2015 年中国心血管病报告指出, 中国心脑血管疾病死亡率仍是我国疾病死亡原因的首位, 随着我国老龄化的人数不断增加, 心脑血管疾病的发病率持续上升, 其中急性心肌梗死 (acute myocardial infarction,ami) 的发病率死亡率仍居高不下 [1], 目前治疗的主要手段有经

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1 丹酚酸 B 镁对兔急性心梗再灌注后无复流心肌损伤的保护作用吴源鸿 1,2, 林冬铭 2, 陈超 2, 孙志强 2, 罗颖 2, 俞炜炜 2, 黄抒伟杭州 ;2. 浙江中医药大学附属第二医院, 杭州 ) 2* (1. 浙江省中西医结合医院, 杭州市红十字会医院, 摘要 : 目的评价丹酚酸 B 镁 (salvianolic acid B,Sal-B) 对兔急性心肌梗死再灌注后心肌损伤的保护作用方法新西兰大白兔 40 只随机分成 4 组, 即假手术组心肌缺血再灌注 (myocardial ischemia/reperfusion,mi/r) 再灌注低剂量组(Sal-B 20 mg kg 1 组 ) 再灌注高剂量组(Sal-B 60 mg kg 1 组 ), 每组 10 只假手术组只开胸不结扎, 其余 3 组结扎左室缘支 90 min, 切断结扎线 120 min, 建立 MI/R 模型各组分别于结扎左心室缘支前 5 min 结扎后 90 min 再灌注 120 min 时取血, 检测肌酸激酶同工酶 (CK-MB) 心肌肌钙蛋白 I(cTnI), 并评估缺血范围无复流范围及梗死区心肌范围结果结扎 90 min 后,MI/R 组 Sal-B 20 mg kg 1 组和 Sal-B 60 mg kg 1 组 3 组之间 CK-MB ctni 水平差异无统计学意义再灌注 120 min 后,Sal-B 60 mg kg 1 组的血清 CK-MB ctni 水平显著低于 MI/R 组 Sal-B 20 mg kg 1 组, 差异有统计学意义 (P<0.05) 各组染色所测的冠脉结扎区心肌缺血范围基本一致与 MI/R 组 Sal-B 20 mg kg 1 组比,Sal-B 60 mg kg 1 组可以显著减少无复流面积 (P<0.05) 和梗死面积 (P<0.05),MI/R 组和 Sal-B 20 mg kg 1 组之间差异无统计学意义结论 Sal-B 60 mg kg 1 能在一定程度上减轻心肌细胞结构损伤, 缩小心肌梗死面积, 减轻无复流的发生关键词 : 急性心肌梗死 ; 缺血再灌注损伤 ; 无复流 ; 丹酚酸 B 镁中图分类号 :R285.4 文献标志码 :A 文章编号 : (2018) DOI: /j.cnki.issn 引用本文 : 吴源鸿, 林冬铭, 陈超, 等. 丹酚酸 B 镁对兔急性心梗再灌注后无复流心肌损伤的保护作用 [J]. 中国现代应用药学, 2018, 35(8): Protective Effect of Salvianolic Acid B Magnesium on the Myocardial Injury After Acute Myocardial Infarction and Reperfusion No-reflow in Rabbits WU Yuanhong 1,2, LIN Dongming 2, CHEN Chao 2, SUN Zhiqiang 2, LUO Ying 2, YU Weiwei 2, HUANG Shuwei 2* (1.Integration of Traditional and Western Medicine Hospital of Zhejiang, Hangzhou Red Cross Hospital, Hangzhou , China; 2.The Second Clinical Medical College of Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou , China) ABSTRACT: OBJECTIVE To evaluate the protective effects of salvianolic acid B magnesium (Sal-B) on the myocardial