2018-5中国药理学通报封面

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1 632 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018May;34(5):632~9 网络出版时间 : :12 网络出版地址 :htp://kns.cnki.net/kcms/detail/ r html 白藜芦醇抑制人结肠癌细胞增殖与骨形态发生蛋白 7 的关系研究 朱茄慧 1,2, 曾于桦 1,2, 王涵 1,2, 廖云鹏 1,2, 马妍 1,2, 吴柯 1,2 1,2, 何百成 (1. 重庆市生物化学与分子药理学重点实验室,2. 重庆医科大学药理学教研室, 重庆 ) doi: /j.isn 文献标志码 :A 文章编号 : (2018) 中国图书分类号 :R284 1;R329 24;R ;R977 6 摘要 : 目的研究白藜芦醇 (resveratrol,res) 对人结肠癌细胞生长的抑制作用与骨形态发生蛋白 7(BMP7) 的关系, 及其可能的分子机制 方法利用 CCK 8 流式细胞术 West ernblot 和 AnnexinV EGFP 染色等方法, 分析 Res 对 HCT116 细胞增殖和凋亡的影响 利用细胞增殖抑制实验 PCR 和 Westernblot 等实验, 分析 Res 对 HCT116 细胞中 BMP7 表达的影响, 以及 BMP7 对 Res 抑制结肠癌细胞增殖的影响及可能分子机制 结果 Res 能抑制 HCT116 细胞增殖, 诱导 S 期阻滞并促进其凋亡 ;Res 增加 BMP7 在 HCT116 细胞中的 mrna 和蛋白表达 过表达 BMP7 增强 Res 对 HCT116 细胞的增殖抑制作用, 并促进凋亡, 而 BMP7 特异性抗体则明显减弱此作用 ; 在 HCT116 细胞中,Res 对 BMPs/Smads 信号无明显影响, 但能降低 Akt1/2/3 的磷酸化水平 ; 过表达 BMP7 增强 Res 抑制 Akt1/2/3 磷酸化的作用, 而 BMP7 特异性抗体明显减弱 Res 的这种作用 ; 同时, 过表达 BMP7 能增强 Res 抑制 PTEN 磷酸化的作用, 而 BMP7 特异性抗体明显减弱 Res 对 PTEN 磷酸化的抑制 结论 Res 对结肠癌 HCT116 细胞有增殖抑制作用, 机制可能与 Res 通过上调 BMP7 表达而抑制 PTEN 磷酸化, 最终使 PI3K/Akt 信号转导下降有关 关键词 : 白藜芦醇 ; 增殖抑制 ; 结肠癌 ;BMP7;PI3K/Akt; PTEN 结肠癌是常见的消化道肿瘤, 每年约有 120 万新发病例和 60 万死亡病例 [1] 现阶段, 对结肠癌的治疗方式包括手术 放射治疗和化疗 虽然已引入靶向药物治疗结肠癌, 如贝伐单抗 西妥昔单抗 帕尼单抗等, 但预后仍不能令人满意 [2] 因此, 临床仍急需研发能治疗结肠癌且高效低毒的药物 传统中药或中药有效单体衍生物是治疗癌症的有效药物来源之一, 如喜树碱 长春新碱 紫杉醇等 [3] 白藜收稿日期 : , 修回日期 : 基金项目 : 国家自然科学基金资助项目 (No ) 作者简介 : 朱茄慧 (1995-), 女, 硕士生, 研究方向 : 分子药理学,E mail:zhujiahui.qie@qq.com; 何百成 (1972-), 男, 博士, 教授, 研究方向 : 分子药理学和干细胞生物学, 通讯作者,E mail: @qq.com 芦醇 (resveratrol,res) 是天然多酚类化合物, 又称芪三酚 研究表明,Res 可以抑制胰腺癌 乳腺癌 结肠癌等多种癌细胞增殖及促凋亡 [4] 对于结肠癌, 尽管 Res 的抗癌作用已得到验证 [5], 但该作用的具体分子机制尚不十分清楚 骨形态发生蛋白 (bonemorphogeneticprotein, BMP) 是转化生长因子 TGF β 超家族的一个亚族, 在调控胚胎发育的多个关键步骤, 以及各种细胞的生长 分化和凋亡调节中起重要作用 目前, 已经确定约 20 个 BMP 亚族成员 [6] 据报道,BMP 可能与癌症发生发展有关, 如 BMP9 可在肝癌细胞中促进增殖和抗凋亡 [7],BMP2 在卵巢癌细胞中促进增殖 [8] 同时, 也有研究表明,BMP 信号在肿瘤中也具有相反的作用, 如 BMP7 能抑制胃癌 肾癌 乳腺癌 结肠癌细胞增殖 [9] BMPs 不仅可以通过经典的 BMP/Smad 途径传递信号, 还可通过非经典的 BMP/Smad 途径发挥功能, 如 PI3K/Akt 信号 PI3K/Akt 信号已被发现在多种癌症中过度激活, 而 PTEN 作为一种抑癌基因, 可负性调节 PI3K/Akt 信号的转导活性 [10] 本研究主要对 Res 抑制 HCT116 细胞增殖作用与 BMP7 的关系进行分析, 并初步探讨 BMP7 发挥该作用的可能机制 1 材料与方法 1.1 材料 细胞株 HCT116 细胞系购自 American TypeCultureColection(ATCC), 细胞培养条件为 5% CO 2 及 37, 培养基为含 10% FBS 的 DMEM (100kU L -1 青霉素及 0 1g L -1 链霉素 ) 试剂 Res 购于西安昊轩生物科技有限公司 ; 本实验所用一抗均购自 SantaCruzBiotechnology 公司 ;HRP 标记二抗购于碧云天生物技术公司 ;An nexinv EGFP 试剂盒购于南京凯基生物科技有限公司 ;CCK 8 试剂盒购于上海七海复泰生物科技有限公司 ;PCR 试剂盒购于 TaKaRa 公司 仪器细胞培养箱 ( 美国 Thermo 公司 ), 倒置荧光显微镜 ( 日本 Nikon 公司 ), 定量 PCR 仪及凝胶成像仪 ( 美国 Bio Rad 公司 ), 脱色摇床 ( 上海世平实验仪器有限公司 ), 垂直电泳槽和湿式转膜仪 ( 北

2 中国药理学通报 C P m B 2 0 8M 3 4 5 京六一仪器厂 633 2 结果 2 重组腺病毒载体构建 本实验按照 AdE 系 2 R 对 HCT 6细胞增殖的影响 CCK 8检 统构建重组腺病毒载体 通过 PCR将人源 BMP7 能明显抑制 HCT 6细胞增殖 F 测结果显示 R 绿色荧光蛋白 GFP 及 PTEN的编码 序 列 进 行 扩 b 结果显示 R 能增加 PCNA的 A W RNA片段通过商业合成获得 然后将 增 PTEN的 B 且呈浓度依赖性 细胞周期分析结 水平 F 这些片段 分 别 克 隆 到 穿 梭 载 体 padt 中 并 重 果显示 R 明显增加 S期细胞比例 F C 结 组 将正确的重组载体线性化 转染到 HEK29 3细 果提示 R 对 HCT6细胞增殖有抑制作用 胞中 包装重组腺病毒 所得重组腺病毒分别命名 为 AdBMP7 Ad PTEN和 Ad PTEN 重组腺病毒分 别用 GFP和红色荧光蛋白 RFP 标记 仅表达 GFP 的重组腺病毒 AdGFP 作为载体对照 3 细胞增殖检测 将 HCT6细胞接种至 9 6孔 3 板中 密度 3 0 每孔 用不同浓度的 R 重组 4 4 8 7 2 检测时 每 腺病毒或 DMSO处理细胞 2 孔加入 CCK 8 0μL 并在 37 孵育 4 用酶标仪 m测定吸光度 每组实验重复 3次 在波长 450 4 细胞周期及凋亡检测 将 HCT 6接种在 6 孔板中 并 用 R 不 同 浓 度 0 20 4 0 60μm L 处理 4 8 对于细胞周期分析 收集细胞并用 4 的磷酸盐缓冲液 PBS 洗涤 用 7 0 5 0 30 乙醇 4 固定 用 PBS洗涤 加入含 RN L 的碘化丙啶 PI 20 L 溶液 ml 染色细 胞3 0m 最后用流式细胞仪测定 对于细胞凋亡 分析 收集细胞并用 PBS 4 洗涤后 采用 A V EGFP PI双染色法处理细胞 通过流式细胞 仪进行分析 每组实验重复 3次 5 总 RNA提取及 PCR实验 将 HCT 6接种 至 T25瓶养瓶 贴壁后 用不同浓度的 R 或 DMSO 处理细胞 用 TRI z 试剂提取 RNA 逆转录试剂盒 制备 DNA 最后用半定量 PCR检测目的基因的表 达 PCR引物序列为 GAPDH 上游引物 5 CAAC GAATTTGGCTACAGCA 3 下 游 引 物 5 AGGG GAGATTCAGTGTGGTG 3 BMP7 上 游 引 物 5 GGCAGGACTGGATCATCG 3 下游引物 5 AAGTG GACCAGCGTCTGC 3 每组实验重复 3次 