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1 18 国际中医中药杂志 2011 年 1 月第 33 卷第 1 期 Int J Trad Chin Med, January 2011, Vol. 33, No.1 土槐汤及其拆方提取物外用对表皮增生小鼠水份丢失量的基础研究 实验研究 史月君李波宋顺鹏占城朱英华李乔 摘要 目的研究局部外用土槐汤及其拆方提取物对表皮增生小鼠表皮功能的影响, 为土槐汤局部外用治疗银屑病提供理论依据 方法根据 Denda 的方法, 用胶带破坏小鼠皮肤屏障功能, 制作表皮增生模型 给予土槐汤及其拆方不同浓度水 醇提取物外涂, 自开始本实验起, 每日用药前, 用多功能皮肤生理仪于躯干两侧检测皮肤水分丢失量 结果土槐汤水 醇提取物均有减少皮肤水分丢失量作用, 拆方组中当归组 红花组 丹参组 夏枯草组的水 醇提取物均有减少皮肤水分丢失量作用 结论土槐汤水 乙醇提取物具有减少皮肤水分丢失量抗增生作用, 可以外用治疗银屑病, 为临床治疗银屑病奠定前期基础 关键词 土槐汤 ; 提取物 ; 表皮增生 ; 基础研究 Basic study on Tuhuai decoction and its disassembled prescriptions on the amount of water lose in mice with epidermal hyperplasia SHI Yue-jun, LI Bo, SONG Shun-peng, ZHAN Cheng, ZHU Ying-hua, LI Qiao. Skin Hospital in Dalian City, Dalian , China Abstract Objective To study the topical application of Tuhuai decoction and its disassembled prescriptions on skin function of mice with epidermal hyperplasia, and to provide a theoretical basis for the treatment of psoriasis. Methods According to the Denda method, skin barrier function in mice was destructed with tape, to produce epidermal hyperplasia model. Tuhuai decoction and its disassembled prescriptions with different concentrations of water and alcohol extracts were external applied on the mice. Since the beginning of the treatment, loss of skin moisture of both sides the trunk was detected with Multi-functional instrument at every day before using the medicine. Results Tuhuai decoction had function of reducing the amount of water loss of skin. The disassembled prescriptions, such as Angelica group, safflower group, Danshen root group, and water and ethanol extracts of Prunella group can reduce the amount of water loss of skin effect. Conclusion Water and ethanol extracts of Tuhuai decoction has the functions of reducing water loss of skin and