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如肴谷
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1 ３２２中西医结合学报２００７年５月第５卷第３期 Jo urn al o f C hin ese In te g r at ive Me dicin e Ma y ２００７ V ol ５ N o ３灵芝孢子能够调节妊高征大鼠所生幼鼠海马线粒体相关分子物质的水平程进军曾园山熊轶张伟陈穗君钟志强中山大学中山医学院组织胚胎学教研室神经科学研究室广东广州５１００８０目的探讨灵芝孢子对妊高征大鼠所生幼鼠海马线粒体相关分子物质的影响方法用一氧化氮合酶 nit ric o xide sy nt hase N O S 抑制剂 N 硝基左旋精氨酸甲酯 N w nit r o L ar ginine met h ylester L N A M E 给予大鼠腹腔注射制备妊高征模型在此基础上胃饲灵芝孢子应用 cam P 放免法 RT PCR 酶活力检测等技术评价灵芝孢子对妊高征大鼠所生幼鼠海马线粒体相关分子物质水平的影响结果妊高征孕鼠的刚分娩幼鼠海马 ca M P 水平线粒体 D N A m td N A 水平及 A T P 合酶活力都降低 pg c１α 表达水平与正常对照大鼠比较没有变化生后３０ d 的幼鼠海马 cam P 水平 mtdn A 水平 ATP 合酶活力和 pgc１α 表达水平低于正常对照大鼠胃饲灵芝孢子后妊高征大鼠的刚分娩幼鼠和生后３０ d 的幼鼠海马 ca M P 水平和 mt DN A 含量恢复到正常对照大鼠水平 AT P 合酶活力和 pgc１α 表达水平也有恢复性增高结论灵芝孢子具有调节妊高征大鼠所生幼鼠海马线粒体相关分子物质水平的作用关键词大鼠灵芝孢子妊娠高血压海马线粒体线粒体 DN A 中图分类号 R６５１２１文献标识码 A 文章编号１６７２１９７７２００７０３０３２２０６ Ganoderma spores may regulate the levels of mitochondria related molecular substances in hippocampus of young rats birthed by rats with gestational hypertension Jin jun CHENG Yuan shan ZENG Yi XIONG Wei ZHANG Sui jun CHEN Zhi qiang ZHONG Divisio n o f Ne ur oscience Depa rt men t of H istolog y and Embryolog y Z ho ngsha n Medical College Sun Y at sen University Gua ngzho u Guang do ng Province ５１００８０ China Objective To investigate the effects of Ganoderma spores on mitochondria related molecular substances in hippocampus of young rats birthed by rats with gestational hypertension Methods Nitric oxide synthase NOS inhibitor Nw ni tro L arginine methylester L NAME was intraperitoneally injected into pregnant rats to induce gestational hypertension and Ganoderma spores were administered orally The effects of Ganoderma spores on levels of mitochondria related molecular substances in hippocampus of young rats birthed by the rats with gestational hypertension were evaluated with immunoradiometric assay of camp RT PCR analysis of related genes and detection of enzyme activity Results In hippocampus of the new born rats birthed by rats with gestational hypertension the camp level mi tochondrial DNA mtdna level and adenosine triphosphatase ATPase activity were decreased and the expression level of peroxisome proliferator activated