6 W b 实验 将 HCT 6细胞接种至 6 孔板 用不同浓度 R 或与相应的重组腺病毒处理 在设定的时间点 收集细胞裂解液并煮 0m 将 所有样品进行 SDS PAGE电泳 并转移到 PVDF膜 F E R p HCT 6 A CCK 8 w d p v R HCT 6 B W b w d R 上 依次与相应的一抗和辣根过氧化物酶标记的二 p v PCNA HCT 6 GAPDHw d d 抗孵育 采用 ECL试剂盒显影成像 每组实验重复 C F w m w d 3次 0 5 P 0 0 v R HCT 6 P 0 7 统计学分析 本实验数据分析所 用 软 件 为 珋± SPS S 0 数据表示为 组间比较采用 SNK 2 2 R 对 HCT 6细胞凋亡的影响 检验法 结果显示 R 在 HCT 6细胞中 升高 B d水平的同 W b

3 634 中国药理学通报 C P m B 2 0 8M 3 4 5 时 降低 B 2的水平 F 2A A V EGFP染 3B 3C 结果提示 R 抑制 HCT 6细胞增殖的 色结果表明 R 能增加细胞凋亡数量 F 2B 结 作用可能与促进 BMP7表达有关 果提示 R 对 HCT 6细胞的凋亡具有促进作用 2 4 BMP7对 R 抑制 HCT 6细胞增殖作用的 2 3 R 对 HCT 6细胞中 BMP7表达水平的影 影响 响 W b 结果显示 BMP7在常见的结肠癌 CCK 8测定结果显示 过表达 BMP7能降低 的抗增殖作用 癌细胞的生存活力 且明显增强 R 细胞 HCT 6 SW4 80 L V HT2 9 C CO2 S W6 20 BMP7抗体能部分逆转 R 对 HCT 6细胞的抗增 以及 FHC细 胞 中 均 有 表 达 但 在 结 肠 癌 细 胞 中 殖作用 F 4A W b 结果表明 BMP7增 BMP7的表达要明显高于 FHC细胞 F 3A PCR 加 R 上调 B d水平的作用 同时也增强 R 降低 和 W b 分析结果显示 R 能以浓度和时间 B 2水平的作用 F 4B BMP7抗体减弱 R 对 依赖的方式上调 BMP7的 mrna和蛋白水平 F B d和 B 2蛋白水平的影响 F 4C 结果提示 F 2 E R pp d HCT 6 A W b w d R p v B d db 2 HCT 6 GAPDHw d d B A VEGFP w d R p p HCT 6 F 3 E R p BMP7 HCT 6 A W b w d d p BMP7 dfhc GAPDHw d d B PCR w d R mrna p BMP7 HCT 6 C W b w d R p v BMP7 HCT 6 GAPDHw d d

4 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018May;34(5) 635 Fig4 EfectsofBMP7onanti cancer activityofresinhct116cels A:CCK 8asayresultsshowedtheefectofBMP7orBMP7specific antibodyontheanti proliferationefectofresonhct116cels. P< 0 05, P<0 01vscontrol; # P<0 05, ## P<0 01vsResgroup;B: WesternblotanalysisresultsshowedtheefectofBMP7onproteinlevels ofbadandbcl 2afectedbyResinHCT116cels,GAPDHwasusedas loadingcontrol;c:westernblotasayresultsshowedtheefectofbmp7 specificantibodyonproteinlevelsofbadandbcl 2afectedbyResin HCT116cels,GAPDHwasusedasloadingcontrol. BMP7 参与介导 Res 对人结肠癌细胞的增殖抑制作用, 但具体机制不详 2.5 BMP7 通过 PI3K/Akt 信号影响 Res 抑制 HCT116 细胞增殖的作用 Westernblot 分析结果显示,Res 