肌酸激酶MB型同工酶测定试剂盒（速率法）说明书

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铸皮
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1 雌激素受体抗体 ( 免疫组化法 ) 说明书产品名称通用名称 : 雌激素受体抗体 ( 免疫组化法 ) 英文名称 :FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Estrogen Receptor α, Clone 1D5, Ready-to-Use, (Link) 包装规格 12 ml 预期用途用于免疫组化 (IHC) 测试时, 定性检测经福尔马林固定石蜡包埋的乳腺癌组织中雌激素受体的表达该抗体着色为棕色 DAB 染色, 定位于细胞核类固醇受体与其配体具有高度的亲和性和特异性人类雌激素受体 (ER) 是一种 65kDa 的二聚体蛋白, 主要位于细胞核, 属于具有反式作用的一类蛋白, 通过与特异性 DNA 结合元件结合刺激转录, 该元件也被称之为激素反应元件通过与雌激素的结合,ER 被诱导激活转录, 因此, 也被称为诱导增强因子 (4,5) 前期的研究表明, 雌激素受体的表达状态与未经治疗患者的预后相关 ( 即, 对分化良好的浸润癌的预后 ) 对激素治疗有反应, 如他莫昔芬治疗研究发现, 雌激素集中在动物的雌激素靶器官和人类乳腺癌, 也有文献报道雌激素受体介导雌激素的促有丝分裂作用对乳腺癌生物学机制的研究显示, 多数乳腺癌细胞生长速率分别与雌激素孕激素或二者共同表达有关 (5) 因此, 乳腺癌细胞雌激素受体的分布状态被认为是患者预后, 以及抗激素疗法疗效的预测指标 (5,6) 检测原理 1. 免疫原可溶性的重组人雌激素受体 (7) 2. 特异性该抗体能够特异性地与 ERα 反应, 与 ERβ 未显示有反应 (8,9) 抗原表位位于 ERα N- 末端结构域 (A/B 区 ) 表达 ER 的质粒载体, 转染的 COS 细胞内提取的蛋白, 通过免疫印迹试验鉴定, 在人类乳腺癌细胞系 MCF-7, 以及人类子宫内膜组织, 该抗体标记的多肽分子量大约为 67kD 与 ER 完全一致 A/B 区缺失性突变质粒转染的 COS 细胞, 则未见有相应的抗体标记 (7) 免疫组化结果显示, 该抗体能够与大鼠 ERα 相应的蛋白起反应 (8) 3. 免疫组化 (IHC) 反应原理 : 应用抗原与抗体特异结合的原理, 用已知抗体与待测抗原结合, 通过抗体再结合酶 (HRP 或 AP) 标记的放大系统 ( 显色系统 ) 形成复合物, 加上酶的底物 ( 显色剂 ) 使之显色, 找到待测抗原, 通过显微镜观察结果一抗 + 显色系统 /HRP 或 AP + 显色剂观察结果 _IR CN/ /7

