系 统 性 红 斑 狼 疮 (, ) 是 自 身 免 疫 介 导 以 免 疫 性 炎 症 为 突 出 表 现 的 弥 漫 性 结 缔 组 织 病 患 者 发 病 机 制 尚 不 十 分 明 确, 主 要 表 现 为 自 身 免 疫 调 节 紊 乱, 预 后 差 研 究 表 明, 免 疫 系 统 失

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1 中 国 病 理 生 理 杂 志, ( ): - [ 文 章 编 号 ] - ( ) - -, 张 帆 * 系 统 性 红 斑 狼 疮 中 表 达 特 点 的 研 究, 朱 丽 花, 王 旭, 陈 少 华, 杨 力 建, 吴 秀 丽, 李 萡, 周 毅,, 李 扬 秋 ( 广 东 药 学 院 生 命 科 学 与 生 物 制 药 学 院 广 东 省 生 物 技 术 候 选 药 物 研 究 重 点 实 验 室, 广 东 广 州 ; 暨 南 大 学 医 学 院 血 液 病 研 究 所, 第 一 附 属 医 院 风 湿 免 疫 科, 再 生 医 学 教 育 部 重 点 实 验 室, 广 东 广 州 ) [ 摘 要 ] 目 的 : 了 解 系 统 性 红 斑 狼 疮 ( ) 患 者 外 周 血 中 肿 瘤 坏 死 因 子 α 诱 导 蛋 白 (, 也 称 ) 核 因 子 κ ( -κ ) 黏 膜 相 关 淋 巴 瘤 易 位 基 因 ( ) 及 其 转 录 本 ( ) 的 表 达 特 点 方 法 : 采 用 - 法 检 测 例 患 者 ( 其 中 合 并 硬 皮 症 例, 合 并 类 风 湿 关 节 炎 例, 合 并 淋 巴 瘤 例 ) 及 例 健 康 人 外 周 血 单 个 核 细 胞 ( ) 中 -κ 和 的 表 达 情 况 结 果 : 样 本 中, 表 达 水 平 较 健 康 人 明 显 降 低 ( <. ), 和 -κ 也 较 健 康 人 降 低 ( <. ) 在 健 康 人 组, 和 -κ 的 表 达 水 平 未 呈 现 明 显 相 关 性, 和 -κ 则 呈 正 相 关 ( <. ); 而 在 组 中, 和 -κ 则 显 示 出 显 著 正 相 关 ( <. ), 和 -κ 则 不 存 在 相 关 性 中 表 达 量 显 著 低 于 正 常 人 ( <. ), 相 关 性 研 究 还 显 示, 健 康 人 中 和 存 在 正 相 关 关 系 ( <. ), 在 中 则 不 存 在 ( >. ) 结 论 : 本 研 究 首 先 提 供 了 - - -κ 通 路 在 中 的 表 达 特 点 患 者 异 常 低 表 达, 这 可 能 与 患 者 低 免 疫 耐 受 相 关, 其 与 -κ 表 达 的 正 相 关 性 情 况 可 能 与 其 它 因 素 的 调 控 有 关, 有 待 进 一 步 证 实 [ 关 键 词 ] 系 统 性 红 斑 狼 疮 ; ; ; -κ [ 中 图 分 类 号 ]. ;. + [ 文 献 标 志 码 ] : -,, -,, -, -, -,,, -, (, - -,,, ;,,,,,,, - ) - [ ] : ( ) :, -κ,, ( ) (,, ) - :, -κ, -κ, ( <. ) - -κ ( <. ), -, ( <. ), : - - -κ, -, -κ [ ] ; ; ; -κ [ 收 稿 日 期 ] - - [ 修 回 日 期 ] - - *[ 基 金 项 目 ] 国 家 自 然 科 学 基 金 资 助 项 目 ( ) 通 讯 作 者 : - ; -

