分子生物学中使用的缓冲液和贮存液的配制 ph 缓冲液酶贮存液酶稀释缓冲液酶反应缓冲液杂交缓冲液预杂交和杂交

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兹尤
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1 ph 缓冲液酶贮存液酶稀释缓冲液酶反应缓冲液杂交缓冲液预杂交和杂交溶液抽提 / 裂解缓冲液和溶液电泳和凝胶加样缓冲液特殊的电泳缓冲液凝胶加样缓冲液 ph 缓冲液磷酸缓冲盐溶液 (PBS) 137 mol/l NaCl 2.7 mmol/l KCl 10 mmol/l Na 2 HPO 4 2 mmol/l KH 2 PO 4 用 800 ml 蒸馏水溶解 8 g NaCl, 0.2 g KCl, 1.44 g Na2HPO4 和 0.24 g KH2PO4 用 HCl 调节溶液的 ph 值至 7.4, 加水至 1L 分装后在 15 psi( 1.05 kg/cm 2 ) 高压蒸汽灭菌 20 min, 或通过过滤除菌, 保存于室温 PBS 是一种通用试剂值得指出的是本文列出的配方缺乏双价阳离子, 如果需要,PBS 可以补加成 1mmol/L CaCl2 和 0.5 mmol/l MgCl2 10 Tris EDTA(TE) ph mmol/l Tris-Cl (ph 7.4) 10 mmol/l EDTA ( ph 8.0 ) ph mmol/l Tris-Cl (ph 7.6) 10 mmol/l EDTA (ph 8.0) ph mmol/l Tris-Cl (ph 8.0)

2 10 mmol/l EDTA (ph 8.0) 分装后在 15psi (1.05kg/cm2) 的高压下蒸汽灭菌 20 min, 在室温保存 Tris-Cl(1mol/L) 用 800 ml 蒸馏水溶解 g Tris 碱, 加浓盐酸调 ph 至所需值 ph HCl ml ml ml 应使溶液冷至室温后, 方可最后调定 ph 值加水定容至 1L 分装后高压蒸汽灭菌如果 1mol/ L 溶液呈现黄色, 应予丢弃并使用质量更好的 Tris Tris 溶液的 ph 值因温度而异, 温度每升高 1,pH 值大约降低 0.03 单位,0.05 mol/l 溶液在 5,25 和 37 时的 ph 值分别为 9.5, 8.9 和 8.6 Tris 镁盐缓冲液 (TM) 50 mmol/l Tris-Cl ( ph7.8) 10 mmol/l MgSO4 Tris 缓冲盐溶液 (TBS) 用 800 ml 蒸馏水溶解 8 g NaCl, 0.2 g KCl 和 3 g Tris 碱, 加入 g 酚红并用 HCI 调 ph 值至 7.4, 用蒸馏水定容至 1L 分装后在 15 psi (1. 05 kg/cm2)y 高压下蒸汽灭菌 20 min, 保存于室温酶贮存液溶菌酶 (10mg/ml) 使用前用 10 mmol/ltris-cl ( ph 8. 0 ) 即刻溶解溶菌酶, 配制成 10 mg/ml 浓度的贮存液配制时要确保 Tris 的 ph 值为 8.0, 如果溶液的 ph 值低于 8.0 则溶菌酶不能有效的工作溶细胞酶 (67 mg/ml) 用前用含有 50% 甘油的 0.01 rnol/l 磷酸钠配制成 67mg/L(900 U/ml) 胰 DNase Ⅰ(1mg/ml) 用 1 ml 下述溶液溶解 2 mg 粗制胰 DNase I: 10 mmol/ L Tris-Cl ( ph7.5) 150 mmol/l NaCl 1 mmol/ L MgCl2 当 DNase I 溶解时, 加入 1 ml 甘油, 盖紧管口轻轻颠倒几次, 加以混合避免产生气泡和泡沫分装后保存于 -20 胰 RNase (1mg/ml) 用 2 ml TE ( ph7.6 ) 溶解 2 mg 粗制胰 RNase I 蛋白酶 K(20 mg/ml) 购来的蛋白酶 K 是冷冻干燥的粉未状物质, 用灭菌的 50 mmol/l Tris ( ph8.0),1.5 mmol/ L 乙酸钙溶解, 配制成浓度为 20 mg/ml 的溶液将贮存液分装, 在 - 20 下保存胰蛋白酶

