主要用途 GenIII 微孔板使用固定在微孔板上的 94 个不同的生化试验来对广泛的革兰氏阳性和阴性细 菌提供表型概况并进行鉴定 1,2 Biolog 鉴定系统 (Microlog-M,MicroStation,Omnilog ) 中的 软件通过读取 GenIII 微孔板上所表现出的表型图谱来对细菌

Similar documents
Microsoft Word - 18-滕炜鸣_new_.doc

主要用途 FF 微孔板使用固定在微孔板上的 95 个不同的生化试验来对广泛的真菌 ( 包含丝状真菌及酵母 ) 提供表型概况并进行鉴定 Biolog 鉴定系统中的软件 (Microlog TM 3) 通过读取 FF 微孔板上所表现出的表型图谱来对真菌进行鉴定 FF 鉴定板适合鉴定新鲜的培养物, 对于在

第 期 黄雪莲等 响应面优化绿色木霉菌培养基 材料与方法 菌种 仪器与试剂 菌种的活化 单因素试验 响应面优化试验 优化工艺的验证 数据处理 结果与分析

Microsoft Word - Augmentin IV_GDS28-IPI09_C approval.doc

Microsoft Word - Augmentin 1g_中文IPI06L doc


福建农业学报 材料与方法 试验菌株 引物 主要仪器 主要试剂 细菌培养 模板的制备 反应条件 扩增产物的检测 特异性试验 敏感性试验 分离菌株检测 产物的克隆及序列测定 结果与分析

Microsoft Word - Augmentin 375mg&Syrup 156mg_GDS21-IPI12_C approval.doc


实验室常用培养基的配制方法


材料! 方法! # 基因的扩增及其序列分析

~p10z1w1g2l14x4

Qubit-DNA RNA 总浓度测定 dsdna BR Assay Kits 各试剂加样量 : Buffer 标准 1 标准 2 样品 试剂 ( 荧光染色 ) 总量 ( 溶液体积 ) 50 或 250ml 1 或 5ml 1 或 5ml 待测 250µl 或 1.25ml 原始浓度 未知 0 ng

菌 量 ( 表 三 ) 如 果 欲 分 離 N. gonorrhoeae B. pertussis 或 C. diphtheriae 及 少 數 病 毒 時, 應 先 告 知 檢 驗 室 以 便 準 備 特 殊 的 分 離 培 養 基 鏈 球 菌 性 咽 喉 炎 診 斷 鏈 球 菌 性 咽 喉 炎,


Microsoft Word - 20周丽英.doc

.., + +, +, +, +, +, +,! # # % ( % ( / 0!% ( %! %! % # (!) %!%! # (!!# % ) # (!! # )! % +,! ) ) &.. 1. # % 1 ) 2 % 2 1 #% %! ( & # +! %, %. #( # ( 1 (

# % & ) ) & + %,!# & + #. / / & ) 0 / 1! 2

目录 Aerobic Plate Count (APC) 菌落总数... 3 Alicyclobacillus spp 脂环酸芽孢杆菌... 3 Bacillus cereus 蜡样芽孢杆菌... 3 Campylobacter spp 弯曲杆菌... 4 Clostridium perfringe


Microsoft Word - 24.doc

KWIK-STIK Microorganisms


目录 附录 A 实验室结果统计汇总和评价... 1 附录 A1 菌落总数项目结果汇总和统计评价... 1 附录 A2 大肠菌群项目结果汇总和统计评价... 5 附录 A3 粪大肠菌群项目结果汇总和统计评价... 9 附录 A4 大肠杆菌项目结果汇总和统计评价 附录 A5 沙门氏菌项目结果

上海第二医科大学教案

untitled

b1-¼ï¤l©ú19-27

婴幼儿教育(四).doc

Microsoft Word - 崔宝臣.doc

材料與方法

(Microsoft Word \274B\313\241\265\330.doc)

材料 方法


<4D F736F F D20AAFEA5F331A147A655BAD8C0CBC5E7AE65BEB9A4CEB1C4B6B0BBA1A9FA2E646F63>


pdf

最新执法工作手册(九十八)

投影片 1

目录 一 2014 年全院 5533 株细菌分布及前 10 位主要细菌耐药性结果 二 按照标本类型 ( 或感染部位 ) 进行的病原菌构成及药敏分析 1 呼吸道标本病原菌构成及药敏分析 2 尿液标本病原菌构成及药敏分析 3 血流 骨髓标本病原菌构成及药敏分析 4 皮肤软组织标本病原菌构成及药敏分析 5

(Microsoft Word - \254\354\256i\(1\).doc)

绿化养殖

untitled

目 次 前 言... II 1 范 围 规 范 性 引 用 文 件 术 语 和 定 义 技 术 要 求 电 器 安 全 性 要 求 卫 生 安 全 性 要 求 抗 菌 除 菌 功 能 要 求

GB/T GB/T GB/T GB/T GB/T


实验 1 显微镜的构造和使用

%! # # % % & # ( ) ( +, & +, +, & +, & +, +, &!

