146 TGTCCTGTGTCCTCCCTGC among c.17073-17091 was deleted in intron 11 of NHE1 gene. Furthermore,6 SNPs c.309 G>C,c.11653 C>T,c.13405 C>A,c.13438 T>C,c.

广 东 农 业 科 学 2016,43(7):145-150 Guangdong Agricultural Sciences doi:10.16768/j.issn.1004-874x.2016.07.022 陈 伟 国, 李 广 伟, 严 专 强, 等. J 亚 群 禽 白 血 病 病 毒 受 体 基 因 NHE1 的 遗 传 多 态 性 分 析 [J]. 广 东 农 业 科 学,2016,43(7): 145-150. J 亚 群 禽 白 血 病 病 毒 受 体 基 因 NHE1 的 遗 传 多 态 性 分 析 陈 伟 国 1, 李 广 伟 2, 严 专 强 2, 谢 青 梅 1 (1. 华 南 农 业 大 学 动 物 科 学 学 院, 广 东 广 州 510642; 2. 广 东 温 氏 食 品 集 团 股 份 有 限 公 司, 广 东 云 浮 527400) 摘 要 : 为 发 掘 J 亚 群 禽 白 血 病 病 毒 (ALV-J) 受 体 基 因 NHE1 潜 在 的 遗 传 抗 性 位 点, 采 用 PCR 技 术 分 段 扩 增 NHE1 受 体 基 因 序 列, 并 分 析 其 遗 传 多 态 性 结 果 显 示, 在 黄 羽 肉 鸡 NHE1 基 因 外 显 子 区 域 发 现 了 16 个 SNP 突 变, 分 别 为 c.309 G>C,c.11653 C>T,c.11689 G>A,c.11917 C>T,c.11946 C>T,c.13405 C>A, c.13429 T>C,c.13438 T>C,c.14108 A>C,c.14516 A>G,c.14522 G>A,c.14654 C>T,c.15834 G>A,c.15873 G>A,c.17560 C>G and c.17770 G>A 进 一 步 分 析 表 明 这 些 SNP 突 变 均 为 同 义 csnp, 未 引 起 氨 基 酸 发 生 改 变 ; 在 黄 羽 肉 鸡 NHE1 基 因 内 含 子 区 域 发 现 了 SNP 和 插 入 / 缺 失 突 变,NHE1 基 因 内 含 子 2 c.12239~12240 和 c.13114~13115 分 别 存 在 AGGGCTGC 和 TGAAGCC 插 入 突 变, 内 含 子 11 c.17073~17091 存 在 TGTCCTGTGTCCTCCCTGC 缺 失 突 变 ; 在 ALV-J 攻 毒 后 阴 性 鸡 和 阳 性 鸡 的 NHE1 基 因 外 显 子 区 域 均 发 现 c.309 G>C c.11653 C>T c.13405 C>A c.13438 T>C c.14108 A>C 和 c.14516 A>G 6 个 SNP 突 变, 内 含 子 区 域 也 均 发 现 与 黄 羽 肉 鸡 相 同 的 插 入 / 缺 失 突 变 研 究 结 果 表 明, 发 现 的 NHE1 受 体 基 因 遗 传 变 异 位 点 不 能 作 为 ALV-J 潜 在 的 遗 传 抗 性 位 点 关 键 词 :J 亚 群 禽 白 血 病 病 毒 ;NHE1 受 体 基 因 ; 序 列 分 析 ; 遗 传 多 态 性 中 图 分 类 号 :S858.317.4;Q346 +.5 文 献 标 识 码 : A 文 章 编 号 :1004-874X(2016)07-0145-06 Analysis on genetic polymorphism of avian leukosis virus subgroup J receptor gene NHE1 CHEN Wei-guo 1,LI Guang-wei 2,YAN Zhuan-qiang 2,XIE Qing-mei 1 (1. College of Animal Science,South China Agricultural University,Guangzhou 510642,China; 2. Guangdong Wen s Food Group Co.,Ltd.,Yunfu 527400,China) Abstract:To