3 用 200 mmol/ L 碳酸氢按 (ph8.9) 配制成 250 μg/ml 浓度分装后在 -20 下保存酶解酶 5000(2mg/ml) 使用前用含有 50% 甘油的 0.01 mo1/l 磷酸钠缓冲液配制成浓度为 2 mg/ml 的溶液酶稀释缓冲液 DNase Ⅰ 稀释缓冲液 l0 mmol/l Tris-C1 (ph 7.5) 150 mmol/l NaCI 1 mmol/l MgCl2 聚合酶稀释缓冲液 50 mmol/l Tris-Cl ( ph 8.1) 1 mmol/l 二硫苏糖醇 (DTT) 0.1 mg/ml EDTA (ph8.0) 0.5 mg/ml 牛血清白蛋白 5% (V/V) 甘油现用现配测序酶稀释缓冲液 10 mmol/l Tris-Cl ( ph 7.5 ) 5 mmol/l 二硫苏糖醇 (DTT) 0.5mg/ml BSA 贮存于 -20 Taq 稀释缓冲液 25 mmol/l Tris 一 Cl (ph 8. 8) 0.01 mmol/l EDTA ( ph8.0) 0.15%(V/ V)Tween %(V/ V) 乙基苯基聚乙二醇 (NP40) 酶反应缓冲液重要 : 尽可能使用由厂家提供的 10x 反应缓冲液否则, 使用下列配方 10 扩增缓冲液 500 mmol/l KCl 100 mmol/l Tris-Cl (ph8.3, 室温下 ) 15 mmol/l MgC12 在 15 psi (1.05 kg/cm2) 高压下蒸汽灭菌 10min 分装后贮存在 X 噬菌体 T4 DNA 连接酶缓冲液 200 mmol/l Tris-Cl (ph7.6) 50 mmol/l MgCl2 50 mmol/l 二硫苏糖醇 (DTT)

4 分装成若干小份贮存在 -20 要进行反应时加入 ATP 至合适的浓度 ( 如 1mmol/L 10 噬菌体 T4 DNA 聚合酶缓冲液 330 mmol/l Tris- 乙酸 (ph8.0) 660 mmol/l 乙酸钾 100 mmol/l 乙酸镁 5 mmol/ L 二硫苏糖醇 (DTT) 1 mg/ml 牛血清白蛋白分装成小份, 冷冻贮存在噬菌体 T4 多核苷酸激酶缓冲液 700 mmol/ L Tris-Cl (ph7.6) 100 mmol/l MgC12 50 mmol/l 二硫苏糖醇 (DTT) 分装成小份, 冷冻贮存在 BAL31 缓冲液 3 mol/l NaCl 60 mmol/ L CaCl2 60 mmol/ L MgCl2 100 mmol/ L Tris-Cl (ph8.0) 1 mmol/ L EDTA (ph8.0) 10 去磷酸化缓冲液 ( 用于 CIP) 100 mmol/l Tris-Cl (ph8.3) 10 mmol/l MgCl2 10 mmol/l ZnC12 10 去磷酸化缓冲液 ( 用于 SAP) 200 mmol/l Tris-Cl(pH8.8) 100 mmol/l MgCl2 10 mmol/l ZnC12 1 EcoRI 甲基化酶缓冲液 50 mol/l NaCl 50 mmol/l Tris-Cl (ph8.0) 10 mol/l EDTA 80 µmol/l S- 腺苷甲硫氨酸分装成小份, 贮存于外切核酸酶 Ⅲ 缓冲液 660 mmol/l Tris-Cl (ph8.0) 66 mmol/l MgCl2 100 mmol/l β- 巯基乙醇用时才加 β- 巯基乙醇 10 Klenow 缓冲液

