一抗 + 显色系统 /HRP 或 AP + 显色剂观察结果主要组成成分 1. 所提供的试剂即用型小鼠单克隆抗体, 以液体的形式提供, 保存在含有 1% BSA 蛋白稳定剂及 0.015% 的叠氮钠的缓冲液内克隆号 :MIB-1(8) 同型 :IgG1,kappa 链 2. 必需但未提供的材料

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度肥暨
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1 Ki-67 抗体 ( 免疫组化法 ) 说明书产品名称通用名称 :Ki-67 抗体 ( 免疫组化法 ) 英文名称 : FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Ki-67 Antigen, Clone MIB-1, Ready-to-Use,(Link) 包装规格 12 ml 预期用途用于免疫组化 (IHC) 测试时, 定性检测经福尔马林固定石蜡包埋的组织中正常细胞和肿瘤细胞中 Ki-67 抗原的表达例如软组织肉瘤 (1), 前列腺腺癌 (2) 和乳腺癌 (3) 中肿瘤细胞采用一组抗体联合使用, 用于细胞分化状态的鉴别该抗体着色为棕色 DAB 染色, 定位于细胞核 Ki-67 抗原是一种核蛋白, 已通过 Ki-67 单克隆抗体的反应性得以证实已经明确该基因编码两个蛋白异构体, 分别为 345 和 395kDa(5) Ki-67 抗原主要表达于细胞周期的活动期 (G1,S,G2, 以及 M 期 ), 但静止期 (G0) 该蛋白不表达在细胞间期, 该抗原只表达于细胞核, 而在有丝分裂期, 多数蛋白重新定位于染色体的表面随着细胞进入非增生状态, 抗原快速地被降解 (6), 显示出 DNA 修复过程中没有 Ki-67 蛋白的表达的状态 (7) 检测原理 1. 免疫原编码人类 ki-67 的长度为 1002bp 的 cdna 片段重组多肽 (8) 2. 特异性对多发性骨髓瘤细胞系 IM-9 的蛋白免疫印迹检测显示,MIB-1 抗体标记的条带为 345 和 395kDa 的两个条带, 与原始 Ki-67 抗体标记的目的条带一致而且, 免疫印迹和竞争结合实验清晰地显示,MIB-1 与 Ki-67 抗体一样, 能够与 Ki-67 基因中 66bp 重复元件编码的表位反应免疫组织化学方法中, 在扁桃体冷冻组织切片上,MIB-1 和 Ki-67 抗体能够提供相同的染色模式 (8) MIB-1 抗体能够识别原始 Ki-67 抗原及 Ki-67 分子的重组片段 (8) 3. 免疫组化 (IHC) 反应原理 : 应用抗原与抗体特异结合的原理, 用已知抗体与待测抗原结合, 通过抗体再结合酶 (HRP 或 AP) 标记的放大系统 ( 显色系统 ) 形成复合物, 加上酶的底物 ( 显色剂 ) 使之显色, 找到待测抗原, 通过显微镜观察结果 P04603CN_01_IR CN/ /5

2 一抗 + 显色系统 /HRP 或 AP + 显色剂观察结果主要组成成分 1. 所提供的试剂即用型小鼠单克隆抗体, 以液体的形式提供, 保存在含有 1% BSA 蛋白稳定剂及 0.015% 的叠氮钠的缓冲液内克隆号 :MIB-1(8) 同型 :IgG1,kappa 链 2. 必需但未提供的材料 1) 需要采用免疫组化预处理系统 (PT Link)( 代码 PT100/PT101) 进行热诱导的抗原修复 (HIER) 详细信息请参阅免疫组化预处理系统 (PT Link) 用户指南最佳结果可通过将标本用抗原修复液 (EnVision, Target Retrieval Solution, Low ph (50x) ( 代码 K8005) 修复后获得 2) 推荐的显色系统为 EnVision FLEX, 高 ph 型 (Link)( 代码 K8000) 可采用低 ph 型 (50x) ( 代码 K8005) 的抗原修复液替代试剂盒内的高 ph 型 EnVision FLEX 抗原修复液染色步骤及孵育时间已预先设定在组织染色机 (AutoStainer link 48) 软件内推荐使用的试剂体积为每张切片 μl 或 2 150μL 有关载玻片和试剂的详细使用说明, 请参阅组织染色机 (AutoStainer link 48) 用户指南如果用户的组织染色机 (AutoStainer link 48) 工作平台上没有相应的方案可以使用, 请与 Dako 公司的技术支持人员联系所有孵育步骤均在室温下进行 3) 推荐采用苏木素染色液 ( 代码 K8008) 进行复染推荐采用非水溶性的永久封片剂进行封片 4) 为了增加组织与玻片之间的黏附力, 推荐采用 FLEX IHC 载玻片 ( 代码 K8020) 5) 推荐使用的阴性质控试剂为 FLEX 阴性质控 ( 代码 IR750) 储存条件及有效期 2~8 保存有效期 24 个月载机稳定性为室温下可保存 5 天不要在瓶上标记的效期后使用如果试剂不是按照指定的条件存储, 用户须对存储条件进行有效性确认因此, 在对患者标本进行检测时, 应同时运行阳性和阴性质控如果异常的染色结果不能用实验室检测过程变化解释, 怀疑是抗体的问题质量所导致, 请与我们的技术支持人员联系生产日期, 失效日期 : 见标签适用仪器组织染色机 (AutoStainer link 48) 样本要求 1. 抗体用于标记福尔马林固定, 石蜡包埋的组织切片组织标本切片的厚度应该大约为 4μm 2. 石蜡包埋切片 : 对福尔马林固定, 石蜡包埋的组织切片推荐采用 3 合 1 的免疫组化预处理系统 (PT Link) 进行标本制备按照抗原修复液 (EnVision, Target Retrieval Solution, Low ph (50x) ( 代码 K8005) 说明书给出的方法进行处理提示 : 染色后的切片必须进行脱水透明, 并采用封片剂进行永久封片 P04603CN_01_IR CN/ /5

