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- 浩霖润 花
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1 11;31(11) 南方医科大学学报 J South Med Univ 1885 基础研究 MicroRN-221 通 过 抑 制 CDKN1C/p57 表 达 促 进 结 肠 癌 细 胞 增殖 孙 凯 王 伟 雷尚通 吴承堂 李国新 南方医科大学南方医院普通外科 广东 广州 摘要 目的 探讨microRN-221 MIR221 对结肠癌细胞中CDKN1C/p57表达调控及细胞增殖的影响 方法 常规培养人 结肠癌 Caco2 细胞系 预先给予或不给予 CDKN1C/p57 干扰性小 RN anti-p57-sirn 处理 再以脂质体分别转染 MIR221前体 pre-mir221 或MIR221特异性抑制剂 anti-mir221 寡核苷酸 应用实时荧光定量PCR Real-time RT-PCR 检测Caco2细胞中MIR221表达状况 运用半定量RT-PCR及Western-blot分析CDKN1C/p57 mrn及蛋白表达状况 并通 过噻唑蓝 MTT 比色法观察细胞的增殖状态 构建 pgl3-p57 荧光素酶报告载体并与 pre-mir221 或 anti-mir221 共转染 Caco2细胞 检测转染细胞中荧光素酶活性变化 结果 Caco2细胞转染pre-MIR221后 CDKN1C/p57蛋白表达水平下降 细胞增殖显著 P<.1 而 anti-mir221 可上调 CDKN1C/p57 蛋白表达继而抑制细胞增殖 且此种抑制作用可被 anti-p57-sirn 逆转 说明此种抑制效应确由 CDKN1C/p57 所介导 在转染重组有 CDKN1C/p57 基因 3'-UTR 片段的荧光 素酶报告载体的Caco2细胞中 共转染pre-MIR221后荧光素酶活性下降 而共转染anti-MIR221后荧光素酶活性增高 差异 均具有统计学意义 P<.1 结论 MIR221 可通过与 CDKN1C/p57 mrn 3'-UTR 区域结合使结肠癌细胞中 CDKN1C/ p57蛋白表达下降而促进肿瘤增殖 anti-mir221则可通过上调cdkn1c/p57蛋白表达继而抑制细胞增殖而发挥抗瘤效应 关键词 结肠癌 microrn-221 CDKN1C/p57 增殖 中图分类号 R 文献标志码 文章编号 MicroRN-221 promotes colon carcinoma cell proliferation in vitro by inhibiting CDKN1C/p57 expression SUN Kai, WNG Wei, LEI Shang-tong, WU Cheng-tang, LI Guo-xin Department of General Surgery, Nanfang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 51515, China bstract: Objective To investigate the regulatory effect of microrn-221 (MIR221) on CDKN1C/p57 expression in colon carcinoma cells in vitro. Methods Caco2 cells were treated with or without anti-p57-sirn prior to the addition of pre-mir221 or anti-mir221. The MIR221 expression pattern was detected by real-time RT-PCR, and the mrn and protein levels of CDKN1C/p57 expression were detected using semi-quantitative RT-PCR and Western blotting. Caco2 cell proliferation following the treatment was detected with MTT assay. CDKN1C/p57 3'-UTR fragment was amplified by PCR from the genome DN of human colon and inserted into a luciferase reporter plasmid. The luciferase reporter plasmid construct was then transfected into Caco2 cells along with pre-mir221 or anti-mir221, and the luciferase activity in the transfected cells was detected. Results MIR221-specific inhibitor significantly up-regulated CDKN1C/ p57 protein expression in Caco2 cells (P<.1). nti-mir221 could markedly inhibit Caco2 cell proliferation, and the inhibitory effect was obviously abolished by pretreatment with anti-p57-sirn, suggesting that the inhibition was mediated by CDKN1C/p57 (P<.1). significant increase of luciferase activity was detected in Caco2 cells co-transfected with the luciferase reporter plasmid construct and anti-mir221 (P<.1). Conclusions MIR221 can interact with the target site on the 3'-UTR of CDKN1C/p57 mrn to inhibit CDKN1C/p57 expression by post-transcriptional gene silencing to promote colon carcinoma cell proliferation, suggesting the value of MIR221 as a potential target for treatment of colon carcinoma. Key words: colon carcinoma;microrn-221; CDKN1C/p57; cell proliferation 收稿日期 基金项目 广东省自然科学基金博士启动项目 广东 省 医 学 科 研 基 金 119 南 方 医 科 大 学 南 方 医 院 院 长 基 金 8C5 作者简介 孙 凯 博士 电话 sunkai92@sina.com 通讯作者 雷尚通 电话 leishangtong@163.com DOI: CNKI: /R 网络出版时间 :22: 结肠癌是我国常见多发的恶性肿瘤之一 其总体发 1 病 率 近 年 来 呈 明 显 的 上 升 趋 势 MicroRN-221 MIR221 是新近发现的一种微小RN 可通过调控细 胞增殖周期而参与肿瘤的演进过程 2 CDKN1C/p57属 于激酶抑制蛋白CIP/KIP基因家族 由于其能使细胞增 殖停滞于 G/G1 期 发挥对细胞周期的负性调控作用而 成 为 近 年 来 的 研 究 热 点 3 我 们 前 期 实 验 已 证 实 MIR221 和 CDKN1C/p57 在结肠癌及癌旁组织中表达
2 1886 南方医科大学学报 (J South Med Univ) 第 31 卷 [4] 水平存在显著差异, 并呈负相关, 但 MIR221 是否真正通过抑制 CDKN1C/p57 表达而促进结肠癌发生发展尚未见研究报道 本实验中我们观察了 MIR221 对人结肠癌细胞系中 CDKN1C/p57 表达的调控作用及对细胞增殖的影响 1 材料与方法 1.1 材料人结肠癌细胞系 Caco2 由中国科学院上海生命科学院细胞库提供 ; 由 mirase 数据库 ( sanger.ac.uk/) 查找基因序列, 使用软件 Primer-Express 2. 