5 0.4 mol/l 磷酸钾 (ph7.5) 66 mmol/l MgC12 10 mmol/l β- 巯基乙醇 10 接头激酶缓冲液 600 mmol/l Tris-Cl (ph7.6) 100 mmmol/l MgCl2 100 mmol/l 二硫苏糖醇 (DTT) 2 mg/ml 牛血清白蛋白使用时现配核酸酶 S1 消化缓冲液 0.28 mol/l NaCl 0.05 mol/l 乙酸钠 (ph4.5) 4.5 mmol/l ZnS04 7H2O 分装成小份, 贮存于 -20 用前加核酸 S1 至浓度为 500U/ml 10 蛋白酶 K 缓冲液 100 mmol/ L Tris-C1 (ph8.0) 50 mmol/ L EDTA (ph8.0) 500 mol/l NaCl 10 反转录酶缓冲液 500 mmol/l Tris-Cl ( ph8.3) 750 mmol/l KC1 30 mmol/l MgC12 RNA 酶 H 缓冲液 20 mmol/l Tris-Cl (ph7.6) 20 mmol/l KCl 0.1 mmol/l EDTA (ph8.0) 0.1 mmol/l 二硫苏糖醇 (DTT) 用时现配制 5 末端转移酶缓冲液大多数厂家都提供 5 反应缓冲液, 典型的缓冲液含有下列试剂 : 500 mmol/l 二甲胂酸钾 (ph7.2) 10 mmol/l CoCl2 6H2O 1 mmol/l 二硫苏糖醇 (DTT) 5 末端转移酶缓冲液 ( 或加尾 ) 缓冲液可按照下列方法 (Eschenfeldt et al. 1987) 配制 : 1. 用 10 ml 3mo1/L 乙酸钾在室温下平衡 5g Chelex min 后, 抽气过滤除去过剩的液体用 10 ml 无离子水洗 Chelex3 次 3. 配制 1 mol/l 二甲胂酸钾溶液用处理过的 Chelex 树脂平衡二甲胂酸盐溶液

6 4. 借以通过配有 Whatman 1 # 滤纸的漏斗回收二甲胂酸盐溶液 5. 依次将水二硫苏糖醇和 CoCl2 加入回收的二甲胂酸盐溶液中, 配制成终浓度为 500 mmol/l 二甲胂酸钾,1 mmol/l 二硫苏糖醇和 20 mmol/ L CoCl2 的溶液 10 通用 KGB( 限制性内切核酸酶 ) 缓冲液 1 mo1/l 乙酸钾 250 mmol/l Tris- 乙酸 (ph7.6) 100 mol/l 四氢乙酸镁 5 mmol/l β- 巯基乙醇 0.1 mg/ml 牛血清白蛋白分装成小份, 贮存于 -20 杂交缓冲液碱性转移缓冲液 ( 用于将 DNA 碱转移至尼龙膜上 ) 0.4 mol/l NaOH 1 mol/l NaCl Church 缓冲液 1% (m/v) 牛血清白蛋白 1 mmol/l EDTA 0.5 mol/l 磷酸盐缓冲液 7%(m/V) SDS 变性缓冲液 ( 中性转移, 仅用于双链 DNA) 1.5 mol/l NaCl 0.5 mmol/l NaOH HCl(2.5mol/L) 加 25 ml 浓 HCl(11.6 mol/l) 到 91 ml 蒸馏水中于室温保存用于 RNA 的含甲酰胺的杂交缓冲液 40 mmol/l PIPES (ph 6.8) 1 mmol/l EDTA (ph 8.0 ) 0.4 mol/l NaCl 80% (V/V) 去离子甲酰胺用 PIPES 的二钠盐配制缓冲液. 用 1 mol/l HCl 调 ph 至 6.4 用于 RNA 的不含甲酰胺的杂交缓冲液 40 mmol/l PIPES (ph 6.4) 0.1 mmol/l EDTA (ph 8.0) 0.4 mol/l NaCl 用 PIPES 的二钠盐配制缓冲液. 用 1 mol/l HCl 调 ph 至 6.4 中和缓冲液 Ⅰ( 用于将 DNA 转移至不带电荷的膜上 ) 1 mol/l Tris-C1 (ph7.4)