receptor gamma coactivator １ alpha pgc１α was unchanged compared to the normal control group The camp level mtdna level ATPase activity and pgc１α expression level in hippocampus of ３０ day post natal rats were lower than those of the rats in normal control group After oral administration of Ganoderma spores the camp and mtdna levels in hippocampus of the new born rats and ３０ day post natal rats recovered almost to the levels of normal control rats and the ATPase activity and pgc１α expression level were also increased significantly Conclusion Ganoderma spores may regulate the levels of mitochondria related molecular substances in hippocampus of young rats birthed by rats with gestational hypertension Keywords rat Ganoderma spores gestational hypertension hippocampus mitochondria mitochondrial DNA Cheng JJ Zeng YS Xiong Y Zhang W Chen SJ Zhong Z Q J Chin Integ r Med Zhong X i Jie H e X ue Bao ２００７５３３２２３２７ Received July ３２００６ published online May １５２００７ Free full tex t PDF is available at w w w jcimjournal com Co rrespondence Prof Yuan shan ZE N G Tel ０２０８７３３１４５２ E mail zengysh mail sysu edu cn

2 中西医结合学报 2007 年 5 月第 5 卷第 3 期 Journ al o f C hinese Int egra tiv e M edicin e, M ay 2007 ; V o l.5, N o 灵芝孢子 ( Ganode rma spore, G S) 是经过现代技术加工处理的灵芝生殖细胞, 具有一定的防治疾病的功效本研究组以往研究发现, 灵芝孢子可以 [ 1, 2 ] 促进受损伤的神经元存活及其轴突再生, 这提示灵芝孢子具有神经生物活性一氧化氮 ( nitro gen m onoxide, NO) 是调控神经系统和心血管系统功能的重要信使分子在妊娠高血压征 ( 妊高征 ) 孕 [ 3 ] 妇的血液中发现,N O 和精氨酸的含量降低我们也发现, 应用一氧化氮合酶 ( nitric o xide syn thase, N O S) 抑制剂 N 硝基左旋精氨酸甲酯 ( N w nitro L arginine m ethylester, L N A M E) 抑制 N O 生成, 可以造成孕鼠的血压升高及其胎鼠和所生幼鼠海马的损伤, 喂服灵芝孢子后可以部分缓解 N O 水平降低引起的损害最新研究提示,N O 可以促进线粒体生物发生 (mitochondrial biogenesis) [ 6 ] 然而, 妊高征孕鼠的 N O 水平降低是否引起其所生幼鼠海马线粒体生物发生障碍, 目前尚未见报道本研究试图探讨灵芝孢子对妊高征大鼠所生幼鼠海马线粒体相关分子物质水平的影响, 为临床服用灵芝孢子干预妊高征提供实验资料 1 材料与方法 1.1 实验动物 SD 成年雌性大鼠 40 只, 体质量 200 ~ 230 g,11 ~ 12 周龄 ;SD 成年雄性大鼠 10 只, 体质量 250 ~ 300 g,13 ~ 15 周龄由中山大学实验动物中心提供, 合格证号为 ( 医动字 ) 第 26 99C016 号按雌雄比例为 2 1 合笼后的第 2 天观察雌鼠阴道黏液 ( 涂片法 ), 有精子者被认为是妊娠 0 天 (E0) 将这些妊娠鼠随机分为 :(1) 正常对照组, 于妊娠 14 ~ 20 d(e14 ~ E20) 腹腔注射生理盐水 + 胃饲蒸馏水 ;(2) L N A M E + 蒸馏水组, 注射 L N A M E + 胃饲蒸馏水 ;( 3) L N A M E + 精氨酸组, 注射 L N A M E + 胃饲 L 精氨酸 100 m g/(k g d), 分 2 次胃饲 ;(4) L N A M E + 灵芝孢子组, 注射 L N A ME + 