explore the potential genetic resistance loci in avian leukemia virus subgroup J (ALV-J)receptor gene NHE1,the sequence of NHE1 receptor gene was amplified by PCR technique,and the genetic polymorphism of NHE1 gene was analyzed. The results indicated that 16 SNP mutations,including c.309 G>C,c.11653 C>T, c.11689 G>A,c.11917 C>T,c.11946 C>T,c.13405 C>A,c.13429 T>C,c.13438 T>C,c.14108 A>C,c.14516 A>G,c.14522 G>A,c.14654 C>T,c.15834 G>A,c.15873 G>A,c.17560 C>G and c.17770 G>A,were found within the exon region of NHE1 gene in yellow broilers,these SNPs were synonymous with csnp and the changes of amino acid were not caused by further analysis. In addition,snps and insertion/deletion mutations were also found within the intron region of NHE1 gene in yellow broilers,the AGGGCTGC was inserted between c.12239 and 12240 and the TGAAGCC was inserted between c.13114 and 13115 within the intron 2 of NHE1 gene,respectively,and the 收 稿 日 期 :2016-04-12 基 金 项 目 : 广 东 省 自 然 科 学 基 金 团 队 项 目 (S2013030013313) 作 者 简 介 : 陈 伟 国 (1981-), 男, 硕 士, 助 理 研 究 员,E-mail:wgchen81@scau.edu.cn 通 讯 作 者 : 谢 青 梅 (1972-), 女, 博 士, 教 授,E-mail:qmx@scau.edu.cn

146 TGTCCTGTGTCCTCCCTGC among c.17073-17091 was deleted in intron 11 of NHE1 gene. Furthermore,6 SNPs c.309 G>C,c.11653 C>T,c.13405 C>A,c.13438 T>C,c.14108 A>C and c.14516 A>G within the exon region, as well as insertion/deletion mutations within the intron region that were same with yellow broilers,were found in NHE1 gene of the negative and positive chickens after inoculated by ALV-J. The results demonstrated that the genetic mutation loci found in receptor gene NHE1 may not be used as potential genetic resistance loci of ALV-J. Key words:alv-j;nhe1 receptor gene;sequence analysis;genetic polymorphism J 亚 群 禽 白 血 病 是 由 J 亚 群 禽 白 血 病 病 毒 (ALV-J) 引 起 的 一 种 免 疫 抑 制 性 肿 瘤 性 传 染 [1] 病 ALV-J 可 引 起 感 染 鸡 群 产 生 免 疫 抑 制 生 产 性 能 下 降, 乃 至 发 生 血 管 瘤 骨 髓 瘤 等 特 征 性 肿 瘤 