93 任睿欣, 等. 扩增阻滞突变系统法检测非小细胞肺癌微小标本表皮生长因子受体突变 肺癌是世界范围内癌症死亡的主要原因之一, 其中 85% 以上为非小细胞肺癌 (non-small cell lung cancer,nsclc) [1] 表皮生长因子受体 (epidermal growth fac
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1 肿瘤 212 年 11 月第 32 卷第 11 期 TUMOR Vol. 32, November 技术与方法 Technology and Method DOI: /j.issn Copyright 212 by TUMOR 扩增阻滞突变系统法检测非小细胞肺癌微小标本表皮生长因子受体突变 任睿欣 1*, 李嘉瑜 1*, 李雪飞 1, 陈秀 1, 任胜祥 2 2, 周彩存同济大学附属上海市肺科医院 1. 肺癌免疫实验室,2. 肿瘤科, 上海 2433 [ 摘要 ] 目的 : 探讨非小细胞肺癌 (non-small cell lung cancer,nsclc) 微小标本代替大体标本用于扩增阻滞突变系统 (amplification refractory mutation system,arms) 法检测表皮生长因子受体 (epidermal growth factor receptor,egfr) 基因突变的可行性 方法 :181 例 NSCLC 标本纳入本研究, 包括 157 例微小标本 ( 分别为 CT 引导下经皮肺穿刺活检标本 支气管内超声引导下针吸活检标本 淋巴结活检标本 支气管镜活检标本和胸腔积液 ) 和 24 例大体标本 采用 QIAGEN DNA 提取试剂盒提取标本组织 DNA, 然后使用 AmoyDx 人类 EGFR 基因 4 种突变荧光 PCR 检测试剂盒检测 EGFR 基因的突变情况, 最后采用 χ 2 检验或 Fisher 精确检验比较微小标本与大体标本的 EGFR 突变检出率 结果 :181 例标本中,EGFR 的总突变率为 39.8%(72/181); 其中微小标本的 EGFR 突变检出率为 38.9%, 大体标本的 EGFR 突变检出率为 45.8%,2 者间差异无统计学意义 (P =.515) EGFR 突变率在不吸烟患者 (P =.33) 和腺癌患者 (P <.1) 中显著增高 结论 :ARMS 法检测 NSCLC 微小标本也能获得较高的 EGFR 突变检出率 对于晚期难以获得大体标本的 NSCLC 患者, 微小标本可代替大体标本应用于临床 EGFR 突变检测 [ 关键词 ] 癌, 非小细胞肺 ; 受体, 表皮生长因子 ;DNA 突变分析 ;ARMS [ 中图分类号 ] R734.2 [ 文献标志码 ] A [ 文章编号 ] (212) Detection of epidermal growth factor receptor mutations in small specimens of non-small cell lung cancer by amplification refractory mutation system REN Rui-xin 1*, LI Jia-yu 1*, LI Xue-fei 1, CHEN Xiu 1, REN Sheng-xiang 2, ZHOU Cai-cun 2 1. Department of Lung Cancer and Immunology, 2. Department of Medical Oncology, Shanghai Pulmonary Hospital Affiliated to Tongji University, Shanghai 2433, China [ABSTRACT] Objective: To explore the feasibility of the application of small specimens as alternatives of gross specimens to detect EGFR (epidermal growth factor receptor) mutation in NSCLC (non-small cell lung cancer) by ARMS (amplification refractory mutation system). Methods: Biopsy specimens from 181 cases of NSCLC were collected, in which 157 were small specimens (including specimens acquired through CT-guided percutaneous lung biopsy, endobronchial ultrasound-guided transbronchial needle aspiration, lymph node biopsy, bronchoscopic biopsy and aspiration of pleural effusion) and 24 were gross specimens. QIAGEN DNA extraction kit was used to extract DNAs from NSCLC