多, 不同种属的功能微生物培养检测方法各有差提供 ;NAC 液体培养基和 NAC 琼脂培养基由北异, 杂菌检查方法也不尽相同 为了安全有效地京奥博星生物技术有限公司提供 ;75% 氯化钠肉控制地衣芽抱杆菌活菌颗粒的质量, 笔者根据中汤培养基 ( 北京陆桥技术有限责任公司 ) 以上培养国药典微生态活菌

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1 ! 醇 ˉ0.1% 磷酸水溶液及甲醇 ˉ 水进行梯度洗脱 切换波长测定 结果表明以甲醇 ˉ 水为流动相进行梯度洗 脱时, 待测组份峰形理想 分离效果好 操作简便 REFERENCES [1] [2] [3] 阻 [5] 中国药典.- 部 [S].2010;95ˉ96 230ˉ231,263ˉ264 国家药品标准 ( 试行 )WSˉ725(Zˉ151)ˉ2001[S]200L FUY ZHUZJ HUANGS,etal DetenmnatiOnOfhVe SaikOSapOninSmB /e 叫 m 加 yj 门 c 力 Owe 刀 sebyhplc[j].nat PrOdReSDeV( 天然产物研究与开发 ), (3);494ˉ497. LIUYQ CAIQHPLCdete mnationofatractylenolidei anda 订 actylenolideⅢm50batchesomdedmgsandslicesof A αc h 北 Ⅱ 加 αc 厂 Oc 邹 hα/αkoidz 丘 Omdi 肚 rentsomces[j]. ChinJPharmAnaI( 药物分析杂志 ), (7):l249ˉ1252. WUH;ZHAOWL,SHANGS etal SimultaneOuS 6 [7 [8] [9] dete mnationofatractyleno1idei Ⅱ ⅢmAhac 叮 1OdiS MacrOOephalaeRhiZOmaWithandwithOut 负 edwithbranby HPLCwaVelengthSwitching[J].ChinTraditPatMed( 中成药 ), 2013,35(1l):2484ˉ2487. GUOQL LUWQ,ZENGLP eta1hplcdetermmationof naringm,hesperidinandneohespeiidinmci 位 ireticulatae Pe caipiumandaurantiifmcmsextract[j].chinjexptradit MedFOIm( 中国实验方剂学 ), (20):100ˉ104. LIUYC,ZHANGJ.SimultaneOuSdetem1matiOnOf hespendinandnaringinmorangetangerineloquatcapsule byhplc[j].a huimedphaⅢmj( 安徽医药 ),2013,I7(12): 2044ˉ2045 中国药典 20l0 年版.- 部 [Sl2010;263ˉ264. ZHAOSM Dete mnationofsaikosaponma,dinradix BuplemOralliquidSbyimprOVedHPLC[J] ChinaPhann( 中 国药师 ), (5):7.05ˉ707. 