injury after acute myocardial infarction and reperfusion in rabbits. METHODS Forty New Zealand rabbits were divided randomly into four groups(n=10): sham operation group, myocardial ischemia/reperfusion(mi/r) group, Sal-B 20 mg kg 1 group (reperfusion with the treatment of low dose group ), Sal-B 60 mg kg 1 group (reperfusion with the treatment of high dose group). The rabbits in the sham operation group were only opened chest without ligation, the others were subjected to 90 min of coronary occlusion followed by reperfusion for 120 min. The serum levels of CK-MB, ctni were respectively detected in the former 5 min ligation and 90 min ligation, 120 min reperfusion. And to evaluate the area range of no-reflow, infracted area and risk area of the heart. RESULTS After 90 min ligation, serum contents of CK-MB, ctni were no significant among MI/R group, Sal-B 20 mg kg 1, Sal-B 60 mg kg 1 group. Serum of CK-MB, ctni contents in Sal-B 60 mg kg 1 group was lower than that in MI/R group and Sal-B 20 mg kg 1 group after 120 min of reperfusion (P<0.05). The ligation area(la) measured by pathological evaluation were no significant difference in all groups. Compared with the MI/R group and Sal-B 20 mg kg 1 group, the degree of reduction in infarct size and morphological injury of myocardium were more significantly in the Sal-B 60 mg kg 1 group (P<0.05). The area of myocardial infarction in the MI/R group and Sal-B 20 mg kg 1 group were similar. CONCLUSION Sal-B 60 mg kg 1 can reduce myocardial cell structure damage, decrease no-reflow area and myocardial infarction size in experimental acute myocardial ischemial-reperfusion. KEY WORDS: acute myocardial infarction; ischemial-reperfusion injury; no-reflow; salvianolic acid B magnesium 基金项目 : 浙江省医学会临床科研基金项目 (2013ZYC-A30CA038) 作者简介 : 吴源鸿, 男, 硕士生 Tel: @163.com (0571) hsw1104@163.com * 通信作者 : 黄抒伟, 男, 教授, 主任医师 Tel: 1130 Chin J Mod Appl Pharm, 2018 August, Vol.35 No.8 中国现代应用药学 2018 年 8 月第 35 卷第 8 期