进行引物与探针的设计 RNU6 上游引物 5'-CTC GCTTCGGCGCC-3', 下游引物 5'-CGCTTC CGTTTGCGT-3', 扩增片段长 96 bp;mir221 上游引物 5'-CGCTCTGTTCCTTGTG-3', 下游引物 5'-CTTTGGTGTTTGGTGTTTGG-3', 扩增片段长 73 bp;cdkn1c/p57 mrn 3'- 非翻译区 (untranslated region,utr) 上游引物 5'-TCTGGCCCG GCCC-3', 下游引物 5'-TCTGGTTCTTT TTTTGC-3', 扩增片段长 262 bp;cdkn1c/ p57 上游引物 5'-CGTTCTTCTCGGGTGG-3', 下游引物 5'-CTGTCTCCTTGGCTC-3', 扩增片段长 5 bp; 内参照 GPDH 上游引物 5'-CCCGTCCT GCCTCC-3', 下游引物 5'-TCCCCCCCTGTTG CTGT-3', 扩增片段长 452 bp; 上述引物均由上海生工合成 MIR221 前体 (pre-mir221) MIR221 特异性抑制剂 2'- 氧甲氧化修饰的 RN 寡核苷酸 (anti-mir221) MIR221 抑制剂阴性对照和转染阴性对照均购自上海吉玛制药技术有限公司 CDKN1C/p57 干扰性小 RN(small interfering RN,anti-p57-siRN) 及空白对照 sirn-con 均为 Santa Cruz 公司产品 ( 编号分别为 sc-377 及 sc-35125) 1.2 细胞培养及转染 Caco2 细胞常规复苏后, 以含 1% 胎牛血清 (v/v) 的 RPMI 16 培养基 (Hyclone) 重悬, 置于 25 cm 2 培养瓶 37 5% CO 2 孵育箱中静置培养, 待细胞接触密度至 %~9% 时常规胰酶消化传代, 细胞传代 4~8 代后用于实验 转染前 1 d, 选择生长状态良好的 Caco2 细胞, 以 / 孔的密度接种 6 孔板, 待细胞密度达到 5%~ 7% 后, 按 Lipofectamine 转染试剂盒说明书进行转染 (Invitrogen); 先预先转染或不转染 nmol/l 的 anti-p57-sirn( 以 sirn-con 作为空白对照 ),24 h 后再转染 5 nmol/l 的 pre-mir221 或 anti-mir221, 设置阴性对照组 anti-mir221 阴性对照组 pre-mir221 转染组 anti-mir221 转染组, 每组设 6 个复孔, 培养 24 h 后换新鲜培养液 1.3 Real-time RT-PCR 检测标本中 MIR221 表达收集培养细胞 1 1 7, 常规 Trizol 试剂 (Invitrogen) 抽提总 RN, 按照我们之前实验方法行 MIR221 定量检 [5] 测, 实验均至少重复 3 次 1.4 半定量 RT-PCR 检测标本中 CDKN1C/p57 mrn 表达取总 RN 3 μg 为模板, 参照 TaKaRa 公司的 RN [6] PCR Kit Ver 3. 试剂盒说明书行 RT-PCR 检测 mrn 相对含量 = 目的基因条带积分吸光度值 / 内参照 GPDH 基因条带积分吸光度值 实验均至少重复 3 次 1.5 Western-blot 检测标本中 CDKN1C/p57 蛋白表达培养细胞经预冷 PS 漂洗 2 次, 置于冰冷裂解液 ( 含 15 mmol/l NaC1 5 mmol/l Tris-HCl [ph7.6].1% SDS 1% NP- 和蛋白酶抑制剂复合物 ) 中研磨匀浆后超声破碎 1 min,13 g 离心 1 min 收集裂解物总蛋白 ; 取 5 μg 总蛋白行 SDS-PGE 并原位电转印至 PVDF 膜 ; 膜经封闭液 ( 含 mmol/l Tris-HC1 [ph7.6] 15 mmol/l NaCl.1% Tween- 和 5% 脱脂奶粉 ) 处理后, 与兔抗人 CDKN1C/p57( 稀释 1:) 和内参照 β-actin( 稀释 1 ) 多克隆抗体分别孵育, 膜经漂洗后再与羊抗兔二抗 ( 稀释 1 5) 反应 ( 一抗, 二抗均购自 bcam 公司 ), 增强化学发光法 (ECL) 发光试剂显影得到蛋白印记条带, 将 CDKN1C/p57 与同条件下扩增的内参照进行灰度比较以半定量分析 以上实验均至少重复 3 次 1.6 荧光素酶报告载体的构建和荧光素酶活性检测从正常结肠黏膜组织中分离基因组 DN, 利用 PCR 扩增 CDKN1C/p57 基因 3'-UTR 片段, 其中即含有 MIR221 可能结合位点 ;PCR 反应条件为 :94 2 min; 94 3 s 55 3 s 72 1 min,3 个循环 ;72 1 min PCR 产物通过琼脂糖电泳纯化后克隆入 T 克隆载体 pmd-t(takara) 挑选数株细菌克隆培养并提取质粒后进行 DN 测序, 将序列正确的质粒备用 将重组有人 CDKN1C/p57 基因 3'-UTR 片段的 pmd-t 载体进行适当酶切和通过琼脂糖电泳纯化后, 用 T 4-DN 聚合酶 (TaKaRa) 将两端补平, 再将此片段插入经 Xba I 酶切的荧光素酶报告载体 pgl3-control(promega), 所制备的质粒称为 pgl3-p57, 挑选插入方向通过酶切鉴定正确的克隆, 按 Lipofectamine 转染试剂盒说明书转染 Caco2 细胞 (Invitrogen), 同时转染 5 pmol 的 pre-mir221 或 anti-mir221, 用转染 pgl3-control 空载体的 Caco2 细胞作为对照 细胞培养 24 h 后按 Dual-Luciferase reporter assay system(promega) 操作手册对细胞提取物中的荧光素酶活性进行分析 以上实验均至少重复 3 次 1.7 噻唑蓝 (MTT) 比色法检测细胞增殖细胞转染后常规培养 48 h 后取出培养板, 每孔加入 MTT(5 g/l) μl 并继续孵育 4 h 后弃培养液, 加入二甲基亚砜 (DMSO) μl/ 孔, 微量振荡器振荡 1 min 至结晶溶解, 空白对照调零, 酶标仪上测定 49 nm 波长
3 第 11 期 孙 凯,等.MicroRN-221 通过抑制 CDKN1C/p57 表达促进结肠癌细胞增殖 处吸光度值 细胞增殖抑制率 CPIR = 1-实验组平 均49值/空白对照组平均49值 % 以上实验均 至少重复3次 1.8 统计学方法 实验所得数据用均数±标准差表示 采用完全随机 设计的单因素方差分析 多个样本均数间的两两比较采 用 Student-Newman-Keuls q 检验 以 P<.5 为差异具 有统计学意义 所有操作均以SPSS 13.统计软件完成 1887 位 点 图 3 推 测 MIR221 可 能 与 CDKN1C/p57 mrn 3'-UTR 区域相结合而发挥转录后调控作用 将 pgl3-p57 质粒与 pre-mir221 或 anti-mir221 共转染 Caco2 细胞并培养 24 h 后 提取细胞裂解物进行荧光 素酶活性分析 转染 pre-mir221 后荧光活性显著下 降 而相应地转染 anti-mir221 后荧光活性显著增高 差异均具有统计学意义 图 3 P< nti-mir221 抑制 Caco2 细胞增殖确由 CDKN1C/ p57所介导 如果 anti-mir221 抑制 Caco2 细胞增殖确实通过 前述的上调CDKN1C/p57蛋白所完成 那么CDKN1C/ p57 特异性且不可逆性拮抗剂 anti-p57-sirn 应当能 消除此种抑制效应 继而 Caco2细胞预先给予或不给 予 anti-p57-sirn nmol/l 处 理 24 h 后 再 经 pre-mir221(5 nmol/l)或 anti-mir221 (5 nmol/l)作 用 24 h 以 MTT 法检测细胞增殖 nti-p57-sirn 可 显著抑制Caco2细胞中CDKN1C/p57 mrn及蛋白质 2 结果 2.1 MIR221抑制Caco2细胞中CDKN1C/p57蛋白表达 目 的 基 因 转 染 至 Caco2 细 胞 48 h 后 应 用 Real-time RT-PCR检测细胞中MIR221表达状况 检测 标本中 MIR221 cdn 显示指数增长 并达到平台期 其扩增曲线为一组典型的倒S型曲线 图1 扩增效率 较高 MIR221 的 PCR 产物为 73 bp 其对应的 Tm 为 84.26±.56 熔解温度均一 峰的形状亦较锐利 图 1 通过设置复孔取平均值 即得到各 样 本 中 目 的 基 因 扩 增 的 Ct 值 作 为 Delta Rn vs cycle MIR221定量判定 转染pre-MIR221后 1.e+1 相应MIR221表达水平明显增高 2.915± 1.e+.442 而 转 染 anti-mir221 后 相 应 1.e-1 MIR221 表 达 水 平 明 显 下 降.541 ±.6 与基线表达水平 1.831± e-2 相比差异均具有统计学意义 P<.1 1.e-3 说明目的基因转染效率较高 1.e-4 anti-mir221 确实有效地抑制了 Caco2 细胞中MIR221表达 转染pre-MIR221 1.e-5 后 Caco2 细胞中 CDKN1C/p57 蛋白表 1.e 达下降 而相应地转染 anti-mir221 后 Cycle number CDKN1C/p57 蛋白表达上调 差异均具 MiR-221 specific product 有统计学意义 图 2 P<.1 说明 MIR221可抑制细胞中CDKN1C/p57蛋 白 表 达 而 anti-mir221 可 上 调. CDKN1C/p57 蛋白表达 且此种调控作 用发生在转录后水平 因为无论转染.3 pre-mir221 或 anti-mir221 细 胞 中 CDKN1C/p57 mrn 表达水平均无显. 著变化 图 2 MTT 法则显示 转染 MIR221后细胞增殖活跃 而相应地转染 anti-mir221后细胞增殖受到抑制 差异. 均具有统计学意义 图2C P< 荧光素酶活性分析证实 MIR221 与 CDKN1C/p57 mrn结合位点 Temperature ( ) 应 用 TargetScan PicTar miranda 图1 Real-time RT-PCR检测Caco2细胞中MIR221表达的扩增曲线 及熔解曲线 等分析软件发现 MIR221 与 CDKN1C/ Fig.1 mplification () and dissociation () curves of MIR221 in Caco2 cells detected p57 mrn 3'-UTR 区域存在互补结合 by real-time RT-PCR.
