GC-MS/MS 同时测定杭白菊中 68 种农药残留 朱海花 徐强 冯瑛 王溶溶*(浙江省中药研究所有限公司 杭州 摘要 目的 310023) 采用 GC-MS/MS 建立同时测定杭白菊中 68 种农药残留的分析方法 方法 样品采用 QuEChERS 前处理程 序 经 1%冰醋酸浸泡 30 min 后 乙腈提取 经装有无水硫酸镁 900 mg PSA 300 mg 十八烷基键合硅胶 300 mg 硅胶 300 mg 和石墨化炭黑 90 mg 的分散固相萃取净化管净化 采用 GC-MS/MS 动态多反应监测模式 进行定性定量分析 结 果 68 种农药在各自浓度范围内线性关系良好 相关系数 r 均>0.993 在 20 100 200 μg kg 1 3 个不同加标水平下 除 六氯苯 甲基五氯苯硫醚 苯氟磺胺 p,p'-滴滴伊和氯氟氰菊酯外 大部分农药的回收率均在 70.0%~120.0%之间 RSD 在 0.4%~13.9%之间 方法的检出限为 0.2~25.6 μg kg 1 定量限为 0.8~85.5 μg kg 1 结论 该方法简单 快速 高效 灵敏 可为杭白菊中多农药残留的快速筛查和测定提供一种有效的分析手段 关键词 杭白菊 农药残留 气相色谱-三重四极杆串联质谱 QuEChERS 中图分类号 R917 文献标志码 B 文章编号 1007-7693(2018)11-1702-07 DOI: 10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2018.11.024 引用本文 朱海花, 徐强, 冯瑛, 等. GC-MS/MS 同时测定杭白菊中 68 种农药残留[J]. 中国现代应用药学, 2018, 35(11): 1702-1708. Simultaneous Determination of 68 Pesticide Residues in Chrysanthemum Morifolium by GC-MS/MS ZHU Haihua, XU Qiang, FENG Ying, WANG Rongrong*(Zhejiang Research Institute of Traditional Chinese Medicine Co., Ltd., Hangzhou 310023, China) ABSTRACT: OBJECTIVE To establish a multi-residue analytical method for the determination of 68 pesticides in Chrysanthemum morifolium by GC-triple quadrupole mass spectrometry(gc-ms/ms). METHODS Samples were treated with QuEChERS pretreatment method. They were extracted with acetonitrile after soaking in 1% acetic acid for 30 min, and then purified by dispersed solid-phase extraction and purification tubes containing 900 mg of anhydrous magnesium sulfate, 300 mg of PSA, 300 mg of octadecyl-bonded silica, 300 mg of silica gel and 90 mg of graphitized carbon black. The GC-MS/MS dynamic multiple reaction monitoring (dmrm) mode was used for the qualitative and quantitative analysis. RESULTS The linear relationship of each pesticide residue was good(r>0.993) in their respective concentration range. The recoveries of most pesticides were between 70.0% and 120.0% at 3 spiked levels of 20, 100, 200 μg kg 1, with the relative standard deviations(rsd) from 0.4% to 13.9%, except hexachlorobenzene, methyl-pentachlorophenyl sulfide, dichlofluanid, DDE-p,p' and cyhalothrin. The limits of detection(lod) were 0.2 25.6 μg kg 1, and the limits of quantification(loq) were 0.8 85.5 μg kg 1. CONCLUSION The method is simple, rapid, efficient