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1 操作規範名稱 : 編號 : M 版次 : 3.0 版 撰寫者 : 簡春治撰寫日期 : 2003 年 12 月 修訂者 : 簡春治修訂日期 : 2015 年 12 月 本版次啟用日期 : 同主管簽結日 取代之舊版版次 : 2.5 版 與前版次相異之內容 ( 例如 : 起訖段落 頁碼 ): 1. 修訂人員安全防護表 -d. 濺灑處理消毒液 - 家用漂白水 2. 修訂 並新增 等培養基品項 3. 新增 檢體收件後, 第二天起有細菌生長可執行菌種鑑定, 如鑑定為上述病原菌, 便可發陽性鑑定初步報告 存放地點 : 電子檔 -LMS 檢驗管理程式 品管醫檢師

2 人員安全防護表 操作人員在執行此操作時, 可能會接觸到生物危害或化學物質危害, 因此必須注意下 列事項 : 1 所有來自病人的檢體, 不論是否有標示, 皆應視為感染性檢體 因檢體中所含的感 染源可能有 HBV HIV Mycobacterium... 等 2 人員應正確並謹慎地操作含有化學危害物, 避免因操作不當造成傷害 化學危害物 種類有易燃氣體 非易燃 ( 高壓 ) 氣體 易燃液體 毒性物質及腐蝕性物質等, 所有 化學危害物應有一份完整的物質安全資料表 (MSDS), 以供查詢 3 人員應遵循本科安全衛生操作規範上之指示 a 人員執行此操作規範時, 可能會接觸到的危害物如下 : 血液媒介病源 (Blood borne pathogens) 空氣媒介病源 (Air borne pathogens) 危害試劑 (Hazardous reagents) V 其他 :urine stool CSF 各種體液等 ( 遵循 universal precaution) b 人員執行此操作規範時, 須使用 : V 手套 V 實驗衣 ( 粉紅隔離衣 ) V 口罩 安全眼鏡 面罩 V 生物安全操作箱 化學排煙櫃 抽氣設備 隔離衣 其它 : c 工作完畢後, 必須使用下列消毒液消毒工作區域 : V 75% 酒精 5%Phenol 其它 : 0.1%Benzalkonium Chloride( 速淨 -k 稀釋 100 倍 ) 新鮮配製之 0.05 % 稀釋漂白水 d 污染的檢體打翻或濺出到桌面或地上, 應以紗布或用擦手紙浸下列消毒液, 覆蓋污染處 30 分鐘再清除 : V 家用漂白水 5%Phenol 其它 :

3 高雄長庚紀念醫院編號 :M 版次 :3.0 檢驗醫學科日期 :2015 年 12 月頁數 : 第 1 頁, 共 4 頁 Policy/Procedure 名稱 : 1. 目的 / 原理 (Purpose/ Principle) 培養生殖道檢體, 分離致病菌, 協助臨床診斷生殖道感染 2. 適用範圍 (Scope) 2.1. 檢驗項目代號 L72-601,L 適用於微生物組一般醫檢師 ( 含 ) 以上醫檢師 3. 検體採檢及運送方式 (Specimens) 3.1. 依採檢部位, 可分為二類, 採檢 運送可參照 SCP0406 檢驗醫學科檢驗手冊 Vagina discharge,cervix discharge,penis,scrotum,male-urethral discharge Endocervix,endometrix,placenta,amniotic fluid,cyst or puerperal sepsis,prostatic fluidsemen 3.2. N.gonorrhoeae 採集運送的方式可參照 M Neisseria gonorrhoeae 培養操作規範 3.3. β-streptococcus Gr.B 採集運送的方式可參照 M B 群鏈球菌培養操作規範 3.4. 檢體採檢後請盡速送檢 若檢體無法立刻送檢, 應置於室溫保存, 但不超過 2 小時為限 4. 試劑材料 (Reagents/ Materials) 4.1. 培養基 : TSAII5%SB/LEVINE EMB agar (BD 或同等廠牌, 簡稱 BP/EMB) Modified Thayer-Martin agar(home-made, 簡稱 TM) H medium whole plate(home-made, 簡稱 H) Thioglycollate broth (home-made, 簡稱 Thio broth) 厭氧培養基 - CDC Anaerobe Blood agar ( 簡稱 CDC ANA,BD 或同等廠牌 ) 厭氧培養基 -CDC ANA BLD W/PEA( 簡稱 PEA,BD 或同等廠牌 ) 厭氧培養基 -BBE agar( bacteroides bile esculin) agar( 簡稱 BBE,home-made) 請參閱 M 培養基放置於 2-8 冰箱內保存 5. 儀器設備 (Instruments) 5.1. 生物安全操作箱

