来 作 用 于 软 骨, 所 以 OTL 可 以 抑 制 炎 性 前 期 细 胞 因 子 的 合 成 [8] 4 参 考 文 献 1 Harris ED Jr. The bone and joint decade: a catalyst for progress. Arthritis Rheum, 2001, 44(9):

5 中 国 修 复 重 建 外 科 杂 志 2010 年 3 月 第 24 卷 第 3 期 Wieland HA, Michaelis M, Kirschbaum BJ, et al. Osteoarthritis an untreatatable disease?nat Rev Drug Duscov, 2005, 4(4): Hoşnuter M, Babucçu O, Kargi E, et al. Rat skin surface measurement: a practical formula. Plast Reconstr Surg, 2003, 112(5): 王 贤 波, 蒋 青. 大 鼠 骨 性 关 节 炎 模 型 的 构 建 及 其 稳 定 性 观 察. 中 国 临 床 康 复, 2005, 9(10): 翟 吉 良, 翁 习 生, 邱 贵 兴. 骨 关 节 炎 动 物 模 型 的 建 立 及 选 择. 中 国 矫 形 外 科 杂 志, 2007, 15(11): 孙 嘉 利, 范 建 中. 兔 膝 关 节 骨 性 关 节 炎 的 模 型 制 作 及 组 织 病 理 学. 中 国 康 复, 2005, 20(2): 马 建 兵, 沙 浩 渡, 李 向 阳, 等. 兔 实 验 性 膝 骨 性 关 节 炎 的 组 织 病 理 学 及 发 病 机 理. 中 国 矫 形 外 科 杂 志, 2001, 8(1): Largo R, Alvarez-Soria MA, Díez-Ortego I, et al. Glucosamine inhibits IL-1beta-induced NF kappab activation in human osteoarthritic chondrocytes. Osteoarthritis Cartiloge, 2003, 11(4): Makin HJ, Dorfman H, Li ppiello L, et al. Biochemical and metabolic abnormalities in articular cartilage from osteo-arthritic human hi ps. II. Correlation of morphology with biochemical and metabolic data. J Bone Joint Surg (Am), 1971, 53(3): McAlindon TE, LaValley MP, Gulin JP, et al. Glucosamine and chondroitin for treatment of osteoarthritis: a systematic quality assessment and meta-analysis. JAMA, 2000, 283(11): Oegema TR Jr, Deloria LB, Sandy JD, et al. Effect of oral glucosamine on cartilage and meniscus in normal and chymopapain-injected knees of young rabbits. Arthritis Rheum, 2002, 46(9): Russell AL. Focusing on glucosamine sulfate. Can Fam Physician, 2004, 50: 王 玉 彬, 陈 安 民, 郭 风 劲, 等. 骨 关 节 炎 患 者 软 骨 组 织 中 TNF-α TGF-β IL-6 IL-9 的 表 达 变 化 及 意 义. 山 东 医 药, 2007, 47(12): Tardif G, Pelletier JP, Dupuis M, et al. Collagenase 3 production by human osteoarthritic chondrocytes in response to growth factors and cytokines is a function of the physiologic state of the cells. Arthritis Rheum, 1999, 42(6): Blaney Davidson EN, Scharstuhl A, Vitters EL, et al. Reduced transforming growth factor-beta signaling in cartilage of old mice: role in impaired repair capacity. Arthritis Res Ther, 2005, 7(6): R Hedbom E, Häuselmann HJ. Molecular aspects of pathogenesis in osteoarthritis: the role of inflammation. Cell Mol Life Sci, 2002, 59(1): 钟 玉, 李 荣 亨, 周 小 莉, 等. 复 元 胶 囊 对 实 验 性 兔 骨 关 节 炎 白 介 素 1 及 转 化 生 长 因 子 β2 的 调 节 作 用. 重 庆 医 科 大 学 学 报, 2007, 32(8): , Malemud CJ, Killeen W, Hering TM, et al. Enhanced sulfated-proteoglycan core protein synthesis by incubation of rabbit chondrocytes with recombinant transforming growth factor-beta 1. J Cell Physiol, 1991, 149(1): Takahashi K, Goomer RS, Harwood F, et al. The effects of hyaluronan on matrix metalloproteinase-3 (MMP-3), interleukin-1 beta (IL-1beta), and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 (TIMP-1) gene expression during the development of osteoarthritis. Osteoarthritis Cartilage, 1999, 7(2): 吴 宏 斌, 杜 靖 远, 胡 勇, 等. 兔 前 交 叉 韧 带 切 断 骨 关 节 炎 模 型 中 MMP-1 MMP-13 及 TIMP-1 的 mrna 表 达 研 究. 中 华 风 湿 病 学 杂 志, 2002, 6(3): Hozumi A, Nishimura Y, Nishiuma T, et al. Induction of MMP-9 in normal human bronchial epithelial cells by TNF-alpha via NF-kappa B-mediated pathway. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol, 2001, 281(6): L ( 收 稿 : 修 回 : ) ( 本 文 编 辑 : 刘 丹 ) 读 者 作 者 编 者 本 刊 已 启 用 科 技 期 刊 学 术 不 端 文 献 检 测 系 统 为 了 提 高 来 稿 质 量, 禁 止 抄 袭 伪 造 剽 窃 不 当 署 名 一 稿 多 投 等 学 术 不 端 行 为 在 本 刊 的 出 现, 促 进 本 刊 健 康 发 展, 我 们 已 启 用 科 技 期 刊 学 术 不 端 文 献 检 测 系 统, 对 所 有 来 稿 在 收 稿 时 即 进 行 检 测 ; 为 严 把 质 量 关, 我 们 还 将 在 付 印 前 再 次 进 行 检 测 对 于 检 测 出 有 严 重 不 端 行 为 的 稿 件, 编 辑 部 将 一 律 退 稿 该 系 统 将 提 交 的 文 件 与 涵 盖 数 千 万 条 数 据 的 中 国 文 献 总 库, 上 百 亿 网 页 资 源 数 百 万 英 文 文 献 资 源 比 对, 并 创 建 一 个 完 整 的 文 献 复 制 报 告 在 报 告 中, 不 仅 包 括 检 测 文 献 总 的 文 字 复 制 比 例, 还 详 细 列 出 检 测 文 献 中 每 一 段 雷 同 文 字 的 详 细 出 处, 并 准 确 定 位 每 一 段 文 字 的 具 体 位 置 在 此, 希 望 广 大 作 者 在 撰 写 论 文 时, 一 定 要 本 着 实 事 求 是 的 科 学 精 神, 自 觉 抵 制 上 述 学 术 不 端 行 为, 引 用 他 人 的 研 究 成 果 时 务 必 标 引 参 考 文 献 本 刊 希 望 借 助 此 工 具, 与 广 大 专 家 学 者 一 道, 共 同 遏 制 学 术 不 端 之 风, 构 建 公 平 公 正 的 学 术 交 流 平 台, 营 造 健 康 的 学 术 环 境 本 刊 编 辑 部

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