而 死 亡, 给 养 鸡 业 造 成 巨 大 的 经 济 损 [2-3] 失 迄 今 为 止, 该 病 尚 无 商 品 化 疫 苗 和 有 效 的 治 疗 方 法, 主 要 通 过 净 化 种 群 和 生 物 安 全 措 [4] 施 进 行 预 防 近 年 来, 已 从 商 业 肉 鸡 蛋 鸡 品 系 和 地 方 鸡 种 中 分 离 出 ALV-J [5-7] 可 见, 现 有 措 施 并 不 能 完 全 控 制 J 亚 群 禽 白 血 病 在 中 国 普 遍 发 生 与 流 行, 该 病 已 成 为 威 胁 我 国 养 鸡 业 ( 尤 其 是 种 鸡 业 ) 可 持 续 健 康 发 展 的 重 大 疾 病 之 一 因 此, 研 发 更 适 合 防 控 ALV-J 的 新 策 略 已 迫 在 眉 睫 近 年 有 研 究 表 明, 抗 病 育 种 可 以 成 [8] 为 防 控 禽 白 血 病 的 有 效 策 略 禽 白 血 病 病 毒 (ALV) 必 须 通 过 特 异 性 受 体 侵 入 宿 主 细 胞, 不 同 亚 群 的 ALV 由 相 应 的 细 胞 表 面 特 异 性 受 体 介 导 侵 入 宿 主 细 胞, 继 而 发 [9] [10] 生 感 染 Chai 等 证 实 ALV-J 侵 入 宿 主 细 胞 的 受 体 是 1 型 钠 氢 交 换 蛋 白 (NHE1) 受 体 基 因 的 遗 传 变 异 会 引 起 宿 主 对 ALV 的 感 染 产 [11] 生 遗 传 抗 性 Kucerová 等 报 道 了 ALV-J 的 NHE1 受 体 蛋 白 第 38 位 氨 基 酸 ( 色 氨 酸 ) 的 缺 失, 导 致 ALV-J 宿 主 细 胞 对 ALV-J 的 感 染 产 生 遗 传 抗 性 然 而, 关 于 中 国 鸡 种 ALV-J 受 体 基 因 NHE1 是 否 存 在 潜 在 的 遗 传 抗 性 位 点 仍 有 许 多 未 知 本 研 究 拟 通 过 分 析 ALV-J 受 体 基 因 NHE1 的 遗 传 多 态 性, 以 期 发 掘 ALV-J 受 体 基 因 NHE1 潜 在 的 遗 传 抗 性 位 点, 为 进 一 步 研 究 宿 主 遗 传 抗 ALV-J 的 感 染 提 供 科 学 依 据 1 材 料 与 方 法 1.1 试 验 材 料 惠 阳 胡 须 鸡 和 杏 花 鸡 的 DNA 样 品 保 存 于 广 东 省 畜 禽 健 康 养 殖 与 环 境 控 制 ( 企 业 ) 重 点 实 验 室 快 大 黄 鸡 矮 脚 黄 鸡 青 脚 麻 鸡 208 411 和 603 商 业 肉 鸡 品 系 的 血 液 样 品 采 自 广 东 温 氏 食 品 集 团 祖 代 种 鸡 场, 每 个 鸡 种 10 个 样 品 ALV-J 攻 毒 后 阴 性 鸡 和 阳 性 鸡 培 育 于 广 东 省 畜 禽 健 康 养 殖 与 环 境 控 制 ( 企 业 ) 重 点 实 验 室 [12-13] ALV-J 攻 毒 后 阴 性 鸡 和 阳 性 鸡 样 品 分 别 为 12 18 个 血 液 样 品 的 DNA 提 取 按 照 血 液 DNA 抽 提 试 剂 盒 说 明 书 进 行, 抽 提 的 DNA 于 -20 下 保 存 主 要 试 剂 :Premix PrimeSTAR HS 和 DL2000 DNA Marker 购 自 大 连 宝 生 物 公 司, 血 液 DNA 抽 提 试 剂 盒 购 自 天 根 生 化 科 技 有 限 公 司, 其 他 试 剂 为 本 实 验 室 自 配 1.2 试 验 方 法 1.2.1 引 物 设 计 及 合 成 根 据 GenBank 已 收 录 的 原 鸡 N H E 1 基 因 序 列 ( 登 录 号 : NC_006110.4) 设 计 7 对 引 物 用 于 PCR 扩 增 ALV-J 受 体 基 因 NHE1, 扩 增 引 物 信 息 见 表 1, 引 物 均 由 上 海 生 工 生 物 工 程 股 份 有 限 公 司 合 成 由 于 NHE1 受 体 基 因 内 含 子 1 过 长, 共 11 340 bp, 涵 盖 了 c.329~11567, 故 不 对 其 进 行 PCR 扩 增 1.2.2 NHE1 基 因 的 PCR 扩 增 NHE1 基 因 7 个 片 段 的 PCR 扩 增 体 系 为 25 µl:premix PrimeSTAR HS 12.5 