CD20检测试剂盒(免疫组化)说明书

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1 胶质纤维酸性蛋白抗体试剂 ( 免疫组织化学法 ) 说明书 说明书编号 :40031a 产品编号 :Kit-0031 产品名称 通用名称 : 胶质纤维酸性蛋白抗体试剂 ( 免疫组织化学法 ) 英文名称 :Glial Fibrillary Acidic Protein(G-A-5) 包装规格 3ml/ 瓶 6ml/ 瓶 预期用途 本抗体试剂用于福尔马林固定 石蜡包埋的人体组织切片, 细胞中胶质纤维酸性蛋白抗 原的定性检测 本抗体试剂用以辅助脑星形细胞瘤 胶质瘤的诊断 阳性细胞中抗原定位为细胞质 对 任何阳性或阴性结果的解读, 应由病理医生结合病理形态学 临床表现及其它检测方法进行, 不作为单独的诊断指标 检测原理 利用免疫学抗原抗体分子由于结构的互补和彼此亲和性所发生特异性结合原理, 并通过 氧化还原化学反应使标记抗体的酶显色剂显色来确定组织细胞内抗原, 对其进行定位 定性 首先是联结鼠抗人胶质纤维酸性蛋白免疫组化单克隆抗体和组织上的胶质纤维酸性蛋白抗 原, 第二是酶标羊抗小鼠 / 兔 IgG 聚合物识别已经连接上的胶质纤维酸性蛋白抗体 ; 第三, 加入底物, 聚合物上的辣根过氧化物酶部分可以催化 DAB 显色液中的 H 2 O 2 分解, 使联苯 胺氧化变成联苯亚胺, 使组织切片中抗原位点上出现黄色或棕黄色着色 最后对样本进行复 染和封片 通过显微镜观测显色情况, 推断组织切片上胶质纤维酸性蛋白的存在位点和情况 为了质量控制, 建议使用福尔马林固定石蜡包埋的人类脑胶质瘤组织切片作为阳性对照 本抗体试剂克隆号为 :GA-5; 细胞染色定位为细胞质 ; 无需修复抗原 主要组成成份 鼠抗人胶质纤维酸性蛋白免疫组化单克隆抗体 (IgG 1, 来源 : 小鼠腹水 ; 克隆号 :GA-5) 未提供的迈新配套材料如下 : 迈新 DAB 染色液 ( 聚合物法 )( 迈新产品编号 :Kit-0014, 内含 : 内源性过氧化物酶阻断剂 酶标羊抗小鼠 / 兔 IgG 聚合物 稳定型 DAB 缓冲液 稳定型 DAB 底物 稳定型 DAB 色原 DAB 显色液配制管 ); PBS 磷酸盐缓冲液 ( 粉剂 )( 迈新产品编号 :PBS-0060/0061); 苏木素体细胞染色液 ( 迈新产品编号 :CTS-1099/1097/1090/1091); 空白对照试剂 ( 可采用迈新抗体稀释液, 迈新产品编号 :ABD-0030) 其他未提供材料 : 阳性对照片 ( 脑胶质瘤 ) 二甲苯 乙醇 ( 无水 95% 85%) 蒸馏水 中性树胶 储存条件及有效期 2~8 避光保存, 禁止冻存 有效期为 12 个月 使用时, 采取即拿即用的原则, 每次使用后, 应立即放回 2~8 的冰柜中进行保存 开 瓶后有效期不变 样本要求 新鲜活检或外科样本组织, 中性福尔马林固定, 固定时间 8~24 小时, 参照病理技术规范 要求取材 脱水 石蜡包埋并制成蜡块 蜡块在常温条件下保存有效期 5 年 1

