肺腺样囊性癌的分子特征何诚, 等 2353 根据 WHO(2015 版 ) 分类标准, 肺腺样囊性癌在肺肿瘤中属于唾液腺型肿瘤的一种亚型, 占所有肺肿瘤的 0.04%~0.2% [1-5] 对于这种类型的肺肿瘤, 目前属于低度恶性肿瘤,5 年生存率超过 90% 以上 [6] 但仍有一些肺腺样囊性癌被

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1 2352 临床与病理杂志 J Clin Pathol Res 2017, 37(11) doi: /j.issn View this article at: 肺腺样囊性癌的分子特征 何诚 1, 黄榕芳 1, 刘伟 1, 庄武 2, 方美玉 3, 吴标 2, 郑晓彬 2, 许春伟 1, 陈燕坪 1 1, 陈刚 (1. 福建医科大学附属福建省肿瘤医院病理科, 福州 ;2. 福建医科大学附属福建省肿瘤医院胸部肿瘤内科, 福州 ;3. 浙江省肿瘤医院综合内科, 杭州 ) [ 摘要 ] 目的 : 探讨肺腺样囊性癌的分子特征 方法 : 对 2007 年 7 月至 2016 年 12 月 15 例病理确诊的肺腺样囊性癌临床特征和分子特点进行回顾性分析 结果 :EGFR 基因突变率为 6.67%(1/15), 且为 19del, EGFR 基因状态与性别 (P=1.000) 年龄(P=1.000) 吸烟状态(P=1.000) 及分期 (P=1.000) 均无相关性 ; 未见 ALK 融合基因和 ROS1 融合基因 结论 : 肺腺样囊性癌中存在常见基因改变, 常规基因检测仍不可忽视 [ 关键词 ] 腺样囊性癌 ; 分子特征 ; 基因检测 Molecular features of pulmonary adenoid cystic carcinoma HE Cheng 1, HUANG Rongfang 1, LIU Wei 1, ZHUANG Wu 2, FANG Meiyu 3, WU Biao 2, ZHENG Xiaobin 2, XU Chunwei 1, CHEN Yanping 1, CHEN Gang 1 (1. Department of Pathology, Fujian Cancer Hospital, Fujian Medical University Cancer Hospital, Fuzhou ; 2. Department of Medical Thoracic Oncology, Fujian Cancer Hospital, Fujian Medical University Cancer Hospital, Fuzhou ; 3. Department of Comprehensive Medical Oncology, Zhejiang Cancer Hospital, Hangzhou , China) Abstract Keywords Objective: To investigate the molecular characteristics of pulmonary adenoid cystic carcinoma (PACC). Methods: From July 2013 to December 2016, 15 PACC patients received treatment. All the patients were diagnosed by pathology. We retrospectively reviewed the clinical data and genetic state. Results: EGFR mutation rate was 6.67% (1/15), and it was 19del, the relationship between EGFR gene status and gender (P=1.000), age (P=1.000), smoking status (P=1.000) and stage (P=1.000) were no significant, and ALK fusion and ROS1 fusion gene was not detected. Conclusion: Gene change exists PACC, and the gene detection cannot be ignored in PACC. adenoid cystic carcinoma; molecular features; gene detection 收稿日期 (Date of reception): 通信作者 (Corresponding author): 许春伟, xuchunweibbb@163.com; 吴标, wubiao97@qq.com 基金项目 (Foundation item): 国家临床重点专科建设项目 (2013); 福建省卫生计生青年科研课题 ( ); 福建省医学创新课题 (2017- CXB-1) This work was supported by National Clinical Key Specialty Construction Program (2013), Fujian Provincial Youth Health Science Research Project ( ) and Fujian Medical Innovation Project (2017-CXB-1), China.

