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洒幸
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1 第 51 卷第 2 期 2015 年 4 月青岛大学医学院学报 ACTA ACADEMIAE MEDICINAEQINGDAO UNIVERSITATIS Vol.51,No.2 April 2015 doi: /j.qdyxy 海带多糖对糖尿病小鼠胰岛素受体表达的影响于竹芹 1, 帅莉 2, 李晓丹 3, 段德麟 4, 董永阳 5 (1 青岛大学医学院松山医院, 山东青岛 ; 青岛大学化学与环境工程学院 ; 3 青岛大学中西医结合中心 ; 4 中国科学院海洋研究所 ; 5 山东海芝宝科技有限公司 ) [ 摘要 ] 目的探讨海带多糖对实验性 2 型糖尿病小鼠胰岛素受体 (InsR) 表达的影响及其辅助降血糖作用. 方法健康雄性昆明小鼠随机分为 2 组, 对照组 10 只, 普通饲料喂养 ; 实验组高脂饲料喂养 4 周后, 经腹腔注射四氧嘧啶制备 2 型糖尿病动物模型, 随机分为治疗组和模型组, 各 10 只, 治疗组应用海带多糖灌胃干预治疗 2 周 ; 模型组和对照组同步灌胃给予等量的生理盐水. 自动血糖仪检测小鼠空腹血糖 (FBG) 水平, 免疫组织化学和 WesG ternblot 方法检测 InsR 蛋白表达,RTGPCR 检测 InsR mrna 丰度表达. 结果经海带多糖治疗后, 实验组动物血清 FBG 水平较模型组显著降低 (F=4.0,q=3.2,P<0.05). 小鼠肝脏和胰腺组织中, 实验组 InsR 着色均较模型组明显增强 (F= ,q= ,P<0.05);InsR 蛋白表达水平较模型组显著升高 (F= , q= ,P<0.05); 而 InsR mrna 丰度表达水平较模型组明显升高 (F= ,q= ,P< 0.05). 结论海带多糖可能通过提高肝脏和胰腺组织细胞 InsR 表达, 减轻胰岛素抵抗, 发挥降糖作用. [ 关键词 ] 海带多糖 ;2 型糖尿病 ; 胰岛素 ; 胰岛素受体 ; 小鼠 [ 中图分类号 ] R93 [ 文献标志码 ] A [ 文章编号 ] 1672G4488(2015)02G0141G05 EFFECTOFSACCHARINA JAPONICA POLYSACCHARIDE ON THE EXPRESSION OFINSULIN RECEPTORIN DIABETIC MICE YUZhuqin,SHUAILi,LIXiaodan,DUAN Delin,DONGYongyang (InstituteofIntegrative Medicine,Qingdao University,Qingdao266021,China) [ABSTRACT] Objective ToinvestigatetheinfluenceofLaminariajaponicapolysaccharide(LJPS)onexpressionofinsulin receptor(insr)inexperimentaltype2diabetesmelitus(t2dm)miceanditsauxiliaryhypoglycemicaction. Methods Healthy Kunmingmalemicewererandomlydividedintotwogroups.Tenmiceinthecontrolgroupweregivennormaldiet;20intheexperiG mentalgroupwerefedwithhighfatdietforfourweeksandthenintraperitonealaloxanwasinjectedtocreateamodeloft2dm. Thediabeticmodelanimalswereevenlyrandomizedtomodelgroupandtreatmentgroup.Themiceinthetreatmentgroupwere treatedwithintragastricadministrationofljpsfortwoweeks,andthoseinthemodelandcontrolgroupswereadministeredwith equivalentamountofnormalsaline.theleveloffastingbloodglucose(fbg)wasdetectedbyautomaticbloodglucosedevice,the