specimens. Then AmoyDx EGFR Mutation Test Kit a highly sensitive real-time PCR-based test was used to detect EGFR mutations. The detection rates of EGFR mutations in small specimens and gross specimens were compared by Chi-square test or Fisher s exact test. Results: The total EGFR mutation detection rate of all biopsy specimens was 39.8% (72/181). The detection rates of small specimens and gross specimens were 38.9% and 45.8%, respectively (P =.515). Furthermore, EGFR mutation frequencies were significantly higher in non-smokers (P =.33) and in patients with adenocarcinoma (P <.1). Conclusion: A relatively high detection rate of EGFR mutation in NSCLC small specimens can be obtained through ARMS. For patients with advanced NSCLC whose gross specimens cannot be easily obtained, the alternative small specimens can be used in clinical EGFR mutation detection. [KEY WORDS] Carcinoma, non-small cell lung; Receptor, epidermal growth factor; DNA mutation analysis; ARMS [TUMOR, 212, 32 (11): ] [ 基金项目 ] 1. 国家自然科学基金资助项目 ( 编号 : ) 2. 上海市科委基础研究重点项目 ( 编号 :11JC14113) Correspondence to: ZHOU Cai-cun( 周彩存 ) caicunzhou@yahoo.com.cn *2 位作者对本文贡献相同 Received Accepted
2 93 任睿欣, 等. 扩增阻滞突变系统法检测非小细胞肺癌微小标本表皮生长因子受体突变 肺癌是世界范围内癌症死亡的主要原因之一, 其中 85% 以上为非小细胞肺癌 (non-small cell lung cancer,nsclc) [1] 表皮生长因子受体 (epidermal growth factor receptor,egfr) 参与调控肿瘤细胞的增殖 凋亡 侵袭 血管生成和转移, 是 NSCLC 重要的治疗靶点之一 [2] 表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂 (epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors, EGFR-TKIs) 如吉非替尼和厄洛替尼等, 可选择性地抑制 EGFR 酪氨酸激酶区的活化, 阻断其下游的信号转导, 可用于至少一次化疗失败后的局部晚期或转移性 NSCLC 的治疗 研究显示,EGFR 基因突变状态能够预测 EGFR- TKIs 的疗效 [3] 212 年新版美国国立综合癌症网络 (National Comprehensive Cancer Network, NCCN) 中 NSCLC 临床实践指南明确指出, 对于晚期 复发或转移性非鳞癌 NSCLC 患者应进行 EGFR 突变检测, 突变阳性的患者推荐使用 EGFR-TKIs 作为一线治疗 另外,212 年公布的 TAILOR 研究表明, 对于 EGFR 野生型的 NSCLC 患者, 化疗药物多西紫杉醇二线治疗的有效率及无进展生存时间均优于厄洛替尼, 提示 EGFR 突变检测对 NSCLC 患者二线治疗也具有重要意义 [4] 然而, 目前我国晚期 NSCLC 患者 EGFR 突变检测的现状却令人担忧, 研究显示仅有 9.6% 的患者进行 EGFR 突变检测 [5] 除了广大医务人员对 EGFR 突变状态的意义认识不足之外, 另外一个主要原因是当前广泛采用的 DNA 直接测序法对检测标本要求高, 需要大体标本石蜡切片, 而大部分晚期 NSCLC 患者已经失去了手术切除根治提供大体标本的机会 扩增阻滞突变系统 (amplification refractory mutation system,arms) 法在实时荧光定量 PCR 的平台上, 利用特异的引物对 DNA 突变靶序列进行高精准的 PCR 扩增, 并利用荧光标记探针对扩增产物进行突变检测 与直接测序法相比, ARMS 法简单 快速 特异性强 灵敏度高, 可 [6, 检测到 DNA 中含量低至 1% 的突变基因 7] 既往研究曾采用 