2 主要组成成分 1. 所提供的试剂即用型小鼠单克隆抗体, 以液体的形式提供, 保存在含有 1% BSA 蛋白稳定剂及 0.015% 的叠氮钠的缓冲液内克隆号 :1D5(7) 同种型 :IgG1,kappa 2. 必需但未提供的材料 1) 需要采用免疫组化预处理系统 (PT Link)( 代码 PT100/PT101) 进行热诱导的抗原修复 (HIER) 详细信息请参阅免疫组化预处理系统 (PT Link) 用户指南最佳结果可通过将预处理标本置于抗原修复液 (EnVision, Target Retrieval Solution, High ph (50x) ( 代码 K8000/ K8004) 中 97 下孵育 20 分钟修复后再在洗脱缓冲液 EnVision FLEX Wash Buffer ( 代码 K8007) 放置 5 分钟后获得 2) 推荐的显色系统为 EnVision FLEX+Mouse, 高 ph 型 (Link)( 代码 K8002) 染色步骤及孵育时间已预先设定在组织染色机 (AutoStainer link 48) 软件内推荐使用的试剂体积为每张切片 μl 或 2 150μL 有关载玻片和试剂的详细使用说明, 请参阅组织染色机 (AutoStainer link 48) 用户指南如果用户的组织染色机 (AutoStainer link 48) 工作平台上没有相应的方案可以使用, 请与 Dako 公司的技术支持人员联系用来更新 Autostainer Link 软件中 Anti-ERα, Clone 1D5 的相关方案和试剂信息的 DakoLink 软件的安装程序可在中找到所有孵育步骤均在室温下进行 3) 推荐采用苏木素染色液 EnVision FLEX Hematoxylin, (Link).( 代码 K8008) 进行复染并采用非水溶性的封片剂进行固定 4) 为了增加组织与玻片之间的黏附力, 推荐采用 FLEX IHC 载玻片 ( 代码 K8020) 5) 推荐使用的阴性质控试剂为 FLEX Negative Control, Mouse, (Link)( 代码 IR750) 储存条件及有效期 2~8 保存有效期 12 个月载机稳定性 : 30 C 可保存至少 4 天不要在瓶上标记的效期后使用如果试剂不是按照指定的条件存储, 用户须对存储条件进行有效性确认因此, 在对患者标本进行检测时, 应同时运行阳性和阴性质控如果异常的染色结果不能用实验室检测过程变化解释, 怀疑是抗体的问题质量所导致, 请与我们的技术支持人员联系生产日期, 失效日期 : 见标签适用仪器组织染色机 (AutoStainer link 48) 样本要求 1. 该抗体用于标记福尔马林固定, 石蜡包埋的组织切片组织标本切片的厚度应该大约为 4μm 2. 需要采用免疫组化预处理系统 (PT Link)( 代码 PT100/PT101) 进行热诱导的抗原修复 (HIER) 详细信息请参阅免疫组化预处理系统(PT Link) 用户指南最佳结果可通过将预处理标本置于抗原修复液 (EnVision, Target Retrieval Solution, High ph (50x) ( 代码 K8000/ K8004) 中 97 下孵育 20 分钟修复后再在洗脱缓冲液 EnVision FLEX Wash Buffer ( 代码 K8007) 放置 5 分钟后获得 3. 石蜡包埋切片 : 对福尔马林固定, 石蜡包埋的组织切片推荐采用 3 合 1 免疫组化预处理 _IR CN/ /7

3 系统 (PT Link) 进行标本制备按照抗原修复液 (EnVision, Target Retrieval Solution, High ph (50x) ( 代码 K8000/ K8004)) 说明书给出的方法进行处理提示 : 染色后的切片必须进行脱水透明, 并采用封片剂进行永久封片 4. 组织切片在处理过程中或免疫染色过程中不应该干燥为了增加组织与玻片之间的黏附力, 推荐采用 FLEX IHC 玻片 ( 代码 K8020) 检测方法 1. 检测步骤需要采用免疫组化预处理系统 (PT Link)( 代码 PT100/PT101) 进行热诱导的抗原修复 (HIER) 详细信息请参阅免疫组化预处理系统 (PT Link) 用户指南最佳结果可通过将预处理标本置于抗原修复液 (EnVision, Target Retrieval Solution, High ph (50x) ( 代码 K8000/ K8004) 中 97 下孵育 20 分钟修复后再在洗脱缓冲液 EnVision FLEX Wash Buffer ( 代码 K8007) 放置 5 分钟后获得 1) 将抗原修复液按照 1:50 比例配制好, 放置在免疫组化预处理系统 (PT Link) 中 2) 运行免疫组化预处理系统加热 (PT Link) 至 65 度, 将切片放置在抗原修复液中 3) 加热至 95 度, 持续 20 分钟, 然后缓慢降温至 65 度 4) 将切片迅速取出放置在洗脱缓冲液工作液中,5 分钟后, 放置在组织染色机上染色 5) 过氧化物酶阻断剂 5 分钟 6) 洗脱缓冲液工作液冲洗 7) 一抗 20 分钟 8) 洗脱缓冲液工作液冲洗 9) 二抗 20 分钟 10) 洗脱缓冲液工作液冲洗 11) DAB 显色 10 分钟 12) 自来水冲洗 13) 苏木素染色液复染 5 分钟 14) 自来水冲洗 15) 70% 酒精,80% 酒精,90% 酒精,100% 酒精,100% 酒精各 2 分钟 16) 二甲苯透明 5 分钟 17) 二甲苯透明 5 分钟 18) 封片 2. 质控当进行患者标本染色时, 也应该同时进行阳性和阴性质控染色阳性质控组织应该包括子宫颈和细胞 / 结构上能显示所有阳性标本性能参数所描述的反应分布模式推荐使用的阴性质控试剂为 FLEX 阴性质控 ( 代码 IR750) 更多信息及使用说明请参考 Dako 组织染色机 (AutoStainer link 48) 用户指南产品性能指标 1. 染色结果的解释抗体标记的细胞应为细胞核染色如果观察到细胞质着色, 为非特异性染色关于阳性评估, 据报道 cut-off 值范围是从 >0% 到 45%,ASCO/CAP 推荐 cut-off 1% 为阳性肿瘤细胞 _IR CN/ /7