320 农业机械学报 2017 年 6 0orpH valueof5 0,thegrowthofP.fragiwasinhibited,andat15~25,1% NaClorpH value of6 0,pH valueof5 0andat33,1% NaLthegrowthofP.fragiwa

食品簡易檢查

# ( + + # + # 6 +,! + # +! +, + # ( + ) ( + ( + ) + 7! + # + /8 + ) ( +! + #. + ( +, +! + # + # + + ( ! ( + ) ( + ) +, + ( + 9% +! +, + ( +


附件四:作品送展表(夾於作品說明書第一頁,請勿裝訂)

untitled

实验指导编写模板



Chine ferments fromage


32 500

高雄市立五福國民中學95學年度第2學期第3次段考二年級自然與生活科技學習領域試題卷

游戏攻略大全(三十一).doc

% %! # % & ( ) % # + # # % # # & & % ( #,. %

l 幼兒肚臍處突出-不要緊張

奈米標章驗證體系

目录样品说明 :... 3 一 [ 计数 ]Drinking Water ENUMERATION TESTS 饮用水计数检测 [ 计数 ]Total Coliforms and E. Coli 总大肠菌群 & 大肠杆菌 [ 计数 ]Colony Counts 菌落计数..

胶体金测试片0322

,4, (GB/T , 2010),25 g 225 ml 4 (BPW), (MagneticNanoparticles, O157 MNPs) 1.2.2, -NMR, (150 r/min) 37 18~24 h ( 3% NaCl), 2 (CFU/mL)

校园之星

Claforan

: MALDI-TOF 417, (m/z), ;, ( ), [1] MALDI-TOF-MS,, ( ) [2], PCR,,, PCR,,, MALDI-TOF-MS, [3],,,, MALDI-TOF-MS, O157:H7, ( BioTyper Mascope ), [4 9] MAL

BIOTECON Diagnostics 1998, real-time PCR (GMOs) BIOTECON Diagnostics, ISO 9001:2008, service laboratory DIN EN ISO/IEC BIOTECON Diagnostics, ( (

彩页维生素类质控品.cdr

新建 Microsoft PowerPoint 演示文稿.ppt

PowerPoint 演示文稿

牛初乳和乳珍

untitled

微生物学通报 Microbiology China 研究报告 NOV 20, 2010, 37(11): by Institute of Microbiology, CAS 茶多酚对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的抑菌机理 * 钱丽红陶妍

Microsoft Word _朱静鸿-二校 30

期 周 凯等 欧 洲 鳗 鲡 红 头 病 病 原 的研 究 酒 精 棉 球 将 尾 部 反 复 擦 洗 消 毒 然 后 用 灭 菌 剪 刀 剪 断 尾 巴 将 血 液滴 加 在 营 养 琼 脂 或 琼脂 平板 上作 划线 分 离 在 获 得 纯 培 养 后 移 人 斜 面 保存备 用 培养 后 取

: 379 (Bacillus thuringiensis) (Bacillus subtilis) (Salmonella typhi) (Shigella flexneri) (Proteus vulgaris) (Pseudomonas aeruginosa) (Enterobacter ae

! " # +(!"# $%& (!"!#$%& (&%!)*) +,)) )!#$%&+!$%-./! $*0! +,)) 1*23!% %*2$*23 1!%%*$*2,2#%!,) )4542*$ *0!2$*1*#,$*&2!! 1!%%*$*2 $#!"!)!" "

中華民國 第51屆中小學科學展覽會

第 期 甘金华等 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 材料与方法 试剂及溶液

<4D F736F F D203636CAB3C6B7CEA2C9FACEEFD1A7BCECD1E92020DAE6C6E9B3A6B8CBBEFABCECD1E92E646F63>

GB doc

<4D F736F F D A67EAB49A44AA9CAC2E5C0F8B342B86DB7D3C540AB7EBDE8B4A3A4C9AD70B565A740B77EA4E2A5555FC2E5B07CAAA95F A8D AFF3AED7292D >