resisting hyperplasia, suitable for treating psoriasis by external application, setting a foundation for clinical treatment of psoriasis. Key words Tuhuai decoction;extract;epidermal hyperplasia;basic research 银屑病是由多环境因素刺激诱导的免疫异常性慢性炎症性增生性皮肤病, 以表皮过度增生 角化不全及真皮淋巴细胞浸润为特征, 与遗传 病毒或链球菌感染 免疫功能异常 表皮生成障碍有关 [1] 目前治疗银屑病的药物存在不同程度的毒副作用 [2] 生物类药物和免疫抑制剂价可抑制造血系统, 且格昂贵 中草药口感 服用的方便性限制了其临床应用, 因此研发安全有效治疗银屑病的外用中药意义重大 银屑病以表皮增生分化异常为主要改变, 本实验利用表皮增生小鼠研究局部土槐提取物外用对皮肤水分丢失量的影响 1 材料与方法 1.1 动物来源及分组 : 选取清洁级 (SFP) 昆明 DOI: /cma.j.issn 作者单位 : 辽宁省大连市皮肤病医院皮肤科 种 6 至 8 周雌性小鼠 ( 由大连医科大学实验动物中心提供 )660 只, 体重 28~31 g, 未曾交配 1.2 建模方法 : 参照 Denda 方法建立表皮增生动物模型 [3], 将小鼠背及躯干两侧 (4 4 cm) 除毛后, 用胶带破坏皮肤的屏障功能,2 次 /d, 连续 5 d 采用美国米寇公司生产的电子水分测量仪测量躯干的侧面皮肤水分丢失量, 即皮肤屏障功能 组织石腊光镜下模型组较正常组表皮有核细胞的层数增多 表皮增厚 ( 正常组小鼠表皮厚度平均约 15 μm, 模型成功小鼠表皮厚度 >20 μm), 表明模型成功, 见图 药物制备方法 : 中药土茯苓 槐花 紫草 大青叶饮片等购至大连同仁堂药房, 醋酸地塞米松 ( 吉林精优长白山药业有限公司 ),95% 酒精 ( 沈阳富康消毒药剂厂 ) 将土槐汤的复方和各味中药分别放入 95% 的乙醇中浸泡 4 周或水煎 2 h, 再过

2 国际中医中药杂志 2011 年 1 月第 33 卷第 1 期 Int J Trad Chin Med, January 2011, Vol. 33, No.1 19 图 1 模型组表皮 图 2 正常组表皮 滤除渣后将其浓度调为 1% 5% 两种 均选取道地药材, 按 1998 年出版的 全国中药材炮制规范 进行炮制 制备 1.4 试验方法 : 先将小鼠的背及躯干两侧备皮, 除正常组外, 其余各组每次刺激后, 在小鼠背及躯干两侧涂 100 μl 基质或不同浓度的提取物 并于开始实验起, 在隔日用药前, 先用多功能皮肤生理仪于躯干两侧测量皮肤水分丢失量 第 6 天取治疗部位 cm 大小的皮肤活检 1.5 分组及给药方法 : 采用随机数字表法随机分为正常对照组 基质对照组 1% 和 5% 水提治疗组 1% 和 5% 醇提治疗组, 阳性对照组为 0.075% 醋酸地塞米松的水和醇溶液 每组各 10 只 1.6 统计学方法 : 使用 SPSS 13.0 软件进行统计处理实验数据, 试验结果为正态分布, 满足方差齐性, 以均数 ± 标准差 ( x ± s ) 表示实验结果,t 检验采用配对 t 检验和两组独立样本 t 检验, 多组间差异显著性检验用单因素方差分析, 组间比较用 SNK(q) 检验, 各处理组与对照组比较用 Dunnett t 检验 2 结果 2.1 1% 土槐汤及其拆方水提皮肤水分丢失量结果 :1 模型空白组皮肤水分丢失量随着时间的延长而逐渐增多, 第 3 天多于第 1 天 (t=2.862 P= 0.018), 第 5 天多于第 1 天 (t=6.456 P=0.001) 2 正常空白组与模型空白组比较, 第 3 天 (t= P=0.028) 第 5 天 (t=8.596 P=0.000) 均有统计学意义 3 与模型空白组比较, 第 3 天, 地塞米松水溶组 (t=2.529,p=0.029) 地塞米松醇溶组 (t=2.546,p=0.026) 土槐汤全方组 (t= 2.594,P=0.019) 当归组 (t=2.518,p=0.028) 