7 1.5 mol/l NaCl 中和缓冲液 Ⅱ( 用于将 DNA 碱性转移至尼龙膜上 ) 0.5 mol/l Tris-Cl (ph7.2) 1 mol/l NaCl 中和液 ( 适于中性转移, 仅用于双链 DNA) 0.5 mol/l Tris-Cl (ph7.4) 1.5 mol/l NaCl 预杂交液 ( 用于斑点狭缝和 RNA 杂交 ) 0.5 mol/l 磷酸钠 (ph7.2) 7%(m/V) SDS 1 mmol/l EDTA (ph7.0) 预杂交和杂交溶液预杂交 / 杂交溶液 ( 用于噬菌斑和菌落 ) 50%(V/V) 甲酰胺 6 SSC( 或 6 SSPE ) 0.05 BLOTTO 使用 Church 缓冲液, 可以替代上述溶液预杂交 / 杂交液 ( 适用于液体缓冲液中的杂交 ) 6 SSC( 或 6 SSPE ) 5 Denhardt's 液 0.5%(m/V ) SDS 1 µg/ml poly(a) 100 µg/ml 鲑鱼精 DNA 预杂交 / 杂交液 ( 适用于甲酰胺缓冲液中的杂交 ) 6 SSC( 或 6 SSPE ) 5 Denhardt's 液 0.5%(m/V ) SDS 1 µg/ml poly(a) 100 µg/ml 鲑鱼精 DNA 50% (V/V) 甲酰胺充分混合后, 用 0.45µm 乙酸纤维素膜过滤为降低在非严格条件下 ( 如 20%-30% 甲酰胺 ) 杂交的背景, 重要的是使用的甲酰胺要尽量的纯预杂交 / 杂交液 ( 适用于磷酸 -SDS 缓冲液中的杂交 ) 0.5 mol/l 磷酸缓冲液 (ph7.2) 1 mmol/l EDTA (ph8.0) 7% (m/v) SDS 1% (m/v) 牛血清白蛋白

8 使用电泳级的牛血清白蛋白使用这种特殊的预杂交 / 杂交溶液不需要封闭剂或杂交率增强剂 20 SSC 用 800 ml H2O 溶解 g NaCl 和 88.2 g 柠檬酸钠, 用几滴 14 mol/l HCl 调 ph 值至 7.0, 用水定容至 1L 分装后高压灭菌该试剂的终浓度为 3.0 mol/l NaCl 和 0.3 mol/l 柠檬酸钠 20 SSPE 用 800 ml H2O 溶解 g NaCl,27. 6 g NaH2PO4 H2O 和 7.4 g EDTA 用 NaOH 调 ph 值至 7.4, 用水定容至 1 L 分装后高压灭菌该试剂的终浓度为 3.0 mol/l NaCl,0.2 mol/l NaH2PO4 和 0.02 mol/l EDTA 抽提 / 裂解缓冲液和溶液碱裂解溶液 Ⅰ( 制备质粒 ) 50 mmol/l 葡萄糖 25 mmol/l Tris-Cl (ph8.0) 10 mmol/l EDTA (ph8.0) 溶液 Ⅰ 一次可配制 100 ml, 在 15 psi(1.05kg/cm2) 压力下蒸汽灭菌 15 min, 保存于 4 碱裂解溶液 Ⅱ( 制备质粒 ) 0.2 N NaOH( 从 10N 贮存液中现用现稀释 ) 1% (m/v) SDS 溶液 Ⅱ 要现用现配制, 室温下使用碱性裂解溶液 Ⅲ( 制备质粒 ) 5 mol/l 乙酸钾 60.0 ml 冰乙酸 11.5 ml H2O 28.5 ml 所配成的溶液中钾的浓度为 3mol/L. 乙酸根的浓度为 5 mol/l 保存于 4, 用时置于冰浴中 STET 10 mmol/l Tris-Cl (ph8.0) 0.1 mol/l NaCl 1 mmol/l EDTA (ph8.0) 5%(V/ V) Triton X-100 所有的成分加完后, 确保 STET 的 ph 值为 8.0 用前 STET 不需要灭菌电泳和凝胶加样缓冲液常用电泳缓冲液缓冲液工作液贮存液 /L