收稿日期 :20l4ˉ06ˉ12 地衣芽抱杆菌活菌颗粒杂菌检查方法验证 郑小玲 l 陈爽 l 章盒萍 2, 王知坚 l(1 浙江省食品药品检验研究院, 杭州 ;2 浙江京新药业股份有限公司, 浙江绍兴 ) 摘要 : 目的建立地衣芽抱杆菌活茵颗粒杂菌检查方法 方法控制菌检查采用干皿涂布法 ; 非致病性杂菌检查以杂菌率不得过 0.1% 为限度指标 采用营养琼脂平皿涂布法 37 培养 ; 真茵计数采用玫瑰红钠琼脂乎皿涂布法 25 培养 结 果控制菌检查 非致病性杂茵检查和真茵计数方法均满足中国药典 2010 年版验证试验的基本妥求 结论该方法可作 为地衣芽抱杆菌活菌颗粒杂菌检查方法 关键词 : 地衣芽抱杆菌 ; 活菌颗粒 ; 杂茵检查 中图分类号 :R927.l 文献标志码 :B 文章编号 ;1007ˉ7693(2015)03ˉ0339ˉ05 DOI cnki issn1007ˉ VaIidatiOnmrCOntaminatmgMicrOOrganiSmSTeStinB cj SLjC e 帅 mparticles ZHENGXiaOling1 CHENShuang1,ZHANGXinping2,WANGZh 加 an1(i 勺 jα g 加 s/jm/e 允 死 oαα αdmg CO 刀 jm 严 ho 3I00 C/jj α/2 酬 e 盯 jα g 刀门醉加 Phα 厂加 αce jjcα/co. L/α 毗 αox 加 g3i2500 C/ j α) ABSTRACT:OBJECTIvETOeStabliShamethOd 加 rcontaminatingmicroorganismstestinbαcj// J/jChe 加厂加恋 part1cles. I 皿 THODSSpreadplatemethOdwaSuSedinthecOntrolbacte aexamination;thenonˉpathogenicmicrobeswascountedin nutrientagarandgrowthat37 JthemaximumacceptablecOuntWaSSuggeStedin0.1%oftOtalmicrObeS;theSodiumrOSe Bengalagarand 摩 owthat25 wasusedtodothefjmgicount.resui TSThemethodWasacceptedinvalidationtestof ChineSepha nacopoeia2010.conclusionthemethodcanbeusedincontaminantstest 允 rbαci// s/jche 加枷加 particlescontrol. KEYwORDS:BαCj/ J/jche 沈厂加 jj;viableparticles;contammatingmicroorganismstest 地衣芽抱杆菌活菌颗粒属于微生态活菌制 剂 用于治疗急慢性肠炎 痢疾及各种因素引起的肠道菌群失调 腹泻等 [1ˉ2] 杂菌率是地衣芽抱 杆菌活菌颗粒质量控制的重要指标 中国药典 2010 年版三部微生态活菌制品总论项下附录 3 虽 列出微生态活菌制品杂菌检查法的 _ 般规定 但并没有列出各个品种项下不同活菌制剂杂菌检查法的具体检测方法 [3] 由于微生态活菌制剂种类繁 作者简介 : 郑小玲, 女 硕士生 主管药师 m;(0i)864427eˉmail:imghuxiao83@163.com ChmJModApplPham1,2015M 虹 ch,Ⅵ1 32No L

2 多, 不同种属的功能微生物培养检测方法各有差提供 ;NAC 液体培养基和 NAC 琼脂培养基由北异, 杂菌检查方法也不尽相同 为了安全有效地京奥博星生物技术有限公司提供 ;75% 氯化钠肉控制地衣芽抱杆菌活菌颗粒的质量, 笔者根据中汤培养基 ( 北京陆桥技术有限责任公司 ) 以上培养国药典微生态活菌制品杂菌检查法和微生物限度基适用 性检查均符合中国药典 2010 年版规定 [3] 检查法中方法验证规定对本品的杂菌检查方法开试纸和兔血浆由青岛海博生物技术有限公展相关的方法学验证研究 [3] 本实验对地衣芽抱杆司提供 ; 氯化三苯基四氮挫 (TTC 