红花组 (t=2.476,p=0.035) 丹参组 (t=2.495, P=0.031) 夏枯草组 (t=2.386,p=0.041) 差异均有统计学意义 (P 均 <0.05); 第 5 天, 与模型空白组比较, 地塞米松水溶组 (t=7.149,p=0.000) 地塞米松醇溶组 (t=7.012,p=0.000) 土槐汤全方组 (t=8.412,p=0.000) 当归组 (t=7.857,p= 0.000) 红花组 (t=7.641,p=0.000) 丹参组 (t= 7.683,P=0.000) 夏枯草组 (t=7.705,p=0.000) 差异均有统计学意义 (P 均 <0.01) 4 土茯苓组 槐花组 生地组 紫草组 板蓝根组 大青叶组 乌蛸蛇组 黄芩组 金银花组 连翘组与模型空白组皮肤水分丢失量比较, 差异均无统计学意义 5 组内比较 : 第 3 天与第 1 天比较, 土茯苓组 (t= 3.119,P=0.014) 槐花组 (t=2.876,p=0.017) 生地组 (t=2.742,p=0.021) 紫草组 (t=2.517, P=0.036) 板蓝根组 (t=2.726,p=0.026) 大青叶组 (t=2.619,p=0.032) 乌蛸蛇组 (t=2.513, P=0.037) 黄芩组 (t=2.769,p=0.018) 金银花组 (t=2.657,p=0.029) 连翘组 (t=2.602,p= 0.033),P 均 <0.05; 第 5 天与第 1 天比较, 土茯苓组 (t=6.952,p=0.001) 槐花组 (t=6.899,p= 0.001) 生地组 (t=6.742,p=0.008) 紫草组 (t= 6.593,P=0.009) 板蓝根组 (t=6.452,p=0.001) 大青叶组 (t=7.124,p=0.000) 乌蛸蛇组 (t= 6.236,P=0.001) 黄芩组 (t=6.389,p=0.001) 金银花组 (t=6.637,p=0.008) 连翘组 (t=6.513, P=0.001), 皮肤水分丢失量均有统计学意义 (P 均 < 0.01), 见表 % 土槐汤及其拆方醇提皮肤水分丢失量结果 :1 模型空白组皮肤水分丢失量随着时间的延长而逐渐增多, 第 3 天多于第 1 天 (t=2.862,p= 0.018), 第 5 天多于第 1 天 (t=6.456 P=0.001) 2 正常空白组与模型空白组比较, 第 3 天 (t= P=0.028) 第 5 天 (t=8.596 P=0.000) 均有统计学意义 3 与模型空白组比较, 第 3 天, 地塞米松水溶组 (t=2.529,p=0.029) 地塞米松醇溶组 (t=2.546,p=0.026) 土槐汤全方组 (t= 2.623,P=0.016) 当归组 (t=2.532,p=0.026) 红花组 (t=2.476,p=0.035) 丹参组 (t=2.457, P=0.033) 夏枯草组 (t=2.398,p=0.038) 差异均有统计学意义 (P 均 <0.05); 第 5 天, 与模型空白组比较, 地塞米松水溶组 (t=7.149,p=0.000) 地塞米松醇溶组 (t=7.012,p=0.000) 土槐汤全方组 (t=8.189,p=0.000) 当归组 (t=7.884,p= 0.000) 红花组 (t=7.641,p=0.000) 丹参组 (t= 7.512,P=0.000) 夏枯草组 (t=7.716,p=0.000) 差异均有统计学意义 (P 均 <0.01) 4 土茯苓组 槐花组 生地组 紫草组 板蓝根组 大青叶组 乌蛸蛇组 黄芩组 金银花组 连翘组与模型空白组皮肤水分丢失量比较, 差异均无统计学意义