3 3. 脱蜡切片 : 推荐采用免疫组化预处理系统 (PT Link) 对福尔马林固定脱蜡的组织切片进行预处理, 并按照石蜡包埋切片相同的方法进行处理染色后, 切片应该采用水溶性永久封片剂进行封片 4. 组织切片在处理过程中或免疫染色过程中不应该干燥为了增加组织与玻片之间的黏附力, 推荐采用 PLEX IHC 玻片 ( 代码 K8020) 检测方法 1. 检测步骤需要采用免疫组化预处理系统 (PT Link) 进行热诱导的抗原修复 (HIER) 详细信息请参阅免疫组化预处理系统 (PT Link) 用户指南最佳结果可通过将标本用抗原修复液 (EnVision, Target Retrieval Solution, Low ph (50x) ( 代码 K8005) 修复后获得 1) 将抗原修复液按照 1:50 比例配制好, 放置在全自动免疫组化预处理系统 (PT Link) 中 2) 运行免疫组化预处理系统加热 (PT Link) 至 65 度, 将切片放置在抗原修复液中 3) 加热至 95 度, 持续 20 分钟, 然后缓慢降温至 65 度 4) 将切片迅速取出放置在洗脱缓冲液工作液中,5 分钟后, 放置在组织染色机上染色 5) 过氧化物酶阻断剂 5 分钟 6) 洗脱缓冲液工作液冲洗 7) 一抗 20 分钟 8) 洗脱缓冲液工作液冲洗 9) 二抗 20 分钟 10) 洗脱缓冲液工作液冲洗 11) DAB 显色 10 分钟 12) 自来水冲洗 13) 苏木素染色液复染 5 分钟 14) 自来水冲洗 15) 70% 酒精,80% 酒精,90% 酒精,100% 酒精,100% 酒精各 2 分钟 16) 二甲苯透明 5 分钟 17) 二甲苯透明 5 分钟 18) 封片 2. 质控当进行患者标本染色时, 也应该同时进行阳性和阴性质控染色阳性质控组织应该包括子宫颈和细胞 / 结构上能显示所有阳性标本性能参数所描述的反应分布模式推荐使用的阴性质控试剂为 FLEX 阴性质控 ( 代码 IR750) 更多信息及使用说明请参考 Dako 组织染色机 (AutoStainer link 48) 用户指南产品性能指标 1. 染色结果的解释除有丝分裂期细胞外, 被抗体标记的细胞显示在细胞核染色, 而在有丝分裂期的细胞该抗原标记在染色体和细胞质 2. 检测结果的解释 P04603CN_01_IR CN/ /5