胃饲灵芝孢子 8 g/( kg d), 分 2 次胃饲 ;(5) 灵芝孢子 + L N A M E + 灵芝孢子组, 注射 L N A M E 前 1 周胃饲灵芝孢子 8 g/(kg d), 注射 L N A M E 后胃饲灵芝孢子 8 g/( kg d), 均分 2 次胃饲每组 5 只除正常对照组每天分两次注射生理盐水和胃饲蒸馏水外, 各组妊娠鼠于 E14 ~ E20 腹腔注射 L N A M E 60 m g/(kg d), 分 2 次注射,2 次之间相隔 10 h 每次注射后 2 h, 再接着胃饲相应的蒸馏水 L 精氨酸或灵芝孢子 1.2 药物 L 精氨酸购自美国 Amresco 公司, L N A M E 购自美国 Sigma 公司灵芝孢子 (2036) 购自 H olistal International Ltd, 批号 GA N SP S L N A M E 用生理盐水配制成溶液, L 精氨酸用蒸馏水配制成溶液, 灵芝孢子用羧甲基纤维素钠配制成溶液 1.3 取材从上述处理的每只孕鼠刚分娩的 0 d () 幼鼠中随机选择 3 只, 取其海马组织, 分别用放射免疫 R T P CR 以及酶活力测定等方法进行相关检测剩余幼鼠饲养至生后 30 d() 后用戊巴比妥钠麻醉后放在冰盘上分离海马组织, 同样用上述方法作各项相关检测 1.4 放射免疫法检测 ca M P 水平每只幼鼠海马组织称质量后, 放入盛有 2 ml 冷冻醋酸缓冲液 (50 m m ol/l,ph 4.75) 的试管内, 在冰上匀浆后加入 2 ml 无水乙醇, 混匀, 静置 5 min,3 500 r/min 离心 15 min, 离心半径为 16.3 cm 60 烘箱中烘干, 4 保存测量时用 1 m l 醋酸缓冲液溶解后取 0.1 ml 检测检测步骤及结果计算按照试剂盒要求操作 ca M P 放免试剂盒购自上海中医药大学核医学实验室 1.5 R T P CR 检测相关基因转录和幼鼠中各收集 3 例分离海马组织将获取的每只幼鼠海马组织, 按照 T rizol 试剂 ( 北京赛百胜公司 ) 说明一步法提取组织总 R N A 取 2 μl R N A 经 RT 反应体系作用, 在下列条件下合成 cd NA :70 5 min, min,94 5 min 取 R T 产物 1 μl 对如下引物进行 P CR Pero xisome proliferat or activat ed receptor gam ma coactiva tor 1 alpha (pgc1α) 引物序列为 : 上游引物,5'cacagattcaagccagtgctac3'; 下游引物,5'cggagagtt aaaggaagagcaa3' tfam 引物序列为 : 上游引物,5'gaaac gcctaaagaagaaag ca3' ; 下游引物, 5'aag tcca tg ggctacagaaaaa3' G A PD H 引物序列为 : 上游引物,5'aacaagt aaccctcaaccct g3'; 下游引物,5'acac cctct gatacccacat t3' P CR 反应程序 :94 预变性 2.5 min 然后进入以下 29 个循环 :94 变性 45 s,54 退火 1 min ; 72 延伸 1.5 min 循环完毕,72 延伸 5 min 中止反应 P CR 产物于 1 % 琼脂糖凝胶电泳, 凝胶成像系统拍照,Imag et ool 软件进行目的条带光密度分析 1.6 m td NA 水平测定将获取的每只幼鼠海马组织, 按照试剂盒 ( 上海杰美基因公司 ) 说明提取 D NA, 并按照如下引物应用 P CR 分别扩增 C OX3 C O X4 和 G APDH COX3 引物序列为 : 上游引物, 5'at gaccactaacaggagccct a3'; 下游引物,5'taggggat tta aagg ggt gat t3' COX4 引物序列为 : 上游引物, 5'ggactca gaactcaagg gacac3'; 下游引物,5't gat gt t gg t cactt tt tccac3' 扩增产物应用 1.5 % 琼脂糖凝胶电

3 324 中西医结合学报 2007 年 5 月第 5 卷第 3 期 Journ al o f C hin ese Inte grat ive Medicin e, Ma y 2007 ; V ol.5, N o.3 泳, 凝胶成像系统拍照,Im age T ool 图像分析软件分析目的条带光密度, 进行统计学分析 1.7 酶活力测定乳酸脱氢酶 (lactat e dehydro genase, LDH) 乳酸丙酮酸激酶 (pyruvate kinase, PK ) A T P 合酶 ( A T Pase) 和谷氨酰胺合成酶 (g lu tathione synthetase, G S) 测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所各酶活力和组织乳酸含量测定按照试剂盒说明书步骤进行 1.8 统计学方法上述所得各组实验数据做单因素方差分析, 数据处理均采用 SPSS 