µl,dna 模 板 1 µl,f/r 引 物 (10 µmol/l) 各 0.5 µl, 双 蒸 水 补 至 25 µl PCR 反 应 程 序 为 :95 预 变 性 3 min;94 变 性 30 s 55~60 退 火 45 s 72 延 伸 1~1.5 min, 共 35 个 循 环 ;72 延 伸 10 min,12 终 止 将 PCR 扩 增 产 物 送 美 吉 生 物 科 技 公 司 进 行 测 序 1.2.3 NHE1 基 因 的 序 列 分 析 运 用 DNAStar Lasergene 7.1 软 件 对 不 同 黄 羽 肉 鸡 品 种 ( 系 ) NHE1 基 因 的 测 序 结 果 进 行 拼 接, 并 与 GenBank 登 陆 的 原 鸡 NHE1 基 因 序 列 进 行 比 对, 分 析 不 同 黄 羽 肉 鸡 品 种 ( 系 )NHE1 基 因 的 遗 传 多

147 表 1 NHE1 基 因 PCR 扩 增 引 物 信 息 引 物 引 物 序 列 (5' -3' ) 引 物 序 列 位 置 退 火 温 度 ( ) 目 的 片 段 大 小 (bp) 1-F CCCTTCCCTGGGCTCTGCT 23~41 58 634 1-R GGGGTTCCAGTGGGGTTGC 638~656 2-F CGGGTTGCACCTCACGGCCG 11467~11486 55 872 2-R GGGCAGAGCGAGGCAGCAA 12319~12337 3-F TGCTTGGAGGTGATGTGCTTCG 12227~12248 55 797 3-R GGCAAGGATGACCCAGCAAGAG 13011~13022 4-F GGAACGCTTTTGCCTTCTGCT 12674~12694 60 1346 4-R CACGCTGCTCCACATCTTGAG 13999~14018 5-F CCCACGGACCCCAAAATGAC 13700~13719 60 1875 5-R ACGCTGGGATTCACTGGGAGG 15553~15573 6-F GGACATCTGCGGTCACTACGG 15408~15428 60 1649 6-R TCAGCAACACCCGCACGT 17038~17055 7-F TTCTTGCTCATCCCCGAGAC 16845~16864 60 1132 7-R AACCCGGAGCGTAGCGATAGAG 17956~19088 态 性, 以 及 对 ALV-J 攻 毒 后 阴 性 鸡 和 阳 性 鸡 NHE1 基 因 的 序 列 进 行 分 析 2 结 果 与 分 析 2.1 黄 羽 肉 鸡 NHE1 基 因 的 PCR 扩 增 利 用 PCR 方 法 扩 增 出 了 NHE1 基 因 序 列 的 7 个 目 的 片 段, 通 过 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 ( 图 1) 可 见,PCR 扩 增 条 带 大 小 与 预 期 扩 增 片 段 大 小 一 致 bp 2000 1000 750 500 250 100 M 1 2 3 4 5 6 7 N M:DL2000 marker;1~7: 引 物 1~7 的 PCR 扩 增 产 物 ;N: 空 白 对 照 图 1 NHE1 基 因 7 个 片 段 的 PCR 扩 增 结 果 2.2 黄 羽 肉 鸡 NHE1 基 因 的 序 列 分 析 将 NHE1 基 因 PCR 扩 增 产 物 送 测 序 公 司 进 行 测 序, 对 7 个 片 段 的 测 序 结 果 运 用 DNAStar Lasergene 7.1 进 行 拼 接, 获 得 NHE1 基 因 全 长 序 列 ( 内 含 子 1 除 外 ) 将 其 与 GenBank 收 录 的 原 鸡 NHE1 基 因 序 列 ( 登 录 号 :NC_006110.4) 进 行 比 对 分 析, 发 现 在 外 显 子 区 域 存 在 16 个 SNP 突 变, 分 别 为 c.309 G>C c.11653 C>T c.11689 G>A c.11917 C>T c.11946 C>T c.13405 C>A c.13429 T>C c.13438 T>C c.14108 A>C c.14516 A>G c.14522 G>A c.14654 C>T c.15834 G>A c.15873 G>A