4 1888 南方医科大学学报 (J South Med Univ) 第 31 卷 CDKN1C/p57 (57 ) β-actin (45 ) 表达 7% 以上 ( 图 4~), 说明行 RN 干扰效果确切 ; 而 anti-mir221 所介导的 Caco2 细胞增殖抑制效应绝大部分 ( 但并不完全 ) 被 anti-p57-sirn 所消除 (CPIR 由 61.4% 下降至 41.2%,P<.1)( 图 4C) C CPIR (%) CDKN1C/p57 GPDH NC anti-mir-221 NC mir-221 anti-mir-221 图 2 Western-blot 及半定量 RT-PCR 检测 Caco2 细胞中 CDKN1C/p57 蛋白 () 及 mrn() 表达状况 1: 阴性对照组 ; 2: anti-mir221 阴性对照组 ; 3: pre-mir221 转染组 ; 4: anti-mir221 转染组. MTT 法检测 Caco2 细胞增殖状态 (C), 与阴性对照组 (NC) 相比, P<.1. Fig.2 Western blotting and semi-quantitative RT-PCR analysis showing CDKN1C/p57 protein () and mrn () expression in Caco2 cells. The status of cell proliferation was determined by MTT assay (C). 3 讨论 MIR221 是新近发现的一种 mirn, 其在肝细胞 [7] 癌 膀胱癌 胰腺癌等多种恶性肿瘤中表达上调, 并通过抑制细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子 (cyclin-dependent kinases inhibitors,cdki) 的表达而 [8] 促进肿瘤细胞由 G /G 1 期进入 S 期 我们前期研究发现 MIR221 在结肠癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织 ; 而 CDKN1C/p57 作为 CDKI 家族重要一员, 其 mrn 在结肠癌和癌旁组织中表达无显著差异, 而蛋白质在结肠癌组织中表达明显下降, 推测 MIR221 可能通过不完全互补配对方式与 CDKN1C/p57 mrn 结合, 故仅能抑制 CDKN1C/p57 mrn 的进一步翻译但不能将其根本降解, 肿瘤细胞可能通过 MIR221 介导的 [9] CDKN1C/p57 转录后基因沉默而获得增殖能力, 但 MIR221 是否真正通过抑制 CDKN1C/p57 蛋白表达而促进结肠癌细胞增殖及其与 CDKN1C/p57 mrn 确切结合位点尚未见研究报道 本实验证实结肠癌细胞株转染 pre-mir221 后在相应 MIR221 表达水平明显增高的同时 CDKN1C/p57 蛋白表达下降, 癌细胞增殖亦更加活跃, 说明 MIR221 可 Luciferase activity 1 1 pgl3+nc pgl3+ pgl3+anti- pgl3- pgl3-p57+ pgl3-p57+ mir-221 mir-221 p57+nc mir-221 anti-mir-221 图 3 MIR221 与 CDKN1C/p57 mrn 3'-UTR 区域结合 : TargetScan 软件分析 MIR221 与 CDKN1C/p57 mrn 可能结合位点 ; : 荧光素酶活性分析 Caco2 细胞中荧光强度变化, 与阴性对照组相比, P<.1. Fig.3 Direct binding of MIR221 to CDKN1C/ p57 mrn 3'-UTR. 通过抑制 CDKN1C/p57 表达而促进肿瘤细胞增殖, 发挥类似 癌基因 作用,MIR221 可作为结肠癌基因治疗的新的药理学靶点 ; 而应用 anti-mir221 则可有效降低 MIR221 表达水平, 继而 CDKN1C/p57 蛋白表达随之上调, 且显著抑制了肿瘤细胞增殖, 说明 anti-mir221 确具有抗肿瘤效应, 而上调 CDKN1C/p57 表达则是 anti-mir221 发挥抗瘤效应的作用机制之一 ; 并且 MIR221 对 CDKN1C/p57 确实于转录后水平发挥调控作用, 因为无论转染 pre-mir221 或 anti-mir221, 细胞中 CDKN1C/p57 mrn 表达水平均无显著变化 ; 同时亦进一步证实了 MIR221 仅能抑制 CDKN1C/p57 mrn 翻译但不能将其根本降解, 而这亦与生物信息软
5 CPIR (%) 第 11 期 孙凯, 等.MicroRN-221 通过抑制 CDKN1C/p57 表达促进结肠癌细胞增殖 1889 C CDKN1C/p57 GPDH CDKN1C/p57 (57 ) β-actin (45 ) anti-p57-sirn mir anti-mir 图 4 半定量 RT-PCR 及 Western-blot 分别检测 Caco2 细胞中 CDKN1C/p57 mrn() 及蛋白 () 表达状况 1: 阴性对照组 ; 2: sirn-con 转染组 ; 3: anti-p57-sirn 转染组. MTT 法检测 Caco2 细胞增殖状态 (C), 与阴性对照组 (NC) 相比, P<.1; 与 anti-mir221 作用组相比, # P<.1. Fig.4 Semi-quantitative RT-PCR and Western blotting showing CDKN1C/p57 mrn () and protein () expression in Caco2 cells. The status of cell proliferation was determined by MTT assay (C). 件所显示的 MIR221 和 CDKN1C/p57 mrn 3'-UTR 仅存在不完全互补配对的分析结果相一致 ; 另外当 anti-mir221 与 pgl3-p57 质粒共转染 Caco2 细胞后荧 光素酶活性增高, 说明 anti-mir221 可通过与 Caco2 细 胞中基础表达的 MIR221 互补结合, 从而抑制了 MIR221 与 pgl3-p57 质粒中 CDKN1C/p57 基因 3'-UTR 片段结合, 使得质粒中报告荧光强度增加, 更进 一步直接确认了 MIR221 系通过与 CDKN1C/p57 mrn 3'-UTR 区域结合而发挥转录后基因沉默效应 在本研究中,anti-MIR221 可通过上调 CDKN1C/ p57 蛋白表达而抑制结肠癌细胞增殖, 且此抑制效应可 被 CDKN1C/p57 特异性拮抗剂 anti-p57-sirn 所绝大 部分 ( 但不能完全 ) 消除, 这一方面说明 anti-mir221 对 结肠癌细胞增殖的抑制作用确由 CDKN1C/p57 所介 导 ; 而另一方面亦说明 anti-mir221 除了上调 CDKN1C/p57 表达外, 尚具有其他 CDKN1C/p57 非依赖性抗肿瘤生物学功能 既往研究证实,MIR221 尚可 抑制 CDKI 家族其他成员包括 CDKN1/p27 等表达, 而 # anti-mir221 同样可上调 CDKN1/p27 表达水平, 这亦可能是本实验中 anti-mir221 所产生的肿瘤抑制作用 [1] 仅部分为 anti-p57-sirn 所消除的原因 值得注意的是, 亦有研究报道证实 MIR221 可抑制甲状腺乳头状癌中 c-kit 癌基因的表达, 此时 MIR221 似又发挥着 抑癌 [11] 基因 作用 究竟是同一种 mirn 本身即具有双向调控作用, 抑或仅是在不同肿瘤或不同时空环境下其作用机制不同尚难以确定 ; 而这亦与目前有关 mirn 的最新认识相一致, 即 mirn 与其靶 mrn 并不是简单的 一对一 直接线性关系, 而是构成复杂的网络调控模式 总之,MIR221 可通过与 CDKN1C/p57 mrn 3'-UTR 区域结合使结肠癌细胞中 CDKN1C/p57 蛋白表达下降而发挥促癌作用, 而 anti-mir221 则可通过上调 CDKN1C/p57 蛋白表达继而抑制细胞增殖而发挥抗瘤效应 然而本实验结果来自于体外细胞培养, 这些实验是否能够经多次重复, 从不同方面来反复验证后形成一种理论进而真正应用于临床, 或在动物实验及人体是否会有更新的发现, 这应当是我们关注的问题 参考文献 : [1] Sun K, Zeng JJ, Wang W, et al. MicroRN-221 controls CDKN1C/ P57 expression in human colorectal carcinoma[j]. cta Pharmacol Sin, 11, 14(4): [2] artels CL, Gj T. MicroRNs: novel biomarkers for human cancer [J]. Clin Chem, 9, 55(4): [3] Vlachos P, Joseph. The Cdk inhibitor p57(kip2) controls LIM-kinase 1 activity and regulates actin cytoskeleton dynamics[j]. Oncogene, 9, 28(47): [4] 曾俊杰, 孙凯, 吴承堂, 等. 应用实时荧光定量 PCR 检测结直肠癌与癌旁组织中 mirn-221 的差异表达状况 [J]. 山东医药, 1, 5 (12): [5] 王伟, 孙凯, 吴承堂, 等. 特异性 mir-221 抑制剂对结直肠癌细胞增殖及凋亡的影响 [J]. 南方医科大学学报, 11, 31(4): [6] 孙凯, 曾俊杰, 王伟, 等. 微小 RN-221 对结直肠癌中 CDKN1C/ p57 表达的调控研究 [J]. 中华胃肠外科杂志, 11, 14(4): [7] le Sage C, Nagel R, Egan D, et al. Regulation of the p27(kip1) tumor suppressor by mir-221 and mir-222 promotes Cancer cell proliferation[j]. EMO J, 7, 26(15): [8] Visone R, Russo L, Pallante P, et al. MicroRNs (mir)-221 and mir-222, both overexpressed in human thyroid papillary carcinomas, regulate p27kip1 protein levels and cell cycle[j]. Endocr Relat Cancer, 7, 14(3): [9] 曾俊杰, 孙凯, 吴承堂, 等. 结直肠癌与毗邻癌旁组织中 microrn- 221 与 CDKN1C/p57 的差异表达 [J]. 中华实验外科杂志, 11, 28 (1): [1]Galardi S, Mercatelli N, Giorda E, et al. mir-221 and mir-222 expression affects the proliferation potential of human prostate carcinoma cell lines by targeting p27kip1[j]. J iol Chem, 7, 282(32): [11]He H, Jazdzewski K, Li W, et al. The role of microrn genes in papillary thyroid carcinoma[j]. Proc Natl cad Sci US, 5, 12 (52): ( 编辑 : 黄开颜 )