对 Smad1/5/8 磷酸化水平无明显影响 (Fig5A), 但能降低 Akt1/2 和磷酸化 Akt1/2/3(p Akt1/2/3) 的水平 (Fig5B) 提示 BMP7 对 Res 抗增殖作用的影响可能并非由经典 BMPs/Smads 信号介导, 而是与 PI3K/Akt 信号有关 进一步 Western blot 检测结果显示, 过表达 BMP7 增强 Res 降低 Akt1/2 和 p Akt1/2/3 水平的作用 (Fig5C),BMP7 抗体明显减弱 Res 的这种作用 (Fig5D) 以上结果提示,Res 抑制 HCT116 细胞增殖的作用可能与上调 BMP7 表达, 进而抑制 PI3K/Akt 信号转导有关 2.6 BMP7 和 Res 对 HCT116 细胞中 PTEN 磷酸化的影响 Westernblot 分析结果显示,Res 对 HCT116 细胞中 PTEN 的总蛋白水平无明显影响, 但明显降低 PTEN 的磷酸化水平 (Fig6A) 过表达 BMP7 可增强 Res 降低 PTEN 磷酸化水平的作用 (Fig6B), 而 BMP7 抗体能减弱 Res 降低 PTEN 磷酸化水平的作用 (Fig6C) 结果提示, 在 HCT116 细胞中 Res 可上调 BMP7 表达, 从而抑制 PTEN 的磷酸化, 最终降低 PI3K/Akt 信号的转导活性 3 讨论结肠癌是临床常见的恶性肿瘤, 每年约 60 万人因患结肠癌而死亡 [1] 尽管结肠癌的治疗已取得较大的进展, 但预后仍不理想 因此, 临床仍急需低毒而高效的药物来治疗结肠癌 本研究表明,Res 能明显抑制 HCT116 细胞增殖并促进其凋亡,Res 的这种作用可能与上调 BMP7 表达, 进而抑制 PTEN 的磷酸化, 并最终降低 PI3K/Akt 信号传导活性有关 Res 主要用作营养补充剂, 具有保护心血管 抗血小板聚集 抗氧化 抗炎 降血糖等药理作用 [11] 研究证明,Res 可以抑制多种肿瘤细胞增殖, 如结肠癌 研究表明,Res 的抗癌活性可能与多种信号或因子有关, 如抑制 TNF α p38mapk PI3K/Akt 信号等 [12], 但具体的分子机制尚不十分清楚 BMPs 是属于 TGF β 超家族成员,BMPs 对细胞的增殖 分化和凋亡具有调节作用 因此,BMPs 的功能异常与多种肿瘤有关, 如 BMP2 BMP6 BMP7 [8] BMPs 不但能通过 BMPs/Smads 信号实现对多种生理过程的调节, 还可通过非经典 BMPs/Smads 信号发挥作用, 如 PI3K/Akt MAPK NF κb 等 [13] 在本研究中, 我们发现 Res 可以提高 HCT116 细胞中 BMP7

5 636 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018May;34(5) Fig5 EfectsofBMP7onPI3K/AktsignalingafectedbyResinHCT116cels A:WesternblotanalysisresultsshowedtheefectofResonproteinlevelsofSmad1/5/8andp Smad1/5/8,GAPDHwasusedasloadingcontrol; B:WesternblotanalysisresultsshowedtheefectofResonproteinlevelsofAkt1/2andp Akt1/2/3inHCT116cels,GAPDHwasusedasloadingcon trol;c:westernblotanalysisresultsshowedtheefectofbmp7onproteinlevelsofakt1/2andp Akt1/2/3afectedbyResinHCT116cels,GAPDH wasusedasloadingcontrol;d:westernblotanalysisresultsshowedtheefectofbmp7specificantibodyonproteinlevelsofakt1/2andp Akt1/2/3af fectedbyresinhct116cels,gapdhwasusedasloadingcontrol.