安全救护教学设计 一 教学导入 教学过程设计 二 学情了解 三 学习新课 1. 指压止血法

untitled

<4D F736F F D20ADB9AB7EBDC3A5CDBB50A677A5FE>

歐美法規管理之比較

ICS

GB : Antibacterial and cleaning function for household and similar electrical appliances - Particular requirements of material

1.適用範圍:本方法適用於禽畜肉、蛋及蛋製品等中單核球增多性李斯特菌之檢驗,惟乳品除外。

Microsoft Word - Augmentin 625mg Tablets_GDS21-IPI09_C approval.doc

FTA ai

现代天文学7.ppt

Microsoft Word - 郑媛_new_.doc

14052_公開用.pdf

# 7 % % % < % +!,! %!!

#!! +!,! # &!. / !!, 7!!, & #! % 7! % )

Transcription:

GEN III MicroPlate TM 使用说明书 http://www.huayueco.com 售后服务专线 :400-888-6211 电话 :020-34821111 传真 :020-34820098 Biolog GEN III MicroPlate 使用说明书 1 / 11

主要用途 GenIII 微孔板使用固定在微孔板上的 94 个不同的生化试验来对广泛的革兰氏阳性和阴性细 菌提供表型概况并进行鉴定 1,2 Biolog 鉴定系统 (Microlog-M,MicroStation,Omnilog ) 中的 软件通过读取 GenIII 微孔板上所表现出的表型图谱来对细菌进行鉴定 概述 Biolog GenIII 微孔板可以对微生物进行 94 种表型测试, 其中包括 :71 种碳源利用测试 ( 图 1,1-9 列 ) 以及 23 种化学敏感性测试 ( 图 1,10-12 列 ) 微生物在测试板上所显 示出的 表型指纹 被用来在种的水平上鉴定该微生物 所有必要的营养物质以及生化试剂都被预先填充 干化在 96 个孔中 四唑类氧化还原 染料通过色度的变化来指示微生物对碳源的利用程度以及对化学物质的敏感程度 试验的操作过程非常简单, 如图 2 所示 在平板上按照常规方法划线分离需要鉴定的微生物, 然后将分离的到的纯种用棉签挑到接种液 (IF) 3 中, 配成指定细胞浓度的菌悬液 将菌悬液按每孔 100µl 的量加到 GenIII 板后孵育, 以便微生物代谢后产生表型指纹图谱 所有的孔在刚开始的时候都是无色的 当孵育一段时间之后, 那些能被细胞利用碳源的孔中的呼吸作用增强了 增强的呼吸作用导致四唑氧化还原染料被还原, 变成紫色 而阴性孔则保持无色, 就像没有碳源的阴性对照孔 (A1) 一样 同样, 还有一个阳性对照孔 (A10) 作为列 10-12 化学敏感性测试的参考 孵育后, 通过显紫色孔所产生的表型指纹同 Biolog 数据库中的数据进行比较 如果找到匹配的, 所分离出来的微生物在种的水平上得到鉴定 Biolog GEN III MicroPlate 使用说明书 2 / 11

