50 0, Vol.5, No.06 食 品 科 学 工 艺 技 术 猪 股 骨 头 胶 原 蛋 白 降 血 压 肽 的 分 离 纯 化 刘 小 红, 李 诚 *, 付 刚, 苏 赵 ( 四 川 农 业 大 学 食 品 学 院, 四 川 雅 安 650) 摘 要 : 依 次 采 用 碱 性 蛋 白 酶 木 瓜 蛋 白 酶 和 风 味 蛋 白 酶 对 猪 股 骨 头 胶 原 蛋 白 进 行 酶 解, 制 备 降 血 压 肽 为 了 得 到 高 活 性 高 纯 度 的 降 血 压 肽, 依 次 采 用 超 滤 离 子 交 换 层 析 凝 胶 层 析 对 酶 解 液 进 行 分 离 纯 化, 采 用 体 外 检 测 方 法 测 定 各 分 离 产 物 对 血 管 紧 张 素 转 化 酶 活 性 的 半 抑 制 浓 度 (IC 50 值 ) 结 果 显 示 : 猪 骨 酶 解 液 经 超 滤 分 离 获 得 分 子 质 量 小 于 5 ku 的 组 分 对 血 管 紧 张 素 转 化 酶 的 抑 制 活 性 最 高,IC 50 值 为 00 mg/ml; 该 组 分 进 行 离 子 交 换 层 析 分 离 得 个 组 分, 其 中 组 分 的 活 性 最 高,IC 50 值 为 88 mg/ml; 再 将 组 分 进 行 凝 胶 层 析 分 离 得 个 组 分, 其 中 组 分 的 活 性 最 高,IC 50 值 为 0.95 mg/ml 关 键 词 : 酶 解 ; 降 血 压 肽 ; 超 滤 ; 离 子 交 换 层 析 ; 凝 胶 层 析 ; 血 管 紧 张 素 转 化 酶 半 抑 制 浓 度 Separation and Purification of Anti-hypertensive Peptides from Pig Femoral Collagen LIU Xiao-hong, LI Cheng*, FU Gang, SU Zhao (College of Food, Sichuan Agricultural University, Ya an 650, China) Abstract: Anti-hypertensive peptides were prepared from pig femoral bones by sequential hydrolysis using alkaline protease, papain and flavourzyme. In order to obtain high activity and purity of anti-hypertensive peptides, ultrafiltration, ion exchange chromatography and gel permeation chromatography were used to separate the hydrolysates. The angioensin-Ⅰ converting enzyme (ACE) inhibitory activity (IC 50 ) of the separated fractions was determined in vitro. The results showed that the ultrafiltration fraction with molecular weight of less than 5 ku showed the highest ACE inhibitory activity, with an IC 50 value of 00 mg/ml. The fraction was then purified by ion exchange chromatography to obtain peaks, among which peak had the strongest ACE inhibitory activity with an IC 50 value of 88 mg/ml. The peak was further fractionated by gel permeation chromatography to obtain sub-peaks, and the sub-peak had the highest ACE-inhibitory activity with an IC 50 value of 0.95 mg/ml. Key words: enzymatic hydrolysis; anti-hypertensive peptides; ultrafiltration; ion