2 组织切片厚度为 3~5 μm 黏附在聚赖氨酸玻片上, 轻拍切片架并用吸湿纸吸取组织切片中的水滴, 再放入 56~60 C 恒温箱中烤片两个小时后, 从恒温箱中移出放置在室温下冷却 如果切片在室温下 (15~28 ) 保存, 为了良好地重现组织中抗原分布情况, 要在 7 天内完成检测 检测方法 1 检测所需仪器 设备移液器 免疫组化油笔 计时器 孵育盒 染色架 盖玻片 光学显微镜 (40 ~200 ) 洗瓶 2 溶液配置 : 2.1 PBS 溶液 : PBS 溶液以及 DAB 显色液的配制参见各产品说明书 3 试验温度条件 :15 ~28 4 试验步骤 : a) 脱蜡和水化 : 石蜡切片置于新鲜的二甲苯中, 浸泡 15 分钟 2 次 ; 去除多余的液体后, 置无水乙醇中, 浸泡 3 分钟 2 次 ; 去除多余的液体后, 置 95% 乙醇中, 浸泡 3 分钟 ; 去除多余的液体后, 置 85% 乙醇中, 浸泡 3 分钟 ; 自来水冲洗 1 分钟 ; b) 阻断内源性过氧化物酶除去 PBS 溶液, 加 100μl 内源性过氧化物酶阻断剂, 室温下孵育 10 分钟, c) 加胶质纤维酸性蛋白抗体或空白对照试剂除去 PBS 溶液, 加 100μl 的胶质纤维酸性蛋白抗体或空白对照试剂, 室温下孵育 60 分钟 d) 加酶标聚合物除去 PBS 溶液, 加 100μl 酶标羊抗小鼠 / 兔 IgG 聚合物, 室温下孵育 15 分钟 e) 显色除去 PBS 溶液, 加 100~200μl 新鲜配制的 DAB 显色液, 孵育 3~5 分钟, 光镜观察染色结果一般不超过 10 分钟 f) 复染自来水冲洗, 加 100~200μl 苏木素体细胞染色液孵育 10~30 秒 ; PBS 溶液或自来水冲洗返蓝 注意 : 依据作用的苏木素染色液的强度和孵育时间的长短 : 对比染色结果导致细胞核呈现淡蓝到深蓝颜色的反应, 而过染或是不足染色都有可能危及正确结果的判断 g) 脱水 透明 封片 85% 乙醇中, 浸泡 3 分钟 ; 95% 乙醇中, 浸泡 3 分钟 ; 无水乙醇, 浸泡 3 分钟 ; 二甲苯透明 ; 中性树胶和盖玻片封片 5 结果判断 : 2

3 免疫组化检测结果要由有资格的病理医生在光学显微镜下对染色后切片进行观察并进行判断 5.1 免疫组化染色结果必须建立在组织阳性对照 试剂阴性对照实验成立的基础上, 染色结果的判读 : 阳性 (+)/ 阴性 (-); 染色阳性结果是指组织切片中特定细胞的细胞质上见有棕黄色着色, 且无背景染色 ; 阴性染色结果是组织内预期细胞中未见棕黄色着色 注意 : 在每一次染色过程中, 必须使用阳性对照片和空白对照试剂, 否则结果不可采用 5.2 组织阳性对照和试剂阴性对照实验成立的基础上, 受检组织片中出现阳性染色表示组织切片上存有胶质纤维酸性蛋白抗原 5.3 组织阳性对照和试剂阴性对照实验成立的基础上, 受检组织片中出现阴性染色表示组织切片上存有胶质纤维酸性蛋白抗原可能性低 5.4 如果组织阳性对照和试剂阴性对照实验均为阴性结果, 表明试剂失效或实验操作错误, 应重新实验 过程与结果质控阳性对照 : 阳性对照组织内脑胶质瘤组织, 肿瘤细胞含有胶质纤维酸性蛋白抗原可作为阳性对照 ; 而血管内皮, 各种淋巴细胞 平滑肌细胞和纤维细胞则代表通常意义的阴性对照 空白对照 : 每次染色都要包含同一测试条件下的空白对照试剂进行对比 空白对照试剂来代替抗体 对组织切片进行染色, 用来判断非特异性着色, 并对抗原部位特异性染色提供更好的解释 空白对照试剂的孵育时间必须与抗体一致 检测结果的解释 1 抗原修复 孵育时间 温度的修改或应用其他方法均有可能得出错误结果 2 在每一次染色过程中, 必须使用阳性对照片和空白对照试剂, 否则结果不可采用 3 当在室温下保存时, 样本应该在组织封存到载玻片上 7 天内染色 避免组织中抗原的退 变产生假阴性结果 4 如果阳性组织对照不能显示适当的阳性染色, 则说明操作错误, 此批实验测试样本的结 果应认为是无效的 检测方法的局限性 免疫组化是一种多步骤病理诊断过程, 包括试剂的选择, 