expressionofinsrproteinwasdeterminedbyimmunohistochemistryand Westernblot,andtheexpressionofInsR mrnaabug ndancewasdetectedbyrtgpcr. Results AfterLJPStreatment,theFBGlevelsweremuchlowerinthetreatmentgroupthan thatinthemodelgroup(f=4.0,q=3.2,p<0.05).acomparisonbetweenthetreatmentgroupandthemodelgroupindicatedthat inliverandpancreatictissues,insrcoloringinthetreatmentgroupwasenhanced(f=329.04,52.81;q=25.1,6.0;p<0.05),the expressionofinsrproteinwashigher(f=180.92,137.20;q=4.6,14.4;p<0.05),andtheexpressionlevelsofinsr mrnaabug ndanceincreased(f=116.35,402.37;q=12.6,14.4;p<0.05). Conclusion ThehypoglycemicactivityofLJPSisprobablyby increasingtheexpressionofinsrinliverandpancreatictissue,andrelievinginsulinresistance. [KEY WORDS] laminariajaponicapolysaccharide;type2diabetesmelitus;insulin;insulinreceptor;mice 胰岛素是由胰岛 β 细胞分泌的蛋白质激素, 由 51 个氨基酸残基组成 [1]. 胰岛素受体 (InsR) 由 α β 各两个亚单位组成. 胰岛素与 α 亚单位结合后, β 亚单位中酪氨酸激酶被激活, 使受体磷酸化, 介导和调节细胞内酶系统活性, 控制物质代谢.InsR 是一种跨膜糖蛋白, 位于胰岛素发挥作用的靶细胞膜上 [ 收稿日期 ]2014G05G12; [ 修订日期 ]2014G10G10 [ 基金项目 ] 国家十二五科技支撑计划 (2013BAB01B00/ 2013BAB01B01), 广东省 G 中科院合作项目 (2012B ) [ 作者简介 ] 于竹芹 (1970G), 女, 硕士, 副主任医师. [ 通讯作者 ] 段德麟 (1963G), 男, 博士后, 博士生导师. [2G3] 特定部位, 如肝脏脂肪和骨骼肌, 在中枢神经系 [4G7] 统胰腺泡红细胞等均有表达. 海带 (SacchaG rinajaponica) 性寒味咸, 有软坚散结消痰利水 [5] 功效. 海带多糖是海带的主要有效成分, 具有抗 [8G10] 氧化抗凝降血脂血糖等作用. 已有研究表 [8,11] 明, 海带可增强机体的抗氧化降血脂作用, 促 [12] 进胰岛细胞分泌功能恢复而发挥降血糖作用. 但关于其对 InsR 表达和减轻胰岛素抵抗作用的报 [13] 道甚少. 本文旨在研究海带多糖对 2 型糖尿病小鼠 InsR 表达影响, 探讨其辅助降血糖作用机制.

2 142 青岛大学医学院学报 51 卷 1 材料与方法 1.1 动物及分组取成年健康雄性昆明小鼠 40 只, 体质量 23~ 27g, 清洁级, 由青岛市药物检验所动物中心提供. 实验前普通饲料适应性喂养 1 周, 随机取 10 只为对照组, 普通饲料喂养. 另 30 只喂高脂饲料 4 周后, [14] 腹腔注射四氧嘧啶建立 2 型糖尿病小鼠模型. 方法 : 用生理盐水将四氧嘧啶配制成 2.5g/L 溶液, 腹腔注射 (50mg/kg), 隔日 1 次, 连续 3 次, 对照组同步注射等量的生理盐水. 末次注射后第 3 天, 剪尾采血检测空腹血糖 (FBG) 水平, 以 FBG 大于对照组 x±s 为 2 型糖尿病模型成功的标志. 将血糖未达标准的 10 只小鼠剔除, 其余 20 只造模成功的小鼠再随机分为模型组和治疗组, 每组 10 只. 1.2 实验方法治疗组用生理盐水将海带多糖 ( 中国科学院海洋研究所提供 ) 配制成 300g/L 溶液, 根据前期研究所得的有效剂量 (3.00g/kg 体质量, 相当于 20mL/ kg 体质量 ) [14] 灌胃治疗, 每日 1 次, 连续 2 周. 