材料 方法
生物技术通报 张发洲 杨慧兰 为了构建单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽 真核表达质粒 应用 技术从 株 的基因组中扩增 基因 并连接至真核表达载体 对阳性克隆进行菌落 酶切和测序鉴定后 成功构建了重 组质粒 用 转染试剂盒将重组质粒 转染至 细胞中 并用 及 检测其表达情况 结果显示 基因在 细胞中得到正确表达 真核表达质粒 的构建成功 为进 一步研究 对宿主细胞的影响奠定了基础 单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽
标题
环 球 中 医 药 2016 年 5 月 第 9 卷 第 5 期 摇 Global Traditional Chinese Medicine, May 2016,Vol 郾 9, No 郾 5 摇 557 两 种 电 针 对 脊 髓 损 伤 14 天 后 大 鼠 运 动 功 能 神 经 元 及 MEK2 p 鄄 ERK1 表 达 的 影 响 论 著 宋 良 玉 摇 吕 威 摇 景 泉 凯 摇 莫 雨
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生物技术通报 高曰文 朱耀明 王艳林 朱晨宇 秦烨 胡汉卿 韩钰 旨在探讨盐酸普鲁卡因 对人结肠癌 细胞 基因甲基化及表达的影响 应用巢式双重 甲基化特异性聚合酶链反应 检测盐酸普鲁卡因处理前后 细胞中 基因启动子的甲基 化水平 逆转录 聚合酶链反应 和蛋白印迹技术观察 细胞内 基因表达情况 检测发现人结肠癌 细胞中 基因存在甲基化 经盐酸普鲁卡因处理能够使 基因甲基化水平下降 和蛋白印迹分析结果显
:TGF-β bfgf 23 KEY WORDS:transforminggrowthfactor-β ;basicfibroblastgrowthfactor; bonemarrow mesenchymalstemcels;eukaryoticexpressionvector; liposomet
2 ( )208 58 JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)208,Vol.58No. TGF-β bfgf,, 2 (., 330006; 2., 5040) : -β (TGF-β ) (bfgf) (BMSCs), SD BMSCs Percol PCR TGF-β bfgf, pcdna3.(+), 3 BMSCs RT-PCR Westernblot
福建农业学报 材料与方法 试验菌株 引物 主要仪器 主要试剂 细菌培养 模板的制备 反应条件 扩增产物的检测 特异性试验 敏感性试验 分离菌株检测 产物的克隆及序列测定 结果与分析
2004级研究生现代免疫学实验技术结业报告
PCR PCR PCR RT-PCR PCR (Polymerase Chain Reaction,PCR) 80 DNA, DNA PCR PCR PCR DNA PCR -- -- DNA DNA 93 DNA PCR DNA DNA ( ) DNA 55 DNA DNA -- TaqDNA dntp DNA -- -- PCR PCR DNA DNA Y (1 X) n Y DNA X (Y)
12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL
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( )2017 57 5JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2017,Vol.57No.5 11 LY294002, (, 330006) : LY294002 PI3K/AKT 0 10 15 20 25 30μmol L -1 LY294002(LY294002 ) A549,PBS CCK8 LY294002 A549 ; Westernblot
第 卷 第 期 年 月 水 生 生 物 学 报 肠 丫 搔蒸霎 原 位杂 交 和 原 位 技 术在 鱼 类基 因 定位 中 的 应 用 黄 袁仕 取 梅 朱作言 中 国科 学 院 水 生 生 物 研 究 所 淡 水 生 态 与 生 物 技 术 国 家 重 点 实验 室 武 汉 陕 西 师 范 大学 生 命 科 学 院 西 安 # 万 尸 了夭 如 趾 郑 人 扭寿 卿 关 键词 艺 只 妙 毛山知
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第 24 卷 第 5 期 2015 年 5 月 碘 131 doi:10.3978/j.issn.1005-6947.2015.05.005 http://dx.doi.org/10.3978/j.issn.1005-6947.2015.05.005 Chinese Journal of General Surgery, 2015, 24(5):643 647. Chinese Journal of
马 丽 媛, 等. 油 茶 皂 苷 体 外 诱 导 人 白 血 病 Jurkat 细 胞 凋 亡 及 其 可 能 机 制 1073 力 争 将 茶 油 作 为 食 用 油 的 主 流 品 种 [5] 茶 麸 系 油 茶 果 实 榨 除 茶 油 后 的 废 弃 残 渣, 药 用 名 为 茶 子 饼,
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1072 基 础 研 究 Basic Research www.tumorsci.org 肿 瘤 2011 年 12 月 第 31 卷 第 12 期 TUMOR Vol. 31, December, 2011 DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2011.12. 004 Copyright 2011 by TUMOR 油 茶 皂 苷 体 外 诱 导 人 白 血 病 Jurkat
HGC27 MKN45 SGC7901 MGC803 BGC823 AGS GES μl ATCC RPMI X F12K Sigma SDS-PAGE PBS 4 d CCK-8 Tris-base Biosharp 10% CCK μ
516 1002-0217 2017 06-0516 - 05 3 1,2, 1, 1, 1 1. 210029 2. 244000 3 RT-PCR Western-blot RNA CCK-8 Western-blot P < 0. 05 P < 0. 001 LC3Ⅱ P < 0. 001 P62 P < 0. 001 3 R 735. 2 A DOI 10. 3969 / j. issn.
第 期 马 海 燕 等 臭 氧 水 和 超 声 波 协 同 作 用 在 速 冻 西 兰 花 中 的 应 用 研 究 材 料 与 方 法 臭 氧 水 的 制 取 臭 氧 水 处 理 超 声 波 处 理 超 声 波 和 臭 氧 水 协 同 处 理 对 照 处 理 邻 苯 二 胺 分 光 光 度 法 测
第 卷 第 期 年 月 食 品 与 生 物 技 术 学 报 臭 氧 水 和 超 声 波 协 同 作 用 在 速 冻 西 兰 花 中 的 应 用 研 究 马 海 燕 张 慜 孙 金 才 食 品 科 学 与 技 术 国 家 重 点 实 验 室 江 南 大 学 江 苏 无 锡 海 通 食 品 集 团 股 份 有 限 公 司 浙 江 慈 溪 由 于 速 冻 蔬 菜 加 工 过 程 中 的 热 烫 处 理 对
第 期 王 兴 涛 等 猪 流 行 性 乙 型 脑 炎 病 毒 种 猪 精 液 分 离 株 的 鉴 定 及 进 化 分 析 病 料 毒 株 及 细 胞 试 剂 引 物 设 计 提 取 及 基 因 克 隆 及 测 序
河 南 农 业 科 学 王 兴 涛 罗 俊 滕 蔓 樊 剑 鸣 鄂 巍 禹 斌 刘 力 张 改 平 利 用 技 术 对 河 南 省 某 规 模 化 猪 场 乙 脑 疑 似 病 例 的 种 猪 精 液 进 行 分 析 从 部 分 样 本 中 扩 增 出 与 流 行 性 乙 型 脑 炎 病 毒 基 因 和 基 因 具 有 高 度 同 源 性 的 预 期 产 物 在 日 龄 乳 鼠 脑 内 接 种 种 猪
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EB 病 毒 Rta/IgG 抗 体 与 鼻 咽 癌 分 期 的 关 系 蔡 永 林, 郑 裕 明, 成 积 儒, 李 军, 莫 永 坤, 钟 青 燕 ( 广 西 梧 州 市 红 十 字 会 医 院, 梧 州 市 肿 瘤 防 治 研 究 所, 广 西 梧 州 543002) 摘 要 : 目 的 探 讨 EB 病 毒 Rta/IgG 抗 体 与 鼻 咽 癌 临 床 分 期 的 关 系 方 法 用 酶
第 期 李 伟 等 用 方 法 对 中 国 历 史 气 温 数 据 插 值 可 行 性 讨 论
李 伟 李 庆 祥 江 志 红 使 用 插 值 方 法 对 已 经 过 质 量 控 制 和 均 一 化 的 年 月 年 月 中 国 全 部 基 本 基 准 站 气 温 资 料 逐 月 进 行 空 间 插 值 通 过 站 点 的 实 际 序 列 与 插 值 后 格 点 序 列 进 行 比 较 针 对 相 关 系 数 和 线 性 趋 势 等 多 个 量 来 检 验 方 法 对 气 候 资 料 插 值 的