2 2015 年中国心血管病报告指出, 中国心脑血管疾病死亡率仍是我国疾病死亡原因的首位, 随着我国老龄化的人数不断增加, 心脑血管疾病的发病率持续上升, 其中急性心肌梗死 (acute myocardial infarction,ami) 的发病率死亡率仍居高不下 [1], 目前治疗的主要手段有经皮冠脉介入治疗 (percutaneous coronary intervention,pci) 静脉溶栓或冠状动脉旁路移植术 (coronary artery bypass grafting,cabg) 等 [2] 但临床实践中发现, 开通罪犯血管往往伴随再灌注后心肌无复流 (no-reflow,nr) 现象 NR 的发生将导致心肌缺血的加重, 梗死面积扩大, 心源性猝死等 [3] 然而, 目前临床上并无明确有效的治疗手段因此, 探索及反复验证新药物是亟需解决的问题丹参具有改善血管内皮功能, 维持内皮完整性, 降低氧化应激, 抑制血小板的活化黏附聚集, 降低中性粒细胞的活性, 减少血管活性因子的产生等多种作用, 其保护心血管的作用目前正不断被研究证实 [4] 丹酚酸 B 镁 (salvianolic acid B,Sal-B) 作为丹参水溶性物质中药理活性最强的成分, 目前已发现其能抑制细胞黏附聚集, 抗炎抗氧化抗凋亡, 改善心肌微循环等作用, 但具体作用机制尚不清楚, 并且仍需要足够的实验及临床证据支持 [5-6] 本实验在兔急性心梗再灌注模型上研究 Sal-B 对急性心梗血运重建后 NR 的影响, 探讨其可能的相关作用机制, 以期为解决心肌梗死再灌注后 NR, 保护心肌损伤提供更多实验依据 1 材料 1.1 动物新西兰健康大白兔 40 只,, 体质量为 2.5~3.0 kg, 为普通级动物, 普通饲料自由饮水, 由浙江中医药大学动物实验中心提供生产许可证号 :SCXK( 浙 ) , 实验动物使用许可证号 :SYXK( 浙 ) 药品与试剂 Sal-B 粉 ( 上海绿谷制药有限公司, 批号 : );50% 葡萄糖注射液 ( 杭州民生药业有限责任公司, 批号 : ); 肌酸激酶同工酶 (creatine kinase MB form,ck-mb) 试剂盒 ( 朗道公司, 批号 :CK1553); 肌钙蛋白 I(cTnI) 试剂盒 (BioMerieux 公司, 批号 : ); 伊文氏蓝 ( 批号 : ) 2,3,5- 氯化三苯基四氮唑红 (TTC, 批号 : ) 粉剂硫磺素 S( 批号 : ) 均来自美国 Sigma 公司 ; 磷酸盐缓冲液 (ph 7.4, 南京奥多福尼生物科技有限公司, 批号 : ) 1.3 仪器 MedLab-U/4C 型生物信号采集处理系统 ( 南京美易科技有限公司 ) ; BECKMAN ALLEGRA X-15R 型冷冻离心机 ( 美国贝克曼公司 ); 电热恒温培养箱 ( 上海森信实验仪器有限公司 ); UniCel DxC800 全自动生化分析仪 (BECKMAN 公司 ); ZEISS LSM 700 光学显微镜 ( 德国蔡司公司 ); Pixera Pro 150ES CCD 摄像头及图像采集卡 Image Pro Plus 6.0 图像分析软件均来自美国 Media Cybernetics 公司 ;752 紫外分光光度计 ( 上海分析仪器总厂 ) 2 方法 2.1 分组与给药将 40 只大白兔按成组设计应用随机列表法分成假手术组, 心肌缺血再灌注 (myocardial ischemia/reperfusion,mi/r) 组,Sal-B 再灌注低高剂量组 (20,60 mg kg 1 组 ), 每组 10 只假手术组动物不结扎, 只对冠状动脉左室缘支 1/2 的地方穿线 MI/R 组动物结扎 90 min 后再灌注 120 min, 再灌注前 10 min 同时经耳缘静脉缓慢注射 25% 的葡萄糖注射液 2 ml kg 1 Sal-B 20,60 mg kg 1 组结扎 90 min 后再灌注 120 min, 再灌注前 10 min 同时经耳缘静脉给予 Sal-B 20 mg