10.0 统计分析软件 2 结果 2.1 海马 ca MP 水平 L N A ME + 蒸馏水组海马 ca M P 水平相比于正常对照组有所下降 L N A M E + 蒸馏水组海马 ca M P 水平低于其他 4 组, 且差异有统计学意义 L N A M E + 灵芝孢子组和灵芝孢子 + L NA M E + 灵芝孢子组的和海马 ca M P 水平均恢复到正常对照组水平, 而且明显高于 L N A M E + 蒸馏水组水平见表 1 表 1 各组和幼鼠海马 camp 水平 Table 1 camp level in hippocampus of and young rats c A M P l evel o f y o un g ra ts Group of pregnant rats n N or m al cont rol ± ± 0.40 L N A M E + dist illed w a ter ± ± 0.27 L N A M E + arg inin e ± ± 0.13 L N A M E + GS ± ± 0.42 GS + L N A M E + GS ± ± 0.60 P < 0.05, P < 0.01, v s L N A M E + distil led w a ter group. : n ew n at al ra ts ; :30 da y p ost n at al ra ts. 2.2 pgc1α 与 tfam 基因表达与正常对照组比较,L NA M E + 蒸馏水组的海马线粒体 pgc1α 表达差异无统计学意义, 但是海马线粒体 pgclα 表达明显下降和海马线粒体 tfam 表达均降低 L N A M E + 灵芝孢子组和海马线粒体 pgc1α 及 t fam 表达比 L N A M E + 蒸馏水组的均有增高灵芝孢子 + L NA M E + 灵芝孢子组海马线粒体 pgclα 和 tfam 表达与 L N A M E + 蒸馏水组比较, 差异无统计学意义, 但是海马线粒体 pgclα 和 tfam 表达则明显增高 L N A M E + 精氨酸组海马线粒体 tfam 表达比 L NA M E + 蒸馏水组的有所增高, 其他则未见有明显差异应用 RT P CR 结合图像分析技术检测线粒体生物发生相关基因表达的结果见图 1, 表 m tdn A 水平 CO X3 是线粒体基因组编码的 [ 7 ] 一种基因应用文献推荐的方法比较各组海马 mtd N A 水平, 海马 m tdn A 水平在正常对照组与 L N A M E + 蒸馏水组之间差异无统计学意义, 但是海马 mtdn A 水平在 L N A M E + 蒸馏水组明显低于正常对照组 L NA M E + 灵芝孢子组海马 m td NA 水平比 L NA M E + 蒸馏水组明显增高各组海马 m tdn A 水平与 L N A ME + 蒸馏水组相比, 差异有统计学意义, 其中应用灵芝孢子的 2 个组 m td N A 水平基本恢复到正常对照组水平而和海马细胞核基因组编码的 COX4 表达水平各组间未见明显差异见图 2 表酶活力检测在海马中,LD H 活力在 L N A M E + 蒸馏水组有所升高, 与正常对照组相比, 差异有统计学意义 L N AM E + 灵芝孢子组灵芝孢子 + L N A M E + 灵芝孢子组和 L N A M E + 精氨酸组海马 LD H 活力基本恢复到正常对照组水平然而, 各组海马 LDH 活力之间均无差异与正常对照组比较, 和海马乳酸水平在 L N A M E + 蒸馏水组没有明显变化, 但 L NA M E + 精氨酸组海马乳酸水平明显升高与 L N A M E + 蒸馏水组比较, 应用灵芝孢子的 2 个组和海马乳酸水平均有所下降与正常对照组相比, 海马 PK 活力在 L N A ME + 蒸馏水组和 L N A M E + 精氨酸组明显升高, 应用灵芝孢子的 2 个组均有下降, 基本与正常对照组无差异各组海马 PK 活力基本无差异与正常对照组比较, 和海马 A T P 合酶在 L N A M E + 蒸馏水组和 L N A ME + 精氨酸组明显下降, 应用灵芝孢子的 2 个组则 A T P 合酶活力部分恢复与正常对照组比较, 和海马 G S 酶活力在 L N A M E + 蒸馏水组均有不同程度的降低 L N A M E + 精氨酸组海马 G S 酶活力与 L NA M E + 蒸馏水组没有差异应用灵芝孢子的两个组海马 G S 酶活力比 L NA M E + 蒸馏水组有所升高, 其中灵芝孢子 + L NA M E + 灵芝孢子组基本恢复到正常对照组水平应用灵芝孢子的 2 个组海马 G S 酶活力比 L N A ME + 蒸馏水组的明显增高见表 4 和表 5

rginine group, ; g : L N A M E + G S gro up, ; p : GS + L N A M E + GS group, ; N : N or ma l co ntrol g roup, ; M : L N A M E + distil led w at er gro up, ; A : L N A M E + arg inin e group, ; G : L