2 系 统 性 红 斑 狼 疮 (, ) 是 自 身 免 疫 介 导 以 免 疫 性 炎 症 为 突 出 表 现 的 弥 漫 性 结 缔 组 织 病 患 者 发 病 机 制 尚 不 十 分 明 确, 主 要 表 现 为 自 身 免 疫 调 节 紊 乱, 预 后 差 研 究 表 明, 免 疫 系 统 失 衡 在 发 病 中 发 挥 了 重 要 作 用, 从 而 导 致 免 疫 细 胞 活 化 和 促 炎 因 子 的 增 多 免 疫 系 统 活 化 导 致 靶 器 官 自 身 免 疫 复 合 物 的 沉 积 和 组 织 破 坏 性 细 胞 的 渗 入, 而 促 炎 因 子 则 有 助 于 免 疫 活 化 状 态 的 维 持, 也 称 为 肿 瘤 坏 死 因 子 α 诱 导 蛋 白 ( α-, ), 基 因 定 位 于 染 色 体., 其 序 列 为, 其 开 放 读 码 框 为, 编 码 氨 基 酸 的 蛋 白 蛋 白 在 羧 基 末 端 含 有 个 - 锌 指 (, ) 基 序, 是 一 种 新 类 型 的 锌 指 蛋 白, 这 些 锌 指 基 序 是 -κ 信 号 转 导 作 用 所 必 须 的 而 的 氨 基 端 则 含 有 一 个 基 序, 称 为 卵 巢 肿 瘤 基 序 (, ), 具 有 去 泛 素 化 蛋 白 酶 活 性 作 用 因 此 具 有 肿 瘤 抑 制 因 子 及 炎 症 信 号 转 导 的 中 心 调 节 因 子 -κ 抑 制 因 子 的 双 重 功 [ - ] 能 它 在 天 然 免 疫 和 过 继 性 免 疫 调 节 中 发 挥 了 [ ] 重 要 作 用, 对 免 疫 动 态 平 衡 有 重 要 的 调 节 作 用 缺 失 与 炎 症 介 导 的 自 身 免 疫 性 疾 病 和 淋 巴 细 胞 [ - ] 肿 瘤 的 发 生 发 展 关 系 密 切 近 年 研 究 发 现, 作 为 炎 症 调 控 因 子 对 的 发 生 发 展 起 着 重 要 的 作 用, 基 因 的 缺 失 突 变 和 甲 基 化 与 的 发 生 关 [ - ] 系 密 切 而 黏 膜 相 关 淋 巴 瘤 易 位 基 因 ( - -, ) 是 -κ 信 号 通 路 中 的 一 种 调 控 蛋 白, 在 细 胞 受 体 ( -, ) 介 导 的 - κ 的 活 化 和 调 控 淋 巴 细 胞 增 殖 和 分 化 的 过 程 中 具 [ - ] 有 重 要 作 用 基 因 库 资 料 显 示 存 在 种 转 录 本, 转 录 本 ( ) 比 转 录 本 ( ) 缺 少 个 碱 基, 但 未 有 种 转 录 本 在 正 常 人 血 液 肿 瘤 和 免 疫 系 统 疾 病 中 分 布 特 点 的 报 道 同 时, 作 为 一 种 蛋 白 酶 可 水 解 -κ 负 性 调 控 因 子 因 此, 和 有 可 能 在 的 发 病 中 具 有 一 定 作 用 在 淋 巴 瘤 和 白 血 病 中 的 作 用 及 其 与 关 系 已 有 一 定 研 究, 但 其 在 患 者 中 是 否 扮 演 一 样 的 角 色 还 未 见 报 道 同 样, 尽 管 已 发 现 基 因 的 一 些 单 核 苷 酸 多 态 性 可 能 是 的 易 感 位 点, 但 在 患 者 中 的 表 达 情 况 研 究 尚 不 充 分, 其 调 控 机 制 也 不 明 确 本 研 究 通 过 观 察 患 者 和 正 常 人 外 周 血 单 个 核 细 胞 ( -, ) 中 和 -κ 的 表 达 特 点 及 其 与 疾 病 状 态 的 关 系, 期 望 进 一 步 了 解 细 胞 异 常 的 分 子 机 制 样 本 收 集 材 料 和 方 法 收 集 暨 南 大 学 附 属 华 侨 医 院 年 至 年 确 诊 的 患 者 外 周 血 标 本 例 ( 其 中 合 并 硬 皮 症 例, 合 并 类 风 湿 关 节 炎 例, 合 并 弥 漫 大 细 胞 淋 巴 瘤 例, 无 合 并 症 例 ), 另 收 集 例 健 康 人 外 周 血 标 本 作 为 对 照 组 方 法 提 取 及 合 成 提 取 采 用 - 试 剂 盒 ( ) 提 取 另 外, 采 用 反 转 录 酶 试 剂 盒 ( ) 反 转 录 合 成 第 链 ; 用 - 检 测 β - 微 球 蛋 白 (β -, β ) - 的 表 达 情 况 以 检 验 所 合 成 的 质 量 引 物 设 计 根 据 基 因 ( : _, _ ), 基 因 ( : _ ) 和 -κ 基 因 设 计, 引 物 均 由 上 海 英 潍 捷 基 有 限 公 司 合 成 以 β 上 下 游 引 物, 各 