对照组和模型组同步给予等量生理盐水. 所有动物普通饲料常规喂养. 1.3 标本采集血清治疗结束后, 各组动物禁食 12h, 次日清晨用 100g/L 水合氯醛 (0.016mL/g) 腹腔注射麻醉, 开胸经心脏采血 1.0mL, 以 4000r/min 离心 10min 分离血清,-20 保存石蜡切片每组取 5 只小鼠, 依次用 9g/L 氯化钠溶液 45mL 和 40g/L 多聚甲醛 45mL 经心脏灌注固定. 然后分别取脑干肝脏胰腺组织, 置 40g/L 多聚甲醛中固定 2h, 蒸馏水浸泡 4h, 常规无水乙醇脱水二甲苯透明, 石蜡包埋, 连续 5 mm 厚切片, 贴片, 室温保存总蛋白提取每组取 5 只小鼠, 用 9g/L 氯化钠溶液 45 ml 经心脏灌注后, 取脑干 50 mg 肝脏 100mg 胰腺 100 mg 提取总蛋白. 将组织块置于匀浆器中剪碎, 加 1 ml 细胞裂解液, 研磨匀浆. 收集组织匀浆于 1.5mL 离心管,4 下以 12000r/ min 离心 15min, 取上清液分装于 0.5 ml 离心管, BCA 试剂盒 (P0010, 碧云天生物技术研究所 ) 测定蛋白浓度,-20 保存总 RNA 抽取采用 Trizol 提取试剂 ( 美国 Invitrogen 公司 ) 提取总 RNA. 取脑干 50mg 肝脏 100mg 胰腺 100mg, 分别剪碎置于灭菌离心管中, 加入 Trizol 溶液 1mL 研磨, 颠倒混匀 10s, 室温静置 5min, r/min 离心 15 min. 吸取上清液于干净离心管中, 加入 0.2 ml 氯仿, 振荡混匀 15s, 室温静置 5 min, r/min 离心 15min. 取无色水相置另一 EP 管中, 加 0.5 ml 异丙醇混匀, 静置 10 min, r/min 离心 15min. 小心弃上清液, 加体积分数 0.75 预冷乙醇 1mL, 振荡洗涤 RNA, r/min 离心 5min. 小心弃上清液, 通风橱干燥 20min 后, 加体积分数的 DEPC H2O100μL,57 水浴 10min, 溶解 RNA. 微量分光光度计测 RNA 丰度,-20 保存. 1.4 检测指标 FBG 应用自动血糖仪 ( 强生医疗器械有限公司 ) 检测各组小鼠造模前后及治疗后血糖 InsR 表达强度采用免疫组化染色方法. 兔抗小鼠 InsR 抗体 (Ab75998) 由 Abcam 公司提供, 免疫组化试剂盒 (SPG90001) 由北京中杉生物公司提供. 石蜡切片常规脱蜡至水, 按试剂盒说明书操作,DAB 显色, 苏木精复染, 常规脱水, 透明封片. 阴性对照切片不加一抗, 用 0.1 mol/l 的 PBS 代替. 显微镜下观察, 细胞浆或细胞膜出现棕黄色颗粒者为阳性细胞, 阴性对照不出现阳性着色. 在 400 倍光学显微镜下随机观察 5 个不重叠的视野, 应用 ImageGProPlus 软件分析组织的 InsR 吸光度 (A) 值, 以阳性细胞 A 值减去背景 A 值表示 InsR 表达强度, 取其均值 InsR 蛋白含量采用 Westernblot 方法检测. 每例样品取总蛋白 50μg, 体积分数 0.08 的 SDSGPAGE 电泳分离 InsR 蛋白 ( 相对分子质量 ), 转移到 PVDF 膜, 体积分数 0.05 脱脂奶粉封闭 1h. 然后加入一抗 (InsR1 50),4 摇床过夜,TBST 洗涤 10 min 共 3 次. 加过氧化物酶标记的山羊抗兔二抗 (Abcam,Ab6721,1 5000), 辣根酶标记山羊抗小鼠 lgg(zbg2305, ), 37 孵育 1h. 取出膜用 TBST 洗涤 10 min 共 3 次,TBS 洗涤 5min 共 2 次. 按 1 1 加显色剂 A B 液显影,VilberFusionFX7 成像系统成像,QuantiG tyone 分析软件对图像进行分析. 以 GAPDH( 相对分子质量为 36000) 的灰度值作为内参照, 校正目的蛋白灰度值, 计算目的蛋白相对含量 ( 样品 A 值 / GAPDH A 值 ), 重复测定 3 次.

2 期于竹芹, 等. 海带多糖对糖尿病小鼠胰岛素受体表达的影响 143 1.4.4 InsR mrna 丰度采用 RTGPCR 方法检测. 引物由上海英潍捷基有限公司合成, 引物的序列和长度如下.

