20 山东科学 2012 年 分析 1 材料与方法 1.1 实验材料 测试材料普通玉米粉 ( 市售 ) 试剂浓硫酸, 分析纯, 浓度为 95.5%; 苯酚, 浓度为 6%, 每次测定均需现配 ; 标准葡萄糖, 分析纯 ;3,5 二硝基水杨酸 (DNS) 试剂 ; 斐林试剂甲液

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1 山东科学 SHANDONG SCIENCE 第 25 卷 第 1 期 2012 年 2 月出版 Vol.25No.1Feb.2012 DOI: /j.isn 玉米粉中淀粉含量的快速测定方法 于鲁浩 1, 杨俊慧 2, 孟庆军 2, 杨艳 2 2, 马耀宏 (1. 山东轻工业学院食品与生物工程学院, 山东济南 ; 2. 山东省科学院生物研究所, 山东省生物传感器重点实验室, 山东济南 ) 摘要 : 本文采用苯酚硫酸 DNS 法 (3,5 二硝基水杨酸法 ) 和基于斐林试剂法原理的还原糖测定仪法对玉米粉中的淀粉含量进行测定 通过对三种方法的操作过程及所测得的数据进行综合比较, 结果表明, 还原糖测定仪法测定淀粉含量快速有效 稳定性好 精确度高 关键词 : 苯酚硫酸法 ;DNS 法 ; 还原糖测定仪法 ; 玉米淀粉中图分类号 :TS210.7 文献标识码 :A 文章编号 : (2012) Fastdeterminationofmaizestarchcontentincornflour YU Lu hao 1,YANG Jun hui 2,MENG Qing jun 2,YANG Yan 2,MAYao hong 2 (1.SchoolofFoodBioenginecringShandongPohytechnicUniversity,Jinan250353,China;2.ShandongProvincialKey LaboratoryofBiosensors,BiologyInstitute,ShandongAcademyofSciences,Jinan250014,China) Abstract Thispaperemploysphenol sulfuricacid,dnsandreducingsugaranalyzermethodstodeterminethestarch contentincornflour.wecomprehensivelycomparetheiroperationprocessesandtheacquireddata.resultsshow that reducingsugaranalyzermethodcandeterminemaizestarchcontentmoreconvenientlyandrapidly. Keywords phenol sulfuricacidmethod;dnsmethod;reducingsugaranalyzermethod;maizestarch 玉米是世界上产量最大的谷类作物, 在我国北方种植相当普遍 淀粉是玉米籽粒的主要成分之一, 纯度达 99.5%, 用途广泛 由于玉米淀粉加工途径多样 产品种类繁多 用途广泛 附加值高, 被称为玉米加工业的 黄金产业, 玉米深加工生产出的玉米淀粉已被广泛用作食品 药品和轻工业的生产原料 目前, 玉米加工及玉米的良种选育 科学储粮 [1], 对于国家的粮食发展战略乃至整个国家的发展都具有重要的意义, 而玉米淀粉的含量便是衡量玉米质量的一个重要指标 如何快速准确的测定玉米淀粉的含量非常重要, 目前工厂和实验室对于玉米粉的淀粉含量测定, 采用的方法主要是斐林试剂法 苯酚硫酸法和 GB 中的方法 [2] 这些方法都是手工测量, 不仅费时费力, 而且对于操作要求比较严格 ; 不同的人员测定, 误差会比较大, 所需时间也比较长 本文采用苯酚硫酸法 DNS 法和还原糖测定仪法对玉米粉淀粉含量进行测定 先将玉米粉用酸水解成具有还原性的单糖即葡萄糖, 测出葡萄糖的浓度, 然后换算成淀粉的含量 [3], 同时, 对三种方法进行了比较 收稿日期 : 作者简介 : 于鲁浩 (1986-), 男, 硕士研究生, 研究方向为微生物与酶工程 通讯作者, swdz@keylab.net