分 级 和 气 管 是 否 受 侵 是 影 响 预 后 的 独 立 危 险 因 素 关 键 词 状 腺 肿 瘤 ; 癌, 乳 头 状 ; 预 后 Clinical outcomes of 600 papillary thyroid carcinoma patients ZHANG Zong-min,
移 性 鳞 癌 患 者 的 临 床 资 料, 比 较 不 同 治 疗 手 段 的 效 果 50 例 患 者 男 性 44 例, 女 性 6 例, 年 龄 29~73 岁, 中 位 年 龄 52.5 岁 ; 临 床 分 期 :N2c 占 64% (32/50),N3 占 36% (18/50) 30 例 患 者 行 双 颈 淋 巴 结 清 扫 术 50 例 患 者 均 行 放 疗, 剂 量 为 50~66
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梁 运 文 霍 震 刘 凯 本 文 利 用 奥 尔 多 中 心 的 调 查 数 据 从 三 个 方 面 对 我 国 城 乡 居 民 财 产 分 布 状 况 进 行 了 详 细 的 实 证 分 析 首 先 刻 画 了 我 国 城 乡 居 民 财 产 分 布 的 总 体 统 计 特 征 然 后 从 财 产 构 成 出 发 对 我 国 城 乡 居 民 财 产 分 布 进 行 了 结 构 分 解 最 后 通
绎 阴 元元 510515 Caco-2 Caco-2 P 211 better than those in the control group, with significant difference between two groups (P < 0.05). The ocular hypertension of patients in the cont
210 毛 果 芸 香 碱 联 合 拉 坦 前 列 素 治 疗 原 发 性 急 性 闭 角 型 青 光 眼 的 疗 效 观 察 符 元 党 1, 郑 振 优 2, 林 再 雄 2, 周 吉 良 1. 昌 江 黎 族 自 治 县 中 西 医 结 合 医 院, 海 南 昌 江 572700 2. 海 南 医 学 院 附 属 医 院 眼 科, 海 南 海 口 570100 1 摘 要 : 目 的 探 讨
600 现 代 药 物 与 临 床 Drugs & Clinic 第 31 卷 第 5 期 2016 年 5 月 were significantly decreased, but the levels of IL-12 in two groups were significantly increa
现 代 药 物 与 临 床 Drugs & Clinic 第 31 卷 第 5 期 2016 年 5 月 599 喘 可 治 注 射 液 联 合 细 辛 脑 注 射 液 治 疗 小 儿 毛 细 支 气 管 炎 的 临 床 研 究 唐 辉 英, 佘 定 平, 马 颐 娇 深 圳 市 儿 童 医 院 呼 吸 科, 广 东 深 圳 518026 摘 要 : 目 的 探 讨 喘 可 治 注 射 液 联 合
' ' 1 2 1956-1966 1956 1966 1957 1 50 2 1978 21 30 3 1966-1977 1966 5 1976 10 1984 1 1978-1978 80 3 1978 119
33 Vol. 33 1 Journal of Hubei Normal University Philosophy and Social Science No. 1 2013 ( 湖 北 师 范 学 院 文 学 院, 湖 北 黄 石 435002) 新 中 国 成 立 以 来, 大 学 生 价 值 观 的 变 迁 总 体 上 来 说 经 历 了 两 个 大 的 阶 段, 即 改 革 开 放 前 的
Protein Labeling and Detection
ECL plex Product Specialist 1/ Western Blot 2/ Western Blotting- PI 3/ Western Blotting 1. 2 1 2. 3. 4. Y 3 4 5. 4/ 1. SDS- (SDS-PAGE) SDS ( β- ) --SDS 5/ SDS-PAGE - - - (Tris-HCL ph 6.8) glycine/chloride
strated that cell clones were decreased with increase of the concentration of procyanidins. PI staining a- nalysis showed that cell cycle was a
32 2 Vol. 32 No. 2 2011 4 Journal of Jinan University Medicine Edition Apr. 2011 HepG2 1 1 2 1 1 1 1. 510632 2. 510080 HepG2 MTT WST-8 HepG2 PI Annexin V-FITC /PI Western blotting HepG2 - P < 0. 01 HepG2
14 吴巍芸, 等. MiR-192 对结直肠癌细胞 ZEB2 表达及迁移和侵袭的影响 结直肠癌 (colorectal cancer,crc) 是消化系统常见的恶性肿瘤之一, 其侵袭和转移是导致肿瘤进展及术后复发的重要原因 CRC 的发病机制目前尚未完全明了, 可能与多种因素和多基因参与有关 研究
肿瘤 2014 年 1 月第 34 卷第 1 期 TUMOR Vol. 34, January 2014 www.tumorsci.org 13 基础研究 Basic Research DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2014.01. 003 Copyright 2014 by TUMOR MiR-192 对结直肠癌细胞 ZEB2 表达及迁移和侵袭的影响 吴巍芸, 梁坚,
932 SUZHOU UVIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCE E1A inhibite H22 ascitic hepatoma obviously and almost has no side effect on immune functio
2010 30 5 931 Ad-E1A 215123 Ad-E1A BALB /c Ad-E1A RT-PCR E1A H22 BALB /c H22 PBS Ad-E1A 5-Fu 7 10 9 pfu /ml Ad-E1A Ad-E1A 5-Fu 66. 7% 68. 8% P > 0. 05 Ad-E1A PBS 5-Fu P < 0. 01 P < 0. 05 Ad-E1A PBS 5-Fu
Microsoft Word - 360145.doc
项 目 批 准 号 81273814 归 口 管 理 部 门 申 请 代 码 收 件 日 期 H2716 360145 y 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 资 助 项 目 计 划 书 资 助 类 别 : 面 上 项 目 亚 类 说 明 : 非 连 续 资 助 类 项 目 附 注 说 明 : 项 目 名 称 : 益 气 养 肺 法 拮 抗 bfgf 对 肺 癌 微 环 境 介 导 化 疗
华 南 师 范 大 学 学 报 自 然 科 学 版 年
年 月 华 南 师 范 大 学 学 报 自 然 科 学 版 年 第 期 赵 冬 芹 朱 莹 漫 蔡 昭 林 肖 鹏 李 楚 华 通 过 研 究 碱 性 钙 离 子 水 对 大 鼠 血 液 血 钙 浓 度 及 免 疫 功 能 的 影 响 结 果 显 示 碱 性 钙 离 子 水 对 大 鼠 血 液 和 血 钙 浓 度 无 明 显 影 响 对 大 鼠 免 疫 功 能 具 明 显 增 强 碱 性 钙 离 子
大 学 化 学 第 卷 第 期 年 月 微 囊化技 术 在 生 物 医 学 中的 应 用 俞 耀 庭 陈 长 治 南 开 大学分 子 生物研 究 所 本 文 概 述 了微囊 固 定化技术基 本 应 用 原 理 摘要 的生 物 血液 相溶性 及 通透 性能 胞 在治 疗 肾 衰 肝 衰 及 清除 人体 内 中毒药物 般 性介 绍 微 囊 人 工 细 胞 的 一 般制 备方 法 各种 膜 材 料 对 人
2015内镜杂志-WMD.FIT)
第 22 卷 第 6 期 中 国 内 镜 杂 志 Vol. 22 No.6 2016 年 6 月 China Journal of Endoscopy Jun. 2016 DOI: 10.3969/j.issn.1007-1989.2016.06.015 文 章 编 号 : 1007-1989(2016)06-0056-05 论 著 对 经 口 牵 引 辅 助 内 镜 黏 膜 下 剥 离 术 中 牵
中 国 投 资 率 波 动 的 度 量 与 变 化 的 分 解 年 经 济 发 展 水 平
数 量 经 济 技 术 经 济 研 究 年 第 期 中 国 投 资 率 波 动 的 度 量 与 变 化 的 分 解 年 方 红 生 楼 琳 琳 郭 林 浙 江 大 学 金 融 研 究 院 浙 江 财 经 学 院 经 贸 学 院 本 文 从 产 业 角 度 对 中 国 投 资 率 的 波 动 和 变 化 进 行 了 度 量 和 分 解 表 明 年 产 业 内 效 应 解 释 了 中 国 投 资 率 波
第 12 期 2
第 12 期 12 2013 年 9 月 12 日 中 国 人 民 大 学 重 阳 金 融 研 究 院 研 究 部 副 主 任 贾 晋 京 1 第 12 期 2 第 12 期 3 第 12 期 4 第 12 期 5 第 12 期 6 第 12 期 7 第 12 期 8 第 12 期 9 第 12 期 10 第 12 期 11 第 12 期 12 第 12 期 人 口 : 随 着 美 国 婴 儿 潮
368 detected by Western blot expressed at all phases. The p21 protein was expressed in a few cells by immunohistochemistry, but p21 could not detected