4 2. 检测结果的解释正常组织 : 子宫颈, 基底鳞状上皮细胞以及间质细胞显示中等程度至强阳性染色反应, 鳞状上皮细胞的表层和中间层细胞显示弱阳性至中等程度的染色该抗体已经在大量的其他组织上进行过测试阳性核标记见于乳腺, 扁桃体 ( 生发中心细胞, 鳞状上皮细胞显示局灶弱阳性 ), 子宫 ( 子宫内膜 ), 肺间质细胞, 肺泡衬细胞, 中性粒细胞, 巨噬细胞和前列腺肌纤维基质细胞的细胞质 ( 胞浆 ) 偶也呈阳性标记坏死组织和肺分泌物偶见非特异性染色异常组织 : 许多研究者对福尔马林固定石蜡包埋的乳腺癌组织切片的抗 ER α, 克隆号 1D5, 染色标记进行了观察, 证明该抗体对证实 ER α 的表达状态可靠有效 (1,2,22,23) 该抗体对于评价内分泌疗法的有效性也能够提供精确而有价值的信息 (2,22,23) 当采用他莫昔芬治疗时, 灵敏度分别为 90%(2) 和 89%(22), 特异性分别为 51%(2) 和 73%(22) 在第 (2) 项报告中, 采用了任意阳性率为 50% 作为阳性临界值的 H- 积分方法, 在第 (22) 项研究中, 临界值则设定为 10% 在另外一项研究中,10/25 例胰腺胰岛素瘤标记为阳性 (24) 偶见淋巴瘤和非淋巴瘤如黑色素瘤被标记检测方法的局限性 1. 假阴性的结果可能是由于抗原在组织上时间过长导致抗原降解所致在室温存储条件下, 标本应该在切片后的 2 个月内进行染色 (20) 2. 为获得最佳和可重复性的结果, 当组织采用常规固定 ( 中性缓冲福尔马林 ) 和石蜡包埋时,ER 需要进行热引导抗原修复处理 (HIER) 3. 采用 Dako 公司的雌激素受体抗体对非福尔马林固定剂固定标本的染色效果尚未经过评价 4. 最佳反应条件取决于标本及制备方法, 应该由每个实验室的用户确定如果检测的病理学家期望获得不同的染色强度, 孵育时间及 EnVision FLEX/EnVision FLEX+ 显色系统的选择均可做出调整可以咨询 Dako 应用专家 / 技术支持专家, 确定研究方案中程序的重新设定调整后的方案仍然需要评价, 包括染色分布模式是否与性能参数部分所描述的分布模式一致 5. 任何染色阳性或缺乏表达的临床意义的解释均应该结合形态学特征, 同时采用适当的对照, 并在临床病史的范围内进行评估, 并结合其他合格临床病理学家的诊断测试结果联合做出诊断注意事项 1. 仅用于体外诊断并仅供专业人员使用 2. 本产品中含有叠氮化钠 (NaN3) 剧毒性纯净化合物虽然在本产品中的浓度很低不能归为危险品, 但是叠氮化钠可与铅及铜管道发生反应, 生成极具爆炸性的金属叠氮化合物请使用大量清水冲洗处理, 以防在管道中形成金属叠氮化合物 3. 与所有生物源性物质一样, 应该采用适当的方法进行处理 4. 穿戴合适的个人防护装置, 以避免接触眼睛与皮肤 5. 根据当地政府国家或联邦的规范要求, 对未经使用或不用的溶液进行处理参考文献 1. Mauri FA, Veronese S, Frigo B, Girlando S, Losi L, Gambacorta M, et al. ER1D5 and H222 (ER-ICA) antibodies to human estrogen receptor protein in breast carcinomas. Appl Immunohistochem 1994;2: _IR CN/ /7