exchange chromatography; gel permeation chromatography; half inhibitory concentration of angioensin-Ⅰ converting enzyme 中 图 分 类 号 :S879.9 文 献 标 志 码 :A 文 章 编 号 :00-660(0)06-0050-05 doi:0.7506/spkx00-660-006000 我 国 是 一 个 畜 禽 养 殖 大 国,00 年 我 国 肉 类 总 产 压 症 状 的 手 段 对 人 类 来 说 具 有 非 常 重 要 的 现 实 意 义 [-5], 量 达 到 7 95 万 t, 畜 禽 骨 产 量 大 约 达 到 000 万 t, 但 大 值 得 进 行 深 入 研 究 量 的 骨 头 都 被 废 弃 了, 其 深 加 工 率 不 足 %, 这 不 仅 造 降 血 压 肽, 又 称 为 血 管 紧 张 素 转 化 酶 (angioensin-Ⅰ 成 了 资 源 的 巨 大 浪 费, 而 且 还 会 因 骨 头 所 富 含 的 营 养 converting enzyme,ace) 抑 制 肽, 是 从 食 物 蛋 白 中 分 离 物 质 易 于 腐 败 而 造 成 严 重 的 环 境 污 染 [-] 作 为 养 猪 业 出 的 具 有 显 著 降 低 血 压 功 效 的 多 肽 短 链 物 质 [6], 这 些 多 肽 发 达 的 国 家, 如 何 科 学 有 效 高 值 化 开 展 猪 骨 综 合 的 氨 基 酸 序 列 和 肽 链 长 度 各 有 不 同, 但 都 具 有 类 似 的 功 [7] 利 用 就 成 为 一 个 重 要 的 问 题, 目 前 从 食 物 原 料 中 开 发 能 自 Oshima 等 从 明 胶 蛋 白 中 获 得 ACE 抑 制 肽 起, 学 功 能 活 性 肽 成 为 科 学 家 们 研 究 的 热 点, 其 中 降 血 压 活 性 者 们 相 继 从 植 物 蛋 白 [8-] 水 产 蛋 白 [-5] [6-8] 乳 源 蛋 白 以 [9-0] 肽 是 目 前 研 究 较 多 的 一 类, 而 食 源 性 蛋 白 降 血 压 肽 由 于 及 肉 类 蛋 白 的 酶 解 物 中 提 取 出 降 血 压 肽 以 骨 为 原 料 其 无 毒 无 副 作 用 安 全 性 高, 可 开 发 成 降 压 药 物 或 者 降 制 备 降 血 压 肽 的 研 究 报 道 虽 然 不 少, 但 大 多 都 只 是 酶 解 压 保 健 品 [], 这 种 通 过 保 健 食 品 的 途 径 预 防 和 缓 解 高 血 工 艺 的 研 究 或 以 单 一 酶 进 行 酶 解 以 及 单 一 的 手 段 分 离 纯 收 稿 日 期 :0-0-09 作 者 简 介 : 刘 小 红 (985 ), 女, 硕 士 研 究 生, 研 究 方 向 为 功 能 性 食 品 E-mail:59087@qq.com * 通 信 作 者 : 李 诚 (96 ), 男, 教 授, 博 士, 研 究 方 向 为 畜 产 品 加 工 与 质 量 安 全 控 制 E-mail:lichenglcp@6.com
工 艺 技 术 食 品 科 学 0, Vol.5, No.06 5 [] 化, 如 魏 庭 浩 采 用 胰 蛋 白 酶 酶 解 猪 骨 制 备 降 血 压 肽, [] 并 用 超 滤 对 酶 解 液 进 行 了 初 步 的 分 离 ; 王 金 玲 等 以 酸 性 蛋 白 酶 酶 解 带 鱼 脊 骨 并 用 超 滤 分 离 得 到 了 分 子 质 量 在 ku 以 下 的 降 血 压 肽, 其 半 抑 制 浓 度 (half maximal (50%) inhibitory concentration,ic 50 ) 为 0.77 mg/ml; [] 王 英 超 等 采 用 凝 胶 层 析 对 羊 骨 降 血 压 肽 进 行 了 分 离 纯 化 本 实 验 分 别 采 用 了 碱 性 中 性 酸 性 蛋 白 酶 解 猪 骨, 在 最 大 程 度 上 充 分 利 用 了 原 料, 提 高 了 降 血 压 肽 的 得 率 在 生 物 活 性 肽 的 研 究 中, 分 离 纯 化 是 一 个 重 要 环 节, 只 有 达 到 一 定 的 纯 度, 肽 的 某 种 生 物 活 性 才 能 得 以 体 现, 故 本 实 验 将 酶 解 液 依 次 通 过 超 滤 离 子 交 换 层 析 凝 胶 层 析 进 行 分 离 纯 化, 以 期 获 得 高 活 性 且 纯 度 较 高 的 降 血 压 肽 材 料 与 方 法. 