367 (human lens epithelial cells, HLEC) E (cyclin dependent kinase 2, CDK 2 ) (cyclin2 dependent2kinase inhibitor, CKI) p21, HLEC (posterior capsule opacification, PCO) HLEC HLE2B3, ; ; RNA (reverse transcription
材料! 方法! # 基因的扩增及其序列分析
生物技术通报 黄艳燕 黄靖华 卢福芝 孙靓 彭立新 周兴 黄日波 利用 的方法从鼠李糖乳杆菌基因组 中扩增到 乳酸脱氢酶基因 并连接到载体 上 构建表达质粒 将重组质粒 转化大肠杆菌 重组菌株经 诱导表达 电泳分 析表明 在大肠杆菌中实现了表达 表达产物的分子量约为 同时采用紫外分光光度法测定 乳酸脱氢酶的酶活 测得重组菌株的 乳酸脱氢酶活力为 最适反应温度为 最适 乳酸脱氢酶 克隆 表达 鼠李糖乳杆菌
黄 金 原 油 总 持 仓 增 长, 同 比 增 幅 分 别 为 4.2% 和 4.1% 而 铜 白 银 以 及 玉 米 则 出 现 减 持, 减 持 同 比 减 少 分 别 为 9.4%,9.4% 以 及 6.5% 大 豆, 豆 粕 结 束 连 续 4 周 总 持 仓 量 增 长, 出 现 小 幅
小 麦 净 多 持 仓 增 加, 豆 油 豆 粕 净 多 持 仓 减 少 美 国 CFTC 持 仓 报 告 部 门 : 市 场 研 究 与 开 发 部 类 型 : 量 化 策 略 周 报 日 期 :212 年 5 月 7 日 电 话 :592-5678753 网 址 :www.jinyouqh.com 主 要 内 容 : 根 据 美 国 CFTC 公 布 的 数 据, 本 报 告 中 的 11 个
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药学 实践 杂志 药理 年第 卷第 期 生 物 技 术 药 品 近年 来 的 发 展 杨玉 龙 任海 祥 南 京军 区 南京 总 医 院 南京 本 文 概 述 了 近 年 来 国 内 外 生 物 技 术 药 品 与 生 化 药 品 的 研 究 与 发 展 论 述 了生 物 技 术与 生 物 药 品 摘要 间 的 关 系 介 绍 了 近 代 生物 技 术 在某 些 生 物 药 品 生 产 中 的应 用
,2003. 11 (CIP) /. - : ISBN 7-5364 - 5381-7... -.R657.1 CIP (2003) 102797 3 61 0012 880mm1230m m 1/ 32 10. 5 242 1 2003 11 2003 11 1-2 000 35.00 IS BN
,2003. 11 (CIP) /. - : ISBN 7-5364 - 5381-7... -.R657.1 CIP (2003) 102797 3 61 0012 880mm1230m m 1/ 32 10. 5 242 1 2003 11 2003 11 1-2 000 35.00 IS BN 7-5364 - 5381-7,, : 3 : 61001 2 : 866710 39 866728
材料 材料和方法 人骨肉瘤细胞系 MG 63 和人成骨细胞系 hfob1.19 购自中科院上海细胞库 ; 质粒提取试剂盒 RNA 提取试剂盒 逆转录试剂盒 PCR 试剂盒及 Lipofectamine TM 2000 转染试剂盒购自 Invitrogen;MTT 购自 Sigma;Sp
1428 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2013,29(8):1428 1432 [ 文章编号 ] 1000 4718(2013)08 1428 05 mir 335 靶向 Sp1 对人骨肉瘤 MG 63 细胞增殖的调控 王勇, 赵伟 ( 沈阳医学院附属中心医院骨四科, 辽宁沈阳 110024) [ 摘要 ] 目的 : 探讨 mir 335 对人骨肉瘤
Syngene GBOXHR Retsch MM400 KQ DE Eppendorf Table 1 The sources of Astragali Radix and Hedysarum Radix No. 1 AMM2011_NMGTY Astr
PCR 龙平, 崔占虎, 李虔全, 徐建平, 张春红, 周立社 * *, 李旻辉 ( 包头医学院, 内蒙古包头 014060) DNA 30 28 DNA trnl-trnf PCR PCR 136 bp 323 bp 10% PCR PCR Astragalus membranaceus Fisch. Bge. var. mongho- licus Bge. Hsiao A. membranaceus
孙 建 董 小 萍 程 永 现 成 都 中 医 药 大 学 四 川 成 都 中 国 科 学 院 昆 明 植 物 研 究 所 植 物 化 学 与 西 部 植 物 资 源 持 续 利 用 国 家 重 点 实 验 室 云 南 昆 明 衰 老 是 自 然 界 一 种 复 杂 的 生 命 现 象 我 国 人 口 老 龄 化 趋 势 明 显 抗 衰 老 这 一 世 界 性 医 学 课 题 在 我 国 受 到 关
864 现 代 药 物 与 临 床 Drugs & Clinic 第 31 卷 第 6 期 2016 年 6 月 of apoptosis related factors, decrease the incidence of adverse reactions, which is of great
现 代 药 物 与 临 床 Drugs & Clinic 第 31 卷 第 6 期 2016 年 6 月 863 曲 妥 珠 单 抗 联 合 多 西 紫 杉 醇 治 疗 Her-2 阳 性 乳 腺 癌 的 临 床 研 究 * 周 永 安, 刘 训 碧 黄 石 市 中 心 医 院 ( 普 爱 院 区 ) 乳 腺 肿 瘤 外 科, 湖 北 黄 石 435000 摘 要 : 目 的 探 析 注 射 用 曲
材 料 方 法 统 计 学 分 析 体 外 作 用 对 细 胞 增 殖 的 影 响
生 物 技 术 通 报 罗 春 燕 官 涛 王 红 宁 杨 艳 姜 蓉 胡 晓 舒 华 自 森 王 建 伟 旨 在 探 讨 人 参 总 皂 苷 对 细 胞 表 达 的 影 响 法 显 示 对 细 胞 增 殖 抑 制 程 度 呈 剂 量 与 时 间 依 赖 性 增 加 且 呈 正 相 关 关 系 流 式 细 胞 术 表 明 能 阻 止 细 胞 从 期 向 期 移 行 激 光 共 聚 焦 显 微 镜 观
标题
吉林农业大学学报 ２０１６ ３８ １ ８７ ９１ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｊｉｌｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｈｔｔｐ ｘｕｅｂａｏ ｊｌａｕ ｅｄｕ ｃｎ Ｅ ｍａｉｌ ｊｌｎｄｘｂ ｖｉｐ ｓｉｎａ ｃｏｍ 神 经 生 长 因 子 ｍｒｎａ 在 鹅 等 级 前 卵 泡 中 的 表达 刘璐璐 隋玉健 朱海洋 武惠岩 杨 辉 孙永峰 吉林农业大学动物科学技术学院 长春 １３０１１８
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第 第 卷 海 欺 环 洋 科 境 学 月 年 铜 锌 镐 汞 锰 铬 对 斑 节 对 虾仔虾 急性 致毒 的研 究 高淑 英 邹栋梁 厦 门 大学 海洋 系 厦 门 摘 仔虾 的 急 性 致 毒 效 应 土 本文在恒温 要 结果 表 明 值 分别 为 充 气条 件下 研 究 了 值分 别为 十 对斑节对虾 对 斑 节对 虾 仔 虾 值分 别 为 值 分别 为 六 种重 金 属 的 毒性 顺 序 为
戊 酸 雌 二 醇 片 联 合 宫 颈 注 射 利 多 卡 因 用 于 绝 经 后 妇 女 取 环 的 临 床 效 果 评 价 陆 琴 芬, 等 371 Keywords groups, no removal difficulties and failure, was statistically s
370 临 床 与 病 理 杂 志 J Clin Pathol Res 2015, 35(3) http://www.lcbl.net doi: 10.3978/j.issn.2095-6959.2015.03.009 View this article at: http://dx.doi.org/10.3978/j.issn.2095-6959.2015.03.009 戊 酸 雌 二 醇 片 联
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第 七 章 图 表 反 转 形 态 我 们 知 道 市 场 趋 势 共 有 三 种 : 上 升 趋 势 下 降 趋 势 和 横 向 整 理 市 场 的 价 格 波 动 都 是 运 行 在 这 三 种 趋 势 中, 所 有 的 走 势 都 是 这 三 种 趋 势 的 排 列 组 合 如 图 市 场 趋 势 结 构 示 意 图 7-1 所 示 市 场 趋 势 结 构 示 意 图 7-1 图 市 场 趋
生 命 科 学 研 究 王 英 夏 家 辉 血 友 病 是 由 于 编 码 凝 血 因 子 简 称 的 基 因 先 天 性 异 常 而 导 致 的 机 体 出 血 紊 乱 性 遗 传 病 基 因 治 疗 是 彻 底 治 愈 血 友 病 的 一 种 最 为 理 想 的 治 疗 措 施 就 基 因 及 其 蛋 白 质 分 子 的 结 构 与 性 质 基 因 治 疗 载 体 构 建 靶 细 胞 动 物 模
第 期 焦霞 等 上调! 基因表达对肺腺癌细胞增殖与凋亡的影响 性肿瘤的发生发展 转移及血管形成 有望成为候选抑癌基因 但目前对其抑制肿瘤进展的具体机制尚不完全明了 本实验采用脂质体介导的稳定转染 将! 导入人肺腺癌, 细胞 经 1 筛选后获得稳定高表达! 的, 细胞克隆 观察该转基因细胞克隆 +
第 卷第 期 年 月 江苏大学学报 医学版!"#$%&#'#'$ #($ 上调! 基因表达对肺腺癌细胞增殖与凋亡的影响 焦霞 朱晓蔚 李顺龙 戴桂红 蒋小芹 姚娟 肖蔚 于鸿 泰州市人民医院 病理科 普外科 肿瘤科 江苏泰州 摘要 目的 建立稳定转染 7% 下游调节基因 7%' $#7#$#' ##;01 的, 细胞株 探讨! 对, 细胞增殖与凋亡的影响及其可能的分子机制 方法 经脂质体介导将含有!