6 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018May;34(5) 637 Fig6 EfectsofBMP7onphosphorylationofPTENafectedbyResinHCT116cels A:WesternblotanalysisresultsshowedtheefectofResonproteinlevelofPTENandp PTENinHCT116cels,GAPDHwasusedasloadingcon trol;b:westernblotanalysisresultsshowedtheefectofbmp7onproteinlevelofptenandp PTENafectedbyResinHCT116cels,GAPDHwas usedasloadingcontrol;c:westernblotanalysisresultsshowedtheefectofbmp7specificanti bodyonproteinlevelofptenandp PTENafectedby ResinHCT116cels,GAPDHwasusedasloadingcontrol. 的水平, 外源性 BMP7 能增强 Res 对 HCT116 细胞增殖抑制作用, 但 BMP7 抗体明显减弱 Res 的这种抗增殖作用 提示 BMP7 可能参与介导 Res 对 HCT116 细胞的抗增殖活性, 但机制仍不清楚 由于 BMPs 可通过经典和非经典 BMPs/Smads 信号发挥调节作用, 因此, 本研究对两种信号转导活性进行分析 结果发现,Res 对 Smad1/5/8 的磷酸化无明显影响, 而 Res 本身能促进 BMP7 表达 提示 BMP7 可能通过非经典 BMPs/Smads 信号介导 Res 的抗结肠癌作用 PI3K/Akt 信号对细胞的增 殖 存活和分化具有调节作用, 在多种肿瘤中被过度激活, 并且也是一种非经典的 BMP/Smads 信号 Res 能抑制肿瘤细胞中的 PI3K/Akt 信号 [4], 本研究经 Westernblot 分析也证明,Res 能抑制 Akt 磷酸化 因此, 我们推测 Res 对 PI3K/Akt 信号的抑制作用可能与其促进 BMP7 表达有关 实验结果显示, BMP7 过表达可增强 Res 对 PI3K/Akt 信号的抑制作用, 而 BMP7 抗体则减弱 Res 对 HCT116 细胞中 PI3K/Akt 信号的影响 提示在 HCT116 细胞中, BMP7 可能通过抑制 PI3K/Akt 信号传导来介导 Res

7 638 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018May;34(5) 的抗增殖活性 但 BMP7 在干细胞中能激活 PI3K/ Akt 信号 [14], 导致这种不同的效应可能与细胞种类以及细胞所处微环境有关 PI3K/Akt 信号受到多种因子调节, 如可被 IGF 激活, 但能被 PTEN 抑制 我们推测,BMP7 在 HCT116 细胞中对 PI3K/Akt 信号转导的抑制作用可能与上调 PTEN 有关 结果显示,Res 对 HCT116 细胞中 PTEN 的总蛋白水平无明显影响, 但可以明显降低 PTEN 的磷酸化平, 与文献报道相一致 [15] BMP7 过表达能增强 Res 降低 PTEN 磷酸化水平的作用, 而 BMP7 抗体则明显减弱 Res 在 HCT116 细胞中抑制 PTEN 磷酸化的作用 本研究结果表明,Res 对人结肠癌细胞增殖具有抑制作用, 可能是一种治疗结肠癌的有效药物 Res 的这种作用可能与其促进 BMP7 表达而抑制 PTEN 磷酸化, 最终使 PI3K/Akt 信号转导活性降低有关 课题组将进一步确认在其他结肠癌细胞中 Res 对 BMP7 表达的影响及相关分子机制, 为 Res 用于临床预防和治疗结肠癌提供依据 [ 致谢 : 本实验在重庆市生物化学与分子药理学重点实验室完成 感谢何通川教授 (T.C.HE, 芝加哥大学医学中心 ) 为本实验馈赠所需的重组腺病毒载体 ] 参考文献 : [1] BrennerH,KloorM,PoxCP.Colorectalcancer[J].Lancet, 2014,383(9927): [2] TranNH,CavalcanteLL,LubnerSJ,etal.Precisionmedicine incolorectalcancer:themolecularprofilealterstreatmentstrate gies[j].theradvmedoncol,2015,7(5): [3] NohJK,NaeemM,CaoJ,etal.Herceptin functionalizedpure paclitaxelnanocrystalsforenhanced delivery to HER2 postive breastcancercels[j].intjpharm,2016,513(1 2): [4] LiuYZ,WuK,HuangJ,etal.ThePTEN/PI3K/AktandWnt/ beta cateninsignalingpathwaysareinvolvedintheinhibitoryefect ofresveratrolonhumancoloncancercelproliferation[j].intj Oncol,2014,45(1): [5] 陈前昭, 曾于桦, 邵英, 等. 白藜芦醇抑制人结肠癌细胞增 殖与 p38mapk 的关系研究 [J]. 中国药理学通报,2016,32 (8): [5] ChenQZ,ZengYH,ShaoY,etal.Studyontherelationship betweenp38mapkandtheanti proliferationefectofresveratrol inhumancoloncancercels[j].chinpharmacolbul,2016,32 (8): [6] BragdonB,MoseychukO,SaldanhaS,etal.Bonemorphogenetic proteins:acriticalreview[j].celsignal,2011,23(4): [7] HereraB,García?lvaroM,CruzS,etal.BMP9isaprolifera tiveandsurvivalfactorforhumanhepatocelularcarcinomacels [J].PLoSOne,2013,8(7):e [8] PengJ,YoshiokaY,MandaiM,etal.TheBMPsignalingpath wayleadstoenhancedproliferationinserousovariancancer