c.17560 C>G 和 c.17770 G>A, 这 些 SNP 变 异 位 点 分 别 位 于 外 显 子 1 2 3 4 5 8 12 等 6 个 外 显 子 区 域, 且 不 同 鸡 种 发 生 的 SNP 突 变 位 点 的 数 量 位 置 及 其 频 率 均 存 在 差 异 ( 表 2) 进 一 步 分 析 发 现, 这 16 个 SNP 突 变 均 为 同 义 csnp, 未 引 起 氨 基 酸 发 生 改 变, 其 在 NHE1 基 因 mrna 序 列 (GenBank 登 录 号 :NM_001044643.1) 分 别 位 于 第 309 414 450 678 708 888 912 921 1233 1311 1317 1449 1686 1725 2130 和 2340 位 核 苷 酸 ( 表 3) 在 黄 羽 肉 鸡 的 NHE1 基 因 内 含 子 区 域 发 现 插 入 / 缺 失 突 变, 内 含 子 2 c.12239~12240 和 c. 1 3 1 1 4 ~ 1 3 1 1 5 分 别 发 生 A G G G C T G C 和 T G A A G C C 序 列 插 入 突 变, 内 含 子 1 1 c.17073~17091 发 生 TGTCCTGTGTCCTCCCTGC 序 列 缺 失 突 变, 不 同 鸡 种 NHE1 基 因 内 含 子 区

148 表 2 黄 羽 肉 鸡 NHE1 基 因 外 显 子 区 域 的 遗 传 多 态 性 品 种 ( 品 系 ) 外 显 子 1 外 显 子 2 外 显 子 3 309G>C 11653C>T 11689G>A 11917C>T 11946 C>T 13405C>A 13429T>C 13438T>C 惠 阳 胡 须 鸡 - - - - - 2/10 2/10 3/10 杏 花 鸡 - - 7/10-4/10 - - - 快 大 黄 鸡 - - 3/10-4/10 - - - 矮 脚 黄 鸡 - 3/10-5/10-5/10-3/10 青 脚 麻 鸡 - - 2/10-2/10 6/10 - - 208 品 系 4/10 - - - - - - - 411 品 系 3/10 2/10 4/10 603 品 系 10/10 2/10 - - - 2/10-8/10 品 种 ( 品 系 ) 外 显 子 4 外 显 子 5 外 显 子 8 外 显 子 12 14108A>C 14516A>G 14522G>A 14654 C>T 15834G>A 15873G>A 17560C>G 17770G>A 惠 阳 胡 须 鸡 - 7/10 5/10 - - - - 2/10 杏 花 鸡 8/10 10/10 5/10 - - - - - 快 大 黄 鸡 10/10 10/10 3/10 5/10 3/10 3/10-4/10 矮 脚 黄 鸡 - - - - 3/10-3/10 - 青 脚 麻 鸡 10/10 10/10 - - - - - - 208 品 系 10/10 10/10 - - 5/10 - - - 411 品 系 10/10 10/10 2/10 1/10 2/10 603 品 系 10/10 10/10 - - 2/10-1/10 - 注 : 表 示 检 测 样 品 在 该 SNP 位 点 没 有 发 生 突 变 表 中 数 据 左 边 数 字 表 示 某 一 SNP 位 点 发 生 突 变 的 样 品 数, 右 边 数 字 表 示 检 测 样 品 总 数 表 4 表 5 同 表 3 黄 羽 肉 鸡 NHE1 基 因 外 显 子 区 域 SNP 突 变 信 息 项 目 外 显 子 1 外 显 子 2 外 显 子 3 309 G>C 11653 C>T 11689G>A 11917 C>T 11946 C>T 13405 C>A 13429 T>C 13438 T>C 原 始 密 码 子 CTG ATC TCG ATC GCC GGC TAT ATT 氨 基 酸 L I S I A G Y I 突 变 密 码 子 CTC ATT TCA ATT GCT GGA TAC ATC 氨 基 酸 L I S I A G Y I mrna 位 置 309 414 450 678 708 888 912 921 项 目 外 显 子 4 外 显 子 5 外 显 子 8 外 显 子 12 14108 A>C 14516A>G 14522G>A 14654 C>T 15834G>A 15873 G>A 17560 C>G 17770 G>A 原 始 密 码 子 CTA ACA AAG ACC GAC AAG CTC CTG 氨 基 酸 L T K T E K L L 突 变 密 码 子 CTC ACG AAA ACT GAA AAA CTG CTA 氨 基 酸 L T K T E K L L mrna 位 置 1233 1311 1317 1449 1686 1725 2130 2340