国药集团化学菌活菌颗粒杂菌检查项目中的控制菌检查 非致试剂有限公司 ); 所用试剂均为分析纯 病性杂菌和真菌计数分别开展了方法学验证 建 1.4 样品立了地衣芽抱杆菌活菌颗粒杂菌检查方法 并对地衣芽抱杆菌活菌颗粒 ( 浙江京新药业股份有微生态活菌制品非致病 性杂菌检查标准进行了限公司 活菌含量 : CFU.g 1 批号 : 探讨 1 仪器与材料, , , 规格 :05g) 2 方法与结果 1.1 仪器 2 1 菌液制备调速多用振荡器 HY4 型 ( 国华电器有限公接种金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 痢疾司 );Ⅵtek2COmpact 全自动生化分析仪 ( 法国梅里志贺氏菌和的新鲜培养物至营养肉汤埃 ) 培养基中 35 培养 24h; 接种枯草芽抱杆菌新 1 2 菌株鲜培养物至营养琼脂斜面,35 培养 24h; 接种枯草芽抱杆菌 [CMCC(B)63501] 金黄色葡萄白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中 球菌 [CMCC(B)203] [CMCC(F)25 培养 48h; 接种黑曲霉的新鲜培养物至改良 44102] 铜绿假单胞菌 [CMCC(B)10104] 和白色念马丁琼脂培养基中,25 培养 5d 每种新鲜培养珠菌 [CMCC(F)98001] 均由中国医学细菌保藏中心物按不同实验要求稀释制备菌悬液 提供 ; 黑曲霉 [CMCC(F)98003 中国药品生物制品 2.2 控制菌检查方法验证检定所 ]; 痢疾志贺氏菌 (CGMCC1.1869, 中国微 方法取样品 1g, 加至 9mL 不同的控制生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 ) 菌检查用培养基中 再加入 10~100CFU 对应控制 1 3 培养基与试剂菌作为试验组, 于 37 培养 18h 后, 分别取培养营养琼脂培养基 玫瑰红钠琼脂培养基 三物 0.11nL 涂布接种于相应的选择性琼脂培养基 1 塘铁琼脂培养基 (TSI) PDP 琼脂培养基和半固体式 3 份 除志贺氏菌 检查培养 40h 外, 琼脂由青岛海博生物技术有限公司提供 ; 胆盐乳其余均培养 18h 同时不加试验菌液其余同试验糖培养基 4ˉ 甲基伞形酮葡糖昔酸培养基 () 组操作 作为供试品对照组 不同控制菌检查用增曙红亚甲蓝培养基 沙门 志贺菌属培养基和甘菌培养基和选择性琼脂培养基 见表 1 涂布培养露醇氯化钠琼脂培养基由北京三药科技开发公司完取试验组的可疑菌落按药典规定进行生化鉴定 表 1 不同控制菌检查对应的增菌培养基和选择性琼脂培养基 Tnb.1TheemichmentculmremediumSandSelectiVeagarmediumSofdi 证 rentspecihedm1croorganismstests 控制菌志贺氏菌铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌 增菌培养基胆盐乳糖培养基胆盐乳糖培养基 胆盐乳糖培养基 NAC 液体培养基 7.5% 氯化钠肉汤培养基 选择性琼脂培养基曙红亚甲蓝培养基沙门 志贺菌属培养基沙门 志贺菌属培养基 NAC 琼脂培养基甘露醇氯化钠琼脂培养基 结果控制菌检查选择 性培养结果中试验菌落采用 Vitek 进行生化鉴定 鉴定结果均为地衣组均有典型菌落生长 ; 供试品对照组除甘露醇氯芽抱杆菌 因此表明地衣芽抱杆菌在 7.5% 氯化钠化钠琼脂平板外, 均无菌生长 供试品对照组中肉汤培养基和甘露醇氯化钠琼脂培养基中均能够甘露醇氯化钠琼脂培养基上长有淡黄色菌落 试生长 控制菌检查方法验证详细结果见表 2 和表 3 验组中该平板上除长有金黄色菌落外, 也长有淡从表 2 和表 3 可见试验组均检出阳性控制菌, 因此黄色菌落 取试验组和供试品对照组中的淡黄色控制菌检查可采用上述涂布培养方法浙检验 340 ChmJMOdApplPhaIm 2015March,Vbl32NO.3