apo tentialtherapeutictarget[j].molcarcinog,2016,55(4): [9] RenCM,LiY,ChenQZ,etal.Oridonininhibitstheprolifera tionofhumancoloncancercelsbyupregulatingbmp7toactivate p38mapk[j].oncolrep,2016,35(5): [10] MundiPS,SachdevJ,McCourtC,etal.AKTincancer:new molecularinsightsandadvancesindrugdevelopment[j].brj ClinPharmacol,2016,82(4): [11]SadiG,BozanD,YildizHB.Redoxregulationofantioxidanten zymes:post translationalmodulationofcatalaseandglutathione peroxidaseactivitybyresveratrolindiabeticratliver[j].molcel Biochem,2014,393(1 2): [12]YuanSX,WangDX,WuQX,etal.BMP9/p38MAPKises sentialfortheantiproliferativeefectofresveratrolonhumancolon cancer[j].oncolrep,2016,35(2): [13]Sánchez DufhuesG,HiepenC,KnausP,etal.Bonemorphoge neticproteinsignalinginbonehomeostasis[j].bone,2015,80 (11): [14] WangZ,GuoJ.MechanicalinductionofBMP 7inosteocyte blocks glucocorticoid induced apoptosis through PI3K/AKT/ GSK3betapathway[J].CelBiochem Biophys,2013,67(2): [15] JingX,ChengW,WangS,etal.Resveratrolinducescelcycle arestinhumangastriccancermgc803celsviathepten regula tedpi3k/aktsignalingpathway[j].oncolrep,2016,35(1): Studyonrelationshipbetweenanti proliferativeefectof resveratrolandbmp7inhumancoloncancercels ZHUJia hui 1,2,ZENGYu hua 1,2,WANGHan 1,2,LIAOYun peng 1,2,MAYan 1,2,WUKe 1,2,HEBai cheng 1,2 (1.ChongqingKeyLabofBiochemistryandMolecularPharmcology,Chongqing ,China; 2.DeptofPharmcology,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing ,China) Abstract:Aim Tostudytherelationshipbetweenthe anti proliferativeefectofresveratrol(res)andbmp7 onhumancoloncancercelsanditsposiblemolecular mechanism.methods TheproliferationofHCT116 celswasanalyzed with celproliferation inhibition asay,flowcytometry,westernblotandannexinv

8 EGFPstaining.CCK 8,PCRandWesternblotasay wereusedtodeterminetheefectofresonbmp7in HCT116celsandtheposiblemolecularmechanism underlyingthisproces.results Resinhibitedthe proliferation,arestedcelcycleatsphaseandpromo tedapoptosisinhct116cels.resincreasedtheex presionofbmp7mrnaandproteininhct116cels. OverexpresionofBMP7enhancedtheanti proliferative efectofresonhct116celsandpromotedtheres induced apoptosis, whereasbmp7 specific antibody significantlyatenuatedtheseefects.resexertedno apparentefectonthephosphorylationofsmad1/5/8, butdecreasedthephosphorylationofakt1/2/3sub stantialyinhct116cels.overexpresionofbmp7 enhancedtheinhibitoryefectofresonphosphoryla tionofakt1/2/3,whilebmp7specificantibodyre ducedthisefectnotably.resmarkedlydecreasedthe phosphorylationofpten,whichcouldbeboostedby BMP7,butatenuatedbytheBMP7specificantibody. Conclusions Rescaninhibittheproliferationand promoteapoptosisofhct116cels,andtheanti canc eractivityofresmaybemediated byinactivating PI3K/Aktsignalingthroughup regulatingbmp7tode creasethephosphorylationofptenpartly. Keywords:resveratrol;proliferationinhibition;colon cancer;bmp7;pi3k/akt;pten

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