4 中西医结合学报 2007 年 5 月第 5 卷第 3 期 Journ al o f C hinese Int egra tiv e M edicin e, M ay 2007 ; V o l.5, N o 图 1 RT PCR 检测 pgclα 和 tfam 表达水平 Figure 1 Expression levels of pgclα and tfam determined by RT PCR n : N or m al cont rol g roup, ; m : L N A ME + distilled wa ter gro up, ; a : L N A M E + a rginine group, ; g : L N A M E + G S gro up, ; p : GS + L N A M E + GS group, ; N : N or ma l co ntrol g roup, ; M : L N A M E + distil led w at er gro up, ; A : L N A M E + arg inin e group, ; G : L N A M E + G S group, ; P : GS + L N A ME + GS group, ; L : 100 bp D N A m arker. n = 3. : ne w b orn rat s ; : 30 d ay pos t n a tal rat s. 表 2 各组和幼鼠海马线粒体生物发生相关基因表达水平 Table 2 Expression levels of mitochondrial biogenesis related genes in hippocampus of and young rats tfam expression of young rat s pgclα expression of y oung rats Group of pregnant rats n N or mal cont rol ± ± ± ± 0.24 L N A M E + dist ille d w a ter ± ± ± ± 0.10 L N A M E + arg inin e ± ± ± ± 0.44 L N A M E + GS ± ± ± ± 0.19 GS + L N A M E + GS ± ± ± ± 0.58 P < 0.05, P < 0.01, vs n or m al co ntro l group ; P < 0.05, P < 0.01, v s L N A M E + distil led wa t er group. : n ew n at al ra ts ; :30 da y p ost n at al ra ts. 图 2 PCR 扩增 COX3 和 COX4 基因 Figure 2 COX3 and COX4 gene amplification through PCR L : 100 bp D N A marker ;n : N ormal control group, ;m : L N A ME + distilled w ater group, ; a : L N A ME + arginine group, ; g : L N A ME + GS group, ; p : GS + L N A M E + GS gro up, ; N : Normal control gr oup, ; M : L N A ME + distilled wat er gro up, ; A : L N A M E + arginine group, ; G : L N A ME + GS group, ; P : GS + L N A ME + GS group,. n = 3. : new b orn rat s ; : 30 day post nat al rats. 表 3 各组和幼鼠海马 mtdna 水平 Table 3 mtdna levels in hippocampus of and young rats Group of pregnant rats n C O X3/ G AP DH of youn g ra t s C O X4/ G AP DH of y oun g rat s N or mal cont rol ± ± ± ± 0.17 L N A M E + dist ille d w a ter ± ± ± ± 0.12 L N A M E + arg inin e ± ± ± ± 0.14 L N A M E + GS ± ± ± ± 0.25 GS + L N A M E + GS ± ± ± ± 0.14 P < 0.05, P < 0.01, vs n or m al control gro up ; P < 0.05, P < 0.01, v s L N A M E + dist illed w at er group. : ne w b orn ra ts ; :30 da y p ost n at al ra ts.