引 物 序 列 见 表 [ ] 表 - 使 用 的 引 物 - 作 为 内 参 照 设 计 : - - : - - : - - : - - : - - : - - -κ : - - : - - β : - - : - - 实 时 定 量 利 用 Ⅰ 染 料 进 行 各 基 因 的 实 时 荧 光 定 量 检 测, 扩 增 总 反 应 体 系 为 μ, 应 用 试 剂 盒 ( ), 其 中 包 括 μ 上 下 游 引 物. μ 以 及 μ 每 个 标 本 均 设 复 孔, 每 个 基 因 均 设 个 阴 性 对 照 孔 反 应 条 件 为 预 变 性 后, 共 进 行 个 循 环 扩 增, 每 一

3 循 环 包 括, 随 后, 以. 变 化 速 度 从 到, 每 隔 记 录 次 荧 光 值, 获 得 熔 解 曲 线 反 应 在 荧 光 定 量 仪 [ ] ( - ) 中 进 行 法 分 别 分 析 -κ 表 达 水 平 的 计 算 方 法 采 用 相 对 定 量 患 者 和 健 康 人 外 周 血 细 胞 中 表 达 水 平 的 差 异, 以 β 为 内 参 照, 利 用 值, 计 算 患 者 和 健 康 人 各 基 因 的 相 对 表 达 量 相 对 定 量 法 的 计 算 公 式 为 ΔΔ [ ] 统 计 学 处 理 利 用. 软 件 进 行 相 关 分 析 组 和 健 康 人 组 -κ 数 表 示, 各 组, 检 测 数 据 以 中 位 表 达 水 平 比 较 采 用 秩 和 检 验 ( ), 并 采 用 进 行 相 关 性 分 析, 以 <. 为 差 异 有 统 计 学 意 义 结 果 和 -κ 在 中 的 表 达 水 平 - 结 果 显 示, 组 和 健 康 对 照 组 样 本 均 表 达 和 -κ, 在 健 康 对 照 组 中, 各 样 本 之 间 和 -κ 的 表 达 水 平 比 较 接 近, 在 患 者 中 种 的 表 达 水 平 差 异 较 大, 应 用 独 立 样 本 秩 和 检 验 进 行 分 析 发 现, 在 患 者 中, 的 表 达 水 平 显 著 低 于 健 康 对 照 组 ( <. ), 表 达 水 平 低 于 健 康 对 照 组 ( <. ), -κ 的 表 达 水 平 较 健 康 对 照 组 也 明 显 减 低 ( <. ) 根 据 其 表 达 水 平 特 点, 分 为 高 表 达 和 低 表 达 组 ( <. ); 此 外, 根 据 合 并 其 它 疾 病 与 否 分 为 组, 合 并 其 它 疾 病 组 例, 均 为 低 表 达 ( <. ), 见 表 表 健 康 对 照 和 组 中 和 -κ 的 相 对 表 达 水 平, -κ -κ (, ) (, ) (, ) (, ) * (, ) ** (, ) ** : * <. 另 外, 我 们 还 分 别 分 析 高 或 低 表 达 组 及 有 无 合 并 症 组 样 本 这 些 组 间 并 无 显 著 差 异 ( >. ) 的 表 达 水 平 差 异, 结 果 显 示 中 两 种 转 录 本 的 表 达 特 点 根 据 基 因 库 报 道, 有 种 转 录 本, 两 者 的 表 达 水 平 在 不 同 细 胞 和 疾 病 中 存 在 差 [ - ] 异 本 研 究 分 别 检 测 同 时 含 有 种 转 [ ] 录 本 和 仅 含 转 录 本 的 产 物, 通 过 可 间 接 得 出 表 达 量 进 一 步 比 较 正 常 人 样 本 中 两 种 转 录 本 的 表 达 情 况, 结 果 可 见, 所 有 样 本 均 表 达 种 转 录 本, 在 正 常 人 和 的 大 多 数 样 本 中 比 表 达 量 要 高 组 的 表 达 量 与 正 常 人 比 较 显 著 降 低 ( <. ) 百 分 比 表 达 稍 高 于 正 常 人, 但 无 统 计 学 意 义 ( >. ), 见 表 表 健 康 人 和 中 两 个 转 录 本 相 对 表 达 情 况 (%) (, ) (, ) (, ) * (, ) : * <. 