2 肺腺样囊性癌的分子特征何诚, 等 2353 根据 WHO(2015 版 ) 分类标准, 肺腺样囊性癌在肺肿瘤中属于唾液腺型肿瘤的一种亚型, 占所有肺肿瘤的 0.04%~0.2% [1-5] 对于这种类型的肺肿瘤, 目前属于低度恶性肿瘤,5 年生存率超过 90% 以上 [6] 但仍有一些肺腺样囊性癌被发现具有侵袭性, 对放化疗不敏感, 对靶向治疗特别是表皮生长因子受体 - 酪氨酸酶抑制剂 (epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors,egfr-tkis) 和间变性淋巴瘤激酶 (anaplastic lymphoma kinase,alk)-tki 治疗肺腺样囊性癌仅个案报道, 缺乏数据积累 [5,7-10] 本研究对 15 例肺腺样囊性癌样本 EGFR 基因,ALK 融合基因和 ROS1 融合基因进行回顾性分析, 旨在重视对肺腺样囊性癌常规基因检测和指导靶向治疗 1 对象与方法 1.1 对象收集福建省肿瘤医院和浙江省肿瘤医院 2007 年 7 月至 2016 年 12 月间的肺腺样囊性癌标本 纳入标准 : 1) 病理证实肺腺样囊性癌 ;2) 通过胸部 CT, 脑磁共振 骨扫描 腹部超声或 CT 证实复发的肺腺样囊性癌 本研究经成员单位医院医学伦理委员会批准 1.2 EGFR 基因检测 实时荧光定量 PCR 对 EGFR 基因突变进行体外 扩增 : 显微镜下确认肿瘤细胞后, 取 4 μm 厚度的 石蜡组织切片 4~8 片, 脱蜡 ; 应用分光光度计检测 所提取 DNA 的纯度和浓度, 按照 EGFR 基因突变定 性检测试剂盒 ( 厦门艾德生物医药科技有限公司 ) 说 明书提供的方法, 在 Mx3000P 实时荧光定量 PCR 仪 ( 美国 Stratagene 公司 ) 中进行扩增 该试剂盒包含 EGFR 基因突变类型改变 ( 表 1) 1.3 ALK 和 ROS1 基因检测 实时荧光定量 PCR 对 ALK 和 ROS1 融合基因进 行体外扩增 : 显微镜下确认肿瘤细胞后, 取 4 μm 厚度的细胞块和组织块切 4~8 片, 脱蜡 ; 按照提取 基因组 RNA 试剂盒 (QIAamp RNA FFPE Kit, 德国 QIAGEN 公司 ) 说明书提供的方法提取组织 RNA 应用分光光度计检测所提取 RNA 的纯度和浓度按 照 ALK 和 ROS1 融合基因定性检测试剂盒 ( 厦门艾德 生物医药科技有限公司 ) 说明书提供的方法, 反转 录为 cdna 后, 在 Mx3000P 实时荧光定量 PCR 仪 ( 美国 Stratagene 公司 ) 中进行扩增 该试剂盒包含 ALK 和 ROS1 融合基因类型改变见表 2 表 1 EGFR 基因突变类型 Table 1 Type of EGFR gene mutation 类型 EGFR 基因突变 Exon 18 G719A,G719C,G719S Exon del(24 种突变 ) del15 (E746-A750del), del15 (E746-A750del) del18 (E746-T751del), del15 (E746-T751>A) del18 (E746-S752>A), del18 (E746-S752>D) del9 (L747-E749del), del15 (L747-T751del) del8 (L747-S752del), del12 (L747-T751>S) del15 (L747-T751del), del18 (L747-P753>S) >AAT (E746-T751>I), >T (E746-S752>V) >GC (L747-A750>P), >GCA (L747-T751>Q) >GCA(L747-T751>Q), _AAGAGAAG>C (L747-A750>P) >C (L747-T751>P), >CA (L747-P753>Q) del (S752-I759del), del2237A>T (L747-S752del,E746V) del (L747-A750del,T747S), del21>CAAC (L747-K754>QQ) Exon 20 V769-D770insASV,D770-N771insG,H773-V774insH Exon 20 S768I Exon 20 T790M Exon 21 L858R,L861Q

3 2354 临床与病理杂志, 2017, 37(11) 表 2 ALK 和 ROS1 融合基因类型 Table 2 Variant of ALK and ROS1 fusion gene 类型 融合基因 ALK A B C D E6;A19,E6;A20,E6ins33;A20,E6;ins18A20,E13;A20,E13;ins69A20,E20;A20,E20;ins18A20 E14ins11;del49A20,E14;del14A20,E14;del38A20,E15del60;del71A20 E2;A20,E2;ins117A20,E3;ins53A20,E17;ins30A20,E17ins61;ins34A20,E17ins65;A20,E17;ins68A20, E17del58;ins39A20,E18;A20 KI17;A20,KI24; A20,KL9; A20,T4; A20 ROS1 A B C D SL4;R32,SL14del;R32,CD6;R32,SD2;R32,SD4;R32 SL4;R34,SL14del;R34,CD6;R34,SD4;R34,EZ10;R34 