3 2 期于竹芹, 等. 海带多糖对糖尿病小鼠胰岛素受体表达的影响 InsR mrna 丰度采用 RTGPCR 方法检测. 引物由上海英潍捷基有限公司合成, 引物的序列和长度如下.InsR 上游引物 5 GATGGGCTTCGGG GAGAGGAG3, 下游引物 5 GGGATGTCCATACG CAGGGCACG3, 产物长度为 120bp;GAPDH 上游引物 5 GACCACAGTCCATGCCATCACG3, 下游引物 5 GTCCACCACCCTGTTGCTGTAG3, 产物长度为 452bp. 应用 Takara DRR014A PrimeScript TM RTGPCR Kit 试剂盒扩增,InsR 和 GAPDH 基因扩增条件 :95 预变性 5min,94 变性 30s, 退火 (InsR65,GAPDH60 )30s,72 延伸 40s, 35 个循环, 最后 72 延伸 10 min. 取基因扩增产物 10μL,20g/L 的琼脂糖凝胶电泳 (110V,40A) 分离,VilberLourmat 凝胶系统成像,QuantityOne 软件分析 InsR 和 GAPDH 条带 A 值. 以目的基因 InsR 与内参 GAPDH A 值比值表示 InsR mrna 表达丰度, 重复测定 3 次. 1.5 统计学处理应用 SPSS17.0 软件进行统计学分析, 结果以 x±s 表示, 多组数据间比较采用方差分析, 组间两两比较采用 q 检验. 2 结果 2.1 各组 FBG 水平比较造模前 3 组小鼠 FBG 水平比较差异无显著性 (P>0.05). 治疗前模型组和治疗组 FBG 水平高于对照组, 差异有显著意义 (F=33.0,q= , 0.05). 对照组肝脏肝小叶排列整齐, 中央静脉完整 ; 模型组可见肝细胞脂肪空泡, 呈局灶性或弥漫浸润性分布, 有少量纤维组织增生. 模型组肝脏 InsR 表达强度较对照组显著降低, 差异有显著意义 (F= ,q=35.3,P<0.05); 治疗组与模型组比较差异有显著意义 (q=25.1,p <0.05). 对照组胰岛数及胰岛内细胞数较多, 模型组与对照组比较胰岛体积缩小, 胰岛内细胞数减少, 且有少量炎症细胞浸润及纤维组织. 模型组胰腺组织 InsR 表达强度较对照组明显降低, 差异有显著性 (F=52.81,q=11.2, P<0.05); 治疗组与模型组比较, 胰岛数量及胰岛细胞数明显增多,InsR 表达强度差异有显著性 (q= 6.0,P<0.05). 见表各组 InsR 蛋白表达比较小鼠脑干 InsR 蛋白表达水平 3 组间比较, 差异无显著性 (P>0.05). 模型组小鼠肝脏组织和胰腺组织 InsR 蛋白表达水平低于对照组 (F = ,q= ,P<0.05), 治疗组小鼠肝脏组织和胰腺组织 InsR 蛋白表达水平较模型组明显升高 (q= ,P<0.05). 见图 1 表 3. 表 2 各组不同组织 InsR 表达强度比较 (n=5, x±s) 组别脑干肝脏胰腺对照组 0.245± ± ±0.007 模型组 0.237± ± ±0.009 治疗组 0.242± ± ±0.003 P<0.05); 模型组和治疗组比较差异无显著性 (P> 0.05). 治疗后治疗组 FBG 水平显著低于模型组, 差异有显著性 (F=4.0,q=3.2,P<0.05). 见表 1. 表 1 各组治疗前后血清 FBG 水平比较 (n=10,c/ mmol L -1, x±s) 组别造模前治疗前治疗后对照组 7.40± ± ±1.27 模型组 7.40± ± ±0.91 治疗组 7.40± ± ± 各组不同组织 InsR 表达强度比较 InsR 染色阳性颗粒为棕黄色. 脑干 InsR 见于神经元胞体纤维膜及胞浆内, 胞体较突起染色深, 阳性细胞以中小圆形和锥体形胞体为主 ; 肝脏组织中,InsR 主要分布在细胞膜和胞质内 ; 胰腺组织中, InsR 见于细胞膜和细胞浆. 对照组模型组和治疗组脑干组织 InsR 表达水平比较差异无显著性 (P> InsRGB: 脑干 ;InsRGL: 肝脏 ;InsRGP: 胰腺. 图 1 各组 InsR 蛋白表达 Westernblot 检测表 3 各组不同组织 InsR 蛋白表达比较 (n=5, x±s) 组别脑干肝脏胰腺对照组 0.403± ± ±0.009 模型组 0.384± ± ±0.006 治疗组 0.395± ± ± 各组 InsR mrna 丰度比较模型组肝脏和胰腺组织中 InsR mrna 丰度表达较对照组明显降低 (F= ,q= ,P<0.05), 治疗组 InsR mrna 丰度表达较模

144 青岛大学医学院学报 51 卷型组显著升高 (q=12.6 14.4,P<0.05). 各组脑干组织中 InsR mrna 丰度表达比较差异无显著意义 (P>0.05). 见图 2 表 4. 表 4 图 2 InsRGB: 脑干 ;InsRGL: 肝脏 ;InsRGP: 胰腺.