中 -κ 和 两 个 转 录 本 表 达 水 平 相 关 性 理 论 上, - - -κ 信 号 分 子 的 表 达 水 平 之 间 应 存 在 一 定 的 相 关 性, 在 健 康 对 照 组 中, 可 以 发 现 和 -κ 的 表 达 水 平 呈 现 正 相 关 ( <. ), 见 图 百 分 比 和 呈 现 明 显 负 相 关 ( <. ), 见 图 而 和, 和 -κ 表 达 水 平 之 间 无 显 著 的 相 关 性 ( >. ) 在 患 者 组 中, 和 - κ 则 存 在 明 显 正 相 关 ( <. ), 见 图 而 和 和 -κ 则 不 存 在 明 显 相 关 性 ( >. )

4 -κ 图 健 康 人 和 患 者 -κ 与 表 达 水 平 的 相 关 性 图 健 康 人 和 患 者 和 表 达 相 关 性 分 析 图 健 康 人 和 组 中 与 表 达 的 相 关 性 分 析 讨 论 是 一 种 涉 及 多 个 免 疫 调 节 基 因 功 能 异 常 的 慢 性 炎 症 性 疾 病 而 基 因 在 负 性 免 疫 调 节 中 起 着 关 键 作 用 我 们 的 研 究 结 果 显 示 在 中 基 因 表 达 明 显 降 低, 而 -κ 基 因 表 达 也 存 在 下 调 趋 势 患 者 中 与 -κ 基 因 的 表 达 显 示 明 显 正 相 关, 而 与 -κ 和 百 分 比 的 正 相 关 关 系 则 被 打 破 国 内 外 研 究 表 明, 是 -κ 的 负 调 控 因 子, 但 本 研 究 结 果 却 显 示 在 中, 两 者 呈 正 相 关 关 系, 这 可 能 与 -κ 同 时 接 受 其 它 因 素 的 调 控 有 关 在 正 常 人 中 因 ( 本 研 究 结 果 提 示 主 要 为 调 控 作 用 ) 对 具 有 水 解 酶 作 用, 间 接 调 控 -κ 改 变, 从 而 影 响 细 胞 的 活 化 和 增 殖, 形 成 了 精 密 的 - - -κ 信 号 调 节 途 径 然 而 在 中, 并 未 见 到 对 有 抑 制 作 用, 从 而 失 去 了 对 -κ 的 调 控 能 力 我 们

5 推 测, 其 它 异 常 因 素 的 调 控 使 得 虽 在 水 平 表 达 下 降, 却 仍 然 出 现 了 -κ 表 达 下 降, 细 胞 免 疫 功 能 也 受 到 抑 制 而 和 降 低 这 一 现 象 可 能 是 由 于 表 达 下 降 后 使 对 具 有 降 解 作 用 的 反 馈 性 降 低 引 起, 而 它 是 否 与 病 程 和 治 疗 情 况 有 关 尚 待 进 一 步 研 究 我 们 在 [ ] 多 发 性 骨 髓 瘤 病 人 中, 也 发 现 类 似 的 改 变 特 点, 提 示 -κ 表 达 可 能 涉 及 多 重 调 控 本 文 首 次 报 道 了 中 的 调 控 因 素 的 表 达 特 点, 分 析 了 其 个 转 录 本 的 分 布 情 况 健 康 人 和 存 在 的 负 相 关 关 系 在 患 者 中 被 打 破, 这 可 能 由 于 功 能 异 常 或 之 外 的 其 它 调 控 因 素 作 用 的 结 果, 但 由 于 尚 未 有 其 它 研 究 报 道 中 的 改 变 特 点, 个 转 录 本 的 功 能 也 不 明 确, 尚 需 做 进 一 步 研 究 根 据 目 前 研 究, 表 达 异 常 导 致 的 病 理 机 制 可 归 纳 为 以 下 几 方 面 :( ) 的 低 表 达 造 成 自 身 反 应 性 细 胞 过 度 活 化, 这 是 的 关 键 致 病 因 素 通 过 去 泛 素 化 扰 乱 信 号 向 [ ] -κ 的 传 递, 从 而 抑 制 细 胞 的 活 化, 进 而 引 起 组 织 器 官 损 害 ;( ) 的 降 低 增 强 了 自 身 免 疫 复 合 物 的 沉 积, 这 也 是 的 重 要 特 点 阻 碍 了 [ - ] 细 胞 和 树 突 状 细 胞 的 生 成 和 活 化 在 细 胞 中 的 缺 失 增 加 了 细 胞 的 增 殖 和 自 身 抗 体 的 生 [ ] 成 因 