149 域 的 遗 传 变 异 情 况 见 表 4 另 外,NHE1 基 因 内 含 子 区 域 发 现 多 个 SNP 突 变 ( 未 列 出 ) 表 4 黄 羽 肉 鸡 NHE1 基 因 内 含 子 区 域 的 遗 传 多 态 性 品 种 ( 品 系 ) 内 含 子 2 内 含 子 11 插 入 8 bp 插 入 7 bp 缺 失 19 bp 惠 阳 胡 须 鸡 1/10 10/10 10/10 杏 花 鸡 6/10 10/10 9/10 快 大 黄 鸡 9/10-9/10 矮 脚 黄 鸡 5/10 8/10 - 青 脚 麻 鸡 - 4/10-208 品 系 - 9/10 9/10 411 品 系 6/10 - - 603 品 系 - 10/10 10/10 注 : 插 入 8 bp 为 NHE1 基 因 c.12239~12240 插 入 AGGGCTGC; 插 入 7 bp 为 NHE1 基 因 c.13114~13115 插 入 TGAAGCC; 缺 失 19 bp 为 NHE1 基 因 c.17073~ 17091 缺 失 TGTCCTGTGTCCTCCCTGC 表 5 同 2.3 ALV-J 攻 毒 后 阴 性 鸡 和 阳 性 鸡 NHE1 基 因 的 序 列 分 析 ALV-J 攻 毒 后 的 阴 性 鸡 NHE1 基 因 序 列 与 原 鸡 相 比, 发 现 在 外 显 子 区 域 存 在 6 个 SNP 突 变, 其 在 第 309 11653 13405 13438 14108 和 14516 位 核 苷 酸 发 生 G C C T C A T C A C 和 A G 改 变, 在 内 含 子 区 域 发 现 插 入 / 缺 失 突 变, 内 含 子 2 c.12239~12240 和 c.13114~13115 分 别 发 生 AGGGCTGC 和 TGAAGCC 插 入 突 变, 内 含 子 11 c.17073~17091 发 生 TGTCCTGTGTCCTCCCTGC 序 列 缺 失 突 变 ; 而 在 ALV-J 攻 毒 后 阳 性 鸡 NHE1 基 因 中, 发 现 与 ALV-J 攻 毒 后 阴 性 鸡 存 在 相 同 的 遗 传 突 变 ( 表 5) 3 讨 论 NHE1 是 一 种 跨 膜 蛋 白, 涉 及 细 胞 转 运 表 5 ALV-J 攻 毒 后 阴 性 鸡 和 阳 性 鸡 NHE1 基 因 的 遗 传 多 态 性 外 显 子 1 外 显 子 2 外 显 子 3 外 显 子 4 外 显 子 5 内 含 子 2 内 含 子 11 样 品 309 11653 13405 13438 14108 14516 G>C C>T C>A T>C A>C A>G 插 入 8 bp 插 入 7 bp 缺 失 19 bp 阴 性 鸡 8/12 3/12 5/12 6/12 12/12 12/12 8/12 12/12 12/12 阳 性 鸡 10/18 4/18 10/18 12/18 18/18 18/18 10/18 15/18 18/18 增 殖 与 凋 亡 等 多 种 功 能, 与 多 肿 瘤 性 疾 病 有 密 [14] [10] 切 关 系, 是 ALV-J 的 受 体 蛋 白 蔡 黎 明 [15] 等 研 究 表 明,NHE1 蛋 白 在 ALV-J 感 染 引 起 的 致 病 致 肿 瘤 过 程 中 也 发 挥 着 重 要 作 用 ALV-J 用 NHE1 受 体 基 因 编 码 的 受 体 蛋 白 介 导 侵 入 宿 主 细 胞, 继 而 发 生 感 染 近 年 来 有 研 究 表 明, 受 体 基 因 的 遗 传 突 变 会 导 致 宿 主 对 ALV 的 感 染 产 生 完 全 抗 性 或 易 感 性 降 低 [9] Kucerová 等 报 道 了 ALV-J 的 NHE1 受 体 蛋 白 第 38 位 氨 基 酸 的 缺 失, 引 起 宿 主 