材 料 与 试 剂 猪 骨 雅 安 农 贸 市 场 ; 猪 骨 粉 实 验 室 自 制 ; UNO-S 阳 离 子 交 换 树 脂 美 国 io-rad 公 司 ; 木 瓜 蛋 白 酶 风 胃 蛋 白 酶 碱 性 蛋 白 酶 帝 斯 曼 中 国 有 限 公 司 ; ACE 马 尿 酰 - 组 氨 酰 - 亮 氨 酸 (hippuryl-his-leu,hhl) 美 国 Sigma 公 司 仪 器 与 设 备 蛋 白 层 析 仪 美 国 io-rad 公 司 ; 超 滤 管 (5 0 ku) 美 国 Millipore 公 司 ;QT- 漩 涡 混 匀 器 上 海 琪 特 分 析 仪 器 有 限 公 司 ;UV-00 紫 外 分 光 光 度 计 上 海 美 谱 达 仪 器 有 限 公 司 ;ULT 冷 冻 干 燥 机 美 国 Thermo Scientific 公 司 ;D750 Osterode 高 速 冷 冻 离 心 机 德 国 iofuge 公 司 ;ULUP-IV-0T 超 纯 水 装 置 西 安 优 普 仪 器 设 备 有 限 公 司 ;PHS-C 型 ph 计 成 都 世 纪 方 舟 科 技 有 限 公 司. 方 法.. 分 离 纯 化 猪 骨 降 血 压 肽 的 工 艺 过 程 制 备 酶 解 液 超 滤 离 子 交 换 层 析 凝 胶 层 析... 酶 解 液 的 制 备 称 取 一 定 量 的 猪 骨 粉, 按 底 物 含 量 为 6%(m/m) 加 入 相 应 体 积 的 蒸 馏 水, 再 按 酶 活 为 000 U/g 加 入 碱 性 蛋 白 酶, 调 节 ph 值 为 0., 在 58. 反 应 7 h 后,00 沸 水 浴 0 min 灭 活 ; 再 调 节 ph 值 为 6., 按 酶 活 为 6 000 U/g 加 入 木 瓜 蛋 白 酶,55 反 应.8 h 时 后,00 沸 水 浴 0 min 灭 活 ; 再 调 节 ph 值 为 7.0, 按 酶 活 为 78 U/g 加 入 风 味 蛋 白 酶,5. 反 应. h 后,00 沸 水 浴 0 min 灭 活, 冷 却 后 0 000 r/ min 离 心 0 min, 上 清 液 即 为 后 续 实 验 所 需 的 酶 解 液.. 超 滤 首 先 将 酶 解 液 用 截 留 分 子 质 量 为 0 ku 的 超 滤 管 进 行 超 滤, 然 后 将 分 子 质 量 小 于 0 ku 的 酶 解 液 用 5 ku 的 超 滤 管 进 行 超 滤 得 到 分 子 质 量 范 围 为 >0 ku 5~0 ku <5 ku 个 组 分, 分 别 测 定 其 ACE 抑 制 率, 收 集 体 外 ACE 抑 制 率 最 高 的 组 分, 测 定 其 IC 50 值, 冻 干 备 用... 离 子 交 换 层 析 采 用 蛋 白 层 次 仪 对 收 集 组 分 进 行 线 性 梯 度 洗 脱 层 析 条 件 :UNO-S 阳 离 子 交 换 树 脂, 洗 脱 液 为 含 不 同 浓 度 NaCl 的 mol/l 醋 酸 钠 首 先 用 超 纯 水 将 蛋 白 层 析 仪 的 A 泵 冲 开, 用 A 液 ( mol/l 醋 酸 钠 ) 平 衡 柱 子, 上 样, 再 用 A 液 和 液 ( 含 不 同 浓 度 NaCl 的 mol/l 醋 酸 钠 ) 进 行 线 性 梯 度 洗 脱, 洗 脱 程 序 :A 液 00%~0 液 0~00%, 收 集 洗 脱 液, 清 洗 交 换 剂 管 道 和 装 置 测 定 每 管 洗 脱 液 在 nm 波 长 处 的 吸 光 度, 考 察 不 同 流 速 离 子 强 度 ph 值 对 分 离 效 果 的 影 响, 测 定 各 组 分 ACE 抑 制 率, 收 集 体 外 ACE 抑 制 率 最 高 的 组 分, 测 定 其 IC 50 值 ) 流 速 对 分 离 效 果 的 影 响 :A 液 为 mol/l 醋 酸 钠 (ph.0), 液 为 含 mol/l NaCl 的 mol/l 醋 酸 钠 (ph.0), 考 察 不 同 流 速 (.5 ml/min) 对 分 离 纯 化 效 果 的 影 响, 确 定 最 适 流 速 ;) 离 子 浓 度 对 分 离 效 果 的 影 响 :A 液 为 浓 度 为 mol/l 醋 酸 钠 (ph.0), 液 为 含 不 同 浓 度 NaCl 的 mol/l 醋 酸 钠 (ph.0), 流 速 为 ml/min, 考 察 不 同 离 子 浓 度 (0.75 5 mol/l) 对 分 离 纯 化 效 果 的 影 响, 确 定 最 适 离 子 浓 度 ;) 洗 脱 液 ph 值 对 分 离 效 果 的 影 响 :A 液 为 mol/l 醋 酸 钠, 液 为 含 mol/l NaCl 的 mol/l 醋 酸 钠, 流 速 为 ml/min, 考 察 洗 脱 液 的 不 同 ph 值 (.6.0.) 