5 2. Goulding H, Pinder S, Cannon P, Pearson D, Nicholson R, Snead D, et al. A new immunohistochemical antibody for the assessment of estrogen receptor status on routine formalin-fixed tissue samples. Hum Pathol 1995;26: Shaw JA, Udokang K, Mosquera J-M, Chauhan H, Jones JL, Walker RA. Oestrogen receptors alpha and beta differ in normal human breast and breast carcinomas. J Pathol 2002;198: Kumar V, Green S, Stack G, Berry M, Jin J-R, Chambon P. Functional domains of the human estrogen receptor. Cell 1987;51: Elledge RM, Fuqua SAW. Ch. 31: Estrogen and Progesterone Receptors. In: Diseases of the Breast. Harris JR et al. eds. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins 2000: Fitzgibbons FK, Page DL, Weaver D, Thor AD, Allred DC, Clark GM, et al. Prognostic factors in breast cancer: College of American Pathologists consensus statement Arch Pathol Lab Med 2000; 124: Al Saati T, Clamens S, Cohen-Knafo E, Faye JC, Prats H, Coindre JM, et al. Production of monoclonal antibodies to human estrogenreceptor protein (ER) using recombinant ER (RER). Int J Cancer 1993;55: Nishihara E, Nagayama Y, Inoue S, Hiroi H, Muramatsu M, Yamashita S, et al. Ontogenetic changes in the expression of estrogen receptor α and β in rat pituitary gland detected by immunohistochemistry. Endocrinology 2000;141: Pettersson K, Grandien K, Kuiper GGJM, Gustafsson J-Å. Mouse estrogen receptor β forms estrogen response element-binding heterodimers with estrogen receptor α. Mol Endocrinol 1997;11: Chebil G, Bendahl PO, Fernö M; South Sweden Breast Cancer Group; North Sweden Breast Cancer Group. Estrogen and progesterone receptor assay in paraffinembedded breast cancer--reproducibility of assessment. Acta Oncol 2003;42: Fernö M, Andersson C, Fallenius G, Idvall I. Oestrogen receptor analysis of paraffin sections and cytosol samples of primary breast cancer in relation to outcome after adjuvant tamoxifen treatment. The South Sweden Breast Cancer Group. Acta Oncol 1996;35: Andersen J. Determination of estrogen receptors in paraffin-embedded tissue. Techniques and the value in breast cancer treatment. Acta Oncol 1992;31: Ferrero-Poüs M, Trassard M, Le Doussal V, Hacène K, Tubiana-Hulin M, Spyratos F. Comparison of enzyme immunoassay and immunohistochemical measurements of estrogen and progesterone receptors in breast cancer patients. Appl Immunohistochem Mol Morphol 2001;9: Santeusanio G, Mauriello A, Ventura L, Liberati F, Colantoni A, Lasorella R, et al. Immunohistochemical analysis of estrogen receptors in breast carcinomas using monoclonal antibodies that recognize different domains of the receptor molecule. Appl Immunohistochem Mol Morphol 2000;8: Grabau DA, Thorpe SM, Knoop A, Vach W, Schrøder HD, Blichert-Toft M, et al. Immunohistochemical assessment of oestrogen and progesterone receptors: correlations with the DCC method and clinical outcome in primary breast cancer patients. Breast 2000;9: _IR CN/ /7