celsco-culturedwithesfbutnotin MD-M-31celsculturedalone.InadditionFSP-1washighly expressedinthecancertissuewithco-growthofmd-m-31celsandesfinnudemicea
( )016 56 4 JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)016Vol.56No.4 1-1 a b a a a ( a. ; b. 330006) : -l(fibroblast-specificprotein-1fsp-l) Transwel MD-M-31 ESF; RT-qPCR MD-M-31 ESF FSP-1 mrn ; MD-M-31
应 用 与环 境 生 物 学 报 升 访 人 川 在 生 物 医 学 中的 应 用 研 究进 展 赵树杰 许开 天 中 国 科 学 院 成 都 生物 研 究所 摘 本 文 综 述 了 新 型 生 物 可 降解材 料 聚 材料 方 面 的 应 用 研 究进 展 和 发 展 趋势 关键 词 成都 幻 要 压轻 基 丁 酸 酷 在 用 作 药 物 缓 释 载 体 材 料 以 及 其 它 生 物 医 学 聚
357 P <. 5. TCD findings revealed that the contralateral vertebral artery systolic blood flow velocities in patients with phase Ⅰ Ⅱ and Ⅲ steal groups
356 TCD 212 3 215 4 TCD 45 TCD 8 Ⅰ 21 Ⅱ 11 Ⅲ 5 4 45 6 2 Ⅰ 12 9 Ⅱ 3 7 1 Ⅲ 3 2 r =. 78 P
生 物 技 术 通 报 相 关 载 体 及 试 剂 动 物 组 织 及 细 胞 培 养 总 的 提 取 及 反 转 录 内 蒙 古 白 绒 山 羊 基 因 的 分 子 克 隆 生 物 信 息 学 分 析
生 物 技 术 通 报 鲍 文 蕾 杨 娇 馥 李 彬 刘 俊 娥 王 潇 郭 旭 东 王 志 钢 侯 鑫 刘 东 军 旨 在 克 隆 内 蒙 古 白 绒 山 羊 血 管 内 皮 生 长 因 子 基 因 并 分 析 其 基 本 表 达 模 式 采 用 技 术 克 隆 基 因 将 得 到 的 基 因 序 列 及 其 编 码 的 氨 基 酸 序 列 进 行 生 物 信 息 学 分 析 利 用 半 定 量
从菜鸟到高手-手把手教你qPCR教程II
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4 FOXQ1 SMMC suggested that FOXQ1 was upregulated in HCC The abnormal expression of FOXQ1 related to the HCC progress and clinicopahology Inh
ISSN 1007-7626 CN 11-3870 / Q http / /cjbmb bjmu edu cn Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology 2015 4 31 4 422 ~ 428 DOI 10 13865 /j cnki cjbmb 2015 04 13 FOXQ1 SMMC- 7721 1 1 * 1 1 1 2
H 2 SO ml ml 1. 0 ml C 4. 0 ml - 30 min 490 nm 0 ~ 100 μg /ml Zhao = VρN 100% 1 m V ml ρ g
16 6 2018 11 Chinese Journal of Bioprocess Engineering Vol. 16 No. 6 Nov. 2018 doi 10. 3969 /j. issn. 1672-3678. 2018. 06. 004 1 2 1 1 1. 330200 2. 330006 4 Box-Behnken 1 25 g /ml 121 92 min 2 6. 284%
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124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na
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河南农业科学,2013,42(2):123-127 JournalofHenanAgriculturalSciences PCR PRRSV CSFV PCV2,, (, 450011) : 根据 TaqMan 复合荧光探针设计原则, 应用 Primer5.0 和 Oligo6.0 软件设计检测猪繁殖 与呼吸综合征病毒 (PRRSV) 猪瘟病毒 (CSFV) 和猪圆环病毒 2 型 (PCV2) 的特异性引物和探针,
instillation therapy combined with Western medicine can reduce the levels of ALT, TBA, ALP, TBIL, DBIL and GGT, and improve the anti-cmv-igm negative
在 线 投 稿 : http://www.baishideng.com/wcjd/ch/index.aspx 帮 助 平 台 : http://www.wjgnet.com/esps/helpdesk.aspx DOI: 10.11569/wcjd.v23.i28.4568 世 界 华 人 消 化 杂 志 2015 年 10 月 8 日 ; 23(28): 4568-4573 ISSN 1009-3079
... (1)....(3)..(5)... (22) (22)......(22)... (22)... (23)....(33)... (33)....(34)....(47)....(51).....(52)......(61)......(62)
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Yearbook of Chinese Medicine and Pharmacy, 23(6),303-320,2005 中 醫 藥 年 報 第 23 期 第 6 冊 編 號 :CCMP93-CT-107 補 中 益 氣 湯 抑 制 多 種 惡 性 細 胞 腫 瘤 生 長 機 轉 的 體 外 細 胞 與 肺 氣 虛 老 鼠 模 型 之 先 驅 研 究 沈 建 忠 長 庚 大 學 中 醫 系 摘 要
一 效 率 优 先 的 主 张
高 等 教 育 研 究 刘 海 峰 厦 门 大 学 高 等 教 育 发 展 研 究 中 心 教 育 研 究 院 福 建 厦 门 高 考 中 的 公 平 是 指 基 于 考 试 成 绩 的 公 平 即 在 分 数 面 前 人 人 平 等 效 率 是 指 综 合 各 方 面 因 素 不 拘 一 格 地 选 拔 优 秀 人 才 效 率 派 认 为 中 国 已 到 了 一 个 不 必 刻 意 追 求 公 平
系 统 性 红 斑 狼 疮 (, ) 是 自 身 免 疫 介 导 以 免 疫 性 炎 症 为 突 出 表 现 的 弥 漫 性 结 缔 组 织 病 患 者 发 病 机 制 尚 不 十 分 明 确, 主 要 表 现 为 自 身 免 疫 调 节 紊 乱, 预 后 差 研 究 表 明, 免 疫 系 统 失
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(CTGF) and fibronectin (FN) in renal tissue. The apoptosis of cell in the renal tissue were observed by TUNEL. Results Compared to the sham group, thi
Vol. 23 No.17 China Journal of Modern Medicine Jun. 2013 1005-8982(2013)17-0035-05 * 杨 波 1, 邓 薇 1, 颜 天 铭 1, 谢 红 萍 1, 蒋 云 生 2, 段 绍 斌 2 观 察 甲 基 胍 加 重 肾 衰 大 鼠 残 余 肾 功 能 损 害, 以 及 普 罗 布 考 的 干 预 作 用 大 鼠 随 机
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第 卷第 期 年 月 西安交通大学学报 医学版!"#$## %&'& & 基础研究 通过 信号通路促进结肠癌细胞的增殖 余钧辉 孙学军 郑见宝 王 炜 杨 魁 魏光兵 西安交通大学第一附属医院普通外科 陕西西安 $ 摘要 目的 探讨 %&' 对结肠癌细胞增殖的影响 并初步探讨其分子机制 方法 用生长曲线实验和 %% 法检测 %&'# 对结肠癌细胞 (% 增殖的影响 流式细胞仪检测 %&' 对结肠癌细胞周期的影响
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168 健 等 木醋对几种小浆果扦插繁殖的影响 第1期 the view of the comprehensive rooting quality, spraying wood vinegar can change rooting situation, and the optimal concent
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198 李晓宇, 等. 上调 mir-181b 表达对乳腺癌细胞功能的影响 the proliferation and migration of human breast cancer cells. This effect may be related to mir-181b targeting o
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工 业 技 术 创 新 工 第 02 业 技 卷 术 第 创 03 新 期 Industrial 2015 年 Technology 6 月 Innovation Industrial Technology Innovation Vol.02 No.03 Jun.2015 GNC62 数 控 系 统 组 态 和 设 备 调 试 设 计 王 声 文, 白 彦 庆, 刘 庆 宏, 孙 振, 黄 岩 (
2 mir-615-5p TRAF4 185 NCI-H460 5 Corning 16% non-small cell lung Quick Cell Proliferation Assay Kit K cancer NSCLC 80% CCK-8 Cell Counting Ki
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1421 历 360 份, 局 部 使 用 抗 菌 药 物 不 进 行 统 计 1.2 方 法 统 计 分 析 2013 年 住 院 患 者 抗 菌 药 物 的 使 用 情 况 统 计 内 容 包 括 使 用 科 室 年 龄 体 质 量 住 院 时 间 诊 断 抗 菌 药 物 品 种 抗 菌 药 物