9 Tris 乙酸 (TAE) 1 40 mmol/l Tris 乙酸 g Tris 碱 1 mmol/l EDTA 57.1 ml 冰乙酸 100ml 0.5mol/L EDTA (ph8.0) Tris 硼酸 (TBE) mmol/l Tris 硼酸 5 54g Tris 碱 1 mmol/l EDTA 27.5g 硼酸 20ml 0.5 mol/l EDTA (ph8.0) Tris 磷酸 (TPE) 1 90 mmol/l Tris 磷酸 lo 108g Tris 碱 2 mmol/l EDTA 15.5 ml 磷酸 (85%,1.679g/ml) 40 ml 0.5 mol/l EDTA (ph8.0) Tris 甘氦酸 l 25 mmol/l Tris-Cl 5 15.lg Tris 碱 250 mmol/l 甘氨酸 94g 甘氨酸 ( 电泳级 ) 0.1% SDS 50 ml 10% SDS( 电泳级 ) 注 :TBE 通常配制成 5 或 lo 贮存液浓的贮存液的 ph 值应为 8.3, 用前稀释由同一浓度贮存液配制凝胶液和电泳缓冲液某些人喜欢使用更浓的 TBE 贮存液 (10 而不是 5 ) 但是,5 贮存液更稳定, 在存放时不会出现沉淀用 0.22 µm 滤膜将 5 或 1O 贮存液过滤可防止或推迟沉淀的形成特殊的电泳缓冲液 10 碱性琼脂糖凝胶电泳缓冲液 500 mmol/l NaOH 10 mmol/l EDTA 将 50 ml 10N NaOH 和 20 ml 0. 5 mol/l EDTA (ph8.0 ) 加到 800ml 水中, 然后定容至 1L 用前即刻将 lo 碱性琼脂糖凝胶电泳缓冲液用水稀释成 l 工作液使用同一 10 贮存液配制喊性琼脂糖凝胶和电泳工作液 10 BPTE 电泳缓冲液 100 mmol/l PIPES 300 mmol/l Bis-Tris 10 mmol/l EDTA 10 缓冲液的最终 ph 值是缓冲液的配方如下 : 将 3 g PIPES 游离酸 ) 6g Bis-Tris( 游离碱 ) 和 2ml 0.5 mol/l EDTA 加到 90m1 蒸馏水中, 然后用焦碳酸二乙酯处理 ( 终浓度为 0.1%) 10 MOPS 电泳缓冲液 0.2 mol/l MOPS (ph7.0) 20 mmol/l 乙酸钠 10 mmol/l EDTA (ph8.0) 用 700 ml 用 DEPC 处理灭菌水溶解 41.8g MOPS 用 2mol/L NaOH 调 ph 值至 7.0 加 20ml DEPC 处理的 1 mol/l 乙酸钠和 20 m1 DEPC 处理的 0.5 mol/l EDTA (Ph8.0) 用 DEPC 处理的水定容至 1L 用 0.45 µm 的滤膜过滤除菌, 室温避光保存如果缓冲液暴露于可见光或被高压灭菌则会变黄, 淡黄色的缓冲液完全可用, 但颜色变深的缓冲液不能使用 TAFE 凝胶电泳缓冲液