4 高雄長庚紀念醫院編號 :M 版次 :3.0 檢驗醫學科日期 :2015 年 12 月頁數 : 第 2 頁, 共 4 頁 Policy/Procedure 名稱 : CO 2 溫箱 5.3. 一般溫箱 5.4. 加熱槍 5.5. 厭氧培養箱 6. 操作步驟 (Procedure) 6.1. 準備培養基 : 須針對不同檢體, 使用不同培養基 不適合作厭氧培養之生殖道檢體, 如 cervix discharge,penis,scrotum, male-urethral discharge: 接種 BP/EMB H TM 可作厭氧培養之生殖道檢體, 如 endocervix,endometrix,placenta,amniotic fluid, cyst purpral or purpral sepsis,prostatic fluid,semen: 接種 BAP/EMB TM,Thio broth 6.2. 檢體接種 : 所有檢體接種均在生物安全操作箱內進行 如以 ( 嗜氧輸送拭子 ), 接種於 1 ml TSB 中在次培養至 BAP/EMB agar,chocolate agar,modified Thayer-Martin(MTM) agar,h medium 液狀檢體棉棒送檢, 將棉棒直接塗於培養基上, 以三區畫法劃開 若為無菌區的液體檢體 : 送檢時 volume>1 ml 時, 應先以 3000 rpm,10 分鐘離心, 取沈澱物接種, 若兩支以上則將沈澱物混合後接種 ; 若 volume 1 ml, 則直接以吸管吸檢體, 分別滴種培養基及 Thio broth 再以三區劃法劃開 組織檢體均質化後, 取均質液接種於培養基及 Thio broth 再以三區劃法劃開 6.3. 培養條件 : 接種過的培養基均置入 35 CO 2 溫箱培養 Thio broth 放入 35 一般溫箱 6.4. 判讀時間 : 初步判讀 :18-24 小時後 最終判讀 : 48 小時 6.5. 培養基判讀 Cervix discharge: 此部位所採之檢體均為非無菌區, 正常情況下即有少量細菌存在

5 高雄長庚紀念醫院編號 :M 版次 :3.0 檢驗醫學科日期 :2015 年 12 月頁數 : 第 3 頁, 共 4 頁 Policy/Procedure 名稱 : 常見的正常菌群 (Normal flora):α,γ, β-streptococcus Neisseria sp. Lactobacilli Corynebactrium sp. Coag(-) staphylococci S. aureus yeasts G. vaginalis β-streptococcus Gr.B anaerobes 等 Vaginal 檢體若長 Gardenella vaginalis, 則須作鑑定 生殖道常分離出致病菌 (pathogenic organisms ):N. gonorrhoeae,l. monocytogens,trichomonas vaginalis,treponema pallidum,mycoplasma sp., Chlamydia trachomatis 如有致病菌存在, 均會造成生殖道感染 若為孕婦檢體主要找 β-streptococcus Gr.B 或 L. monocytogens Penis,scrotum,male-urethral discharge: 主要找 N. gonorrhoeae H. ducreyi Endocervix,endometrix,placenta,amniotic fluid,cyst,puerperal sepsis,prostatic fluid,semen: 此類檢體系較深層取得, 為無菌區, 正常情況下完全無菌, 所以只要有細 菌生長, 即表示生殖道感染, 故所有分離出來的細菌, 均須加以鑑定及抗 生素敏感性試驗 若培養基長 3 種 Normal flora 不須鑑定 若僅由 Thio broth 中次培養出來的細菌為 : Corynebacterium sp. Bacillus sp. Coag(-) Staphylococci Lactobacilli 等, 則視為污染, 不需要鑑定 孕婦檢體找 β-streptococcus Gr.B : 只要在培養基或次培養長出 β -Streptococcus Gr.B, 皆要作鑑定及藥敏試驗 7. 結果報告 (Results and Reports) 7.1. Vagina discharge,cervix discharge,penis, Scrotum,Male-urethral discharge: 若均無細菌生長, 則報告 No Growth To Date 若有細菌生長, 但均非 pathogens, 則報告 Mixed Flora 如有致病細菌存在, 均須報告菌種名稱, 抗生素感受性試驗結果及生長狀況 7.2. Endocervix,Endometrix,Placenta,Amniotic fluid,cyst purpral or purpral sepsis,prostatic fluid: 若均無細菌生長, 則報告 No Growth To Date 若僅由 Thio broth 中次培養出來的細菌為 :Corynebacterium sp.,bacillus sp., Coag(-) Staphylococci,Lactobacilli, 則報告 No Growth To Date