4 正常组织 : 小肠和结肠的粘膜颈细胞和腺窝细胞, 以及 Peyer s 小结的生发中心细胞该抗体染色阳性表皮细胞和其他的粘膜细胞, 例如 Paneth 细胞和结缔组织的粘膜下层细胞均为阴性肌肉细胞也为阴性, 少数平滑肌细胞例外, 可呈阳性表达肾脏, 肝脏, 胰腺, 脑组织为阴性 (9) 偶尔情况下, 血管壁和胰腺间质细胞的某些成分免疫组织化学染色也可能呈阳性表达扁桃体, 生发中心的 B 细胞暗区, 也可以呈中等至强阳性反应 ; 而生发中心 B 细胞则显示弱至中等强度的着色异常组织 : 在一项针对 123 例软组织肉瘤的研究中, 采用 MIB-1 抗体标记,Ki-67 在恶性纤维组织肉瘤细胞呈现高表达, 则脂肪肉瘤表达水平最低在 221 例前列腺癌及 919 例乳腺癌中,Ki-67 抗原标记也为阳性 (3) 检测方法的局限性 1. 最佳反应条件取决于标本及制备方法, 应该由每个实验室的用户确定如果检测的病理学家期望获得不同的染色强度, 孵育时间及 EnVision FLEX/EnVision FLEX+ 显色系统的选择均可做出调整可以咨询 Dako 应用专家 / 技术支持专家, 确定研究方案中程序的重新设定调整后的方案仍然需要评价, 包括染色分布模式是否与性能参数部分所描述的分布模式一致 2. 采用一组抗体联合使用, 用于细胞分化状态的鉴别任何染色阳性或缺乏表达的临床意义的解释均应该结合形态学特征, 同时采用适当的对照, 并在临床病史的范围内进行评估, 并结合其他合格临床病理学家的诊断测试结果联合做出诊断注意事项 1. 仅用于体外诊断并仅供专业人员使用 2. 本产品中含有叠氮化钠 (NaN3) 剧毒性纯净化合物虽然在本产品中的浓度很低不能归为危险品, 但是叠氮化钠可与铅及铜管道发生反应, 生成极具爆炸性的金属叠氮化合物请使用大量清水冲洗处理, 以防在管道中形成金属叠氮化合物 3. 与所有生物源性物质一样, 应该采用适当的方法进行处理 4. 穿戴合适的个人防护装置, 以避免接触眼睛与皮肤 5. 根据当地政府国家的规范要求, 对未经使用或不用的溶液进行处理参考文献 1. Huuhtanen RL, Blomqvist CP, Wiklund TA, Böhling TO, Virolainen MJ, Tukiainen EJ, et al. Comparison of the Ki-67 score and S-phase fraction as prognostic variables in soft-tissue sarcoma. Br J Cancer 1999; 79: Borre M, Bentzen SM, Nerstrøm B, Overgaard J. Tumor cell proliferation and survival in patients with prostate cancer followed expectantly. J Urol 1998; 159: Seshadri R, Leong AS-Y, McCaul K, Firgaira FA, Setlur V, Horsfall DJ. Relationship between p53 gene abnormalities and other tumour characteristics in breast-cancer prognosis [published erratum appears in Int J Cancer 1996;69:354]. Int J Cancer 1996; 69: Gerdes J, Lemke H, Baisch H, Wacker H-H, Schwab U, Stein H. Cell cycle analysis of a cell proliferation-associated human nuclear antigen defined by the monoclonal antibody Ki-67. J Immunol 1984;133: Gerdes J, Li L, Schlueter C, Duchrow M, Wohlenberg C, Gerlach C, et al. Immunobiochemical and molecular biologic characterization of the cell proliferation-associated nuclear antigen that is defined by monoclonal antibody Ki-67. Am J Pathol 1991; 138: P04603CN_01_IR CN/ /5

5 6. Scholzen T, Gerdes J. The Ki-67 protein: from the known and the unknown [review]. J Cell Physiol 2000; 182: Key G, Kubbutat MH, Gerdes J. Assessment of cell proliferation by means of an enzyme-linked immunosorbent assay based on the detection of the Ki-67 protein. J Immunol Methods 1994; 177: Key G, Becker MHG, Baron B, Duchrow M, Schlüter C, Flad H-D, et al. New Ki-67-equivalent murine monoclonal antibodies (MIB 1-3) generated against bacterially expressed parts of the Ki-67 cdna containing three 62 base pair repetitive elements encoding for the Ki-67 epitope. Lab Invest 1993; 68: Cattoretti G, Becker MHG, Key G, Duchrow M, Schlüter C, Galle J, et al. Monoclonal antibodies against recombinant parts of the Ki-67 antigen (MIB 1 and MIB 3) detect proliferating cells in microwave-processed formalin-fixed paraffin sections. J Pathol 1992; 168: 基本信息注册人 / 生产企业名称 :Dako Denmark A/S 住所 :Produktionsvej 42, DK-2600 Glostrup, Denmark 生产地址 :Produktionsvej 42, DK-2600 Glostrup, Denmark 联系电话 : 传真 : 售后服务单位名称 : 安捷伦科技 ( 中国 ) 有限公司联系电话 : 代理人的名称 : 安捷伦科技 ( 中国 ) 有限公司住所 : 北京市朝阳区望京北路 3 号研发中心 ( 一期 )3 层 3-1 至 3-3 室联系电话 : 传真 : 医疗器械注册证编号/ 产品技术要求编号国械注进说明书核准日期及修改日期核准日期 : 标识的解释目录号温度范围有效期体外医疗诊断设备含足够 n 个测试生产厂商参见使用说明书. 批号 P04603CN_01_IR CN/ /5

肌酸激酶MB型同工酶测定试剂盒（速率法）说明书

肌酸激酶MB型同工酶测定试剂盒（速率法）说明书雌激素受体抗体 ( 免疫组化法 ) 说明书产品名称通用名称 : 雌激素受体抗体 ( 免疫组化法 ) 英文名称 :FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Estrogen Receptor α, Clone 1D5, Ready-to-Use, (Link) 包装规格 12 ml 预期用途用于免疫组化 (IHC) 测试时, 定性检测经福尔马林固定石蜡包埋的乳腺癌组织中雌