2 20 山东科学 2012 年 分析 1 材料与方法 1.1 实验材料 测试材料普通玉米粉 ( 市售 ) 试剂浓硫酸, 分析纯, 浓度为 95.5%; 苯酚, 浓度为 6%, 每次测定均需现配 ; 标准葡萄糖, 分析纯 ;3,5 二硝基水杨酸 (DNS) 试剂 ; 斐林试剂甲液 :CuSO 4 5H 2 O35.0g,1% 次甲基兰 5mL, 定容至 1000mL; 斐林试剂乙液 :NaOH126.4g, 酒石酸甲钠 117.0g, 亚铁氰化钾 9.4g, 定容至 1000mL 样品准确称量 1.0g 玉米粉, 加入浓度为 1mol/L 的稀硫酸 100mL, 在水浴锅中沸水浴加热水解, 时间为 20min 1.2 实验原理与方法 苯酚硫酸法 (1) 制作标准曲线 : 准确称取标准葡萄糖 10mg 于 100mL 容量瓶中, 加水至刻度, 充分溶解后即为葡萄糖标准液 分别吸取葡萄糖标准液 0.4,0.6,0.8,1.0,1.2,1.4,1.6mL, 各以蒸馏水补至 2.0mL, 然后加入 6% 苯酚 1.0mL 及浓硫酸 5.0mL, 摇匀冷却, 室温放置 20min 以后于 490nm 测光密度, 以 2.0mL 水按同样显色操作为空白 (2) 样品含量测定 : 取玉米粉水解液 1mL 稀释 100 倍, 取 2mL 于试管中, 然后加入 6% 苯酚 1.0mL 及浓硫酸 5.0mL, 摇匀冷却, 室温放置 20min 以后于 490nm 测光密度 DNS 法 (1) 制作葡萄糖标准曲线取 7 支 25mL 具塞刻度试管编号, 分别加入浓度为 1mg/mL 的葡萄糖标准液 0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0, 1.2mL, 再加蒸馏水补至 2mL, 然后加入 3,5 二硝基水杨酸 (DNS) 试剂 1.5mL, 将各试管摇匀, 在沸水浴中准确加热 5min, 取出, 冰浴冷却至室温 然后用蒸馏水定容至 25mL, 加塞后颠倒混匀, 在分光光度计上进行比色 调波长 540nm, 用 0 号管调零点, 测出 7 支试管的光密度值 (2) 样品含量测定取玉米粉水解液 1mL 稀释 100 倍, 取 2mL 于试管中, 加入 3,5 二硝基水杨酸 (DNS) 试剂 1.5mL, 摇匀, 在沸水浴中准确加热 5min, 取出, 冰浴冷却至室温, 用蒸馏水定容至 25mL, 加塞后颠倒混匀, 在分光光度计上进行比色 还原糖测定仪法采用 SGD IV 全自动还原糖测定仪检测, 本仪器为山东省科学院中日友好生物技术研究中心提供 实验原理 : 根据费林试剂测定原理设计而成 [3] 操作方法 : 接通电源 (220V), 进入待机状态 ; 按 开 / 关 键, 自动启动准备程序, 完成定标 T1; 待仪器提示定标 T2, 用移液器注入 500μL 标准糖完成定标并打印 ; 按测定键, 自动进入测定程序, 用移液器吸取 500μL 待测样品注入仪器反应池中, 完成测定并打印出结果 2 结果与分析 2.1 精密度实验三种实验方法测得的玉米粉中淀粉含量的精密度实验结果见表 1~3 其中玉米粉中淀粉含量 =

3 第 1 期 于鲁浩, 等 : 玉米粉中淀粉含量的快速测定方法 21 测得的还原糖量 0.9( 葡萄糖折换成淀粉的换算系数 ) 从表 1~3 中可以看出, 苯酚硫酸法测得的结果是 70.93%,DNS 法测得的结果是 66.28%, 还原糖测定仪法测得的结果是 67.57%, 其中 DNS 法和还原糖测定仪法的结果很接近, 由于苯酚硫酸法测得的是总糖的含量, 故结果有点高, 若在要求比较高的条件下, 苯酚硫酸法的结果不如其他两种方法准确 表 1 苯酚硫酸法测得的淀粉含量实验结果 Table1 Determinationofpotatostarchcontentbyphenol sulfuricacidmethod 淀粉水解生成的还原糖量 /% 淀粉含量 /% 平均值 /% 标准偏差 变异系数 表 2 DNS 法测得的淀粉含量实验结果 Table2 DeterminationofpotatostarchcontentbyDNSmethod 淀粉水解生成的还原糖量 /% 淀粉含量 /% 平均值 /% 标准偏差 变异系数 表 3 还原糖测定仪法测得的淀粉含量实验结果 Table3 Determinationofpotatostarchcontentbyreducingsugaranalyzer 淀粉水解生成的还原糖量 /% 淀粉含量 /% 平均值 /% 标准偏差 变异系数 回收率实验将三种方法测定的玉米粉中的淀粉含量进行加样回收率实验 取水解液 1mL 定容至 100mL, 添加标准淀粉水解样品, 用三种方法对加样样品进行测定 计算加入标准淀粉的回收率 结果见表 4~6 表 4 苯酚硫酸法回收率测定结果 Table4 Determinationofrecoveryratebyphenol sulfuricacidmethod 测定值 /(g (100mL) -1 ) 添加前淀粉含量 /(g (100mL) -1 ) 回收率 /% 平均回收率 /% 102.7