4 144 青岛大学医学院学报 51 卷型组显著升高 (q= ,P<0.05). 各组脑干组织中 InsR mrna 丰度表达比较差异无显著意义 (P>0.05). 见图 2 表 4. 表 4 图 2 InsRGB: 脑干 ;InsRGL: 肝脏 ;InsRGP: 胰腺. 各组不同组织 InsR 丰度表达 RTGPCR 检测各组不同组织 InsR mrna 丰度表达 (n=5, x±s) 组别脑干肝脏胰腺对照组 0.465± ± ±0.014 模型组 0.449± ± ±0.039 治疗组 0.462± ± ± 讨论 2 型糖尿病是代谢性疾病, 其主要特征为胰岛素抵抗, 相对胰岛素缺乏和高糖血症. 机体物质代谢几乎都受到胰岛素的调控, 一旦产生胰岛素抵抗, 糖类脂类和蛋白质代谢都会发生紊乱, 胰岛素抵抗是机体物质代谢紊乱的共同通路. 胰岛素与靶细胞膜外 InsR 结合后, 引起受体酪氨酸残基自身磷酸化及 β 亚基酪氨酸蛋白激酶活化, 后者使靶细胞内底物如 InsR 底物 G1 或 Shc 蛋白的酪氨酸残基磷酸化, 酪氨酸蛋白激酶在 InsR 信号传递中发挥重要作用.InsR 主要作用是诱导葡萄糖摄取. 但当胰岛素不敏感或 InsR 信号减弱时会导致 2 型糖尿病的发生,InsR 在调节体内葡萄糖平衡中起着关键的作 [15] 用.TAKIKAWA 等研究显示, 蓝莓 ( 主要成分花青素 ) 可通过激活 AMP 蛋白激酶 AMPK 来改善 [16] 高糖血症和增强胰岛素敏感性.WERNER 等研究表明, 一种新型强效选择性胰高血糖素样肽 1 (GLPG1) 受体激动剂 Lixisenatifde, 可增强胰岛素生物合成, 刺激 β 细胞增殖. 我们前期研究证实, 海带多糖可部分恢复胰岛细胞的分泌功能, 提高血清胰岛素水平, 有利于 2 型糖尿病血糖的控制. 本文研究结果显示, 经高脂饲料喂养 4 周及四氧嘧啶注射后, 模型组小鼠与对照组比较 FBG 水平显著升高, 说明 2 型糖尿病小鼠胰岛 β 细胞受损, 胰岛素分泌功能同步下降 ; 免疫组化 Westernblot 和 RTGPCR 结果显示, 各组小鼠脑干组织中 InsR 蛋白及 mrna 丰度表达水平差异无显著性, 提示脑组织中 InsR 不受血糖等影响而保持其稳定性, 对维持脑生理功能的稳定性有重要意义 ; 在肝脏和胰腺组织中, 模型组与对照组比较,InsR 蛋白及 mrna 丰度表达水平均明显降低, 表明 2 型糖尿病小鼠由于肝脏和胰腺组织 InsR 数目减少, 胰岛素敏感性下降而引起胰岛素抵抗. 治疗组小鼠经海带多糖治疗后, 肝脏和胰腺组织 InsR 蛋白及 mrna 丰度表达水平显著升高, 同时小鼠血清 FBG 水平下降, 提示海带多糖可提高 2 型糖尿病小鼠肝脏和胰腺组织中 InsR 表达水平, 减轻胰岛素抵抗, 改善 2 型糖尿病糖代谢, 从而降低血糖水平. 本实验研究证实, 海带多糖可能具有治疗 2 型糖尿病的功效, 但具体的作用机制还有待于更深入的探究. [ 参考文献 ] [1] KENTSB.Totalchemicalsynthesisofproteins[J].ChemSoc Rev,2009,38(2):338G351. [2] SALTIELA R.NewperspectivesintothemolecularpathogeG nesisandtreatmentoftype2diabetes[j].cel,2001,104(4): 517G529. [3] KIDO Y,NAKAEJ,ACCILID.Clinicalreview125:theinG sulinreceptoranditscelulartargets[j].jclin Endocrinol Metab,2001,86(3):972G979. [4] CHIUSL,CLINE H T.InsulinreceptorsignalinginthedeG velopmentofneuronalstructureandfunction[j].neuraldev, 2010,5:7. [5] TIANOJP,DELGHINGAROGAUGUSTO V,LE MAY C A,etal.Estrogenreceptoractivationreduceslipidsynthesisin pancreaticisletsandpreventsbetacelfailureinrodentmodels oftype2diabetes[j].journalofclinicalinvestigation,2011, 121(8):3331G3342. [6] ZHONG