对 分 离 纯 化 效 果 的 影 响, 确 定 最 适 ph 值.. 凝 胶 层 析 经 过 超 滤 之 后 得 到 的 降 血 压 肽 分 子 质 量 大 都 小 于 5 ku, 而 Sephadex G-5 的 分 离 范 围 在 ~5 ku 之 间, 故 选 用 Sephadex G-5 作 进 一 步 的 分 离, 选 用 超 纯 水 作 为 洗 脱 液 首 先 用 超 纯 水 平 衡 柱 子, 上 样, 再 用 超 纯 水 洗 脱, 收 集 洗 脱 液, 清 洗 交 换 剂 管 道 和 装 置 测 定 每 管 洗 脱 液 在 nm 波 长 处 的 吸 光 度, 考 察 不 同 流 速 (0..5 ml/min) 对 分 离 纯 化 效 果 的 影 响, 确 定 最 适 流 速 [].. 降 血 压 肽 活 性 的 测 定 ACE 能 够 催 化 分 解 血 管 紧 张 素 Ⅰ 的 模 拟 物 HHL 产 生 马 尿 酸, 该 物 质 在 8 nm 波 长 处 具 有 特 征 吸 收 峰, 其 含 量 与 该 特 征 吸 收 峰 有 一 定 相 关 性 当 加 入 ACE 抑 制 肽 时, 抑 制 肽 与 ACE 活 性 区 域 作 用, 使 ACE 对 HHL 的 催 化 分 解 作 用 受 到 抑 制, 马 尿 酸 的 生 成 量 减 少 通 过 测 定 吸 光 度, 判 断 马 尿 酸 生 成 量, 从 而 确 定 水 解 物 的 ACE 抑 制 率 具 体 操 作 参 考 文 献 []
5 0, Vol.5, No.06 食 品 科 学 工 艺 技 术 按 下 式 计 算 ACE 抑 制 率 : ACE 抑 制 率 /%=(A b A a )/(A b A c ) 00 式 中 :A a 为 样 品 与 ACE HHL 共 同 反 应 后 的 吸 光 度 ;A b 为 ACE 与 HHL 完 全 反 应 后 的 吸 光 度 ;A c 为 ACE 与 HHL 反 应 的 空 白 对 照 的 吸 光 度.. IC 50 值 测 定 方 法 将 样 品 配 制 成 不 同 的 质 量 浓 度, 分 别 测 定 其 ACE 抑 制 率, 以 样 品 质 量 浓 度 为 横 坐 标 ACE 抑 制 率 为 纵 坐 标, 绘 制 圆 滑 曲 线, 计 算 IC 50 值 结 果 与 分 析. 超 滤 对 酶 解 液 的 分 离 效 果 酶 解 液 经 超 滤 管 初 步 分 离, 共 得 到 个 组 分, 分 别 收 集 这 个 组 分 进 行 ACE 抑 制 率 的 测 定, 结 果 见 图 分 子 质 量 小 于 5 ku 的 肽 抑 制 率 最 高,IC 50 值 为 00 mg/ml, 因 此 收 集 分 子 质 量 小 于 5 ku 的 肽 作 进 一 步 的 分 离 ACE /% Fig. 67.0 66.5 66.0 65.5 65.0 6.5 6.0 5 ku 图 5 0 ku 各 组 分 的 ACE 抑 制 率 0 ku ACE inhibitory activity of ultrafiltration fractions. 离 子 交 换 层 析 对 分 子 质 量 小 于 5 ku 肽 的 分 离 效 果.. 流 速 对 分 离 效 果 的 影 响.. A.8 0 0 0 60 80 00 0.8.8 C 80 A. ml/min;. ml/min;c..5 ml/min Fig. 图 不 同 流 速 的 分 离 效 果 图 谱 Separation efficiency at different flow rates 由 图 可 知, 流 速 对 分 离 效 果 影 响 较 大, 当 流 速 为 ml/min 时, 分 离 效 果 相 近, 峰 形 相 似, 都 得 到 个 峰, 但 当 流 速 为.5 ml/min 时, 只 能 得 到 个 峰, 不 能 将 峰 和 峰 分 开, 因 此 为 了 缩 短 分 离 时 间 并 保 持 较 好 的 分 离 效 果, 采 用 流 速 为 ml/min.. 离 子 浓 度 对 分 离 效 果 的 影 响 Fig..8 A.8.8 C A. 0.75 mol/l;. mol/l;c. 5 mol/l 图 不 同 离 子 浓 度 的 分 离 效 果 图 谱 Separation efficiency at different ion concentrations 由 图 可 知, 离 子 浓 度 对 分 离 效 果 影 响 并 不 大, 这 个 离 子 浓 度 条 件 下 的 分 离 效 果 相 近, 出 峰 的 时 间 也 相 近, 都 得 到 个 峰, 从 峰 形 和 成 本 个 方 面 综 合 考 虑, 采 用 离 子 浓 度 为 mol/l