A1 Negative Control 阴性对照 B1 D-Raffinose 蜜三糖, 棉子糖 C1 α-d-glucose α-d- 葡糖 D1 D-Sorbitol D- 山梨醇 E1 Gelatin 明胶 F1 Pectin 果胶 G1 p-hydroxy- Phenylacetic p- 羟基 - 苯乙酸 H1 Tween 40 吐温 40 A2 Dextrin 糊精 B2 α-d-lactose α-d- 乳糖 C2 D-Mannose D- 甘露糖 D2 D-Mannitol D- 甘露醇 E2 Glycyl-L-Prolin e 氨基乙酰 -L- 脯氨酸 F2 D-Galacturonic D- 半乳糖醛酸 G2 Methyl Pyruvate 丙酮酸甲酯 H2 γ-amino-butryri c γ- 氨基 - 丁酸 A3 D-Maltose D- 麦芽糖 B3 D-Melibiose 蜜二糖 C3 D-Fructose D- 果糖 D3 D-Arabitol D- 阿拉伯醇 E3 L-Alanine L- 丙氨酸 F3 L-Galactonic Lactone L- 半乳糖醛酸内酯 G3 D-Lactic Methyl Ester D- 乳酸甲酯 H3 α-hydroxy- Butyric α- 羟基 - 丁酸 A4 D-Trehalose D- 海藻糖 B4 β-methyl-d-glu coside β- 甲酰 -D- 葡糖苷 C4 D-Galactose D- 半乳糖 D4 myo-inositol 肌醇 E4 L-Arginine L- 精氨酸 F4 D-Gluconic D- 葡糖酸 G4 L-Lactic L- 乳酸 H4 β-hydroxy-d,l Butyric β- 羟基 -D,L 丁酸 A5 D-Cellobiose D- 纤维二糖 B5 D-Salicin D- 水杨苷 C5 3-Methyl Glucose 3- 甲酰葡糖 D5 Glycerol 甘油 E5 L-Aspartic L- 天冬氨酸 F5 D-Glucuronic D- 葡糖醛酸 G5 Citric 柠檬酸 H5 α-keto-butyric α- 酮 - 丁酸 A6 Gentiobiose 龙胆二糖 B6 N-Acetyl-D-Glu cosamine N- 乙酰 -D- 葡糖胺 C6 D-Fucose D- 果糖 D6 D-Glucose- 6-PO4 D- 葡糖 -6- 磷酸 E6 L-Glutamic L- 谷氨酸 F6 Glucuronamid e 葡糖醛酰胺 G6 α-keto-glutaric α- 酮 - 戊二酸 H6 Acetoacetic 乙酰乙酸 A7 Sucrose 蔗糖 B7 N-Acetyl-β-DM annosamine N- 乙酰 -β-d- 甘露糖胺 C7 L-Fucose L- 果糖 D7 D-Fructose-6-P O4 D- 果糖 -6- 磷酸 E7 L-Histidine L- 组胺 F7 Mucic 粘酸 ; 粘液酸 G7 D-Malic D- 苹果酸 H7 Propionic 丙酸 A8 D-Turanose D- 松二糖 B8 N-Acetyl-D-Gal actosamine N- 乙酰 -D- 半乳糖胺 C8 L-Rhamnose L- 鼠李糖 D8 D-Aspartic D- 天冬氨酸 E8 L-Pyroglutamic L- 焦谷氨酸 F8 Quinic 奎宁酸 G8 L-Malic L- 苹果酸 H8 Acetic 乙酸 A9 Stachyose 水苏糖 B9 N-Acetyl Neuraminic N- 乙酰神经氨酸 C9 Inosine 肌苷 D9 D-Serine D- 丝氨酸 E9 L-Serine L- 丝氨酸 F9 D-Saccharic 糖质酸 G9 Bromo-Succinic 溴 - 丁二酸 H9 Formic 甲酸 A10 Positive Control 阳性对照 B10 1% NaCl C10 1% Sodium Lactate 乳酸钠 D10 Troleandomycin 醋竹桃霉素 E10 Lincomycin 林肯霉素, 洁霉素 F10 Vancomycin 万古霉素 G10 Nalidixic 萘啶酮酸 H10 Aztreonam 氨曲南 A11 ph 6 B11 4% NaCl C11 Fusidic 梭链孢酸 D11 Rifamycin SV 利福霉素 SV E11 Guanidine HCl 盐酸胍 F11 Tetrazolium Violet 四唑紫 G11 Lithium Chloride 氯化锂 H11 Sodium Butyrate 丁酸钠 A12 ph 5 B12 8% NaCl C12 D-Serine D- 丝氨酸 D12 Minocycline 二甲胺四环素 E12 Niaproof 4 硫酸四癸钠 F12 Tetrazolium Blue 四唑蓝 G12 Potassium Tellurite 亚碲酸钾 H12 Sodium Bromate 溴酸钠 图 1: 微孔板测试布局 Biolog GEN III MicroPlate 使用说明书 3 / 11