and sensitive, which can be used for the simultaneous anlysis and screening of pesticide multiresidues in Chrysanthemum morifolium. KEYWORDS: Chrysanthemum morifolium; pesticide residues; GC-MS/MS; QuEChERS 杭白菊是著名的浙江道地药材 浙八味 之 近年来 人们对中药材农药残留问题越来越 一 也是卫生部批准的药食两用资源 具有散风 重视 农药残留测定技术得到了快速发展 农药 清热 平肝明目 清热解毒的功效 用于风热感 种类繁多 常见的包括有机氯类 有机磷类 拟 [1] 冒 头痛眩晕 目赤肿痛 眼目昏花 疮痈肿毒 除虫菊酯类及氨基甲酸酯类农药等 受检测器的 由于杭白菊在种植过程中易受病虫草害影响 不 限制 GC 等仅限于单一种类的农药残留测定 而 可避免地会使用各类农药 然而不科学的使用最 色谱质谱联用技术[2-4]能很好地克服这一缺陷 可 终导致产品本身难逃农药的污染 严重影响中药 同时测定多个不同种类的农药 而且灵敏度高 材的品质和食用安全 农药残留问题已成为中药 选择性好 已成为农药多残留分析的一种趋势 材安全的一大隐患 此外 样品前处理技术也在不断发展更新 应用 基金项目 浙江省科技计划项目(2016F10034) 药品医疗器械审评审批制度改革子课题(ZG2016-2-04) 浙江省农业新品种选育重大科技专 项(2016C02058) 作者简介 朱海花 女 硕士 药师 Tel: (0571)85229644 (0571)85241072 E-mail: wrr_107@163.com 1702 E-mail: 1182709954@qq.com Chin J Mod Appl Pharm, 2018 November, Vol.35 No.11 * 通信作者 王溶溶 女 教授级高工 Tel: 中国现代应用药学 2018 年 11 月第 35 卷第 11 期
较多的有 QuEChERS 方法 [5-6] 加速溶剂萃取法 [7] [8] 固相萃取法和凝胶渗透色谱法 [9] 等 虽然我国中 药材农药残留相关标准也在逐步提高, 但仍需不断完善 现行中国药典 2015 年版中仅对人参 甘草 西洋参和黄芪 4 种药材中的有机氯类农药残留限量作了相关规定, 而对大部分药材和农药品种并未提出相关标准 已报道文献中, 针对杭白菊中农药残留测定的研究多针对少数或某一类农药的分析 [10-11] 因此, 本研究在调研杭白菊田间实际使用的农药品种基础上, 结合中国药典 2015 年版四部的农残检测指标 [12], 建立了同时测定杭白菊中 68 种农药残留的 GC-MS/MS 分析方法, 农药品种涵盖有机磷 有机氯及拟除虫菊酯等多个种类, 该方法简单 快速 灵敏 高效, 可用于杭白菊中农药多残留的快速筛查和定量分析, 也可为药农在种植过程中合理规范喷洒农药提供有效依据 1 仪器与试药 Agilent 7890B/7000D 型气相色谱 - 三重四极杆质谱联用仪 ( 美国 Agilent 公司 );XS105 电子天平 ( 瑞士 Mettler Toledo 公司 );100 L,1 000 L,5 ml 移液器 ( 德国 Eppendorf 公司 );MS3 basic 旋涡混合器 ( 德国 IKA);KS 260 控制型摇床 ( 德国 IKA); MD200-1 氮气吹扫仪 ( 杭州奥盛仪器有限公司 ); TGL-10B 高速台式离心机 ( 上海安亭科学仪器厂 ) 乙腈 丙酮 乙酸乙酯 环己烷 正己烷均为色谱纯, 购于美国 Tedia 公司 ; 石油醚为分析纯, 购于国药集团化学试剂有限公司 ; 冰醋酸 无水硫酸镁 无水乙酸钠为分析纯, 购于上海麦克林 生化科技有限公司 ; 氦气 氮气购于杭州今工气体, 纯度 99.999%; 水为超纯水 QuEChERS 净化填料 : 石墨化炭黑 (120~400 mesh), 硅胶 (50 μm),c 18 (50 μm),psa(40~60 μm), 均购于天津博纳艾杰尔科技有限公司 农药对照品及内标购自德国 Dr. Ehrenstorfer 公司 农业部环境保护科研监测所, 对照品纯度 >96.96% 40 批杭白菊均产自桐乡, 来源于不同杭白菊种植基地, 经浙江省中药研究所有限公司药材资源中心沈宇峰高级工程师鉴定, 均为菊科植物菊 Chrysanthemum morifolium Ramat 的干燥头状花序 2 方法与结果 2.1 色谱及质谱条件采用柱中反吹技术, 色谱柱 1 和色谱柱 2 均为 Agilent HP-5MS UI 毛细管柱 (15 m 0.25 mm, 0.25 μm) ; 载气为高纯氦气, 恒定流量 0.8 ml min 1 ; 进样口温度 280, 不分流进样, 进样量 1 μl; 程序升温 : 初始温度 70, 保持 2 min, 以 25 min 1 升温至 150, 以 3 min 1 升温至 200, 以 8 min 1 升温至 280, 保持 8 min, 最后 310 后运行 5 min 