1420 天 津 市 中 心 妇 产 科 医 院 2013 年 住 院 患 者 抗 菌 药 物 使 用 情 况 分 析 * 汪 涛, 邢 丽 天 津 市 中 心 妇 产 科 医 院 药 剂 科, 天 津 300100 摘 要 : 目 的 调 查 天 津 市 中 心 妇 产 科 医 院 2013 年 住 院 患 者 抗 菌 药 物 的 使 用 情 况, 并 分 析 评 估 其 使 用 合 理 性 方
离 婚 诉 讼 中 的 调 解 研 究
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期 唐 曦 胡 娅 徐炎华 等 $#' 通过下调 ( 抑制肺腺癌细胞系 &)#' 的迁移侵袭 微小 $%&#'$#' 已被证实是一种抑癌 -/$%& 可参与调控直肠癌 乳腺癌 卵巢癌等多种肿瘤细胞生长 转移和侵袭 从而发挥抑制肿瘤进 展的作用 有研究显示 $#' 在肺腺癌组织中 # 表达减少 但尚未
第 卷第 期 年 月 西安交通大学学报 医学版!"#$## %&'&!& 基础研究 通过下调 抑制肺腺癌细胞系 的迁移侵袭 唐 曦 胡 娅 徐炎华 汪春林 邱 萍 王向辉 华中科技大学同济医学院附属荆州医院肿瘤科 湖北荆州 # 长江大学 医学院 湖北荆州 # 华中科技大学同济医学院附属荆州医院胸外科 湖北荆州 # 摘要 目的 探索微小 $%&#'$#' 是否通过下调 ( 抑制肺癌细胞系 &)#' 细胞的迁移和侵袭
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中国肿瘤临床 216 年第 43 卷第 6 期 Chin J Clin Oncol 216. Vol. 43. No. 6 www.cjco.cn 223 基础研究 mir-92a 在结直肠癌中的表达及其对肿瘤血管生成的作用 王秀杜冀晖黄虞龚慧王磊李一凡 摘要目的 : 探讨 mir-92a 在结直肠癌中的表达及其对肿瘤血管新生功能的影响和作用机制 方法 : 采用 qrt-pcr 方法检测广东医学院附属深圳南山医院
, Vol.34, No.21 nm nm nm nm μm μm μm a b c d e
2013, Vol.34, No.21 359 Abstract Key words TS201.2 A 360 2013, Vol.34, No.21 nm nm nm nm μm μm μm a b c d e 2013, Vol.34, No.21 361 362 2013, Vol.34, No.21 ph ph 2013, Vol.34, No.21 363 () (1) (2) (SiO
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2 JCAM. June,2012,Vol. 28,NO. 6 膝 关 节 创 伤 性 滑 膜 炎 是 急 性 创 伤 或 慢 性 劳 损 所 致 的 关 节 滑 膜 的 无 菌 性 炎 症, 发 病 率 达 2% ~ 3% [1], 为 骨 伤 科 临 床 的 常 见 病 多 发 病 近 年 来
![2 JCAM. June,2012,Vol. 28,NO. 6 膝 关 节 创 伤 性 滑 膜 炎 是 急 性 创 伤 或 慢 性 劳 损 所 致 的 关 节 滑 膜 的 无 菌 性 炎 症, 发 病 率 达 2% ~ 3% [1], 为 骨 伤 科 临 床 的 常 见 病 多 发 病 近 年 来](/thumbs/42/22962570.jpg "2 JCAM. June,2012,Vol. 28,NO. 6 膝 关 节 创 伤 性 滑 膜 炎 是 急 性 创 伤 或 慢 性 劳 损 所 致 的 关 节 滑 膜 的 无 菌 性 炎 症, 发 病 率 达 2% ~ 3% [1], 为 骨 伤 科 临 床 的 常 见 病 多 发 病 近 年 来")
针 灸 临 床 杂 志 2012 年 第 28 卷 第 6 期 1 临 床 研 究 针 刀 治 疗 膝 关 节 创 伤 性 滑 膜 炎 的 临 床 研 究 向 伟 明 1, 丁 思 明 1, 张 秀 芬 2, 权 五 成 2, 唐 吉 莲 1, 杨 友 金 1, 黄 涣 强 1, 颜 勋 1, 曾 晓 宇 1, 朱 传 芳 1 1, 张 雄 ( 1. 重 庆 市 梁 平 县 第 二 人 民 医 院,
# 抗 日 战 争 研 究 年 第 期 & # & & & & & & & & # # & # & % % & # # % # & # % & # # % % % %
权 力 与 监 督 抗 战 时 期 四 川 省 县 长 权 责 的 扩 增 与 民 意 的 运 用 黄 小 彤 抗 战 时 期 作 为 举 足 轻 重 的 抗 战 后 方 基 地 四 川 负 担 了 战 争 所 需 的 大 部 分 粮 食 和 兵 源 供 应 而 要 筹 集 足 够 的 人 力 和 物 力 基 层 行 政 显 得 至 关 重 要 藉 新 县 制 的 实 施 国 民 政 府 采 取 了
ment group was more effective than that of the control group OR = % CI = Conclusion The clinical efficacy of Chinese medic
33 243 HAART Meta * 1 1 1 1 1 2 3 3 3 1. 530001 2. 538000 3. 530011 highly active anti-retroviral therapy HAART Pubmed HAART randomized controlled trials RCT Jadad RevMan5. 3 Meta 5 RCT 761 Meta HAART
龚 亚 夫 在 重 新 思 考 基 础 教 育 英 语 教 学 的 理 念 一 文 中 援 引 的 观 点 认 为 当 跳 出 本 族 语 主 义 的 思 维 定 式 后 需 要 重 新 思 考 许 多 相 连 带 的 问 题 比 如 许 多 发 音 的 细 微 区 别 并 不 影 响 理 解 和
语 音 语 篇 语 感 语 域 林 大 津 毛 浩 然 改 革 开 放 以 来 的 英 语 热 引 发 了 大 中 小 学 英 语 教 育 整 体 规 划 问 题 在 充 分 考 虑 地 区 学 校 和 个 体 差 异 以 及 各 家 观 点 的 基 础 上 遵 循 实 事 求 是 逐 级 定 位 逐 层 分 流 因 材 施 教 的 原 则 本 研 究 所 倡 导 的 语 音 语 篇 语 感 语 域
人结肠癌 细胞系为研究对象 抑制物 转染 细胞后 观察 细胞增殖能力及!" 基因表达变化情况 预测及验证靶向调控!" 基因的 #$ 为后续科研以及临床治疗提供新的思路 材料与方法 材料人结肠癌 细胞系 正常结肠上皮组织细胞系 #%&' 细胞系来源于中南大学湘雅医学院医学检验系实验中心 &' 培养液
对人结肠癌细胞系 细胞增殖及 基因表达的影响 林琳 周刘祥 王晓春 中南大学湘雅医学院医学检验系 湖南长沙 摘要 目的 探讨 "$ 对人结肠癌 细胞增殖及 ( 基因表达的影响 方法 运用实时荧光定量 )* 检测 细胞和正常结肠上皮组织 +*, 细胞中 "$ 与 ( "+- 的表达水平 "$ 抑制剂 $/$0$1 转染 细胞后 观察细胞增殖能力 及 "$ ( "+-"$ 表达水平 1 0% 检测 (
生 水 简 称 比 比 重 物 生 一 率值 制 作血 涂 片 用 曰 用 值 分 作 染液和 染 液 染 色 在 放大 短 径 值 全 部 数据 经 生 物 统 计 学 处 理 一 记录 了 测 定 日 以 上 午 体长 幅 值 为 材 料 鱼在 采 血 前 均 进 测 定 取 鳞片 作 了 年
!! 生 水 简 称 比 比 重 物 生 一 率值 制 作血 涂 片 用 曰 用 值 分 作 染液和 染 液 染 色 在 放大 短 径 值 全 部 数据 经 生 物 统 计 学 处 理 一 记录 了 测 定 日 以 上 午 体长 幅 值 为 材 料 鱼在 采 血 前 均 进 测 定 取 鳞片 作 了 年 龄 鉴定 同 时 一 为 测 定 时 间 室 外 气 温 池 水水 温 一 值 和测 定 简称
床 数 6 张, 年 管 理 住 院 病 人 数 120 人 次, 门 诊 工 作 期 间 能 保 证 培 训 对 象 日 工 作 量 20 人 次. 肿 瘤 科 轮 转 期 间 至 少 能 开 展 8 种 常 见 恶 性 肿 瘤 筛 查, 年 常 见 癌 症 筛 查 人 数 5000 人 次. (
预 防 医 学 科 专 业 基 地 认 定 细 则 按 照 国 家 卫 生 和 计 划 生 育 委 员 会 «住 院 医 师 规 范 化 培 训 内 容 与 标 准 ( 试 行 ) 预 防 医 学 科 培 训 细 则» 要 求 和 培 训 基 地 认 定 标 准 总 则 规 定, 制 订 本 细 则. 一 预 防 医 学 科 临 床 基 地 ( 一 ) 预 防 医 学 科 临 床 培 训 专 业 基
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中 国 应 对 气 候 变 化 的 政 策 与 行 动 2013 年 度 报 告 国 家 发 展 和 改 革 委 员 会 二 〇 一 三 年 十 一 月 100% 再 生 纸 资 源 目 录 前 言... 1 一 应 对 气 候 变 化 面 临 的 形 势... 3 二 完 善 顶 层 设 计 和 体 制 机 制... 4 三 减 缓 气 候 变 化... 8 四 适 应 气 候 变 化... 20
所 属 团 岗 位 名 称 研 究 方 向 应 聘 条 件 具 有 肉 品 科 学 与 技 术 食 品 科 学 专 业 背 景, 熟 悉 畜 禽 屠 宰 副 产 物 加 工 领 域 科 学 发 展 前 沿, 在 海 外 取 得 博 士 学 位 或 有 3 年 以 上 国 外 博 士 后 科 研 工
中 国 农 业 科 学 院 农 产 品 加 工 研 究 所 2016 年 青 年 英 才 计 划 人 才 招 聘 岗 位 和 应 聘 条 件 所 属 团 岗 位 名 称 研 究 方 向 应 聘 条 件 熟 悉 粮 油 加 工 品 质 学 植 物 蛋 白 质 工 程 活 性 短 肽 与 多 糖 等 研 究 领 域, 在 海 外 获 得 博 士 学 位 或 获 得 博 油 料 加 工 与 品 粮 油 加
科 学 出 版 社 科 学 出 版 社 前 言 本 书 是 针 对 普 通 高 等 院 校 经 济 类 和 工 商 管 理 类 本 科 专 业 财 务 管 理 学 的 教 学 需 求, 结 合 教 育 部 经 济 管 理 类 本 科 财 务 管 理 学 课 程 教 学 大 纲 编 写 而 成 的 本 书 执 笔 者 都 是 长 期 工 作 在 财 务 管 理 教 学 一 线 的 专 业 教 师,
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郑 长 德 教 育 的 发 展 人 力 资 源 的 开 发 是 决 定 西 部 民 族 地 区 未 来 发 展 的 关 键 因 素 之 一 是 实 施 西 部 大 开 发 战 略 提 高 其 经 济 竞 争 力 和 综 合 实 力 的 重 要 保 障 本 文 从 西 部 民 族 地 区 教 育 发 展 的 现 状 入 手 指 出 中 华 人 民 共 和 国 成 立 多 年 来 西 部 民 族 地 区