kg 1 或 60 mg kg 1 ( 溶于 25% 葡萄糖注射液 1 ml kg 1 中 ) 2.2 兔急性心肌梗死 (acute myocardial infraction, AMI) 再灌注模型的制备 [7] 参照文献的方法, 分别于冠状动脉结扎前 5 min 结扎后 90 min 及再灌注 120 min 分别记录心电图, 并在此 3 个时间段从颈总动脉取血 4 ml, r min 1 离心 10 min 后 80 保存备用结扎后心电图可见 ST 段呈弓背明显抬高, 各波形可融合形成高耸而宽大的复合波形, 表明模型制备成功结扎 90 min, 再松开灌注 120 min, 可见结扎区域心肌颜色由暗紫色或暗红色逐渐变红心肌收缩力增强, 抬高的 S-T 段回落 50% 以上, 表示 AMI 再灌注模型建立成功中国现代应用药学 2018 年 8 月第 35 卷第 8 期 Chin J Mod Appl Pharm, 2018 August, Vol.35 No

3 2.3 心肌梗死及 NR 范围评估再灌注 120 min, 从耳缘静脉注入 6% 的硫磺素 S( 按 1 ml kg 1 ),4 min 后耳缘静脉注入 2% 伊文氏蓝 (5 ml),1 min 后取出心脏, 装袋后置于 80 冰箱中冷冻 20 min 将心肌切成 1~2 mm 厚的横断面切片, 紫外线照射仪下可见未结扎区域心肌呈蓝色荧光为血流灌注正常, 结扎区域部分心肌组织无荧光呈暗黑色为 NR 区域 (no-reflow area, NRA) 其次将切片浸泡在 TTC,37 恒温箱孵育 15~20 min, 可见正常心肌组织被染成红棕色 ; 梗死区域 (myocardial infarction area,mia) 心肌呈苍白或灰白最后将拍摄的各个断面图像输入计算机, 以 Image-Pro Plus 6.0 图像处理软件计算各断面, 得出左心室室壁心肌面积 (left ventricle area, LVA) 缺血区( 未被染成蓝色 ) 面积 (ligation area, LA) NRA 梗死区( 灰白色或苍白色 ) 心肌面积 2.4 统计学处理全部统计分析均用 SPSS 20.0 统计学软件处理计量资料均以 x s 表示, 方差齐性者,2 组间比较用独立样本 t 检验, 多个样本均数的比较用方差分析及 q 检验 ; 若方差不齐性者,2 组间比较用 Cochran&Cox 近似 t 检验 ; 多组间比较用秩变换分析法结合方差分析 ; 以 P<0.05 表示差异有统计学意义 3 结果 3.1 AMI 前后和再灌注后各组血清心肌损伤标志物的动态变化 CK-MB 的测定结果结扎前 5 min, 各组血清 CK-MB 水平无统计学差异结扎后 90 min, MI/R 组与 Sal-B 20,60 mg kg 1 组血清 CK-MB 水平升高,3 组之间差异无统计学意义, 但与假手术组相比, 差异均具有统计学意义 (P<0.05) 再灌注 120 min 后, 各手术组 CK-MB 水平较结扎前显著升高 (P<0.05);MI/R 组与 Sal-B 20 mg kg 1 CK-MB 水平均显著高于 Sal-B 60 mg kg 1 组, 差异有统计学意义 (P<0.05);MI/R 组与 Sal-B 20 mg kg 1 组间差异无统计学意义结果见表 ctni 测定结果结扎前各组血清 ctni 水平差异无统计学意义结扎后 90 min,3 个结扎组组间的差异无统计学意义再灌注 120 min 后,Sal-B 20,60 mg kg 1 组 ctni 水平均显著低于 MI/R 组 (P<0.05),Sal-B 60 mg kg 1 组 ctni 水平显著低于 Sal-B 20 mg kg 1 组 (P<0.05) 结果见表各组间缺血面积 NRA 和梗死面积的比较假手术组心肌血流灌注正常 3 组结扎组之间的缺血区面积比例无统计学差异, 表明 3 组结扎组冠脉左室缘支结扎部位相近, 对缺血区因结扎部位远近差异较小, 因此结扎组之间的 NRA 具有可比性与 Sal-B 60 mg kg 1 组相比,MI/R 组与 Sal-B 20 mg kg 1 组再灌注 120 min 后 NRA 较大 (P<0.05), 梗死面积较广 (P<0.05);MI/R 组与 Sal-B 20 