离子源为电子轰击离子源 (EI),70 ev, 离子源温度 300, 辅助加热器温度 280, 四极杆温度 150, 碰撞池碰撞气为高纯氮气, 流量为 1.5 ml min 1, 淬灭气为高纯氦气, 流量为 2.25 ml min 1, 监测模式为动态多反应监测 (dmrm), 各农药化合物其他参数见表 1,68 种农药对照品和杭白菊代表性样品的 MRM 叠加图分别见图 1~2 图 1 68 种农药对照品 MRM 叠加图 (200 ng ml 1 ) Fig. 1 MRM chromatogram of reference substances of 68 pesticides residues(200 ng ml 1 ) 中国现代应用药学 2018 年 11 月第 35 卷第 11 期 Chin J Mod Appl Pharm, 2018 November, Vol.35 No.11 1703
图 2 杭白菊样品的 MRM 叠加图 Fig. 2 MRM chromatogram of sample of Chrysanthemum morifolium 2.2 溶液配制 2.2.1 对照品储备溶液的制备取各农药对照品适量, 精密称定, 加丙酮溶解并稀释至刻度, 混匀, 分别制成 100~500 μg ml 1 对照品储备溶液 2.2.2 混合对照品储备溶液的制备根据各农药对照品在仪器上的实际响应值, 精密量取各对照品储备溶液适量, 置于 100 ml 量瓶中, 用丙酮稀释至刻度, 混匀, 制成各农药对照品浓度为 0.75~16.98 μg ml 1 的混合对照品储备溶液 2.2.3 内标溶液的制备精密量取内标储备溶液 ( 氘代倍硫磷, 浓度为 100 μg ml 1, 纯度为 99.5%)1.0 ml, 置于 20 ml 量瓶中, 用丙酮稀释至刻度, 摇匀, 制得 4.98 μg ml 1 的内标溶液 2.2.4 供试品溶液的制备取供试品粉碎成粉末 ( 过三号筛 ), 取约 3 g, 精密称定, 至 50 ml 聚苯乙烯具塞离心管中, 加入 1% 冰醋酸溶液 15 ml, 涡旋使药粉充分浸润, 放置 30 min, 精密加入乙腈 15 ml 与内标溶液 150 μl, 涡旋使混匀, 至摇床上剧烈振荡 ( 每分钟 450 次 )5 min, 加入无水硫酸镁与无水乙酸钠的混合粉末 (4.. 1)7.5 g, 立即摇散, 再置摇床上剧烈振荡 ( 每分钟 450 次 )3 min, 放置至室温,4 000 r min 1 离心 5 min, 取上清液 9 ml, 置已预先装有净化材料的分散固相萃取净化管 ( 无水硫酸镁 900 mg,psa 300 mg, 十八烷基键合硅胶 300 mg, 硅胶 300 mg, 石墨化炭黑 90 mg) 中, 涡旋使充分混匀, 再置摇床上剧烈振荡 ( 每分钟 450 次 )5 min, 使净化完全,4 000 r min 1 离心 5 min, 精密吸取上清液 5 ml, 至氮吹仪上浓缩至近干, 用丙酮溶解并定容至 1 ml, 涡旋混匀, 用 微孔滤膜滤过 (0.22 μm), 取续滤液, 即得 2.2.5 基质混合对照品溶液的制备取空白基质样品, 粉碎成粉末 ( 过三号筛 ), 取约 3 g, 精密称定, 至 50 ml 聚苯乙烯具塞离心管中, 加入 1% 冰醋酸溶液 15 ml, 涡旋使药粉充分浸润, 放置 30 min, 精密加入乙腈 15 ml, 按供试品溶液的制备方法处理至 至氮吹仪上浓缩至近干, 分别精密加入内标溶液 50 μl 和混合对照品储备溶液适量, 再用丙酮定容至 1 ml, 制成浓度分别为 ( 以反式氯丹 Chlordane-trans 的浓度计 )5,10,20,50, 100,200,300 ng ml 1 的基质混合对照品溶液 2.3 测定方法精密吸取供试品溶液和基质混合对照品溶液各 1 μl, 注入气相色谱 - 串联质谱仪, 按内标校准曲线法计算供试品中 68 种农药残留量 2.4 方法学验证 2.4.1 线性关系精密吸取系列基质混合对照品溶液各 1 μl, 进样分析, 以各农药化合物与内标的浓度比为横坐标 (x), 各农药化合物与内标的峰面积比为纵坐标 (y), 进行回归分析, 结果表明, 各农药化合物线性关系良好, 相关系数均 >0.993 结果详见表 1 2.4.2 仪器精密度试验精密吸取浓度为 100 ng ml 1 的基质混合对照品溶液 1 μl, 注入气相色谱 - 质谱联用仪, 连续进样 5 次, 记录各化合物定量离子峰面积, 计算各待测化合物与内标峰面积比值的 RSD, 结果测得各农药化合物 RSD 在 1.0%~12.5% 内, 表明仪器精密度较好 1704 Chin J Mod Appl Pharm, 2018 November, Vol.35 No.11 中国现代应用药学 2018 年 11 月第 35 卷第 11 期