此, 的 低 表 达 导 致 细 胞 的 过 度 活 化 和 自 身 抗 体 的 聚 积 ;( ) 的 低 表 达 促 使 - - -α 和 -γ 等 促 炎 症 因 子 的 血 清 水 平 升 高, [ - ] 这 是 的 另 一 个 特 性 缺 失 小 鼠 血 清 中 含 高 水 平 的 炎 症 细 胞 因 子, 并 表 现 为 持 续 性 的 - κ 活 化 和 巨 噬 细 胞 产 生 高 水 平 的 -α [ ] 在 和 其 它 自 身 免 疫 性 疾 病 中 的 低 表 达 同 样 证 明 这 一 机 制 [ - ] 总 之, 由 于 通 常 情 况 下 对 多 种 免 疫 细 胞 的 活 化 具 有 调 控 作 用, 而 当 表 达 降 低 时 可 引 起 异 常 的 免 疫 应 答, 是 发 生 中 的 一 个 重 要 因 素 而 造 成 低 表 达 原 因 可 能 与 调 控 的 上 游 分 子 如, 以 及 基 因 的 突 变 缺 失 或 启 [, ] 动 子 甲 基 化 等 相 关, 至 于 在 本 研 究 中 病 人 样 本 基 因 是 否 同 样 存 在 基 因 突 变 等, 还 有 待 后 续 的 研 究 总 之, 在 本 研 究 中, 我 们 首 次 报 道 了 中 - - -κ 表 达 模 式 的 特 点 和 两 个 转 录 本 的 分 布 情 况 总 的 来 说, 患 者 出 现 了 的 低 表 达 和 功 能 异 常, 而 的 发 生 提 示 -κ 可 能 受 除 以 外 的 其 它 因 素 调 节 或 存 在 转 录 后 水 平 的 调 控, 其 可 能 与 疾 病 的 缓 解 和 治 疗 有 关 此 外, 我 们 的 研 究 仅 限 于 - 方 法 检 测 - 水 平 表 达, 蛋 白 定 量 和 机 理 的 阐 明 还 有 待 下 一 步 的 研 究, 并 期 望 能 明 确 细 胞 中 和 的 功 能 及 其 与 疾 病 转 归 的 相 关 性 [ 参 考 文 献 ] [ ],,, [ ],, ( ): - [ ],, [ ] ( ): -,, [ ], : [ ],, ( ): - [ ],,, - - [ ],, ( ): - [ ], - - [ ],, ( ): - [ ],, - [ ],, : [ ],,, - [ ],, ( ): - [ ],,, - - [ ],, ( ): - [ ],,, [ ],, ( ): - [ ],,, ( ) [ ],, ( ): - [ ] - - [ ],, ( ): - [ ],,, - - [ ],, ( ): -

6 [ ],,, [ ],, : [ ] 曾 可 静, 李 萡, 牛 宇 哲, 等 职 业 苯 接 触 工 人 外 周 血 - 和 - 表 达 变 化 的 特 点 [ ] 中 国 病 理 生 理 杂 志,, ( ): - [ ],,, - ( ; ) + [ ],, ( ): - [ ] 王 旭, 张 帆, 徐 艳, 等 基 因 种 转 录 本 在 正 常 人 和 细 胞 白 血 病 中 的 表 达 特 点 [ ] 中 国 病 理 生 理 杂 志,, ( ): -, [ ],,, [ ],, : [ ] 王 旭, 徐 玲, 张 帆, 等 - - -κ 信 号 分 子 在 中 的 表 达 特 点 [ ] 暨 南 大 学 学 报 : 自 然 科 学 与 医 学 版,, ( ): - [ ],,, - - [ ],, ( ): - [ ],,, - [ ],, ( ): - [ ],,, - -, -, [ ],, ( ): - [ ],,, - - [ ],, ( ): - [ ],, -, - [ ],, ( ): - [ ], [ ],, : [ ],,, ( ) - [ ],, ( ): - [ ],,, - - [ ],, ( ): - [ ],,, [ ],, ( ): - [ ],,,, - [ ],, ( ): -

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