mg kg 1 组之间的 NRA 梗死面积差异无统计学意义结果见表 3 4 讨论流行病学统计资料显示,AMI 后解除血管机械性阻塞后, 约 10%~30% 患者会出现 NR 现象 (TIMI 血流 0~1 级 ) NR 是指发生急性心肌梗死, 解除心外膜血管阻塞后, 管腔内无明显血栓栓塞残余狭窄夹层痉挛等机械性梗阻, 开通后的冠状动脉前向血流减少, 其所支配区域的心肌组织未获得有效的灌注 [8] [9-10] 多项研究证实 NR 现象是 AMI 患者心脏微血管损伤和再灌注障碍最严重的表现,NR 出现可加重心肌缺血, 引起梗死面积扩大, 同时加快心室重构及心力衰竭的发生, 阻表 1 各组 CK-MB 的测定结果 (n=10, x s ) Tab. 1 The results of CK-MB in each group(n=10, x s ) U L 1 组别 AMI 前 AMI 后 90 min 心梗再灌注 120 min 后假手术组 ± ± ± MI/R 组 ± ± ) ± )4) Sal-B 20 mg kg 1 组 ± ± ) ± )4) Sal-B 60 mg kg 1 组 ± ± ) ± )2)3)4) 注 : 与假手术组比较, 1) P<0.05; 与 MI/R 组比较, 2) P<0.05; 与 Sal-B 20 mg kg 1 组比较, 3) P<0.05; 与 AMI 前比较, 4) P<0.05 Note: Compared with sham operation group, 1) P<0.05; compared with MI/R group, 2) P<0.05; compared with Sal-B 20 mg kg 1 group, 3) P<0.05; compared with before AMI, 4) P< Chin J Mod Appl Pharm, 2018 August, Vol.35 No.8 中国现代应用药学 2018 年 8 月第 35 卷第 8 期

4 表 2 各组 ctni 测定结果 (n=10, x s ) Tab. 2 The results of ctni in each group(n=10, x s ) U L 1 组别 AMI 前 AMI 后 90 min 心梗再灌注 120 min 后假手术组 < ± ±0.065 MI/R 组 < ± ) 8.166± ) Sal-B 20 mg kg 1 组 < ± ) 7.114± )2) Sal-B 60 mg kg 1 组 < ± ) 6.058± )2)3) 注 : 与假手术组比较, 1) P<0.05; 与 MI/R 组比较, 2) P<0.05; 与 Sal-B 20 mg kg 1 组比较, 3) P<0.05 Note: Compared with sham operation group, 1) P<0.05; compared with MI/R group, 2) P<0.05; compared with Sal-B 20 mg kg 1 group, 3) P<0.05. 表 3 各组间缺血范围 NR 范围及心肌梗死范围测定结果 Tab. 3 The results of ischemial area no-reflow area and myocardial infarction area mm 2 组别缺血面积梗死面积 NRA 假手术组 MI/R 组 ± ± ±1.163 Sal-B 20 mg kg 1 组 ± ± ±1.218 Sal-B 60 mg kg 1 组 ± ± )2) 8.991± )2) 注 : 与 MI/R 组比较, 1) P<0.05; 与 Sal-B 20 mg kg 1 组比较, 2) P<0.05 Note: Compared with MI/R group, 1) P<0.05; compared with Sal-B 20 mg kg 1 group, 2) P<0.05. 