ARMS 法对大体标本进行 EGFR [8, 突变检测, 显示出该法具有较高的灵敏度 9] 本研究采用 ARMS 法对 NSCLC 微小标本和大体标本进行 EGFR 突变检测, 探讨微小标本是否可代替大体标本用于 ARMS 法 EGFR 突变检测 1 材料与方法 1.1 标本获取收集 211 年 1 月 212 年 2 月 由上海市肺科医院肺癌免疫实验室进行 EGFR 突变检测的 181 例 NSCLC 标本, 包括 157 例微小标本和 24 例大体标本 微小标本包括 CT 引导下经皮肺穿刺活检标本 ( 简称肺穿刺标本,49/181, 27.1%) 支气管内超声引导下针吸活检标本 ( 简称 EBUS 标本,21/181,11.6%) 淋巴结活检标本 (23/181,12.7%) 支气管镜活检标本 (13/181, 7.2%) 和胸腔积液 (51/181,28.2%) 本研究中大体标本为石蜡切片 (24/181,13.3%) 所有标本在进行 EGFR 突变检测前均经病理科医生确诊为 NSCLC 1.2 提取 DNA 用来提取 DNA 的标本应满足以下要求 : 新鲜活检标本不少于.2 g; 胸腔积液不少于 4 ml;4 ~ 5 μm 石蜡切片不少于 5 片 使用德国 QIAGEN 公司的 DNA 提取试剂盒提取 DNA: 微小标本采用血液和组织 DNA 提取试剂盒 (DNeasy Blood & Tissue Kit,Cat.No.6956), 大体标本采用石蜡组织 DNA 提取试剂盒 (QIAamp DNA FFPE Tissue Kit,Cat.No.5644) 使用美国 Thermo Fisher 公司的 NanoDrop 2 分光光度计检测所提取 DNA 的纯度和浓度, 要求 D 26 /D 28 在 1.8 ~ 2. 之间并且 D 26 /D 23 > 2., 微小标本 DNA 质量浓度调整至 1. ng/μl, 大体标本 DNA 质量浓度调整至 2. ng/μl 1.3 ARMS 法检测 EGFR 突变使用厦门艾德生物医药科技有限公司的人类 EGFR 基因 4 种突变荧光 PCR 检测试剂盒对表 1 所示 4 种 EGFR 突变进行检测 该试剂盒采用 8 联 PCR 管设计, 管内装有相应的 EGFR 突变检测试剂和质控试剂 检测时将 23.5 μl 模板 DNA 和 1.5 μl Taq 酶混匀后, 向相应的管内加入 5 μl 即可构成 PCR 反应总体系 PCR 反应条件 :95 5 min, 1 个循环 ;95 25 s,64 2 s,72 2 s,15 个循环 ;93 25 s,6 35 s,72 2 s,31 个循环 在延伸过程中 6 时收集信号 所用仪器为美国 Stratagene 公司的 Mx3P 实时荧光定量 PCR 仪 若收集到的信号满足以下 4 点, 则认为检测成功 结果可信 :(1) 阴性对照无 FAM 信号升起 ;(2) 阳性对照 Ct 值 < 2;(3) 外控 FAM 信号升起且微小标本 Ct 值在 13 ~ 19 之间 大体标本 Ct 值在 15 ~ 21 之间 ;(4) 内控 HEX 信号或 VIC 信号升起 EGFR 突变检测结果判定标准见表 统计学方法使用 SPSS 17. 软件进行统计学分析 采用 χ 2 检验或 Fisher 精确检验分析 NSCLC 微小标本与大体标本之间 EGFR 突变检出率有无统计学差异, 以及具有不同临床病理特
3 任睿欣, 等. 扩增阻滞突变系统法检测非小细胞肺癌微小标本表皮生长因子受体突变 931 征 ( 年龄 性别 吸烟史 病理类型及临床分期 ) 的 NSCLC 患者之间 EGFR 突变率有无统计学差异 所有 P 值均为双侧检验结果, 以 P <.5 为差异有统计学意义 表 1 本研究中检测的 4 种 EGFR 突变 Table 1 Four types of EGFR (epidermal growth factor receptor) gene mutations were detected in this study EGFR mutation Location Base change Cosmic ID E746_A75del (1) Exon _2249del E746_A75del (2) Exon _225del T79M Exon2 2369C > T 624 L858R Exon T > G 6224 表 2 EGFR 突变检测结果判定标准 Table 2 Evaluation criteria of genetic testing of EGFR (epidermal growth factor receptor) mutations EGFR Strongly positive mutation Ct value Weakly positive Ct value ΔCt Cutoff value Negative Ct value 19-Del < Ct < T79M < Ct < L858R < Ct < 结果 2.1 EGFR 突变检测结果采用 ARMS 法对 181 例 NSCLC 标本进行 EGFR 突变检测, 其中 72 例为 EGFR 突变阳性, 突变率为 39.8% 检测到的 72 例 EGFR 突变中,32 例为外显子 19 缺失突变 ( 简称 19-Del,44.4%),33 