工 艺 技 术 食 品 科 学 0, Vol.5, No.06 5.. 洗 脱 液 ph 值 对 分 离 效 果 的 影 响.5 A.5.8.5 C.5 0 0 0 60 80 00 0 0 60 A. ph.6;. ph.0;c. ph. 图 不 同 ph 值 的 分 离 效 果 图 谱 Fig. Separation efficiency at different eluent ph values 由 图 可 知, 洗 脱 液 的 ph 值 对 分 离 效 果 影 响 较 大, 当 ph 值 为.0 时, 可 以 得 到 个 峰 形 较 好 的 峰 ; 当 ph 值 为.6 时, 只 能 得 到 个 峰, 与 ph.0 时 的 图 谱 相 比, 峰 和 峰 不 能 分 开 ; 当 ph 值 为. 时, 只 能 得 到 个 峰, 与 ph.0 时 的 图 谱 相 比, 峰 和 峰 峰 和 峰 均 不 能 分 开, 因 此 洗 脱 液 的 ph 值 选 用.0.. 洗 脱 条 件 的 确 定.8 图 5 最 优 条 件 下 的 离 子 交 换 分 离 图 谱 Fig.5 Ion exchange chromatogram under the optimum separation conditions 综 合 以 上 得 出 最 佳 洗 脱 条 件 :A 液 为 mol/l 醋 酸 钠 (ph.0), 液 为 含 mol/l NaCl 的 mol/l 醋 酸 钠 (ph.0), 前 0 管 用 00%A 液 洗 脱, 后 0 管 按 00%~0%A 液 0%~00% 液 梯 度 洗 脱, 流 速 为 ml/min, 该 条 件 下 的 分 离 图 谱 见 图 5 分 别 收 集 这 个 组 分 进 行 ACE 抑 制 率 的 测 定, 结 果 见 图 6 个 组 分 之 间 的 抑 制 率 有 明 显 差 异, 在 相 同 质 量 浓 度 下, 组 分 的 抑 制 活 性 最 高,IC 50 值 为 88 mg/ml, 比 超 滤 之 后 得 到 的 降 血 压 肽 活 性 提 高 了 将 近 倍, 因 此 收 集 组 分 进 行 进 一 步 分 离 Fig.6 ACE /% 图 6 60 50 0 0 0 0 0 最 优 条 件 下 分 离 所 得 的 各 组 分 的 ACE 抑 制 率 ACE inhibitory rates of four peaks obtained by ion exchange chromatography under the optimum conditions. 凝 胶 层 析 对 组 分 的 分 离 效 果 由 图 7 可 知, 流 速 对 分 离 效 果 影 响 较 大, 当 流 速 为.5 ml/min 时, 仅 能 得 到 个 峰, 并 没 有 将 组 分 分 开 ; 当 流 速 为 ml/min 时, 可 以 得 到 个 峰, 但 峰 形 不 好, 后 个 峰 分 离 度 不 高 ; 当 流 速 为 0. ml/min 时, 分 离 效 果 相 近, 都 得 到 个 峰, 且 峰 形 相 差 不 大, 为 缩 短 分 离 时 间 并 保 持 较 高 的 分 离 效 果, 采 用 ml/min 分 别 收 集 这 个 组 分 进 行 ACE 抑 制 率 的 测 定, 结 果 见 图 8 个 组 分 之 间 的 抑 制 率 有 明 显 差 异, 在 相 同 质 量 浓 度 下 组 分 的 抑 制 活 性 最 高, 且 IC 50 为 0.95 mg/ml, 比 离 子 交 换 层 析 得 到 的 降 血 压 肽 活 性 提 高 了.5 倍.6 -. A..8 0 0 0 60 80 00 0.0 -.5.5-0 0 0 60 80 00 0