W,FANGF,CHENGX,etal.InfluenceofmagneG siumsupplementationoninsulinreceptorafinityinerythrog cytesoftype2diabetesrats[j].weishengyanjiu,2013,42 (2):217G220. [7] HAVRANKOVAJ,ROTHJ,BROWNSTEIN MJ.ConcenG trationsofinsulinandofinsulinreceptorsinthebrainareindeg pendentofperipheralinsulinlevels[j].jclininvest,1979,64 (2):636G642. [8] 田嘉伟, 龙少华, 李晓丹, 等. 海带多糖对高脂血症小鼠血脂和瘦素水平的影响 [J]. 中国海洋药物,2012,31(6):37G40. [9] ROCHA DE SOUZA M C, MARQUES C T,GUERRA DOREC M,etal.AntioxidantactivitiesofsulfatedpolysacG charidesfrom brownandredseaweeds[j].j ApplPhycol, 2007,19(2):153G160. [10]ATHUKORALA Y,LEEK W,KIM SK,etal.AnticoaguG

5 2 期于竹芹, 等. 海带多糖对糖尿病小鼠胰岛素受体表达的影响 145 lantactivityof Marinegreenandbrownalgaecolectedfrom JejuIslandin Korea[J].Bioresour Technol,2007,98(9): 1711G1716. [11] 帅莉, 徐新颖, 郭云良, 等. 海带在高脂血症大鼠中的抗氧化作用研究 [J]. 中国海洋药物,2010,29(5):44G47. [12] 于竹芹, 李晓丹, 徐新颖, 等. 海带在四氧嘧啶糖尿病大鼠模型中的降糖作用 [J]. 中国药理学通报,2011,27(5):651G655. [13] 龙少华, 田嘉伟, 李晓丹, 等. 海带多糖对 2 型糖尿病小鼠血清胰岛素和胰淀素水平的影响 [J]. 中华中医药杂志,2013,28 (7):2145G2147. [14]LONGS H,YU Z Q,SHUAIL,etal.Thehypoglycemic efectofthekelpondiabetesmelitusmodelinducedbyaloxan inrats[j].intjmolsci,2012,13(3):3354g3365. [15]TAKIKAWA M,INOUES,HORIOF,etal.DietaryanthoG cyaningrichbilberryextractameliorateshyperglycemiaanding sulinsensitivityviaactivationofampgactivatedproteinkinase indiabeticmice[j].journalofnutrition,2010,140(3):527g 533. [16] WERNER U,HASCHKE G,HERLING A W,etal.PharG macologicalprofileoflixisenatide:anew GLPG1receptoragoG nistforthetreatmentoftype2 diabetes[j].regulpept, 2010,164(2/3):58G64. ( 本文编辑黄建乡 ) [8] ( 上接第 140 页 ) 硬化斑块形成.TNFGα 主要由激活的单核巨噬细胞分泌, 在动脉粥样硬化形成过程中参与了内皮细胞损伤单核细胞迁移和平滑肌细胞增殖等过程. 前期研究结果已经证实,ATRA 能拮抗 P21 P27 MMPG2 MMPG9 等多种细胞因子的表达,ATG RA 具有抑制 VSMC 增生从而减轻受损血管内膜增生的作用 [9G11]. 本研究在成功诱导兔颈动脉内膜损伤粥样斑块形成而致颈动脉狭窄的模型的基础上, 观察了 ATRA 短期干预对大白兔颈动脉空气干燥术后内膜损伤与增生及其血清 hsgcrp 和 TNFGα 浓度的影响, 探讨 ATRA 是否能通过抑制炎症从而抑制内膜增生. 结果显示, 术后第 7 天,B 组及 C 组内膜都存在轻度增生, 但差异没有统计学意义, 提示超短期 (<7d) 应用 ATRA 没有显示出其抗内膜增生的作用. 随着用药时间延长, 在第 14 天及 28 天, C 组 IA 及 IA/MA 较 B 组明显减少, 形态学观察管腔没有明显狭窄, 未见粥样硬化斑块 ; 镜下观察炎症细胞浸润不明显, 提示随着用药时间的延长,ATRA 显示出较明显的抗炎抗血管内膜增生的作用. 