例为外显子 21 L858R 点突变 ( 简称 L858R,45.8%),2 例同时存在 19-Del 和 L858R(2.8%),2 例同时存在 19-Del 和外显子 2 T79M 点突变 ( 简称 T79M,2.8%),3 例同时存在 L858R 和 T79M (4.2%) 图 1 示以 L858R 为例的 EGFR 突变检测结果 2.2 EGFR 突变与标本类型不同类型 NSCLC 标本的 EGFR 突变检出率见表 3 其中, 微小标本的 EGFR 突变检出率为 38.9%, 大体标本为 45.8%, 二者差异无统计学意义 (χ 2 =.423, P =.515) 将不同类型微小标本的 EGFR 突变检出率与大体标本进行比较 : 肺穿刺标本的 EGFR 突变检出率与大体标本之间差异无统计学意义 (38.8% vs 45.8%,χ 2 =.331,P =.565); EBUS 标本的 EGFR 突变检出率与大体标本之 Del (Ct > 31) Sample Negative control L858R (Ct = 12.72) Sample Negative control T79M (Ct > 31) Sample Negative control External control External control Negative control Fig. 1 Results of EGFR mutation detection for one case revealed that 19-Del mutation was negative (Ct 29), L858R mutation was strongly positive (Ct < 26), and T79M mutation was negative (Ct 28). Based on these results, this case was considered as having exon 21 L858R mutation. The positive control, negative control and external control indicate quality control reagents in AmoyDx EGFR Mutation Test Kit. 图 1 EGFR 突变检测结果 ( 以 1 例外显子 21 L858R 点突变的标本为例 )
4 932 任睿欣, 等. 扩增阻滞突变系统法检测非小细胞肺癌微小标本表皮生长因子受体突变 间差异无统计学意义 (47.6% vs 45.8%,χ 2 =.14,P =.95); 淋巴结活检标本的 EGFR 突变检出率与大体标本之间差异无统计学意义 (34.8% vs 45.8%,χ 2 =.596,P =.44); 胸腔积液的 EGFR 突变检出率与大体标本之间差异无统计学意义 (45.1% vs 45.8%,χ 2 =.4, P =.952); 支气管镜活检标本的 EGFR 突变检出率为 7.7%, 显著低于大体标本的 45.8%, Fisher 精确检验结果显示二者差异有统计学意义 (P =.27) 2.3 EGFR 突变与患者临床病理特征收集上述 181 位 NSCLC 患者的临床病理资料, 分析具有不同临床病理特征的患者的 EGFR 突变状态, 结果见表 4 不吸烟患者与吸烟患者相比, 不吸烟患者 EGFR 突变率较高 (45.9%), 吸烟患者 较低 (3.%), 差异有统计学意义 (χ 2 = 4.557, P =.33); 腺癌患者与非腺癌患者相比, 腺癌患者 EGFR 突变率明显较高 (46.3%), 非腺癌患者较低 (11.8%), 差异有统计学意义 (χ 2 = ,P <.1); 不同年龄 性别或临床分期的患者中 EGFR 突变率差异无统计学意义 (P >.5) 在微小标本中 EGFR 突变状态也有上述特点 : 不吸烟患者比吸烟患者 EGFR 突变率高 (46.7% vs 28.4%,χ 2 = 5.419,P =.2), 腺癌患者比非腺癌患者 EGFR 突变率高 (46.4% vs 9.4%,χ 2 = 14.71,P <.1),EGFR 突变率在不同年龄 性别或临床分期的患者中差异无统计学意义 (P >.5) 大体标本中 EGFR 突变率在不同年龄 性别 吸烟史 病理类型或临床分期的患者中差异均无统计学意义 (P >.5) 表 3 不同类型 NSCLC 标本的 EGFR 突变检出率 Table 3 Detection rates of EGFR (epidermal growth factor receptor) mutations in different specimens of NSCLC (non-small cell lung cancer) (n) Specimen Wild type EGFR mutation EGFR mutation detection rate/% Small specimen CT-guided percutaneous lung biopsy EBUS-guided transbronchial needle aspiration Lymph node biopsy Bronchoscopic biopsy Pleural effusion Gross specimen Paraffin section Total CT: Computed tomography; EBUS: Endobronchial ultrasound. 