5 326 中西医结合学报 2007 年 5 月第 5 卷第 3 期 Journ al o f C hin ese Inte grat ive Medicin e, Ma y 2007 ; V ol.5, N o.3 Group of pregnant rats 表 4 各组幼鼠海马代谢相关酶活力 Table 4 Activities of metabolism related enzymes in hippocampus of young rats n L DH ( U / g pro t) P K ( U/ g pro t) Enzy me activity of young rats GS ( U/ m g pro t) Lac ta te ( m m ol/ g pro t) A T Pase [μm ol pi/( m g pro t h)] N or m al control ± ± ± ± ± 0.09 L N A M E + distilled w a ter ± ± ± ± ± 0.22 L N A M E + arginin e ± ± ± ± ± 0.12 L N A M E + GS ± ± ± ± ± 0.08 GS + L N A M E + GS ± ± ± ± ± 0.19 P < 0.05, P < 0.01, vs n orm a l co ntro l group ; P < 0.05, P < 0.01, v s L N A ME + distilled w at er gro up. : n ew b orn ra ts. Group of pregnant rats 表 5 各组幼鼠海马代谢相关酶活力 Table 5 Activities of metabolism related enzymes in hippocampus of young rats n LD H ( U/ g p rot) P K ( U/ g prot) Enzyme activity of y oung rat s GS ( U/m g pro t) L acta t e A T Pase ( m m o l/ g pr o t) [(μ m o l pi/( m g p rot h)] N or m al control ± ± ± ± ± 0.07 L N A M E + distilled w a ter ± ± ± ± ± 0.37 L N A M E + arginin e ± ± ± ± ± 0.19 L N A M E + GS ± ± ± ± ± 0.11 GS + L N A M E + GS ± ± ± ± ± 0.10 P < 0.05, P < 0.01, vs no rm al control g ro up ; P < 0.05, P < 0.01, vs L N A ME + distilled wat er group. :30 day post natal rats. 3 讨论在前期研究中, 我们已经观察到 N O S 抑制剂 L NA M E 可以降低妊娠小鼠血清 N O 水平, 同时其 E21 胎鼠海马的 N O S 表达受到抑制, 但是其所生 () 幼鼠海马的 N OS 表达却比同龄幼鼠有所 [ 4 ] 增加, 结果 E21 和海马神经元死亡增多关于 NO S 表达降低或增强是如何引起细胞死亡的机 [ 7 ] 制, 目前还不清楚最近有研究报道, 抑制未成熟的海马神经元 N O S 表达会引起线粒体依赖的细胞凋亡然而, 在成熟的海马神经元中, 促进其 N OS 表达则可以使细胞死亡这提示在海马神经元的不同发育时期,N O 的作用效果是不一样的那么, N O 是否通过调节细胞线粒体相关分子物质水平的变化来影响细胞的死亡, 这就是本研究在先前研究结果的基础上感兴趣探讨的问题之一 C O X3 是线粒体基因组 (m tdn A ) 的一个编码基因, 该基因的表达产物是作为线粒体呼吸链上的细胞色素 C 氧化酶复合体的一个成员通过分析 C O X3 基因的拷贝数与细胞核基因组编码的 G A PD H 基因拷贝数的比值, 在一定程度上可以反 [ 8 ] 映 m tdn A 的水平 CO X4 基因的表达产物是作为线粒体呼吸链上的细胞色素 C 氧化酶复合体的另一个成员在本研究中发现,NO S 抑制剂可以降低妊娠大鼠所生幼鼠海马 mtd N A 水平但是, 在幼鼠海马则没有观察到 m tdn A 水平下降的现象, 其原因可能是多方面的其中可能与本研究检测的样本量较少有关, 也可能与未使用定量 P CR 检测方法有关 pgclα 是与 m tdn A 转录水平有密切关系的一种转录因子本研究应用 NO S 抑制剂后, 在海马中 pgclα 表达明显降低 pgclα 作为一种转录因子可以促进细胞核来源的呼吸因子 N RF 表达, 进而促进 m tdn A 转录和复制 pg clα 