TP8;R35,LR16;R35,GO8;R35 GO4;R 统计学处理采用 SPSS 19.0 软件进行统计学分析, 计数资料用百分率表示, 进行 χ 2 检验 P<0.05 表示差异具有统计学意义 2 结果 2.1 患者特征男 10 例, 女 5 例, 年龄 29~69( 中位 48) 岁, 46.67%(7/15) 的患者有吸烟史 ( 表 3, 图 1-2) 表 3 15 例肺腺样囊性癌临床特征 Table 3 Clinical features of 15 cases of pulmonary adenoid cystic carcinoma EGFR 基因 ALK 融合基序号年龄 / 岁性别吸烟史分期状态因状态 ROS1 融合 基因状态 治疗方案 1 51 男 是 IIA 野生型 阴性 阴性 手术 2 53 女 否 IIA 野生型 阴性 阴性 手术 3 30 男 是 IB 野生型 阴性 阴性 手术 4 37 女 否 IB 野生型 阴性 阴性 手术 5 69 男 否 IIA 野生型 阴性 阴性 手术 + 辅助化疗 6 53 女 否 IB 野生型 阴性 阴性 手术 7 51 男 是 IIB 野生型 阴性 阴性 手术 + 辅助放疗 8 35 男 是 IIIB 野生型 阴性 阴性 手术 + 辅助放疗 9 45 男 是 IIA 野生型 阴性 阴性 手术 男 否 IIIA 野生型 阴性 阴性 手术 + 辅助化疗 女 否 IIB 野生型 阴性 阴性 手术 + 辅助化疗 男 是 IA 野生型 阴性 阴性 手术 女 否 IA 野生型 阴性 阴性 手术 男 是 IV 野生型 阴性 阴性 放疗 + 化疗 男 否 IIB 19del 阴性 阴性 手术 + 辅助化疗 + 靶向治疗

4 肺腺样囊性癌的分子特征何诚, 等 讨论 图 1 肺腺样囊性癌大体标本 ( 肿物大小 7.0 cm 4.5 cm, 例 3) Figure 1 Gross specimen of pulmonary adenoid cystic carcinoma (mass size 7.0 cm 4.5 cm, Case 3) 图 2 肺腺样囊性癌病理学改变 (HE, 100, 例 3) Figure 2 Pathological changes of pulmonary adenoid cystic carcinoma (HE, 100, Case 3) 2.2 EGFR 基因 ALK 融合基因和 ROS1 融合基因 状态 ARMS 方法检测 15 例肺腺样囊性癌发现 EGFR 基因突变率为 6.67%(1/15), 为 19del 缺失突变 ( 图 3), EGFR 基因状态与性别 ( P=1.000) 年龄 (P=1.000) 吸烟状态 (P=1.000) 和分期 (P=1.000) 均 无相关性 15 例肺腺样囊性癌患者均未发现 ALK 融 合基因和 ROS1 融合基因 Rn Cycle 图 3 EGFR 基因 19 缺失突变检测曲线阳性样本 Figure 3 EGFR gene 19del curve mutation samples 肺肿瘤中黏液表皮样癌, 腺样囊性癌和上皮 肌上皮癌同属于唾液腺型肿瘤, 其中肺腺样囊性 [9] 癌属于唾液腺型肿瘤中第 2 大肿瘤, 目前研究 显示肺腺样囊性癌中, 男女比与吸烟状态均接近 1:1, 中位年龄 40~50 岁 本研究中男性患者略多于 女性患者, 吸烟患者与未吸烟患者持平, 中位年 龄 48 岁 肺腺样囊性癌属于低度恶性肿瘤, 手术切除 被认为是目前最有效的治疗手段, 术后辅助放疗 对此类肿瘤可能有一定的疗效, 化疗目前仍无随 机对照的临床研究, 需要积累数据 [11-12] 本研究中 绝大部分患者接受手术治疗, 部分患者接收术后 辅助放化疗, 有随访数据的 4 位患者中, 随访时间 0.75~8 年,1 例患者死于本疾病, 另 1 位患者死于车 祸, 其余 2 例患者存活至今 肺腺样囊性癌靶向治疗方面值得探索,Huo [7] 等通过 Sanger 测序方法,ARMS 方法和二代测序 在 24 例肺腺样囊性癌中未发现存在 EGFR,KRAS, BRAF,ALK,PIK3CA,PDGFRA 和 DDR2 基因状 态改变 ; 但之前和之后陆续有研究或个案报道, 肺腺样囊性癌中存在 EGFR 基因突变和 ALK 融合 [5] 基因, 可以尝试靶向治疗 2014 年 Song 等报道 1 例术后 4 年复发的肺腺样囊性癌存在 EGFR 基因 p.e746-a 750 del 缺失突变, 且对一代 EGFR-TKI [8] 埃克替尼有效 ; 随后 Fujita 等于 2016 年报道 1 例 EGFR 基因 p.l747-t751del 缺失突变的患者, 对一代 EGFR-TKI 吉非替尼有效, 但在 7 个月后死于疾病进 展 不仅是 EGFR 基因突变, 肺腺样囊性癌中还存 [9] 在 ALK 融合基因,Qing 等在 12 例肺腺样囊性癌中 通过荧光原位杂交发现 1 例存在 ALK 融合基因, 但 未发现 EGFR 基因突变, 遗憾的是该例 ALK 融合患 者, 作者并未报道是否服用克唑替尼 在本研究 中 1 例 EGFR 基因突变患者, 术后进行辅助化疗以及 复发后进行靶向治疗, 且治疗有效 总之, 肺腺样囊性癌中存在 EGFR 基因或 ALK 融 合基因常见位点改变, 常规基因检测仍不可忽视 参考文献 1. Miller DL, Allen MS. Rare pulmonary neoplasms[ J]. Mayo Clin Proc, 1993, 68(5): 许春伟, 张博, 林冬梅. WHO(2015) 肺肿瘤组织学分类 [ J]. 诊断 病理学杂志, 2015, 22(12):