表 4 具有不同临床病理特征的 NSCLC 患者的 EGFR 突变状态 Table 4 EGFR (epidermal growth factor receptor) mutation status in NSCLC (non-small cell lung cancer) patients with different clinicopathologic characteristics Characteristic Age/year Small specimen (N = 157) Gross specimen (N = 24) Total (N = 181) Case/n EGFR mutation Case/n EGFR mutation Case/n EGFR mutation (43.9) 13 5 (38.5) (43.2) > (33.3) 11 6 (54.6) (36.1) Gender Male (35.1) 14 8 (57.2) (37.8) Female 6 27 (45.) 1 3 (3.) 7 3 (42.9) Smoking history Smoker (28.4) 3 2 (66.7) 7 21 (3.) Non-smoker 9 42 (46.7) 21 9 (42.9) (45.9) Histology ADC (46.4) 22 1 (45.5) (46.3) Non-ADC 32 3 (9.4) 2 1 (5.) 34 4 (11.8) Clinical stage Ⅰ / Ⅱ 7 2 (28.6) 1 () 8 2 (25.) Ⅲ / Ⅳ (39.3) (47.8) (4.4) ADC: Adenocarcinoma. [n (%)]
5 任睿欣, 等. 扩增阻滞突变系统法检测非小细胞肺癌微小标本表皮生长因子受体突变 讨论 IPASS 研究组在东亚对不吸烟或轻度吸烟以及晚期肺腺癌患者比较了吉非替尼与卡铂 - 紫杉醇的一线应用, 结果显示在 EGFR 突变阳性的患者中, 吉非替尼一线应用与卡铂 - 紫杉醇相比可明显延长无进展生存期 (9.5 个月 vs 6.3 个月, 风险比为.48,95% 可信区间为.36 ~.64, P <.1), 提高客观缓解率 (71.2% vs 47.3%, P <.1), 减少不良反应及提高生活质量 ; 但在 EGFR 野生型的患者中, 一线应用吉非替尼反而不如卡铂 - 紫杉醇, 无进展生存期较短 (1.5 个月 vs 5.5 个月, 风险比为 2.85,95% 可信区间为 2.5 ~ 3.98,P <.1), 客观缓解率较低 (1.1% vs 23.5%,P =.1) [1] WJTOG345 OPTIMAL 和 EURTAC 等多项大型临床研究也得出与上述一致的结论 :EGFR 突变阳性的晚期 NSCLC 患者一线治疗应用 EGFR-TKIs 可显著受益 [11-13] INTEREST 研究组在晚期 NSCLC 患者中比较了吉非替尼与多西紫杉醇的二线应用, 结果显示在 EGFR 突变阳性的患者中, 吉非替尼二线应用与多西紫杉醇相比可明显延长无进展生存期 (7. 个月 vs 4.1 个月, 风险比为.16,95% 可信区间为.5 ~.49,P =.1), 提高客观缓解率 (42.1% vs 21.1%,P =.4) [14] TAILOR 研究组在 EGFR 野生型的 NSCLC 患者中比较了吉非替尼与多西紫杉醇的二线应用, 结果显示与吉非替尼相比, 多西紫杉醇二线应用可明显延长无进展生存期 (3.4 个月 vs 2.4 个月, 风险比为.69,95% 可信区间为.52 ~.93,P =.14), 提高客观缓解率 (13.9% vs 2.2%,P =.4) [4] 上述研究提示,EGFR 突变检测对 NSCLC 患者二线治疗也具有重要意义 因此, 进行 EGFR 突变检测, 明确 NSCLC 患者的 EGFR 突变状态, 对于临床医生制定个体化治疗方案至关重要 IPASS INTEREST 和 BR.21 等多项研究都 [1, 14, 采用 ARMS 法进行突变检测 15] [16] Qin 等比较了 DNA 直接测序法 变性高效液相色谱法与 ARMS 法在 EGFR 突变检测中的应用, 突变检出率分别为 6.9% 3.1% 与 38.4%, 灵敏度较高的变性高效液相色谱法与 ARMS 法检测结果的 [17] 一致性达到 9.4%(κ =.79,P =.7) Liu 等比较了直接测序法与 ARMS 法 EGFR 突变检测结果对 EGFR-TKIs 治疗的指导作用, 直接测序法检测出突变阳性的 NSCLC 患者客观缓解率为 81.3%,ARMS 法为 72.7%, 差异无统计学意义 (P =.76); 该结果与 OPTIMAL IPASS 研究组的结果一致 上述研究表明, 与直接测序法相比,ARMS 法不仅有更高的灵敏度和突变检出率, 其突变检测结果也准确 可靠, 再加上操作简单 快速, 更适用于临床 EGFR 突变检测 目前, 尚无任何指南对 NSCLC 的 EGFR 突变检测方法 检测所需标本类型作出明确规定, 什么方法 哪种标本最合适都在探索中 [18-21] 