4 22 山东科学 2012 年 表 5 DNS 法回收率测定结果 Table5 DeterminationofrecoveryratebyDNSmethod 测定值 /(g (100mL) -1 ) 添加前淀粉含量 /(g (100mL) -1 ) 回收率 /% 平均回收率 /% 表 6 还原糖测定仪法回收率测定结果 Table6 Determinationofrecoveryratebyreducingsugaranalyzer 测定值 /(g (100mL) -1 ) 添加前淀粉含量 /(g (100mL) -1 ) 回收率 /% 平均回收率 /% 三种方法比较, 苯酚硫酸法测得的结果较其他两种方法数值都偏高 由于其测得的是总糖的含量, 可能 有纤维素或其他成分被浓硫酸水解形成了还原糖, 导致结果偏高 ; 同时杂质的干扰也会对结果有一定的影 响 其优点是所用的试剂易购买, 成本低, 结果的重现性较理想 缺点是该方法对于操作要求比较严格, 而 且操作过程所需时间长 ; 硫酸具有脱水性, 具有一定的危险性 ; 苯酚容易氧化, 见光或遇氧即逐渐氧化成淡红 色影响结果 DNS 法方法测得的数据结果较低 这是由于该方法测得的是淀粉水解形成的还原糖, 样品中的杂质以 及操作中带来的误差也会对结果影响较大 该方法优点是实验室条件下较容易做, 标准曲线易获得, 重现性 较好 缺点是操作步骤多, 花费的时间较长, 结果易受到液体中原有的颜色的干扰 还原糖测定仪法测得的结果与 DNS 法结果很接近 其优点是该方法是由仪器来测定, 这就减少了手工 操作的一些不必要的误差, 结果就会更准确 ; 稳定性好 重现性好, 对同一样品测得的数值偏差小于 1%; 对 操作人员的要求比较低, 测定一个样品所需时间少于 3min 该仪器采用补色光终点判断系统, 不易受到液 体中原有颜色的干扰 3 结论对玉米粉中淀粉的测定, 从标准偏差 变异系数及回收率来看, 苯酚硫酸法 DNS 法 还原糖测定仪法均可行 但是苯酚硫酸法和 DNS 法操作比较繁琐, 所需时间需要半小时左右 简单快速有效的测定方法是还原糖测定仪法 该方法稳定性好 重现性好, 测定结果的精密度 准确度高, 省时省力, 是测定淀粉含量的一种快速有效的方法 参考文献 : [1] 郑艳春. 玉米淀粉测定及相关问题的探讨 [J]. 黑龙江粮食,2010(4): [2]GB/T , 食品中淀粉的测定 [S]. [3] 史建国, 马耀宏, 孟庆军, 等. 还原糖测定仪测定烟叶中还原糖的研究 [J]. 烟草研究与管理,2003(1): [4] 李云康, 潘思铁. 高效液相色谱法测定柑橘汁糖的组成 [J]. 食品科学,2006,27(4):

5 第 1 期 于鲁浩, 等 : 玉米粉中淀粉含量的快速测定方法 23 [5] 杨俊, 刘江生, 蔡继宝, 等. 高效液相色谱 蒸发光散射检测法测定烟草中的水溶性糖 [J]. 分析化学研究简报,2005,33 (11): [6] 王艳颖, 胡文忠, 庞坤, 等. 高效液相色谱 蒸发光散射法测定苹果中可溶性糖的含量 [J]. 食品与发酵工业,2008,34(6): [7] 杨艳, 马耀宏, 杨俊慧, 等. 糖果中还原糖的快速测定技术 [J]. 食品与发酵工业,2004,25(10): [8] 许汉英, 王柯敏. 流动注射 - 分光光度法测定蜂蜜中还原糖的研究 [J]. 高等学校化学学报,1994,19(12): [9] 朱海霞, 石瑛, 张庆娜, 等.3,5 二硝基水杨酸 (DNS) 比色法测定马铃薯还原糖含量的研究 [J]. 中国马铃薯,2005,19(5): [10] 袁品坦. 淀粉和还原糖测定方法评述 [J]. 发酵科技通讯,2010,30(3): [11] 蔡鑫茹, 刘广新, 焦仁海. 近红外光谱仪测定玉米子粒淀粉含量的研究 [J]. 吉林农业科学,2006,31(6): [12]HTOONAK,UTHAYAKUMARANS,PIYASIRIU,etal.Theefectofaciddextrinisationonenzyme resistantstarchcontentin extrudedmaizestarch[j].foodchemistry,2010,120(1): [13]STAWSKID.Newdeterminationmethodofamylasecontentinpotatostarch[J].FoodChemistry,2008,110(3): [14]MISHRAS,RAIT.Morphologyandfunctionalpropertiesofcorn,potatoandtapiocastarches[J].FoodHydrocoloids,2006,20 (5): 简讯 2011 年山东省十大科技新闻评选揭晓 由山东省科技厅宣传办公室 科技日报 山东记者站组织评选的 2011 年山东省十大科技新闻揭晓, 它们是 ( 按发生时间先后为序 ): (1) 泰山学者攀登计划 启动, 人才 优中选优 重点支持 ;(2) 济南量子技术研究院成立, 建平台引人才 支撑转型 ;(3) 科技部与山东省部省会商, 共推 蓝黄 两大国家战略 ;(4) 国家超算济南中心落户, 全国产 CPU 成就世界第三 ;(5) 青岛打造 蓝色硅谷, 构筑走向深海 旗舰 ;(6) 临沂高新区晋升国家级,19 载努力跨入新时代 ;(7) 中国最先进海洋科学考察船下水, 技术国际先进可实现全球航行 ;(8) 青岛造动车组时速 486 公里, 新头型取材于长征火箭 ;(9) 黄三角国家可持续发展中心获批, 六项任务支撑 黄三角 开发 ;(10) 首条高端集成电路封测生产线济南投产, 我电子信息产品存储器依赖国外局面作古 ( 本刊编辑部 )

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