组织的选择, 固定和处理, 切 片的准备, 染色及结果解释 染色前组织的处理方式能直接影响染色效果 不恰当的固定 冰冻 熔化 清洗 烘干 切片或被其他组织或液体污染都可能造成假阳性, 抗体定位不准确或假阴性结果 固定和包 埋方法的不同或是组织内部的不规则也可能造成异常的染色结果 同时, 过度或不充分的复染也可能影响结果的正确解释 福尔马林固定 石蜡包埋脑胶质瘤组织切片, 胶质纤维酸性蛋白抗体试剂染色, 细胞质阳性 任何阳性染色或阳性染色缺失的临床解释都必须参考其临床病史 细胞形态学和其他组 织病理学背景进行评估 任何染色或其缺失的临床解释都必须以形态学研究和正确的对照以 及其他诊断试验作为补充 测试结果及诊断价值也应由病理医生结合临床及其他检查结果加 3

4 以综合分析和判断 试剂可能在未经测试的组织中出现非预期的反应 由于肿瘤或其他病态组织中的抗原表达具有生物变异性, 因此无法完全消除被测组织出现非预期反应的可能性 假阳性的结果可能会由于蛋白或底物反应产物的非免疫学结合造成的 它们也可能会由红血球和细胞色素 C 造成的 产品性能指标 特异性对一系列正常组织和相关恶性病变组织进行特异性细胞质染色研究, 正常组织结果如下 : 大脑 (3/3) 小脑(3/3) 肾上腺(0/3) 卵巢(0/3) 胰腺 (0/3) 甲状旁腺 (0/3) 垂体 (3/3) 睾丸(0/3) 甲状腺(0/3) 乳腺 (0/3) 脾 (0/3) 扁桃体 (0/3) 胸腺 (0/3) 骨髓 (0/3) 肺 (0/7) 心脏 (0/3) 食管 (0/3) 胃 (0/3) 小肠(0/5) 结直肠(0/3) 肝脏 (0/3) 唾液腺(0/3) 肾 (0/3) 前列腺(0/3) 子宫(0/6) 膀胱 (0/3) 骨骼肌(0/3) 皮肤 (0/3) 外周神经 (0/3) 间皮细胞 (0/3) 相关恶性病变组织结果如下 : 星形细胞瘤 (5/5) 胶质瘤 (5/5) 脑室膜瘤 (5/5) 胶质母细胞瘤 (4/5) 神经鞘细胞瘤(1/5) 平滑肌瘤 (0/5) 平滑肌肉瘤 (1/5) 黑素瘤 (0/5) 纤维瘤 (0/5) 纤维肉瘤 (0/5) 直肠腺癌 (0/5) 神经纤维瘤 (0/5) 用胶质纤维酸性蛋白阳性对照片 ( 脑胶质瘤 ) 进行检测, 三份胶质纤维酸性蛋白阳性对照片 ( 脑胶质瘤 ) 中肿瘤细胞细胞质上观察到黄色或棕黄色着色 ; 而血管内皮, 各种淋巴细胞 平滑肌细胞和纤维细胞上未观察到任何黄色或棕黄色着色 用空白对照试剂取代鼠抗人胶质纤维酸性蛋白免疫组化单克隆抗体配合胶质纤维酸性蛋白阳性对照片 ( 脑胶质瘤 ) 进行检测, 三份胶质纤维酸性蛋白阳性对照片 ( 脑胶质瘤 ) 中肿瘤细胞细胞质上应显示阴性结果 敏感度用胶质纤维酸性蛋白弱阳性对照片 ( 脑胶质瘤 ) 进行检测, 三份胶质纤维酸性蛋白弱阳性对照片 ( 脑胶质瘤 ) 中肿瘤细胞细胞质上观察到浅黄色着色, 且颜色无明显差异 临床总结共进行 624 例有效样本临床试验, 结果如下 : 星形细胞瘤 (69/73) 胶质瘤 (94/104) 神经鞘细胞瘤 (3/51) 平滑肌瘤 (0/82) 平滑肌肉瘤 (0/28) 纤维瘤 (0/69) 纤维肉瘤 (0/40) 胃癌(0/11) 肠腺癌(0/24) 胃肠道间质瘤(0/4) 肠腺瘤(0/1) 食道鳞癌(0/5) 胰腺鳞癌 (0/1) 腹梭形细胞肉瘤 (0/1) 肝硬化 (0/1) 肝胆管黏液性囊腺病 (0/1) 急性阑尾炎 (0/2) 慢性胆囊炎 (0/4) 肺癌 (0/11) 肾癌 (0/27) 肾上腺皮质腺瘤 (0/2) 肾炎 (0/1) 