3 表 2` 试验组和供试品对照组选择性培养结果 皿 b 2ReSultSOfSelectiVecultuIe 加 rspecihedmicroorganismstest 批号组别志贺氏菌 铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌 试验组典型菌落生长典型菌落生长典型菌落生长典型菌落生长供试品对照组试验组典型菌落生长典型菌落生长典型菌落生长典型菌落生长供试品对照组试验组典型菌落生长典型菌落生长典型菌落生长典型菌落生长供试品对照组 典型菌落生长淡黄色菌落生长典型菌落生长淡黄色菌落生长典型菌落生长淡黄色菌落生长 注 : - 代表无菌落生长 NOte: - meansnobacterialgrowth 见 表 3 试验组疑似菌落生化鉴定结果 Tab 3ReSultSOfbiOchemicalidentificatiOn 允 rtestgroupsuspectedcolomes 疑似菌 志贺氏菌 TSI 动力生化鉴定 - TSI 动力生化鉴定.- I 生化鉴定 生化鉴定 TsI 动力生化鉴定 ˉ TSI 生化鉴定 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌 G 球菌 G 球菌 G 球菌 注 :TSI 代表三塘铁琼脂穿刺实验结果符合疑似菌的实验特征 ; 生化鉴定 代表采用 Vitek2COmpact 全自动生化分析仪鉴定检出疑似 菌 ; 其余 代表阳性反应, - 代表阴性反应 NOte:TSI,,meanSpOSitiVereactiOn;biOchemicalidenti 负 cation,,meansthesuspectedbacteriawascheckedbyvitek2compact;other, means positivereaction ~,,meansnegativereaction. 2 3 非致病性杂菌检查和真菌计数方法验证组供试液 再取 2 份样品各 1g, 分别加 0.9% 无菌 在本产品检测项目中有 _ 项效力实验 效力实氯化钠溶液 9n L 振荡混匀后再分别取 1:10 供 验表明地衣芽抱杆菌对金黄色葡萄球菌有明显的试液 05mL 加 0.9% 无菌氯化钠溶液 8.5mL, 振 抑制作用 故在非致病性杂菌检查方法学验证时 荡混匀后再分别加 2.1 项下浓度范围为 (05~1) 金黄色葡萄球菌不列为验证菌的范围 根据中国药 107CFU.mLˉl 的和枯草芽抱杆菌的菌 典微生物限度检查法方法验证规定 选用了大肠埃液各 1 ]L 混匀制成 1:200 供试液 ; 之后按 10 倍希菌 枯草芽抱杆菌 白色念珠菌和黑曲霉作为方梯度关系稀释 制成 1:2 106 供试液作为不同试 法验证实验用菌株 [3] 本品的非致病性杂菌检查参验组供试液 照中国农业行业标准 ( 微生物饲料添加剂 ˉ 地衣芽胞真菌计数 : 取样品 1g, 加 0.9% 无菌氯化钠溶杆菌 NY/T1461ˉ2007) 规定, 以地衣芽抱杆菌的杂液 9mL 放置在振荡器中混匀制成对照组供试液 菌率不得过 O1% 为限度指标进行验证 [4] 同时取 2 份样品各 1g 分别加 0.9% 无菌氯化钠溶 供试液的制备非致病 性杂菌检查 : 取样液 8mL 振荡混匀后再分别加 2.1 项下浓度范品 1g 加 0.9% 无菌氯化钠溶液 9mL, 振荡混匀围 (0.5~1) 104CFU.mLˉ1 的白色念珠菌和黑曲霉后再取 1:10 供试液 0.51nL, 加 0.9% 无菌氯化钠的菌液各 1mL 混匀制成不同试验组供试液 溶液 9.5mL 混匀制成 1:200 供试液 ; 之后按 I 方法非致病 性杂菌检查方法验证 : 取试倍梯度关系稀释 制成 1:2 106 供试液作为对照验组供试液 1mL, 平均涂布接种于 5 个营养琼脂 ChinJMOdApplPham1,2015M 肛 ch VU1 32NO 巴