5 0, Vol.5, No.06 食 品 科 学 工 艺 技 术.8. C - - - 0 0 0 60 80 00 0.8 D. - - - 0 0 0 60 80 00 0 A..5 ml/min;. ml/min;c. ml/min;d. 0. ml/min Fig.8 Fig.7 ACE /% 结 论 60 50 0 0 0 0 0 图 7 不 同 流 速 的 分 离 效 果 图 谱 Separation efficiency at different flow rates - - - 图 8 各 组 分 的 ACE 抑 制 率 ACE inhibitory rates of four sub-peaks obtained by gel permeation chromatography 超 滤 对 粗 酶 解 液 分 离 纯 化 结 果 表 明 : 分 子 质 量 小 于 5 ku 的 肽 的 ACE 抑 制 率 最 高, 且 IC 50 为 00 mg/ml, 此 时 [] 得 到 的 IC 50 比 魏 庭 浩 的 研 究 结 果 高, 可 能 由 于 该 研 究 中 主 要 测 定 的 为 分 子 质 量 小 于 ku 的 肽 段, 而 据 许 多 文 献 报 道, 具 有 较 高 降 血 压 活 性 的 肽 段 分 子 质 量 小 于 ku [5] 由 于 分 子 质 量 小 于 ku 的 肽 段 含 量 很 低, 如 果 采 用 ku 的 超 滤 管 超 滤 会 大 大 降 低 降 血 压 肽 的 得 率, 因 此 仅 针 对 超 滤 之 后 小 于 5 ku 的 肽 组 分 进 行 离 子 交 换 层 析, 其 分 离 纯 化 结 果 表 明 组 分 的 ACE 抑 制 率 最 高, 且 IC 50 为 88 mg/ml, 比 纯 化 前 的 降 血 压 肽 活 性 提 高 了 将 近 倍 凝 胶 层 析 对 离 子 交 换 层 析 得 到 活 性 最 高 的 肽 组 分 的 分 离 纯 化 结 果 表 明 : 组 分 的 ACE 抑 制 率 最 高, 且 IC 50 为 0.95 mg/ml, 比 离 子 交 换 层 析 得 到 的 降 血 压 肽 活 性 提 高 了.5 倍 参 考 文 献 : [] 王 卫, 张 志 宇, 刘 达 玉, 等. 畜 禽 骨 加 工 利 用 及 其 产 品 开 发 [J]. 食 品 科 技, 009, (5): 5-58. [] 罗 通 彪. 畜 禽 鲜 骨 的 开 发 利 用 [J]. 食 品 研 究 与 开 发, 00, (5): 70-7. [] 肖 红, 段 玉 峰, 刘 平, 等. 食 品 蛋 白 降 血 压 肽 及 其 研 究 进 展 [J]. 食 品 研 究 与 开 发, 00, 5(5): -6. [] ERIKSEN E K, VEGARUD G E, LANGSRUD T, et al. Effect of milk proteins and their hydrolysates on in vitro immune responses[j]. Small Ruminant Research, 008, 79(): 9-7. [5] 吴 蕾, 庞 广 昌, 张 建 辉. 乳 源 性 生 物 活 性 肽 的 研 究 进 展 [J]. 食 品 研 究 与 开 发, 009, 0(): 8-85. [6] 王 朝 旭, 赵 丹, 王 小 雪. 酶 法 水 解 骨 蛋 白 最 佳 条 件 的 研 究 [J]. 食 品 科 学, 00, (): 8-9. [7] OSHIMA G, SHIMAUKURO H, NAGASAWA K. Peptide inhibitors of angiotensinⅠ-converting enzyme in digest of gelatin by bacterial collagenase[j]. iochimica et iophysica Acta, 979, 566(): 8-7. [8] 周 存 山, 余 筱 洁, 杨 虎 清, 等. 混 合 酶 法 制 备 紫 菜 蛋 白 降 压 肽 [J]. 中 国 食 品 学 报, 00, 0(): 56-59. [9] 胡 少 新, 江 连 州, 许 德 春, 等. 大 豆 分 离 蛋 白 生 产 降 血 压 肽 酶 解 技 术 研 究 [J]. 大 豆 科 学, 0, 0(): 6-67. [0] MIYOSHI S, ISHIKAWA H, KANEKO T. Structures and activity of angiotensin-converting enzyme in an α-zein hydrolyzate[j]. Agricultural iological Chemistry, 99, 55(): 8-9. [] 辛 志 宏, 吴 守 一, 马 海 乐. 