表 1 68 种农药和内标的保留时间 质谱参数 回归方程和相关系数 Tab. 1 The retention time, mass parameters, regression curve and related correl of 68 pesticides and internal standard 中文名 RT/min 定量离子对 (CE/eV) 定性离子对 (CE/eV) 线性范围 /μg ml 1 回归方程 相关系数 r 敌敌畏 6.38 184.9 93.0(10) 109.0 79.0(5) 8.75~525.00 y=0.173 836x 0.001 586 0.995 9 四氯硝基苯 11.13 260.9 203.0(10) 214.9 179.0(10) 4.00~240.00 y=0.375 63x+0.000 331 299 8 0.999 6 二苯胺 11.50 169.0 168.2(15) 168.0 167.2(15) 26.68~800.33 y=2.707 288x+0.222 775 0.996 7 氟乐灵 12.56 305.9 264.0(5) 264.0 160.1(15) 4.00~240.00 y=0.414 146x 0.001 297 0.999 0 α- 六六六 13.04 216.9 181.0(5) 180.9 145.0(15) 4.00~240.00 y=0.583 416x 0.000 895 464 8 0.998 8 六氯苯 13.40 283.8 213.9(30) 283.8 248.8(15) 4.00~240.00 y=0.959 474x+0.001 058 0.997 6 五氯甲氧基苯 13.57 280.0 237.0(22) 280.0 265.0(12) 4.09~245.10 y=1.109 583x 0.002 003 0.997 9 氯硝胺 13.85 206.1 176.0(10) 160.1 124.1(10) 80.43~2 412.80 y=0.378 527x 0.008 724 0.998 7 β- 六六六 14.38 181.0 145.0(15) 216.7 180.8(8) 4.00~240.00 y=0.691 692x+0.009 463 0.998 5 γ- 六六六 14.46 181.0 145.0(17) 216.9 181.0(5) 4.00~240.00 y=1.402 917x+0.001 129 0.998 5 五氯硝基苯 14.70 295.0 237.0(18) 237.0 143.0(30) 19.98~1 198.72 y=0.228 517x 0.002 318 0.998 9 特丁硫磷 14.80 230.9 129.0(20) 230.9 175.0(10) 4.00~240.00 y=1.355 354x 0.001 042 0.997 7 δ- 六六六 15.75 217.0 180.8(8) 181.1 145.1(15) 8.53~511.50 y=0.158 648x+0.002 914 0.997 3 七氟菊酯 16.10 177.1 127.1(15) 177.1 87.0(30) 6.50~390.00 y=2.827 438x 0.005 32 0.997 4 五氯苯胺 16.66 262.8 192(20) 265.0 230.0(15) 10.17~609.94 y=0.490 648x 0.002 25 0.997 2 甲基毒死蜱 17.67 285.9 92.9(20) 286.0 271.0(15) 21.27~1 276.38 y=0.519 297x 0.002 576 0.999 4 甲基对硫磷 17.72 262.9 109.0(10) 262.9 79.0(30) 21.23~1 273.92 y=0.342 248x 0.009 619 0.997 4 乙烯菌核利 17.75 187.0 124.0(20) 197.9 145.0(15) 21.16~1 269.59 y=0.357 838x 0.000 821 395 5 0.998 1 七氯 17.87 271.7 236.9(15) 273.7 238.9(15) 4.25~255.00 y=0.806 635x 0.001 359 0.997 9 皮蝇磷 18.41 285.0 270.0(18) 285.0 240.0(30) 4.25~255.00 y=0.996 54x 0.001 911 0.999 4 八氯二丙醚 18.43 129.9 94.9(20) 108.9 83.0(10) 4.25~255.00 y=0.442 618x 0.001 728 0.998 3 甲基五氯苯硫醚 19.15 296.0 263.0(15) 296.0 281.0(20) 4.50~270.00 y=0.437 537x 0.001 298 0.998 4 杀螟硫磷 19.27 277.0 109.0(15) 260.0 125.0(10) 31.80~1 908.20 y=0.246 452x 0.012 474 0.996 7 苯氟磺胺 19.53 223.7 123.1(15) 166.8 124.0(12) 8.83~529.55 y=0.388 219x+0.005 707 0.999 1 艾氏剂 19.61 262.9 192.9(35) 254.9 220.0(20) 4.25~255.00 