10 20 mmol/l Tris 乙酸 (ph8.2) 0.5 mmol/l EDTA 用乙酸调 ph 值至 8.2, 使用 EDTA 的游离酸而不是钠盐重要 :TAFE 凝胶缓冲液在用前必须冷却至 14 凝胶加样缓冲液 6 碱性凝胶加样缓冲液 300 mmol/l NaOH 6 mmol/l EDTA 18%(m/V) 聚糖体 (Ficoll) (400 型,Pharmacia) 0.15%(m/V) 溴甲酚绿 0.25%(m/V) 二甲苯青溴酚蓝溶液 (0.4%,m/V) 用 1 ml 灭菌水溶解 4 mg 固体澳酚蓝室温保存 6 凝胶加样缓冲液缓冲液类型 6 缓冲液贮存温度 Ⅰ 0.25%(m/V) 溴酚蓝 % (m/v) 二甲苯青 FF 40 %(m/v) 蔗糖水溶液 Ⅱ 0.25%(m/V) 溴酚蓝室温 0.25% (m/v) 二甲苯青 FF 15%(m/V) 聚糖体 (Ficoll)(400 型,Pharmacia) 水溶液 Ⅲ %(m/v) 溴酚蓝 % (m/v) 二甲苯青 FF 30%(m/V) 甘油水溶液 Ⅳ 0.25%(m/V) 溴酚蓝 4 40 %(m/v) 蔗糖水溶液溴酚蓝蔗糖溶液 0.25%(m/V) 溴酚蓝 40%(m/V) 蔗糖甲酚红溶液 (10 mmol/l) 用 1 ml 灭菌水溶解 4 mg 甲酚红的钠盐 (Alarich ), 室温保存 10 甲醛凝胶加样缓冲液 50% (V/V) 甘油 ( 用 DEPC 处理的水稀释 ) 10 mmol/l EDTA (ph8.0) 0.25%(m/V) 溴酚蓝 0.25%(m/V) 二甲苯青 FF

11 甲酰胺加样缓冲液 80%(m/V) 去离子化甲酰胺 10 mmo1/l EDTA (ph8.0) 1 mg/ml 二甲苯青 FF 1 mg/ml 溴酚蓝购买蒸馏的去离子化甲酰胺, 分装成小份充氮贮存于 -20 RNA 凝胶加样缓冲液 95 % (V/V) 去离子化甲酰胺 0.025%(m/V) 溴酚蓝 0.025%(m/V) 二甲苯青 FF 5 mmol/l EDTA(pH8.0) %(m/v) SDS 2 SDS 凝胶加样缓冲液 100 mmol/l Tris-Cl (ph6.8) 4% (m/v) SDS( 电泳级 ) 0.2%(m/V) 溴酚蓝 20%(V/V) 甘油 200 mmol/l 二硫苏糖醇 (DTT) 或 β- 巯基乙醇不含硫代试剂的 1 和 2 SDS 凝胶加样缓冲液可在室温保存二硫苏糖醇或 β- 巯基乙醇分别配成 1mol/L 或 14 mol/l 的贮存液, 临用前加入 2.5 SDS-EDTA 染料混合液 0.4%(m/V)SDS 30 mmo1/l EDTA 0.25% 溴酚蓝 0.25% 二甲苯青 FF 20% (m/v) 蔗糖

实验室常用培养基的配制方法

实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin( 氨卡青霉素 )(100 mg/ml) 100 mg/ml Ampicillin 50 ml 配制方法 1. 称量 Ampicillin 置于 50 ml 离心管中 ; 2. 加入 40 ml 灭菌水, 充分混合溶解后, 定容至 50 ml; 3. 用 0.22 µm 过滤膜过滤除菌 ; 4. 小份分装 (1 ml/ 份 ) 后,-20 保存 IPTG(

分子生物学中使用的缓冲液和贮存液的配制 ph 缓冲液 酶贮存液 酶稀释缓冲液 酶反应缓冲液 杂交缓冲液 预杂交和杂交

分子生物学中使用的缓冲液和贮存液的配制 ph 缓冲液酶贮存液酶稀释缓冲液酶反应缓冲液杂交缓冲液预杂交和杂交