也有可能调 [ 9 ] 节 ca M P 的水平本研究发现, 应用 NO S 抑制剂后幼鼠海马的 ca MP 水平也明显下降, 提示 pgclα 的表达与 ca MP 的水平之间可能存在一定关系另外,pgclα 通过调节 N RF 家族系列因子, 可能促使 tfam 的转录 tfam 是细胞核基因组编码的另一种转录因子, 该因子调控 m td NA 转录过 [ 1 0 ] 程当 pgclα 表达降低时也可能会影响 t fam 的表达, 因为本研究观察到, 应用 N O S 抑制剂后, 和海马的 tfam 表达水平也是明显降低的线粒体是细胞能量的源泉正常情况下, 其主要能量代谢方式是以有氧代谢三羧酸循环为主当局部组织微环境改变时, 细胞能量代谢方式也可能随之发生变化此外, 有研究证实,pgclα 也具有调节线粒体能量代谢的作用本研究应用 N OS 抑制剂后, 海马无氧糖酵解相关的酶如 PK LDH 等活力升高然而, 和海马有氧三

6 中西医结合学报 2007 年 5 月第 5 卷第 3 期 Journ al o f C hinese Int egra tiv e M edicin e, M ay 2007 ; V o l.5, N o 羧酸循环相关的酶如 ATP 合酶活力明显降低这提示 NOS 抑制剂可以干扰出生后幼鼠海马的能量代谢过程这一现象产生的原因可能是由于海马细胞线粒体相关分子物质水平的变化造成的, 也可能是海马组织缺氧状态及其兴奋性氨基酸代谢失常而引发线粒体的功能障碍等因素参与因为在本研究中和海马 G S 酶活力明显下降, 这表明海马细胞的谷 [ 4 ] 氨酸代谢可能出现障碍我们先前的研究也表明应用 NOS 抑制剂后海马的低氧诱导因子 1α(hypoxia inducible factor 1α, HIF 1α) 表达是增加的, 提示海马组织有缺氧状态这些研究结果都支持上述有关线粒体功能障碍原因的推测服用灵芝孢子后, 妊高征孕鼠血清 N O 恢复到正常水平, 从而改变其胎鼠和所生幼鼠海马神经元的 N OS 表达水平, 缓解海马组织缺氧状态, 结果恢复其所生幼鼠的空间学习记忆和运动能力, 可能起到保护胎鼠及其所生幼鼠海马结构的正常发育以及健全海马正常功能的效果在本研究中发现, 应用灵芝孢子后海马细胞的 ca M P 水平升高,mtDNA 含量增加, 相关代谢酶的活力基本恢复到正常水平这些效应可能参与了上述海马结构与功能的修复过程这些效应有可能与灵芝孢子提高海马细胞的 pgclα 表达水平有关我们推测, 灵芝孢子来源的一些生物活性分子直接或间接诱导 pgclα 的表达增加, 进而调节线粒体相关分子物质水平另外, 海马组织缺氧状态可以降低 mtdna 转录和复制, 降低线粒体电子呼吸链中酶的活力, 缓解缺氧以后可以逆转海马线粒体这 [ 1 1 ] 些损伤性变化 [ 4 ] 够缓解海马组织缺氧状态我们前期研究发现, 灵芝孢子能这可以部分解释灵芝孢子具有调节妊高征大鼠所生幼鼠海马线粒体相关分子物质水平的作用, 从而达到维护线粒体正常能量代谢的目的在本研究中, 我们设置了两种服用灵芝孢子的方案综合而言, 两组之间的药效差异并不明显, 提示预服用灵芝孢子组可能因预先服用的时间较短, 所以与后服用灵芝孢子组的药效之间无明显差别 REFERENCES 1 Zhang W, Zeng YS, Chen SJ. Effects of ganoderma spore on survival and expression of N T 3 and NOS of spinal moto r neuron follo wing ventral root cut in the rat. Jie Pou Xue Bao ; 36(5) : Chinese with abstract in English. 张伟, 曾园山, 陈穗君. 灵芝孢子对大鼠脊神经腹根切断后脊髓运动神经元存活及其 N T 3 NOS 表达的影响. 解剖学报 ;36(5) : Zhang W, Zeng YS, Wang Y,et al.primary study on pro teomics abo ut ganoderma lucidium spores promoting surviv, al and axon regeneration of injured spinal motor neurons in rats. Zhong Xi Yi Jie He Xue Bao.2006 ;4(3) : Chinese with abstract in English. 张伟, 曾园山, 汪洋, 等. 灵芝孢子促进大鼠受损伤脊髓运动神经元存活及其轴突再生相关蛋白质组学的初步研究. 