3 20 国际中医中药杂志 2011 年 1 月第 33 卷第 1 期 Int J Trad Chin Med, January 2011, Vol. 33, No.1 表 1 1% 土槐汤及其拆方水提皮肤水分丢失量 ( x ± s ) 土槐汤全方组 ± ± a 14.65± b 土茯苓组 ± ± c 33.73± d 槐花组 ± ± c 33.35± d 生地组 ± ± c 35.62± d 紫草组 ± ± c 34.16± d 板蓝根组 ± ± c 32.85± d 大青叶组 ± ± c 36.43± d 当归组 ± ± a 16.85± b 红花组 ± ± a 15.17± b 丹参组 ± ± a 15.64± b 夏枯草组 ± ± a 15.19± b 乌蛸蛇组 ± ± c 31.53± d 黄芩组 ± ± c 32.53± d 金银花组 ± ± c 35.53± d 连翘组 ± ± c 32.24± d 表 2 1% 土槐汤及其拆方醇提皮肤水分丢失量 ( x ± s ) 土槐汤全方组 ± ± a 16.25± b 土茯苓组 ± ± c 31.71± d 槐花组 ± ± c 34.32± d 生地组 ± ± c 32.21± d 紫草组 ± ± c 31.43± d 板蓝根组 ± ± c 30.75± d 大青叶组 ± ± c 35.67± d 当归组 ± ± a 15.35± b 红花组 ± ± a 17.54± b 丹参组 ± ± a 16.64± b 夏枯草组 ± ± a 15.54± b 乌蛸蛇组 ± ± c 33.74± d 黄芩组 ± ± c 36.17± d 金银花组 ± ± c 33.56± d 连翘组 ± ± c 30.56± d 注 : 与模型空白组比较, a P<0.05, b P<0.01; 各组自身比较, c P<0.05, d P< 组内比较 : 第 3 天与第 1 天比较, 土茯苓组 (t= 3.119,P=0.014) 槐花组 (t=2.846,p=0.018) 生地组 (t=2.712,p=0.022) 紫草组 (t=2.520, P=0.035) 板蓝根组 (t=2.799,p=0.024) 大青叶组 (t=2.659,p=0.030) 乌蛸蛇组 (t=2.501, P=0.039) 黄芩组 (t=2.725,p=0.020) 金银花组 (t=2.694,p=0.027) 连翘组 (t=2.608,p= 0.032),P 均 <0.05; 第 5 天与第 1 天比较, 土茯苓组 (t=6.997,p=0.000) 槐花组 (t=6.859,p= 0.001) 生地组 (t=6.721,p=0.008) 紫草组 (t= 6.423,P=0.009) 板蓝根组 (t=6.399,p=0.001) 大青叶组 (t=7.215,p=0.000) 乌蛸蛇组 (t= 6.257,P=0.009) 黄芩组 (t=6.219,p=0.001) 金银花组 (t=6.637,p=0.008) 连翘组 (t=6.496, P=0.001), 皮肤水分丢失量均有统计学意义 (P 均 < 0.01), 见表 % 土槐汤及其拆方水提皮肤水分丢失量结果 :1 模型空白组皮肤水分丢失量随着时间的延长而逐渐增多, 具体统计学数据同 正常空白组与模型空白组比较, 第 3 天 第 5 天均有统

4 国际中医中药杂志 2011 年 1 月第 33 卷第 1 期 Int J Trad Chin Med, January 2011, Vol. 33, No.1 21 表 3 5% 土槐汤及其拆方水提皮肤水分丢失量 ( x ± s ) 土槐汤全方组 ± ± a 15.65± b 土茯苓组 ± ± c 33.32± d 槐花组 ± ± c 32.54± d 生地组 ± ± c 35.63± d 紫草组 ± ± c 34.76± d 板蓝根组 ± ± c 31.53±6.054 d 大青叶组 ± ± c 34.56± d 当归组 ± ±7.074 a 16.65± b 红花组 ± ± a 15.65± b 丹参组 ± ± a 15.75± b 夏枯草组 ± ± a 17.36± b 乌蛸蛇组 ± ± c 35.65± d 黄芩组 ± ± c 33.54± d 金银花组 ± ± c 35.44± d 连翘组 ± ± c 31.45± d 表 4 5% 土槐汤及其拆方醇提皮肤水分丢失量 ( x ± s ) 土槐汤全方组 ± ± a 16.35± b 土茯苓组 ± ± c 34.65± d 槐花组 ± ± c 33.63± d 生地组 ± ± c 32.98± d 紫草组 ± ± c 35.64± d 板蓝根组 ± ± c 33.75± d 大青叶组 ± ± c 35.09± d 当归组 ± ± a 17.74± b 红花组 ± ± a 15.89± b 丹参组 ± ± a 16.54± b 夏枯草组 ± ± a 15.53± b 乌蛸蛇组 ± ± c 32.98± d 黄芩组 ± ± c 34.64± d 金银花组 ± ± c 33.16± d 连翘组 ± ± c 32.33± d 计学意义, 具体统计学数据同 第 3 天, 与模型空白组比较, 地塞米松水溶组 (t=2.529,p= 0.029) 地塞米松醇溶组 (t=2.546,p=0.026) 土槐汤全方组 (t=2.585,p=0.021) 当归组 (t= 2.504,P=0.029) 红花组 (t=2.396,p=0.038) 丹参组 (t=2.455,p=0.032) 夏枯草组 (t=2.372, P=0.044) 差异均有统计学意义 (P 均 <0.05); 第 5 天, 与模型空白组比较, 地塞米松水溶组 (t=7.149, P=0.000) 地塞米松醇溶组 (t=7.012,p=0.000) 土槐汤全方组 (t=8.517,p=0.000) 当归组 (t= 7.745,P=0.000) 红花组 (t=7.657,p=0.000) 丹参组 (t=7.679,p=0.000) 夏枯草组 (t=7.514, P=0.000) 差异均有统计学意义 (P 均 <0.01) 4 与模型空白组比较, 土茯苓组 槐花组 生地组 紫草组 板蓝根组 大青叶组 乌蛸蛇组 黄芩组 金银花组 连翘组的第 3 天 第 5 天皮肤水分丢失量差异均无统计学意义 5 组内比较 : 第 3 天与第 1 天比较, 土茯苓组 (t=3.102,p=0.015) 槐花组 (t=2.848,p=0.019) 生地组 (t=2.735, P=0.022) 紫草组 (t=2.502,p=0.037) 板蓝根

5 22 国际中医中药杂志 2011 年 1 月第 33 卷第 1 期 Int J Trad Chin Med, January 2011, Vol. 33, No.1 组 (t=2.726,p=0.026) 大青叶组 (t=2.569,p= 0.035) 乌蛸蛇组 (t=2.483,p=0.039) 黄芩组 (t=2.569,p=0.021) 金银花组 (t=2.832,p= 0.024) 连翘组 (t=2.547,p=0.037),p 均 <0.05; 第 5 天与第 1 天比较, 土茯苓组 (t=6.879,p= 0.000) 槐花组 (t=6.915,p=0.001) 生地组 (t= 6.771,P=0.007) 紫草组 (t=6.498,p=0.009) 板蓝根组 (t=6.452,p=0.001) 大青叶组 (t= 7.054,P=0.000) 乌蛸蛇组 (t=6.675,p=0.008) 黄芩组 (t=6.125,p=0.001) 金银花组 (t=6.786, P=0.008) 连翘组 (t=6.312,p=0.001), 皮肤水分丢失量均有统计学意义 (P 均 <0.01), 见表 % 土槐汤及其拆方醇提皮肤水分丢失量结果 :1 模型空白组皮肤水分丢失量随着时间的延长而逐渐增多, 具体统计学数据同 正常空白组与模型空白组比较, 第 3 天 第 5 天均有统计学意义, 具体统计学数据同 第 3 天, 与模型空白组比较, 地塞米松水溶组 (t=2.529,p= 0.029) 地塞米松醇溶组 (t=2.546,p=0.026) 土槐汤全方组 (t=2.561,p=0.026) 当归组 (t= 2.475,P=0.032) 红花组 (t=2.357,p=0.037) 丹参组 (t=2.642,p=0.029) 夏枯草组 (t=2.476, P=0.041) 差异均有统计学意义 (P 均 <0.05); 第 5 天, 与模型空白组比较, 地塞米松水溶组 (t=7.149, P=0.000) 地塞米松醇溶组 (t=7.012,p=0.000) 土槐汤全方组 (t=8.717,p=0.000) 当归组 (t= 7.568,P=0.000) 红花组 (t=7.641,p=0.000) 丹参组 (t=7.512,p=0.000) 夏枯草组 (t=7.514, P=0.000), 差异均有统计学意义 (P 均 <0.01) 4 与模型空白组比较, 土茯苓组 