4 ˉ~ 笆髓 L 平皿中 一式 3 份, 置 37 培养, 计数 5 块平皿实验用菌株菌落数之和作为试验组 ; 取对照组供试液 1mL 同法操作为供试品对照组 ; 不加入样品 同法测定加入相应的试验菌, 作为菌液组 真菌计数方法验证 : 取试验组供试液 0.1mL 涂布接种于玫瑰红钠琼脂平皿中, 一式 3 份 置 25 培养 计数菌落数作为试验组 ; 取对照组供试液 0.1mL 同法实验作为供试品对照组 ; 不加入样品 同法测定加入相应的试验菌 作为菌液组 计算回收率 : 回收率 /%=[( 试验组平均菌落数 _ 供试品对照组平均菌落数 )/ 菌液组平均菌落数 ] 100% 结果试验组中的 枯草芽抱杆菌 白色念珠菌和黑曲霉对 3 个批号样品回收率均 >70% 符合中国药典对药品微生物验证试验要求 结果见表 4 因此非致病性杂菌检查和真菌计数可按上述方法进行检查 表 44 种试验菌有效性验证回收试验结果 mb.4resultsofvalidationrecyclingtest 允 rhurtest Organ1SmS 样品对照实验组平均回菌种批号辩 嚼 组 /CFU 回收率 /% 收率 /% 枯草芽抱杆菌 白色念珠菌 黑曲霉 叫 l l 样品杂菌检查取 6 批地衣芽抱杆菌活菌颗粒按照 2.2 和 2.3 项进行杂菌检查 结果见表 l00 l00 表 5 地衣芽抱杆菌活菌颗粒样品杂菌检查结果 Tab 5ThereSultSOfcOntaminantSteSt 允 rbαcjii 皿 J/jche 加厂加恋 particles 批号杂菌 l l l 志贺氏菌 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌非致病性杂菌检查 ( 杂菌率 )/% 真菌计数 /CFU.g-l <0.I <100 <0 l <0.] <0.I <O1 <100 <0 <l00 注 : - 代表该项致病菌未检出 NOte: -,meansthepathogenicbacteriawasnotcheckedout, 3 讨论微生态制剂 _ 般采用显微镜检法和微生物学检验进行杂菌含量的检测 前者只能大致了解微生物的数量 无法确切区分活菌与死菌 功能微生物与杂菌 ; 后者主要通过平板法培养计数 [5] 中国药典 2010 年版中微生态制剂杂菌检查是采用选择性培养基对样品进行稀释涂布平板培养检测 本实验采用选择性培养基平板涂布培养对地衣芽抱杆菌活菌颗粒进行控制菌检查和真菌计数验证 结果满足验证试验的要求 但对非致病性杂菌检查进行方法验证时 由于样品中含地衣芽抱杆菌活菌数高达 1 109CFUgˉl 以上 而杂菌检查中非致病性杂菌的菌落数限度仅为样品的百万分之 ( 中国药典规定口服微生态活菌制品成品的非致病性杂菌数不得超过 l000cfugˉ1), 在非选择 性平板上巨量的功.342.ChinJMOdApp1Ph 虹 m 2015M 缸 ch,vbl.32no 3 能微生物活菌会掩盖计数平板中的杂菌 因此对其进行菌落计数非常困难 笔者认为口服微生态活菌制品的非致病性杂菌数控制指标应和微生态制剂产品本身活菌浓度挂钩比较适宜 所以应以杂菌率作为控制指标 例如本品可参照中国农业行业标准 ( 微生物饲料添加剂 ˉ 地衣芽胞杆菌 NY/T1461ˉ2007) 规定 以地衣芽抱杆菌的杂菌率不得过 0.1% 为限度指标 [4] 杂菌率是指杂菌占总菌数的百分率 即杂菌率 = 杂菌数 /( 功能微生物的有效活菌数 杂菌数 ) 100% 此限度杂菌率的控制检查可依据中国药典 2010 年版规定采用营养琼脂培养基用于非致病性杂菌的计数 因此, 2.4 项下本品非致病性杂菌检查以杂菌率不得过 0.1% 为限度指标 将样品稀释至含地衣芽抱杆菌约 1000CFUmLˉl, 然后取 1mL 平均分至 5 个营养琼脂平皿中, 玻棒涂匀后培养计