多囊肾(0/1) 膀胱尿路上皮癌(0/2) 输尿管尿路上皮癌(0/3) 乳腺癌(0/12) 乳腺良性肿瘤 (0/5) 副乳 (0/1) 子宫内膜样癌 (0/3) 子宫腺肌症 (0/1) 宫颈原位癌 (0/3) 宫颈内膜癌 (0/1) 宫颈炎 (0/2) 卵巢腺癌 (0/5) 卵巢乳头状瘤 (0/1) 卵巢 Vrukenberg 瘤 (0/1) 畸胎瘤(0/1) 前列腺癌(0/2) 甲状腺瘤样病变(0/4) 舌鳞癌(0/1) 鼻息肉 (0/2) 腮腺瘤(0/1) 颌窦炎(0/1) 扁桃体炎(0/4) 淋巴瘤(0/5) 血管瘤(0/2) 动脉瘤 (0/1) 脂肪瘤 (0/2) 脂肪肉瘤 (0/1) 神经纤维瘤 (0/1) 脾 (0/1) 基底细胞癌 (0/4) 转移癌(0/1) 恶性嗜铬细胞瘤(0/1) 混合性色素痣(0/1) 蜕膜(0/2) 痔疮(0/1) 瘢痕 (0/1) 批内差在同一批次的产品随机抽取 20 盒样本采用阳性质控品进行检测, 然后在上述 20 盒的样本随机抽取一盒, 对相同质控品连续检测 20 次, 检测结果均为阳性 批间差随机抽取 3 批抗体试剂的样本, 每批抗体试剂抽样数 3 盒, 对每份样本采用阳性内部质控物进行检测, 检测结果均为阳性 4

5 注意事项 1 本品仅用于体外诊断, 不做其它用途 2 本抗体需配合使用迈新 DAB 染色液 ( 聚合物法 ) 等配套产品进行检测, 不得使用其它生产商产品代替使用 3 需专业人员使用 4 鼠抗人胶质纤维酸性蛋白免疫组化单克隆抗体来自生物资源, 对其处理应符合相关要求 5 应用适当的防护措施, 以避免试剂同皮肤和眼睛接触 6 此抗体试剂是否应用于非福尔马林固定组织还未得到证实 7 试剂含有叠氮钠作为防腐剂, 叠氮钠可以和铅铜反应而形成易爆炸的金属叠氮化合物 为 防止金属叠氮化合物的形成, 应用大量的水冲洗以免其堆积 参考文献 1. 王新, 黄如训, 邢成名等. 急性脑梗死患者血清胶质纤维酸性蛋白含量的动态变化及其临床 意义 [J]. 临床神经病学杂志,2006,19(2): 丁成云, 徐群渊, 栾国明. 难治性癫痫患者脑组织胶质原纤维酸性蛋白和多耐药基因蛋白的免 疫电镜观察 [J]. 解剖学报,35(6): 张辉, 饶志仁, 黄文晋. 胶质原纤维酸性蛋白的研究进展 [J]. 生理科学进 展,2001,32(4): 吴秉铨, 刘彦仿. 免疫组织化学病理诊断 [M]. 北京 : 北京科学技术出版社, 王淑琴, 黄风昌, 李红芬, 纪小龙. 免疫组化在常规病理诊断中的应用 [J]. 中国试验诊断 学, 1998,2(6): 智俐, 贾军乐. 免疫组化技术中抗原修复的应用 [J]. 包头医学院学, 2006, 22(02): 唐伟国主编. 医学检验诊断试剂的制备与应用 [M]. 上海 : 上海科学技术文献出版社, 许良中, 杨文涛. 免疫组织化学反应结果的判断标准 [J]. 中国癌症杂志, 1996,6(04): 生产企业 福州迈新生物技术开发有限公司 注册地址 : 福建省福州市闽侯县科技东路 3 号福州高新区海西高新技术产业园创新园 12 号 楼邮编 : 生产地址 : 福州高新区海西高新技术产业园创新园 12 号楼 1-3 层 5-6 层邮编 : 电话 : 传真 : 网址 : 医疗器械生产企业许可证编号 闽食药监械生产许第 号 医疗器械注册证书编号 国械注准 产品标准编号 YZB/ 国 说明书批准及修改日期 2015 年 2 月 10 日 5

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