槐花组 生地组 紫草组 板蓝根组 大青叶组 乌蛸蛇组 黄芩组 金银花组 连翘组的第 3 天 第 5 天皮肤水分丢失量差异均无统计学意义 5 组内比较 : 第 3 天与第 1 天比较, 土茯苓组 (t=3.009,p= 0.017) 槐花组 (t=2.818,p=0.021) 生地组 (t= 2.512,P=0.027) 紫草组 (t=2.618,p=0.034) 板蓝根组 (t=2.615,p=0.029) 大青叶组 (t= 2.712,P=0.031) 乌蛸蛇组 (t=2.596,p=0.034) 黄芩组 (t=2.721,p=0.018) 金银花组 (t=2.672, P=0.028) 连翘组 (t=2.718,p=0.033),p 均 < 0.05; 第 5 天与第 1 天比较, 土茯苓组 (t=6.893, P=0.000) 槐花组 (t=6.876,p=0.000) 生地组 (t=6.871,p=0.008) 紫草组 (t=6.476,p= 0.009) 板蓝根组 (t=6.517,p=0.000) 大青叶 组 (t=7.357,p=0.000) 乌蛸蛇组 (t=6.793,p= 0.008) 黄芩组 (t=6.447,p=0.001) 金银花组 (t=6.515,p=0.008) 连翘组 (t=6.912,p= 0.001), 皮肤水分丢失量均有统计学意义 (P 均 < 0.01), 见表 4 3 讨论银屑病即祖国医学文献中所载的 白疕, 其所描述的症状与银屑病的皮损形态 临床症状相似, 文献认为其病因病机与风燥有关 我国利用中药口服治疗银屑病历史悠久 在前期实验中已证明了土槐汤外用对正常皮肤增生和分化没有明显影响, 且未见毒副作用 [4] 本实验结果表明, 土槐汤及拆方组中当归组 红花组 丹参组 夏枯草组水 醇提均有减少皮肤水分丢失量 抗增殖作用 ; 土茯苓 槐花 生地 紫草 板蓝根 大青叶 乌蛸蛇 黄芩 金银花 连翘组未见抗增生作用, 组方原则上可能取这些中药的抗炎作用, 土茯苓 槐花 生地 紫草具有清热凉血作用 ; 板蓝根 大青叶 黄芩 金银花 连翘具有清热解毒作用, 中药药理研究显示, 这几味中药具有抑菌 抗病毒作用 近来研究认为, 银屑病的诱发因素中感染占首位, 故具有抗炎作用的药物应该有治疗银屑病作用 本实验中土槐汤及拆方水提 醇提及不同浓度作用均未见明显差异, 提示中药外用治疗主要是其药理功效所定, 与基质关系不大 其临床功效还有待于临床大样本验证 参考文献 [1] 郑敏. 银屑病发病机制研究中若干问题的思考. 中华皮肤科杂志,2006,39(3): [2] Ahn SK,Bak HN,park BD. Effects of a multiamellar emulsion on glucocorticoid-induced epidermal atrophy and barrier impairment. J Dermatol,2006,33(2): [3] Denda M,Kitamura K,Elias PM. Tras-4-(Aminomethyl) cyclohexane carboxylic acid(t-amcha), an anti-fibrinolytic agent,accelerates barrier recovery and prevents the epidermal hyperplasia induced by epidermal injury in hairless mice and humans. J Invest Dermatol,1997,109(1): [4] Mao-Qiang Man,Yuejun Shi,Mona Man. Chinese herbal medicine (Tuhuai extract) exhibits topical anti-proliferative and anti-inflammatory activity in murine disease models. Exp Dermatology,2008,17(8): ( 收稿日期 : ) ( 本文编辑 : 高荣慧 )

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