图 2: 检测步骤 Biolog GEN III MicroPlate 使用说明书 4 / 11

试剂及耗材 MicroPlates 微孔板 : Catalog No.1030- Biolog GEN III MicroPlates (10/box). Agar Culture Media 琼脂培养基 : Catalog No.71102-BUG Agar with 5% sheep blood (BUG+B); Catalog No. Bio-M1012- Chocolate Agar; Catalog No.70101- Biolog Dehydrated Growth Agar, 500 gm (BUG Agar). Inoculating Fluid 接种液 : Catalog No.72401- IF-A, Catalog No.72402- IF-B, Catalog No. 72403- IF-C. Inoculatorz 无菌一次性接种棉签 : Catalog No.3321- Sterile disposable inoculator swabs (20x50); Catalog No.3323 (100x1). Streakerz TM 木质无菌一次性接种棒 : Catalog No.3025- Sterile disposable wooden agar plate streakers (10x100); Catalog No.3026 (50x20). Transfer Pipets 无菌一次性移液管 : Catalog No.3019- Sterile disposable 9 inch transfer pipets. Reservoirs 无菌一次性 V 型加样槽 : Catalog No.3102- Sterile disposable reservoirs. Multichannel Pipettes 多道移液器 : Catalog No.3711-8 channel electronic pipettor. Pipet Tips 无菌移液器吸头 : Catalog No. 3201- Sterile racked pipet tips for Ovation multichannel pipettor; Catalog No. 3001- Matrix multichannel pipettor tips. Turbidimeter 浊度计 : Catalog No.3531-110 volt model, Catalog No.3532-220 volt model, Catalog No.3585-240 volt model. Turbidity Standards 标准比浊管 : Catalog No.3441-85% T; Catalog No.3440-65% T. 选择恰当的规程 ( 接种液及细胞浓度 ) 所有的规程都可按相同的方法操作, 只需跟居不同情况选择不同的接种液及细胞接种浓度 规程 A 用于大多数的菌株 规程 B 适用于少部分强还原性的菌株和产芽孢的菌株 ( 主要是气单孢菌 Aeromonas, 弧菌 Vibrio, 革兰氏阳性芽孢杆菌中的一些菌株 ) 这些菌株在使用接种液 A 时可能使 A-1 孔产生假阳性 如果发生这种情况, 仅需使用规程 B 重新实验 规程 C1 用于缓慢生长的菌, 通常是在 BUG+B 生长 24 小时形成的菌落非常小 ( 直径小于 1mm) 的细菌 ( 图 2.d) 这些主要是微好氧 嗜 CO 2 的革兰氏阳性球菌及微小杆菌 ( 详见表 1) Biolog GEN III MicroPlate 使用说明书 5 / 11

规程 C2 用于苛刻生长 嗜 CO 2 对氧气很敏感的细菌, 在 BUG+B 上生长非常缓慢或根本不生长 例如, 一些从呼吸道样品中分离出来的需要在 6.5% CO 2 下巧克力培养基上培养的革兰氏阴性苛生菌 一些对氧气很敏感的革兰氏阳性细菌, 同样需要用接种液 C2 配制比较高接种浓度的接种液 ( 详见表 1) 如果不确定使用何种试验规程, 则先尝试规程 A 如果是由于 A-1 孔假阳性造成鉴定失败, 则尝试规程 B 而如果是由于阳性的碳源代谢反应太少而造成的鉴定失败, 则尝试规程 C1, 如 还不理想, 则继续尝试规程 C2 表 1: 试验规程 规程接种液细胞浓度适用菌种 A A 90-98% T Nearly all this is the default protocol 几乎所有 默认规程 B B 90-98% T Strongly reducing and capsule producing 强还原性和产芽孢的 GN (e.g., some Aeromonas 气单胞菌属, Vibrio 弧菌 ) and GP (e.g., some Bacillus 杆菌, Aneurinibacillus 解硫胺素芽孢杆菌属, Brevibacillus 短芽孢杆菌属, Lysinibacillus 赖氨酸芽孢杆菌属, Paenibacillus 类芽孢杆菌属, and Virgibacillus 枝芽孢杆菌属 ) C1 C 90-98% T Microaerophilic, capnophilic 微好氧, 嗜二氧化碳 GP (e.g., Dolosicoccus 狡诈球菌属, Dolosigranulum 狡诈菌属, Eremococcus 另位球菌属, Gemella 孪生球菌属, Globicatella 球链菌属, Helcococcus 创伤球菌属, Ignavigranum 不活动粒菌属, Lactobacillus 乳杆菌属, Lactococcus 乳球菌属, Leuconostoc 明串珠菌属, Pediococcus 片球菌属, Streptococcus 链球菌属, Weissella 魏斯氏菌属, and some Aerococcus 气球菌属, Arcanobacterium 隐秘杆菌属, Corynebacterium 棒杆菌属 and Enterococcus 肠球菌属 ) C2 C 62-68% T Fastidious, capnophilic, oxygen sensitive 苛刻生长的, 嗜 CO2 的, 对氧气很敏感的 GN (e.g., Actinobacillus 放线杆菌属, Aggregatibacter, Alysiella 小链菌属, Avibacterium 禽杆菌属, Bergeriella, Bordetella 鲍特氏菌属, Capnocytophaga 二氧化碳嗜纤维菌属, Cardiobacterium 心杆菌属, CDC Group DF-3, CDC Group EF-4, Conchiformibius, Dysgonomonas, Eikenella 艾肯氏菌属, Francisella 弗朗西斯氏菌属, Gallibacterium 鸡杆菌属, Gardnerella 加德纳氏菌属, Haemophilus 嗜血菌属, Histophilus 嗜组织菌属, Kingella 金氏菌属, Methylobacterium 甲基杆菌属, Moraxella 莫拉氏菌属, Neisseria 奈瑟氏球菌属, Oligella 寡源杆菌属, Ornithobacterium 鸟杆菌属, Pasteurella 巴斯德氏菌属, Simonsiella 西蒙斯氏菌属, Suttonella 萨顿氏菌属, and Taylorella 泰勒氏菌属 ) and GP (Actinomyces 放线菌属, Aerococcus 气球菌属, Alloiococcus 差异球菌属, Arcanobacterium 隐秘杆菌属, Carnobacterium 肉杆菌属, Corynebacterium 棒杆菌属, Erysipelothrix 丹毒丝菌属, Granulicatella 颗粒链菌属, Lactobacillus 乳杆菌属, Pediococcus 片球菌属, and Tetragenococcus 四联球菌属 ) Biolog GEN III MicroPlate 使用说明书 6 / 11