对 ALV-J [16] 的 感 染 产 生 遗 传 抗 性 Reinišová 等 报 道 白 来 航 品 系 M 的 tvb 受 体 基 因 外 显 子 4 发 生 SNP 突 变, 导 致 TVB 受 体 蛋 白 第 125 位 氨 基 酸 由 半 胱 氨 酸 置 换 位 丝 氨 酸, 引 起 白 来 航 品 系 M 对 ALV-B/D 感 染 的 易 感 性 降 低, 对 ALV-E 的 感 染 产 生 完 全 抗 性 本 研 究 在 黄 羽 肉 鸡 ALV-J 受 体 基 因 NHE1 外 显 子 区 域 发 现 了 16 个 SNP 突 变, 但 这 些 SNP 突 变 均 为 同 义 csnp, 未 引 起 氨 基 酸 发 生 改 变 而 在 ALV-J 攻 毒 后 阴 性 鸡 和 阳 性 鸡 均 发 现 其 中 的 6 个 SNP 突 变, 提 示 这 些 NHE1 受 体 基 因 SNP 突 变 不 能 作 为 作 为 ALV-J 潜 在 的 遗 传 抗 性 位 点 笔 者 前 期 研 究 发 现, 中 国 鸡 种 ALV-A 受 体 基 因 tva 内 含 子 1 破 裂 点 信 号 保 守 区 域 c.502~511 和 c.502~516 分 别 发 生 CGCTCACCCC 和 CGCTCACCCCGCCCC 序 列 缺 失 突 变, 导 致 内 含 子 1 保 留 于 tva 受 体 基 因 mrna 中, 并 产 生 一 个 提 前 终 止 密 码 子, 干 扰 了 tva 受 体 基 因 mrna 的 剪 切, 从 而 [17] 降 低 了 宿 主 对 ALV-A 感 染 的 易 感 性 本 研 究 发 现, 黄 羽 肉 鸡 ALV-J 受 体 基 因 NHE1 内 含 子 2 c.12239~12240 和 c.13114~13115 分 别 发 生 A G G G C T G C 和 T G A A G C C 序 列

150 插 入 突 变, 内 含 子 11 c.17073~17091 发 生 TGTCCTGTGTCCTCCCTGC 序 列 缺 失 突 变, 然 而, 在 ALV-J 攻 毒 后 阴 性 鸡 和 阳 性 鸡 的 NHE1 受 体 基 因 也 均 发 现 存 在 上 述 的 插 入 / 缺 失 突 变, 提 示 发 现 的 NHE1 受 体 基 因 插 入 / 缺 失 突 变 不 能 进 一 步 作 为 ALV-J 潜 在 的 遗 传 抗 性 位 点 去 进 行 功 能 验 证 综 上 所 述, 本 研 究 在 ALV-J 受 体 基 因 NHE1 外 显 子 区 域 发 现 的 SNP 突 变 及 内 含 子 区 域 发 现 的 插 入 / 缺 失 突 变 不 能 直 接 作 为 ALV-J 潜 在 的 遗 传 抗 性 位 点 参 考 文 献 : [1] Fadly A M,Nair V. Leukosis/sarcoma group[m]. Ames,IA:Blackwell Publishing,2008:514 568. [2] Payne L N,Nair V. The long view:40 years of avian leukosis research[j]. Avian Pathol,2012, 41:11 19. [3] 崔 治 中. 我 国 鸡 群 J 亚 群 白 血 病 流 行 的 过 去 现 在 和 将 来 及 其 防 控 对 我 国 动 物 疫 病 防 控 的 启 示 [J]. 现 代 畜 牧 兽 医,2015(1):30-32. [4] 崔 治 中. 种 鸡 场 禽 白 血 病 防 控 和 净 化 技 术 方 案 [J]. 中 国 家 禽,2015,37(23):1-7. [5] 李 昕 键, 李 广 伟, 严 一 铭, 等. 2014 2015 年 广 东 省 5 个 黄 羽 肉 种 鸡 场 禽 白 血 病 感 染 情 况 调 查 [J]. 中 国 家 禽,2015,37(22):72-74. [6] Gao Y,Yun B,Qin L,et a l. Molecu la r epidemiology of avian leukosis virus subgroup J in layer flocks in china[j]. Journal of Clinical Microbiology,2012,50(3):953-960. [7] 张 胜 斌, 吴 天 威, 韦 平, 等. 