虽然外科手术切除的肿瘤组织 ( 大体标本 ) 被认为是进行 EGFR 突变检测最理想的标本类型, 但是大多数 NSCLC 患者确诊时已是晚期 不宜手术, 难以获得大体标本 而微小标本通常取样相对容易 侵袭性较小且可重复, 因此可考虑用来代替大体标本进行 EGFR 突变检测 由于微小标本肿瘤组织或细胞含量较少, 必须选择灵敏度高的检测方法以确保检测结果的可靠性 本研究采用 ARMS 法对 157 例 NSCLC 微小标本和 24 例大体标本进行了 EGFR 突变检测, 并将微小标本与大体标本的 EGFR 突变检出率进行了比较 虽然大体标本的 EGFR 突变检出率 (45.8%) 高于微小标本 (38.9%), 但二者差异并无统计学意义 (P =.515) 在微小标本中, 肺穿刺标本 EBUS 标本 淋巴结活检标本与胸腔积液的 EGFR 突变检出率分别为 38.8% 47.6% 34.8% 与 45.1%, 与大体标本 (45.8%) 相比, 差异无统计学意义 (P <.5) 支气管镜活检标本的 EGFR 突变检出率与大体标本相比明显较低 (7.7% vs 45.83%,P =.27), 这可能与支气管镜活检标本数量少 ( 只有 13 例 ) 有关, 有待其标本数量积累到足够多时进一步研究 总之, 本研究结果提示, 在晚期难以获得大体标本的 NSCLC 患者中, 用微小标本 ( 除支气管镜活检标本外 ) 代替大体标本进行 ARMS 法 EGFR 突变检测具有可行性 本研究收集与标本相对应的 181 位 NSCLC 患者的临床病理资料, 经统计分析后发现 : 在这些患者中 EGFR 突变率为 39.8%, 不吸烟患者与吸烟患者相比 EGFR 突变率更高 (45.9% vs 3.%,P =.33), 腺癌患者与非腺癌患者相比 EGFR 突变率更高 (46.3% vs 11.8%,P <.1) 本研究中 NSCLC 标本的 EGFR 突变率为 39.8%, 与亚裔大体标本直接测序检测到的平均突变率 (3% ~ 4%) 一致 [14] 本研究发现,EGFR 突变多见于不吸烟 病理类型为腺癌的 NSCLC 患 [22] 者, 与 Wu 等的 Meta 分析结论一致 本研究检测到的 72 例 EGFR 突变中, 19-Del 占 44.4%,L858R 占 45.8%,T79M 占 7.%(2 例与 19-Del 同时存在,3 例与 L858R
6 934 任睿欣, 等. 扩增阻滞突变系统法检测非小细胞肺癌微小标本表皮生长因子受体突变 同时存在 ), 另外还检测到 2 例同时存在 19-Del 和 L858R( 占 2.8%) 19-Del 与 L858R 已明确为 EGFR-TKIs 敏感性突变, 携带这些突变的 NSCLC 患者对 EGFR-TKIs 反应更好 T79M 继发突变的出现与 EGFR-TKIs 获得性耐药有关 既往研究表明,19-Del 与 L858R 是最常见的 EGFR 突变 [23], 与本研究结果一致 获得性耐药突变 T79M 在接受治疗前的标本中很少被检测到, 但可见于约 5% 的 NSCLC 疾病进展患者 [24] 本研究检测到的 5 例 T79M 与 19-Del 或 L858R 同时存在, 占 EGFR 突变的 7.%, 可能与本研究采用了灵敏度高的 ARMS 法进行突 [25] [26] 变检测有关 Zhang 等与 Masago 等也检测到 19-Del 和 L858R 同时存在的状况, 但由于例数过少, 尚未能明确这种 EGFR 双敏感突变对 EGFR-TKIs 疗效的影响 综上所述, 在个体化治疗快速发展的今天, EGFR 突变状态在指导 NSCLC 患者的治疗中起着重要作用, 而肿瘤标本质量的好坏直接影响到 EGFR 突变检测结果的可靠性 虽然大体标本是进行 EGFR 突变检测最理想的标本类型, 但是就晚期难以获得大体标本的 NSCLC 患者而言, 取样容易 创伤小 可重复的微小标本 ( 肺穿刺标本 EBUS 标本 淋巴结活检标本和胸腔积液 ) 可代替大体标本用于 ARMS 法检测 EGFR 突变 关于支气管镜活检标本是否能代替大体标本进行 EGFR 突变检测, 尚有待扩大样本量后进一步研究 [ 参考文献 ] [1] JEMAL A, BRAY F, CENTER M M, et al. Global cancer statistics[j]. CA Cancer J Clin, 211, 61(2):69-9. [2] SCAGLIOTTI G V, SELVAGGI G, NOVELLO S, et al. The biology of epidermal growth factor receptor in lung cancer[j]. Clin Cancer Res, 24, 1(12 Pt 2):4227s-4232s. [3] DAHABREH I J, LINARDOU H, SIANNIS F, et al. Somatic EGFR mutation and gene copy gain as predictive biomarkers for response to tyrosine kinase inhibitors in non-small cell lung cancer[j]. Clin Cancer Res, 21, 16(1): [4] GARASSINO M C, MARTELLI O, BETTINI A, et al. TAILOR: A phase Ⅲ trial comparing erlotinib with docetaxel as the second-line treatment of NSCLC patients with wild-type (wt) EGFR[C/OL]. 