试验流程 准备 实验前, 将微孔板及接种液从冰箱中取出后预热到室温, 并且检查整个实验方案, 包括预 防措施 第一步 : 在 Biolog 推荐的培养基上培养微生物将获得的纯培养菌种接种至 Biolog 推荐的培养基 (BUG+B 或巧克力琼脂 ) 上,33 培养 一些菌种可能需要特殊培养条件, 例如更高或更低的温度 (26-37 C) 以及更高的 CO 2 浓度 (6.5% - 10%) 使用其他替代培养基应该先进行验证 对于实验室研究中需要用到的无血琼脂培养基, 我们推荐使用 Biolog 公司的 BUG 琼脂 尽管如此, 一些菌种在不加血的情况下生长极其缓慢甚至不生长, 例如表一中规程 C1 或 C2 中提到的一些菌种 R2A 琼脂以及加血或者不加血的大豆胰酶蛋白胨琼脂 (TSA,TSA+B) 可以作为替代品使用, 但是它们在细菌培养上的应用范围则没有 BUG+B 广泛 此外, 不同厂家生产的培养基的配方以及性能特性也不尽相同 这些细胞必须是新近生长的, 因为许多菌株在稳定期后会失去活力和代谢能力 对于大多数有机体, 培养时间应为 4-24 小时 产芽孢的革兰氏阳性菌 ( 杆菌及其有亲缘关系种类 ) 培养最好不超过 16 小时, 以防产生芽孢 如果生长不好不足以获得接种板子的菌量, 则在一块或多块平皿上进行致密的划线接种 ( 形成菌苔 ) 培养 4-48 小时 这样就能获得足够接种的菌量 第二步 : 准备接种物定期检察 校准浊度仪 使用恰当的标准比浊管 (85% T 或 65% T) 根据浊度仪的使用手册验证浊度仪已经校准且运行正常 使用未接种的含有接种液的干净接种管 ( 擦去管壁污垢及指纹 ) 调整浊度仪空白 由于每只管子在光学性能上并不完全相同, 所以应该分别针对每只接种液来调空白 将浊度仪透光度指针调至 100% 准备预期浊度的接种物 对于规程 A,B,C1, 目标细胞浓度应为 90-98%T 而对于那些对氧气敏感而需要采用规程 C2 的菌株, 则需要更高的细胞浓度 :62-68%T 使用 Inoculatorz 棉签从琼脂平板中有细胞生长的地方沾取直径 3mm 的菌落 如图 2.a 所示, Biolog GEN III MicroPlate 使用说明书 7 / 11