5 2356 临床与病理杂志, 2017, 37(11) XU Chunwei, ZHANG Bo, LIN Dongmei. WHO (2015) classification of tumours of the lung[ J]. Chinese Journal of Diagnostic Pathology, 2015, 22(12): 方三高, 许春伟, 肖华亮, 等. 解读 2015 年 WHO 肺 胸膜 胸腺及心脏肿瘤分类 ( 肺 )[ J]. 重庆医学, 2017, 46(1): FANG Sangao, XU Chunwei, XIAO Hualiang, et al. Interpretation of WHO (2015) classification of tumours of the lung, pleural, thymus and cardiac tumors (Lung)[ J]. Chongqing Medicine, 2017, 46(1): 许春伟, 王海艳, 吴永芳, 等 例肺肿瘤临床病理特征分析 [ J]. 临床与病理杂志, 2016, 36(2): XU Chunwei, WANG Haiyan, WU Yongfang, et al cases of clinicopathological analysis of pulmonary neoplasm[ J]. Journal of Clinical and Pathological Research, 2016, 36(2): Song Z, Wu W, Zhang Y. Effective treatment with icotinib in primary adenoid cystic carcinoma of the lung with liver metastasis[ J]. J Thorac Oncol, 2014, 9(9): e67-e Gaissert HA, Grillo HC, Shadmehr MB, et al. Long-term survival after resection of primary adenoid cystic and squamous cell carcinoma of the trachea and carina[ J]. Ann Thorac Surg, 2004, 78(6): Huo Z, Wu H, Li S, et al. Molecular genetic studies on EGFR, KRAS, BRAF, ALK, PIK3CA, PDGFRA, and DDR2 in primary pulmonary adenoid cystic carcinoma[ J]. Diagn Pathol, 2015, 10: Fujita M, Matsumoto T, Hirano R, et al. Adenoid cystic carcinoma of the lung with an EGFR mutation[ J]. Intern Med, 2016, 55(12): Qing S, Zhou K, Liu X, et al. Primary pulmonary adenoid cystic carcinoma: clinicopathological analyses of 12 cases[ J]. Int J Clin Exp Pathol, 2015, 8(6): Dahse R, Driemel O, Schwarz S, et al. Epidermal growth factor receptor kinase domain mutations are rare in salivary gland carcinomas[ J]. Br J Cancer, 2009, 100(4): Grillo HC, Mathisen DJ. Primary tracheal tumors: treatment and results[ J]. Ann Thorac Surg, 1990, 49(1): Kanematsu T, Yohena T, Uehara T, et al. Treatment outcome of resected and nonresected primary adenoid cystic carcinoma of the lung[ J]. Ann Thorac Cardiovasc Surg, 2002, 8(2): 本文引用 : 何诚, 黄榕芳, 刘伟, 庄武, 方美玉, 吴标, 郑晓彬, 许春伟, 陈燕坪, 陈刚. 肺腺样囊性癌的分子特征 [ J]. 临床与病理杂志, 2017, 37(11): doi: /j.issn Cite this article as: HE Cheng, HUANG Rongfang, LIU Wei, ZHUANG Wu, FANG Meiyu, WU Biao, ZHENG Xiaobin, XU Chunwei, CHEN Yanping, CHEN Gang. Molecular features of pulmonary adenoid cystic carcinoma[ J]. Journal of Clinical and Pathological Research, 2017, 37(11): doi: /j.issn

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