6 16. Molino A, Micciolo R, Turazza M, Bonetti F, Piubello Q, Corgnati A, et al. Estrogen receptors in 699 primary breast cancers: a comparison of immunohistochemical and biochemical methods. Breast Cancer Res Treat 1995;34: Layfield LJ, Gupta D, Mooney EE. Assessment of tissue estrogen and progesterone receptor levels: A survey of current practice, techniques, and quantitation methods. Breast J 2000;6: Leers MP, Hoop JG, van Beers M, van Rodijnen N, Pannebakker M, Nap M. Determination of threshold values for determining the size of the fraction of steroid hormone receptor-positive tumor cells in paraffin-embedded breast carcinomas. Cytometry B Clin Cytom 2005;64: Hammond ME, Hayes DF, Dowsett M, Allred DC, Hagerty KL, Badve S, et al. American Society of Clinical Oncology/College of American Pathologists. Guideline recommendations for immunohistochemical testing of estrogen and progesterone receptors in breast cancer. Arch Pathol Lab Med 2010;134:e Clinical and Laboratory Standards Institute (formerly NCCLS). Quality assurance for immunocytochemistry; Approved guideline. Approved guideline. CLSI document MM4-A ( )- CLSI, 940 west Valley Road, Suite Wayne, PA USA Dako Technical Report TR Pertschuk LP, Feldman JG, Kim Y-D, Braithwaite L, Schneider F, Braverman AS, et al. Estrogen receptor immunocytochemistry in paraffin embedded tissues with ER1D5 predicts breast cancer endocrine response more accurately than H222Spγ in frozen sections or cytosol-based ligand-binding assays. Cancer 1996;77: Barnes DM, Harris WH, Smith P, Millis RR, Rubens RD. Immunohistochemical determination of oestrogen receptor: comparison of different methods of assessment of staining and correlation with clinical outcome of breast cancer patients. Br J Cancer 1996;74: Alabraba EB, Taniere P, Reynolds GM, Stewart PM, Wigmore SJ, Bramhall SR. Expression and functional consequences of oestrogen and progesterone receptors in human insulinomas. Endocr Relat Cancer 2007;14: 基本信息注册人 / 生产企业名称 :Dako Denmark A/S 住所 :Produktionsvej 42, DK-2600 Glostrup, Denmark 生产地址 :Produktionsvej 42, DK-2600 Glostrup, Denmark 联系电话 : 传真 : 售后服务单位名称 : 安捷伦科技 ( 中国 ) 有限公司联系电话 : 代理人的名称 : 安捷伦科技 ( 中国 ) 有限公司 _IR CN/ /7

7 住所 : 北京市朝阳区望京北路 3 号研发中心 ( 一期 )3 层 3-1 至 3-3 室联系电话 : 传真 : 医疗器械注册证编号/ 产品技术要求编号国械注进说明书核准日期及修改日期核准日期 : 标识的解释目录号温度范围有效期体外医疗诊断设备含足够 n 个测试生产厂商参见使用说明书. 批号 _IR CN/ /7

一抗 + 显色系统 /HRP 或 AP + 显色剂观察结果主要组成成分 1. 所提供的试剂即用型小鼠单克隆抗体, 以液体的形式提供, 保存在含有 1% BSA 蛋白稳定剂及 0.015% 的叠氮钠的缓冲液内克隆号 :MIB-1(8) 同型 :IgG1,kappa 链 2. 必需但未提供的材料

一抗 + 显色系统 /HRP 或 AP + 显色剂观察结果主要组成成分 1. 所提供的试剂即用型小鼠单克隆抗体, 以液体的形式提供, 保存在含有 1% BSA 蛋白稳定剂及 0.015% 的叠氮钠的缓冲液内克隆号 :MIB-1(8) 同型 :IgG1,kappa 链 2. 必需但未提供的材料 Ki-67 抗体 ( 免疫组化法 ) 说明书产品名称通用名称 :Ki-67 抗体 ( 免疫组化法 ) 英文名称 : FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Ki-67 Antigen, Clone MIB-1, Ready-to-Use,(Link) 包装规格 12 ml 预期用途用于免疫组化 (IHC) 测试时, 定性检测经福尔马林固定石蜡包埋的组织中正常细胞和肿瘤细胞中