抓住棉签的末端, 使棉签顶端垂直的与菌落接触 图 2.b.c.d 则展示了快速 中等速度以及缓慢生长的细菌的例子, 黄色的圆圈则标记了棉签的顶端应该沾取菌落的位置 对于快速生长的细菌, 沾取一个单菌落即可 ; 对于中等速度生长的细菌, 则沾取一小簇菌落 ; 而对于缓慢生长的细菌, 则沾取第一个菌落交汇生长的区域 将棉签的末端深入装有接种液的接种管的底端, 并来回上下晃动, 以便将细菌释放到接种液中, 图 2.e 使用棉签将管子中的菌块在管壁上打散或者将其挑出 使用棉签将含有细菌的接种液搅拌均匀, 以便得到均一的细胞悬液, 并用浊度仪检测, 如图 2.f 所示 如果细胞浓度太低, 则沾取更多的细胞 而如果细胞浓度过高, 则加入一些接种液 对于那些极端容易结块 不容易打散的细菌, 则采用以下步骤 : 首先按下面的方法准备 2ml 高浓度的菌悬液 : 使用 Streakerz 木质接种针刮取一簇成块的菌落, 但注意不要将琼脂培养基刮下 如果细菌太干, 牢牢嵌入琼之中, 则用无菌的显微镜载玻片的边缘轻轻的刮取大量的细胞到载玻片上, 同样也不能刮下琼脂 使用 Streakerz 木质接种针将细胞从载玻片上刮下 然后将 Streakerz 木质接种针上的菌块涂抹在干燥的接种管的内壁 使用 Streakerz 木质接种针在接种管的内壁上将菌块摩擦 分散开来 然后加入 2ml 接种液, 逐步将管壁上分散开来的细菌释放到接种液中 由此制成的菌悬液是由悬浮细胞及残余的菌块所组成的混合物 将接种管至于管架上静置 5 分钟, 以便让残余菌块沉淀到管底 再使用小移液管将上层悬浮细胞转移加入新的一管接种液中调整到合适的细胞浓度 第三步 : 接种微孔板 将菌悬液倒入 V 型加样水槽中 使用 8 道移液器将菌悬液吸入移液器吸头中 按每孔 100 µl 的量将菌悬液按顺序加入微孔板的所有孔中 ( 图 2.g) 盖好微孔板的盖子, 弹出枪头 第四步 : 孵育微孔板 将微孔板直接放入 OmniLog 的孵育 读数仪中, 如图 2.h 所示, 或者放入培养箱中培养 3-36 小时 培养温度 33, 或者如第一步中提到情况下在更适合微生物生长的其他温度下培养 结果 读板, 诠释结果 Biolog GEN III MicroPlate 使用说明书 8 / 11

读板可使用 BIOLOG 鉴定系统 ( 例如 Omnilog 数据收集软件,Microlog 软件 ), 具体使用方法请参见其用户说明书 BIOLOG 微生物鉴定系统中的软件负责所有的读取及结果解释工作 GenIII 微孔板 1-9 列中的碳源利用测试是以 A-1 阴性对照孔作为参考对其他孔进行比色的 所有视觉上看起来与 A-1 孔类似的空被定为 阴性 (-), 所有明显看起来程紫色 ( 深于 A-1) 的孔被定为 阳性 (+) 如果孔中所显的颜色非常浅, 或者有紫色的小色斑, 再或者有菌块或其他块状物, 则最好将其判定为 边界值 (\) 大多数菌种能形成很容易判定的清晰且较深紫色的 阳性 反应 尽管如此, 对于某些特殊的菌种, 一些本应显 阳性 反应却会显紫色较浅甚至不显色 而列 10-12 中的化学敏感性测试则是以 A-10 阳性对照孔作为参照对其他孔进行比色的 所有颜色不到 A-10 孔一半的, 容易被该化学物质抑制的孔被定位 阴性 (-) 而所有显紫色或接近紫色 ( 与 A-10 孔类似 ) 的孔被定位 阳性 (+) 如果不能准确判断, 最好将其判定为 边界值 (\) 假阳性 是指阴性对照孔 A-1 或者其他本应该是 阴性 的孔显了紫色 这种情况只会出现在少数菌种上, 例如气单孢菌 Aeromonas, 弧菌 Vibrio, 及杆菌 Bacillus 中的一些菌株 如果出现这样的情况, 最好用规程 B 及接种液 B 重新试验 请参阅 Biolog 鉴定系统的用户手册, 以便获得更多关于鉴定结果判定的帮助 注意事项 为获取准确且可重复的结果, 请务必遵循下列建议 : 在使用 GenIII 板及后续操作前, 请再次仔细阅读使用说明书 获取纯的培养物是鉴定的前提, 混合菌无法鉴定 在鉴定中最普遍的问题是微生物学家们可能没有意识到他们获得的并非纯的培养物, 而是混合培养物 划线分离菌落也许远远不够, 因为单菌落不但可能是单个细胞长成的, 也很有可能是一簇细胞长成的 同时, 细菌具有粘性的表面, 所以它们很容易和另外的细菌紧紧的黏在一起 这种情况在黏液样细菌 环境中新分离出来的菌株以及葡萄球菌 staphylococci 中尤其常见 鉴定前, 应首先使用解剖镜或菌落放大镜对培养基上的菌落进行仔细的检查, 在形态学上确认该培养皿上只有一种微生物菌落 如果没有得到鉴定结果, 说明你获得的仍然可能是混合培养物 将这些细胞重新划线接种至多重显色培养基, 然后将原来的培养皿及显色培养皿在室温中同时放置 3-4 天 仔细检察两种培养皿, 在菌落的交汇生长处寻找是否有 隆起 或生长不均匀的生长物 在显色培养皿上, 检察是否有多于一种颜色的菌落 如有必要的, 则重新分离纯化需要类型的菌落, 并再次进行鉴定分析 Biolog GEN III MicroPlate 使用说明书 9 / 11