5 8 d0 0 Ⅱ 0q 用了营养琼脂培养基中添加 ChmJMOdApplPharm,2015March,Ⅵ132NO3 343 逞 数杂菌和地衣芽抱杆菌 作者采用此方法对本品氏阴性菌 从而无法对杂菌的总数进行准确的计的非致病性杂菌检查进行方法学验证 结果证明数 [7] 此外作为活菌制剂产品,, 不同规格产品中的该方法准确可靠, 可作为同类微生态制剂产品质活菌浓度差异较大 因此达到药效浓度的剂量差量控制 安全评价的参考 异也对应较大 如果产品标准中参照口服药微生一般根据 ph 值 抑制剂和指示剂等原理配制物限度标准 [8] 仍然以单位重量的绝对杂菌数进行选择性培养基 [6] 本实验也尝试了 ph ph 法和指示剂产品的质量控制显然并不科学 因此药典中口服法对非致病性杂菌计数方法进行研究 因地衣芽微生态活菌制品成品非致病性杂菌数不得超过抱杆菌对酸度特别敏感 所以将营养琼脂培养基 1000CFUgˉ1 1000CFUgˉl 这 _ 这指标值得商榷 _ c 的 ph 值分别调为 和 6.5 和 6.5 共 4 共个梯 4 个梯 REFERENCES 剧 " 囤 " 田 NCES 度, 结果前 3 个 ph 值虽然对地衣芽抱杆菌的生长有一定的抑制作用, 但是对验证菌株 [1] 郭云霞整肠生佐治 例小儿肠炎的临床分析 [J] [J] 中国民中国民 族民间医药 2013(9):84. 和枯草芽抱杆菌也有抑制作用 而当 ph 值值 时时 [2] 骆稽酉骆稽酉,, 曲淑敏益生菌制剂整肠生 [J] [J] 医学综述医学综述 2001, 2001 对地衣芽抱杆菌已无明显抑制作用 指示剂法采 7(4):245ˉ247. 7(4);245ˉ247. 用了营养琼脂培养基中添加 定浓度的 TTC TTC[3] 中国药典三部 [S]2010:320=324, 附录 98 巨 105. 添加后可以将验证菌株和地衣芽抱杆 [4] 中华人民共和国农业行业标准料添加剂 ˉ 地衣芽胞杆菌.NY/T1461ˉ2007 微生物饲 [S]2007. 菌区分开来, 从而计算出的回收率,[5] 张日俊微生态制剂的质量鉴别与选择 检测指标和标准 [J] 饲料工业 2010,31(20):1ˉ4. 但是验证菌株枯草芽抱杆菌和地衣芽抱杆菌几乎 [6]SUNMxSeIectiveenumerationofmjxmeand 允 nnentmilk 无法区分 可见若采用选择性培养基对样品进行 ofkindsof1acticacidbacteria[d]harbin:harbmhstimteof TecmOlOgy 2010 杂菌计数 选择性培养基除抑制目的菌外 般 [7] 马青竹, 李学军. 一种兽用多菌株混合微生态制剂质量标 也会抑制其他非致病性杂菌 如马青竹等采用麦准研究 [J] 饲料工业,2010,31(I1):56ˉ,2010,31(I1):56ˉ6O 康凯琼脂选择性培养基对多菌株混合微生态制剂 [8] 袁佩娜微生态制剂安全性有效性检查方法 [J] 中国微生 态学杂志,16,8(5):. 产品进行杂菌计数 该培养基同时抑制部分革兰收稿日期 :2014ˉ06 写 20 Z ; 蹿蹿 Q 啄拯贸唾 鞍 sz s7 巴 蓖 哦 蓖 弱 弱 6 6 屯 屯巳 G^ 巳 G^ 虾 Ⅵ 虾 Ⅵ QZ 蹿 QZ 巳 弱究虾蹿 巳 弱究虾? 