212 Annual Oncology Meeting in Chicago, June 1-5, 212: Lung cancer [ ]. s o l i d _ t u m o r / / c h i c a g o _ p d s / lung_cancer/slides [5] XUE C, HU Z, JIANG W, et al. National survey of the medical treatment status for non-small cell lung cancer (NSCLC) in China[J]. Lung Cancer, 212, 77(2): [6] PAO W, LADANYI M. Epidermal growth factor receptor mutation testing in lung cancer: searching for the ideal method[j]. Clin Cancer Res, 27, 13(17): [7] NEWTON C R, GRAHAM A, HEPTINSTALL L E, e t a l. A n a l y s i s o f a n y p o i n t m u t a i o n i n DNA. The amplification refractory mutation system (ARMS)[J]. Nucleic Acids Res, 1989, 17(7): [8] REN S, CHEN X, KUANG P, et al. Association of EGFR mutation or ALK rearrangement with expression of DNA repair and synthesis genes in never-smoker women with pulmonary adenocarcinoma[j]. Cancer, 212 May 8 [Epub ahead of print]. [9] REN S, KUANG P, ZHENG L, et al. Analysis of driver mutations in female non-smoker Asian patients with pulmonary adenocarcinoma[j]. Cell Biochem Biophys, 212 Jun 17 [Epub ahead of print]. [1] MOK T S, WU Y L, THONGPRASERT S, et al. Gefitinib or carboplatin-paclitaxel in pulmonary a d e n o c a r c i n o m a [ J ]. N E n g l J M e d, 2 9, 361(1): [11] MITSUDOMI T, MORITA S, YATABE Y, et al. Gefitinib versus cisplatin plus docetaxel in patients with non-small cell lung cancer harbouring mutations of the epidermal growth factor receptor (WJTOG345): an open label, randomised phase 3 trial[j]. Lancet Oncol, 21, 11(2): [12] ZHOU C, WU Y L, CHEN G, et al. Erlotinib versus chemotherapy as first-line treatment for patients with advanced EGFR mutation-positive nonsmall-cell lung cancer (OPTIMAL, CTONG-82): a multicentre, open-label, randomised, phase 3 study[j]. Lancet Oncol, 211, 12(8): [13] ROSELL R, CARCERENY E, GERVAIS R, et al. Erlotinib versus standard chemotherapy as first-line treatment for European patients with advanced EGFR mutation-positive non-small cell lung cancer (EURTAC): a multicentre, open-label, randomised phase 3 trial[j]. Lancet Oncol, 212,
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