不同培养基及反复传代有可能会影响结果 同一菌株可能会由于在接种前在不同的培养基上生长而在鉴定时产生不同的表型 必须按照操作步骤严格遵循消毒措施 进行无菌操作 否则污染会影响结果 应尽量使用一次性玻璃器皿来处理所有细胞悬液和其他溶液 已经清洗过的玻璃器皿可能含有微量的皂剂或洗涤剂, 会影响到结果 在使用前将微孔板及接种液预热到室温 一些菌种 ( 例如 :Neisseria sp. 奈瑟氏菌属 ) 对冷冲击非常敏感 仔细校正浊度仪, 准备正确浓度的接种液 Biolog 的化学物质包含一些对温度和光敏感的成份 接种液放于冰箱, 避光冷藏 微孔板的孔若变成褐色或黄色, 表示化学物已经变质 请永远记住 : 你正在测试的是活细胞的代谢特性 一些菌种在受到应激作用 ( 如温度 ph 及渗透压变化 ) 时会失去代谢活力, 哪怕是仅仅几分钟 为了从这些微孔板上获得可接受的最佳效果, 请意识到这些细胞是活的, 并小心的对待它们 问题解答 如 1-9 列全是阳性, 请确认 : 您使用的微生物是适合使用 GENIII 微孔板的 如果是由于该细菌还原性强或产芽孢引起 A-1 孔假阳性, 则按照规程 B 及接种液 B 重复实验 您的接种液中没有带入琼脂生长培养基上的营养物质 您的接种液中已经消除了菌块 您的接种浓度没有超过要求 ( 不能太浓 ) 检查并校准浊度仪 A-1 孔加液时不要少加 它被用作 Biolog 鉴定系统软件的参考孔 如 1-9 列全是阴性, 请确认 : 您使用的微生物是适合使用 GENIII 微孔板的 如果是寡营养的 生长非常缓慢的以及对氧气敏感的细菌, 则有可能所有孔都是阴性 您的细胞都是新近生长的, 且使用了推荐的琼脂培养基 您的孵育温度及空气温度是经测试的适合有机体生长的温度 接种液正确存放, 且使用前预热到了室温 您全部使用了一次性的器具来处理细胞 ( 皂剂等残留对细胞来说是有毒的 ) 您的接种浓度是足够的 ( 不能太稀 ) 检查并校准浊度仪 Biolog GEN III MicroPlate 使用说明书 10 / 11

A-1 孔加液时不要多加 它被用作 Biolog 鉴定系统软件的参考孔 限制 GenIII 微孔板被设计用于鉴定纯培养的革兰氏阴性及阳性细菌 该鉴定板仅能鉴定目前数据库内已有的那些菌种 ( 不包括用户自定义的数据库 ) 其他菌种在鉴定结果上则会显示 no identification 非典型的菌株也有可能会产生低相似性的指数, 因此鉴定结果也可能会显示 no identification 本产品不适合于人的体外诊断 一些菌种在某些情况下应当报告政府及公共卫生机构 对于任何分离出被初步判定为沙门氏菌 Salmonella 志贺氏菌属 Shigella 或大肠杆菌 O157:H7 E. coli O157:H7, 我们建议由血清学方法进行确认 淋病奈瑟氏菌 Neisseria gonorrhoeae 也应由其他方法确认 当分离疑似危险病原体的时候应当保持适当的谨慎以及得到认可 质控菌种 (Biolog Catalog No.8050). 1. Escherichia coli 大肠杆菌 ATCC 11775 2. Paenibacillus polymyxa 多粘芽孢杆菌 ATCC 842 3. Staphylococcus epidermidis 上皮葡萄球菌 ATCC 12228 4. Stenotrophomonas maltophilia 嗜麦芽寡养单胞菌 ATCC 13637 引文 1 Bochner, BR 1989. Sleuthing out Bacterial Identities. Nature 339:157-158. 2 Bochner, BR 1989. Breathprints at the Microbial Level. ASM News 55:536-539. 3 Biolog, Inc., US Patent # 5,627,045. OmniLog., MicroPlate., Streakerz., 以及 Inoculatorz. 是 Biolog 公司的注册商标 Biolog GEN III MicroPlate 使用说明书 11 / 11