中西医结合学报 ;4(3) : Kim YJ, Park HS, Lee H Y,et al.reduced L arginine lev el and decreased placental enos activity in preeclampsia. Placenta.2006 ;27(4 5) : Cheng JJ, Zeng YS, Zhang HJ, et al.intervention mecha nisms of Gandoderma spore on injured learning and memory ability of postnatal rats induced by gestational hypertension. Jie Pou Xue Za Zhi.2006 ;29(Suppl) : Chinese. 程进军, 曾园山, 张惠君, 等. 灵芝孢子对妊娠大鼠高血压造成生后幼鼠学习记忆能力下降的干预机制. 解剖学杂志.2006 ;29( 增刊 ) : Cheng JJ, Zeng YS, Zhang HJ, et al.intervention effects of Ganoderma spore on NOS expression and learning and memory ability of hippocampus of fetal and postnatal rats induced by gestational hypertension. Zhong Shan Da Xue Xue Bao ( Yi Xue Ke Xue Ban) ; 27(3S) : Chinese with abstract in English. 程进军, 曾园山, 张惠君, 等. 灵芝孢子对妊娠高血压致胎鼠及其出生后幼鼠海马 NOS 表达和学习记忆功能异常的干预作用. 中山大学学报 ( 医学科学版 ) ; 27 (3S) : Nisoli E, Tonello C, Cardile A, et al.calorie restriction promotes mitochondrial biogenesis by inducing the expres sion of enos. Science.2005 ; 310(5746) : Marks JD,Boriboun C, Wang J. Mitochondrial nitric oxide mediates decreased vulnerability of hippocampal neurons from immature animals to NMDA. J Neurosci ; 25 (28) : Gahan M E, Miller F, Lewin SR, et al. Quantificatio n of mitochondrial DNA in peripheral blood mononuclear cells and subcutaneous fat using real time polymerase chain reac tion.j Clin Virol ; 22(3) : Lin J, Wu H, Tarr PT, et al. Transcriptional co activato r PGC 1 alpha drives the formation of slow twitch muscle fibres. Nature.2002 ;418(6899) : Virbasius JV, Scarpulla RC. Activation of the human mito chondrial transcription factor A gene by nuclear respiratory factors : a potential regulatory link bet ween nuclear and mitochondrial gene expression in organelle biogenesis. Proc Natl Acad Sci U S A.1994 ;91(4) : Vijayasarathy C, Damle S, Prabu SK, et al. Adaptive changes in the expression of nuclear and mitochondrial encoded subunits of cytochrome C oxidase and the catalytic activity during hypoxia. Eur J Biochem ; 270 (5) :

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环球中医药 2016 年 5 月第 9 卷第 5 期摇 Global Traditional Chinese Medicine, May 2016,Vol 郾 9, No 郾 5 摇 557 两种电针对脊髓损伤 14 天后大鼠运动功能神经元及 MEK2 p 鄄 ERK1 表达的影响论著宋良玉摇吕威摇景泉凯摇莫雨