而各组不同时间点 MA 差异无显著性, 提示粥样硬化斑块形成主要由内膜增生所致. 本文结果同时显示, 给予 ATRA 干预的 C 组各时间点 hsgcrp 和 TNFGα 血清浓度较同期 B 组明显下降, 提示 ATRA 可以显著降低内皮损伤修复过程中的炎症反应程度, 进而达到抑制内膜增生的作用. 综上所述,ATRA 能显著降低兔颈动脉内皮损伤后 hsgcrp 和 TNFGα 血清浓度, 并通过抑制血管损伤炎症的程度从而抑制内膜增生.ATRA 可能成为临床上一种预防和治疗动脉粥样硬化性狭窄和再狭窄的有效药物. nanocrystalsenhanced porous PTCAGCyslayerforsimultaG neousdetectionofascorbicacid,dopamineanduricacid[j]. SensorsandActuatorsBGChemical,2013,183(5):157G162. [2] LEEJY,PARK D W,KIM Y H,etal.Incidence,predicG tors,treatment,andlonggterm prognosis ofpatients with restenosisafterdruggelutingstentimplantationforunprotecg tedleftmaincoronaryarterydisease [J].JAm ColCardio, 2011,57(12):1349G1358. [3] COSTA M A,SIMON DI.Molecularbasisofrestenosisand druggelutingstents[j].circulation,2005,111(17):2257g2273. [4] 张青青, 董果雄, 张社华. 全反式维甲酸对兔颈动脉粥样硬化病灶 VSMC 增殖及 AKT1 表达影响 [J]. 青岛大学医学院学报,2010,46(2):135G139. [5] FISCHMAN D L,LEON M B.Arandomizedcomparisonof coronarystentplacementandbaloonangioplastyinthetreatg mentofcoronarydisease[j].n EnglJ Med,1994,331(8): 496G501. [6] LANGEVELDB,ROKSAJ,TIO R A,etal.ReninGangioG tensinsysteminterventiontopreventingstentrestenosis:an unclosedchapter [J].JCardiovasePharmacol,2005,45:88G 98. [7] KRALISZP,KEMONA H,DOBRZYCKIS,etal.Changes incgreactiveproteinlevelsfolowingcoronarystentimplantag tiondependontheextentofperiproceduralarterialinjury[j]. KardiologiaPolska,2006,64(4):364G372. [8] 王勉, 赵思勤, 聂晓莉, 等.CG 反应蛋白与冠心病关系的临床研究 [J]. 四川医学,2004,25(2):138G139. [9] 董果雄, 褚现明, 张社华, 等. 全反式维甲酸对球囊剥脱大鼠胸主动脉内皮后平滑肌细胞增殖和 P21 表达的影响 [J]. 中国分子心脏病学杂志,2003,3(6):339G343. [10] 靳凤琳, 张斌. 全反式维甲酸对球囊损伤大鼠胸主动脉内皮后 MMPG2 和 MMPG9 表达的影响 [J]. 泰山医学院学报,2007,28 (11):860G863. [11] 韩小宁, 董果雄, 侯磊, 等. 全反式维甲酸对血管平滑肌细胞增生和细胞周期素依赖激酶抑制蛋白 P27 蛋白表达的影响 [J]. 中国分子心脏病学杂志,2004,4(1):12G15. [ 参考文献 ] ( 本文编辑黄建乡 ) [1] ZHANG W,CHAI Y Q,YUAN R,etal.Depositedgold

中草药

中草药致谢李沛赵继敏郑智敏江亚楠等病理生理学教研室老师在实验中给予的指导和帮助狄建彬顾振纶赵笑东钱培刚蒋小岗郭次仪中草药中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 10 年 8 月 1324 LDL C 非常明显升高 (