6 高雄長庚紀念醫院編號 :M 版次 :3.0 檢驗醫學科日期 :2015 年 12 月頁數 : 第 4 頁, 共 4 頁 Policy/Procedure 名稱 : 如培養基長 Normal flora 3 種時, 且無常見致病菌存在時, 則報告 Mixed Flora 其餘情況均須報告菌種名稱, 抗生素感受性試驗結果及生長狀況 檢體收件後, 第二天起有細菌生長可執行菌種鑑定, 如鑑定為上述病原菌, 便 可發陽性鑑定初步報告 8. 注意事項 (Precautions) 8.1. 檢體無法立刻送檢, 應置於室溫保存, 但不超過 2 小時為限 8.2. 接種完之棉棒或玻璃試管, 保存於 4 冰箱中一個星期後, 丟入紅色可燃塑膠袋中, 經由高壓滅菌後, 由垃圾車清運離開 8.3. 已發完報告驗證完畢之培養基, 丟入紅色可燃塑膠袋中, 經由高壓滅菌後, 由垃圾車清運離開 9. 臨床意義 (Clinical Significance) Vagina, Cervix discharge, Female urethral discharge 此部位所採之檢體均為非無菌區, 正常情況下即有少量細菌存在, 生殖道常分離出之致病菌 :Neisseria gonorrhoeae, Strepto-group A or B,Enterobacteriaceae,L. monocytogens,neisseria meningitidis,candida albicans-(if showing heavy or pure), 如有上述致病菌存在, 均會造成生殖道感染 Penis,Scrotum, Male-urethral discharge,prostatic fluid: 因 male 與 female 之生理結構差異, 所以採取檢體時, 較不易受泌尿道之表皮常在菌污染, 故當細菌培養出時, 均可能為致病菌 Endocervix, Endometrium: 此類檢體系較深層取得, 是為無菌區正常情況下完全無菌, 所以只要有細菌生長, 即表示生殖道感染, 故所以分離出來的細菌, 均須加以鑑定及抗生素敏感性試驗 10. 參考文獻 (Reference) 10.1.Clinical Microbiology Procedures Handbook 2 nd edition ASM PRESS May 2004 Editor in Chief Henry D. Isenberg Guidelines for Performance of Genital Culture 10.2.James Versalovic, Karen C. Carroll, Guido Funke, et al. Manual of Clinical Microbiology. 10 th,2011, Volume1 p

7 Aerobic culture Genital tract specimens 檢驗項目 Aerobic culture Genital tract specimens 檢驗代號 L 中文名稱生殖道檢體培養 培養 檢體別 CD, CS, CX, GTA, GTS, VA, VF ( 請參閱檢體縮寫對照表 ) 檢驗方法 Culture 採檢容器嗜氧棉棒或無菌試管 檢驗效能請參閱 檢體量 1. 棉棒沾滿檢體 2. 採集之分泌液參考值 1.Mixed flora (VA,CD etc.-) 2.No growth to date (CX etc.-) 收檢時間 24 小時收檢 操作時間每天 報告核發 Negative: 第三天起, Positive: 第二天起鑑定初步報告 單位 健保編號 13007C 支付點數 200 採檢 / 送檢 注意事項 1. 採檢後儘速送檢 2. 若檢體無法立刻送檢, 應置於室溫保存, 但 不超過 2 小時為限 備註 操作組別微生物組聯絡電話 2560 加作其他檢驗項目 : 不適用 更新日期 臨床意義 Vagina,Cervix discharge,female urethral discharge 此部位所採之檢體均為非無菌區, 正常情況下即有少量細菌存在, 生殖道常分離出之致病菌 :Neisseria gonorrhoeae,strepto-group A or B,Enterobacteriaceae,L. monocytogens,neisseria meningitidis,candida albicans-(if showing heavy or pure), 如有上述致病菌存在, 均會造成生殖道感染 Penis,Scrotum,Male-urethral discharge,prostatic fluid: 因 male 與 female 之生理結構差異, 所以採取檢體時, 較不易受泌尿道之表皮常在菌污染, 故當細菌培養出時, 均可能為致病菌 Endocervix,Endometrium: 此類檢體系較深層取得, 是為無菌區正常情況下完全無菌, 所以只要有細菌生長, 即表示生殖道感染, 故所以分離出來的細菌, 均須加以鑑定及抗生素敏感性試驗

8 陰性報告格式 陽性報告格式

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菌 量 ( 表 三 ) 如 果 欲 分 離 N. gonorrhoeae B. pertussis 或 C. diphtheriae 及 少 數 病 毒 時, 應 先 告 知 檢 驗 室 以 便 準 備 特 殊 的 分 離 培 養 基 鏈 球 菌 性 咽 喉 炎 診 斷 鏈 球 菌 性 咽 喉 炎, 上 呼 吸 道 的 感 染 及 檢 體 的 培 養 1,2 賴 美 珠 2 林 金 絲 2 許 國 忠 1 陳 芳 紅 嘉 義 基 督 教 醫 院 1 實 驗 診 斷 科 2 院 內 感 染 管 制 委 員 會 前 言 人 類 呼 吸 道 感 染 是 較 常 見 的 臨 床 感 染, 其 中 由 病 毒 所 引 起 的 佔 絕 大 部 分 ; 若 由 病 毒 引 起 的 案 例, 並 不 需 要 使

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