从 麦 胚 蛋 白 质 中 制 备 降 血 压 肽 的 研 究 [J]. 食 品 科 学, 00, (0): 0-. [] 毋 瑾 超, 汪 依 凡, 方 长 富. 鲢 鱼 降 血 压 肽 的 酶 解 条 件 [J]. 湛 江 海 洋 大 学 学 报, 006, 6(): 6-9. [] 王 金 玲, 何 国 庆. 酶 解 法 制 备 带 鱼 脊 骨 降 血 压 肽 及 其 降 血 压 效 果 [J]. 食 品 与 发 酵 工 业, 00, 6(): 5-57. [] UKEDA H, MATSUDA H, OSAJIMA K. Peptides from peptic hydrolyzate of heated sardine meat that inhibit angiontensinⅠconverting enzyme[j]. Journal of the Agricultural Chemistry Society of Japan, 99, 66(): 5-9. [5] FUJITA H, YOKOYAMA M. LKPNM: A prodrug-type ACE inhibitory peptide derived from fish proteins[j]. Immunopharmacology, 999, (/): 7. [6] NAKAMURA Y, MASUDA O, TAKANO T. Decrease of tissue angiotensin Ⅰ-converting enzyme activity upon feeding sour milk in spontaneously hypertensive rats[j]. Journal of ioscience, iotechnology and iochemistry, 996, 60(): 88-89. [7] 李 朝 慧, 罗 永 康, 王 全 宇. 乳 清 蛋 白 酶 解 制 备 ACE 抑 制 肽 的 研 究 [J]. 中 国 乳 品 工 业, 005, (): 8-. [8] 刘 妍 妍, 张 丽 萍. 牛 乳 酪 蛋 白 源 降 血 压 肽 的 分 离 及 其 分 子 量 分 布 研 究 [J]. 中 国 乳 品 工 业, 006, (5): 6-7. [9] JANG A, LEE M. Purification and identification of angiotensinⅠconverting enzyme inhibitory peptides from beef hydrolysates[j]. Meat Science, 005, 69(): 65-66. [0] ARIHARA K, NAKASHIMA Y, MUKAI T, et al. Peptide inhibitors of angiotensinⅠ-converting enzyme from enzymatic hydrolysates of porcine skeletal muscle proteins[j]. Meat Science, 00, 57(): 9-. [] 魏 庭 浩. 猪 骨 胶 原 多 肽 的 制 备 及 其 血 管 紧 张 素 转 换 酶 抑 制 活 性 的 研 究 [D]. 雅 安 : 四 川 农 业 大 学, 00: 8-9. [] 王 金 玲, 何 国 庆. 酶 解 法 制 备 带 鱼 脊 骨 降 血 压 肽 及 其 降 血 压 效 果 [J]. 食 品 与 发 酵 工 业, 00, 6(): 5-58. [] 王 英 超, 李 天 俊, 王 敏 华, 等. 羊 骨 酶 解 物 中 降 血 压 肽 的 分 离 纯 化 工 艺 研 究 [J]. 食 品 研 究 与 开 发, 007, 8(9): 7-. [] CUSHMAN D W, CHEUNG H S. Spectrophotometric assay and properties of the angiotensin Ⅰ-converting enzyme of rabbit lung[j]. iochemistry Pharmacology, 97, 0(7): 67-68. [5] 尹 波 欢, 王 燕. 食 源 性 降 血 压 肽 研 究 进 展 [J]. 农 产 品 加 工 : 学 刊, 0, 7(7): -.