吗溺 唾 d 屯 d d 唾屯 d 巳唾 虾巳 86 虾己 86 G ZG 己 d ^ 式 β 7 式 β 7 邑巳 邑巳 醉谭屯巳屯 ^? ^? 代 7 代 G G 虾 虾勿 勿虾 7^Z 虾 己 己 G G β 式 Z 式 Z Z Ⅶ 巳屯巳 己 絮蹿 ^7 ; 子 ; 图 起乙起 Z 2d 5 电乙 日 5? 屯 巳: S5 龟 飞 Z 已飞 Z^ 巳凸 回维林0本刊 20 4 年论文下载排行 ( 以 中国学术期刊网络出版总库,, 统计 ) 序号标题 乍者 作者 期卜飘狈队刊期下载频次 1 l 金钡石斜的化学成分和药理作用研究进展张晓敏张晓敏 孙志蓉 孙志蓉, 陈龙, 陈龙 魏蠢盏 魏蒸蒸, 刘文兰 2014 年第 7 期 脂肪酸检测方法的研究进展周文斌 吕春明周文斌 张宁 吕春明, 吴丹 张宁,, 寇芳吴丹 ;, 寇芳魏海 ; 2014 魏海年第 2 期 231 吕寒膝木浑陈剑马_任冰如李吕寒维林 膝杰浑 陈剑 马丽朋 任冰如 李 第年l 期 批把叶总黄酮的纯化工艺及抗氧化活性研究 2014 年第 l 期 1 4 细胞色素 P450 与外源物的相互作用研究进展赵春 李银生 蒋美琳, 丛琳, 丛琳 邱江平 20l4 年第 8 期 新型给药系统和新技术在光动力疗法中的应用局浩吊浩 袁园 张金安 张金安, 郭均平 郭均平 年第年第 1 期 1 期 雷替曲塞的临床应用吴婶婶 陈丁丁 吴婶妈智俊娜 陈丁丁, 智俊娜陆建伟, 2014 年第 年第期 5129 期 7 抗脑胶质瘤中药的研究进展吕林林 许丽娜 彭金咏 2014 年第 年第期 期 : 鳃麓蜜耀五腻中紫丁香脊喇 m 畸 E 和樊如宏征 强,, 傅 2014 年第 3 期 121 : 鳃麓蜜耀五卿中紫丁霄替喇五加蔷 E 和樊如强金学英胡荣陈鹏王建斌憾宏征 20 3 期 l2! 9 内皮素受体及其受体桔抗剂在心血管疾病中的作用李培武 伏旭 傅仲学 伏旭 傅仲学 年第年第 3 期 3121 期 12] l0sg 2 抑制剂 C 皿 agli ozin = 型糖尿病治疗的新药曾要富 姚亮元 钟爱军, 朱颖嘉 袁秀菊 2014 年第 9 期 120 来源数据截止至 20l5 年 3 月 13 日 ChmJMOdApplPha n 2015March,Ⅵl.32NO.3 343

试液进行计数方法适用性试验 若供试品污染的微生物数较多, 低稀释级供试液可能影响微生物回收结果, 因此, 应选择低微生物污染的样品或选择适宜稀释级的供试液进行方法适用性试验 (1) 试验组取上述制备好的供试液, 加入试验菌液, 混匀, 使每 1ml 供试液加菌量不大于 100cfu (2) 供试品对

试液进行计数方法适用性试验 若供试品污染的微生物数较多, 低稀释级供试液可能影响微生物回收结果, 因此, 应选择低微生物污染的样品或选择适宜稀释级的供试液进行方法适用性试验 (1) 试验组取上述制备好的供试液, 加入试验菌液, 混匀, 使每 1ml 供试液加菌量不大于 100cfu (2) 供试品对 中药饮片微生物限度检查法 中药饮片微生物限度检查法用于检查中药材及中药饮片的微生物污染程度 包括微生物计数和控制菌检查 微生物计数包括需氧菌总数 霉菌和酵母菌总数和耐热菌数检查 控制菌检查包括耐胆盐革兰阴性菌 大肠埃希菌 沙门菌的检查 中药饮片微生物限度检查的试验环境应符合微生物限度检查的要求 检验全过程必须严格遵守无菌操作, 防止再污染, 防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出 单向流空气区域

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