滞心脏传导系统, 甚至引发心源性猝死, 严重影响患者心功能的恢复, 是近期和远期心源性死亡及心脏事件的预测因子丹参具有活血调经, 祛瘀止痛, 凉血消痈, 清心除烦, 养血安神等功效其中,Sal-B 是丹参中的一种水溶性有效成分, 具有抗氧化抑制血小板聚集清除氧自由基保护细胞线粒体抗炎等作用, 目前已被广泛应用于临床心脑血管系统疾病的治疗 [11-12] 本实验通过对比 4 组实验血清检测结果, 可以发现相同结扎时间, 与假手术组相比, 其余 3 个结扎组血清中的 CK-MB ctni 水平明显增加, 说明结扎左室缘支已造成了心肌梗死解除梗阻后,CK-MB ctni 较结扎 90 min 升高更明显, 说明梗死面积较大, 造成大量坏死物质释放入血, 再灌注过程中炎症损伤氧化应激进一步加剧心肌损伤标志物升高但再灌注高剂量组在再灌注 120 min 的增高程度低于再灌注低剂量组及对照组, 说明再灌注高剂量组心肌坏死程度较轻, 而且这与本实验中心肌组织缺血范围 NRA 及心肌梗死范围染色改变较为一致提示急性心肌梗死后予以 Sal-B 治疗后能在一定程度上降低心肌坏死率, 减轻心肌缺血再灌注损伤多项研究发现,Sal-B 具有抗炎保护血管内皮完整性抗氧化抗细胞凋亡等作用, 可明显增加血小板一氧化氮合酶活性, 从而抑制血小板黏附活化聚集, 降低心血管事件的发生发展 [13-14] 静脉注射 Sal-B 可降低冠脉结扎犬的心肌缺血程度, 缩小心肌缺血范围, 其作用强度呈剂量依赖性, 其作用机制可能是提高细胞内 SOD 含量减少自由基对心肌细胞的毒害作用, 有效促进梗死灶内成纤维细胞的增生, 从而加速心脏的修复过程 [15] 研究采用 Sal-B 联合骨髓间质干细胞移植诱导血管新生生长因子 VEGF 生成, 结果发现 Sal-B 联合骨髓间质干细胞移植有利于心肌梗死大鼠心肌组织中微血管的再生, 改善心肌微循环 [16] 本实验运用病理染色方法显示, 与假手术组相比, 大致相同的结扎部位与结扎时间下,MI/R Sal-B 20 mg kg 1 组及 Sal-B 60 mg kg 1 组结扎 90 min 后心肌缺血梗死面积较前均明显增加, 差异无统计学意义再灌注 120 min 后,MI/R 组与 Sal-B 20 mg kg 1 组梗死面积及 NRA 都比 Sal-B 60 mg kg 1 组大 (P<0.05), MI/R 组与 Sal-B 20 mg kg 1 组之间的 NRA 梗死面积差异无统计学意义结合本实验心肌损伤标志物数据显示再灌注前予以高剂量的 Sal-B 可在一定程度上降低心肌细胞的损伤, 缩小梗死面积及冠脉 NR 的发生, 一定程度上说明高剂量的 Sal-B 在心肌细胞的保护上更显著本研究的局限性在于未进一步探讨 Sal-B 与信号通路及凋亡蛋白的关系, 但目前已经有一些相关的文献报道, 丹酚酸通过 NF-B 及 PI3K-Akt 信号途径及 Bax Bal-2 caspase-3 蛋白表达, 抑制心肌细胞凋亡, 进而改善心肌时的微血管损伤, 改善微循环, 降低冠脉 NR 的发生率综上所述, 本研究结果显示, 与 MI/R 组 Sal-B 20 mg kg 1 组相比,Sal-B 60 mg kg 1 组血清中心肌损伤标志物 CK-MB ctni 降低较明显,TTC 染色显示心肌梗死面积及 NRA 也较前缩小, 说明 Sal-B 可在一定程度上降低再灌注后冠脉 NR 的发生但由于再灌注后观察的时间窗较短, 未能观察其对远期心功能影响, 同时其具体如何减轻心肌损伤, 改善微循环的作用机制仍需进一步研究中国现代应用药学 2018 年 8 月第 35 卷第 8 期 Chin J Mod Appl Pharm, 2018 August, Vol.35 No

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405 急性心肌梗死是临床较为常见的心血管疾病, 病情危急, 病死率高 [1] 随着经皮冠状动脉介入治疗 (percutaneous coronary intervention,pci) 技术在急性心肌梗死急诊

405 急性心肌梗死是临床较为常见的心血管疾病, 病情危急, 病死率高 [1] 随着经皮冠状动脉介入治疗 (percutaneous coronary intervention,pci) 技术在急性心肌梗死急诊 404 冠心舒通胶囊预防急性心肌梗死 PCI 术后再狭窄的临床研究李静, 王建榜, 王西辉西安医学院第二附属医院心内科, 陕西西安 710038 摘要 : 目的研究冠心舒通胶囊预防急性心肌梗死经皮冠状动脉介入治疗 (PCI) 术后再狭窄的临床