地 方 优 良 鸡 种 禽 白 血 病 病 毒 感 染 调 查 及 净 化 [J]. 中 国 家 禽,2010 (12):11-16. [8] Jie H,Liu Y P. Breeding for disease resistance in poultry:opportunities with challenges[j]. World's Poultry Science Journal,2011,67: 687-695. [9] Barnard R J,Elleder D,Young J A T,et al. Avian sarcoma and leucosis virus-receptor interactions: from classical genetics to novel insights into virus-cell membrane vision[j]. Virology, 2006,344:25 29. [10] Chai N,Bates P. Na/H exchanger type 1 is a receptor for pathogenic subgroup J avian leukosis virus[j]. Proc Natl Acad Sci 2006,103:5531 5536. [11] Kučerová D,PlachÝ J,Reinišová M,et al. Nonconserved tryptophan 38 of the cell surface receptor for subgroup J avian leukosis virus discriminates sensitive from resistant avian species[j]. J Virol,2013,87:8399 8407. [12] 李 广 伟. 广 东 省 禽 白 血 病 流 行 病 调 查 及 J 亚 群 遗 传 抗 病 探 究 [D]. 广 州 : 华 南 农 业 大 学,2015. [13] 严 专 强. J 亚 群 禽 白 血 病 病 毒 分 子 进 化 特 征 及 宿 主 遗 传 抗 性 研 究 [D]. 广 州 : 华 南 农 业 大 学, 2015. [14] Reshkin S J,Bellizzi A,Caldeira S,et al. Na+/H+ exchanger-dependent intracellular alkalinization is an early event in malignant transformation and plays an essential role in the development of subsequent transformation-associated phenotypes [J]. FA SEB Jour na l,2 0 0 0,14(14): 2185-2197. [15] 蔡 黎 明, 王 真 真, 王 言 明, 等. 禽 白 血 病 病 毒 J 亚 群 自 然 感 染 蛋 鸡 病 毒 负 载 受 体 表 达 及 致 瘤 谱 关 系 [J]. 病 毒 学 报,2013(5):515-521. [16] Reinišová M,Senigl F,Yin X,et al. A singleamino-acid substitution in the TvbS1 receptor results in decreased susceptibility to infection by avian sarcoma and leukosis virus subgroups B and D and resistance to infection by subgroup E in vitro and in vivo[j]. Journal of Virology, 2008,82(5):2097-2105. [17] Chen W G,Liu Y,Li H X,et al. Intronic deletions of tva receptor gene decrease the susceptibility to infection by avian sarcoma and leukosis virus subgroup A[J]. Sci Rep,2015,5:9900. ( 责 任 编 辑 崔 建 勋 )