y=0.378 375x+0.002 648 0.997 3 氘代倍硫磷 20.08 284.0 169.0(15) 284.0 115.0(20) / / / 毒死蜱 20.29 313.8 257.8(15) 196.8 169.0(18) 20.07~1 204.03 y=0.811 744x+0.107 077 0.999 2 对硫磷 20.35 291.0 109.1(15) 290.9 80.9(25) 9.25~555.00 y=0.239 317x 0.002 858 0.998 8 三氯杀螨醇 20.37 250.1 139.1(15) 250.1 111.0(43) 16.92~1015.10 y=0.481 982x 0.005 932 0.999 2 氯酞酸二甲酯 20.52 298.9 221.0(25) 331.8 300.9(10) 6.01~360.30 y=1.039 907x 0.002 09 0.998 8 三唑酮 20.55 208.0 181.1(5) 208.0 111.0(20) 42.81~2 568.60 y=0.661 318x 0.004 303 0.997 9 溴硫磷 21.13 331.0 315.9(20) 124.9 47.0(10) 19.06~1 143.51 y=0.581 123x 0.000 878 585 1 0.999 2 仲丁灵 21.23 266.0 220.2(10) 266.0 174.2(20) 31.86~1 911.37 y=0.248 126x 0.014 341 0.997 7 顺式环氧七氯 21.78 352.8 262.9(15) 354.8 264.9(15) 19.11~1 146.88 y=0.193 482x+0.000 073 885 16 0.998 7 氧化氯丹 21.84 184.9 85.0(30) 386.7 262.7(15) 4.96~297.75 y=0.233 6x+0.000 555 135 5 0.999 2 反式环氧七氯 22.01 182.9 154.9(15) 182.9 118.9(25) 8.50~255.00 y=0.150 492x+0.022 397 0.999 6 二甲戊乐灵 22.02 252.1 162.1(12) 252.1 190.8(8) 32.08~1 924.65 y=0.316 077x 0.021 514 0.997 5 哌草丹 22.51 144.9 112.1(5) 144.9 69.1(15) 7.00~420.00 y=1.364 511x 0.007 444 0.998 0 三唑醇 22.85 168.0 70.0(10) 128.0 65.0(25) 42.47~2 548.13 y=0.614 28x 0.000 120 043 0.997 3 腐霉利 22.95 282.8 96.0(10) 284.8 96.0(10) 4.25~255.00 y=0.537 953x+0.001 511 0.998 5 氟虫腈 22.97 366.8 212.8(25) 350.8 254.8(15) 33.92~2 034.96 y=0.297 526x 0.006 664 0.998 6 反式氯丹 22.99 271.7 236.9(15) 372.8 265.8(15) 5.19~311.22 y=0.273 668x+0.000 041 201 82 0.998 8 o,p'- 滴滴伊 23.36 246.0 176.2(30) 317.8 248.0(15) 4.25~255.00 y=3.273 062x 0.005 414 0.997 6 乙基溴硫磷 23.41 358.7 302.8(15) 241.9 96.9(30) 21.28~1 276.60 y=0.585 698x 0.000 972 786 4 0.999 5 α- 硫丹 23.53 194.9 159.0(5) 194.9 125.0(20) 21.44~1 286.35 y=0.052 587x+0.012 678 0.999 6 顺式氯丹 23.70 271.9 236.9(15) 372.9 265.9(20) 4.34~260.30 y=0.255 221x 0.000 365 551 1 0.997 4 氟节胺 24.08 142.8 107.0(32) 143.0 117.0(20) 4.50~270.00 y=0.663 361x 0.003 744 0.998 1 狄氏剂 24.63 263.0 193.0(43) 277.0 206.0(25) 9.00~540.00 y=0.176 706x 0.000 915 472 3 0.997 7 p,p'- 滴滴伊 24.76 246.1 176.2(30) 315.8 246.0(15) 4.50~270.00 y=2.615 617x 0.007 595 0.997 0 o,p'- 滴滴滴 25.05 235.1 165.1(32) 235.4 199.2(18) 4.25~255.00 y=4.055 715x 0.004 805 0.998 1 异狄氏剂 25.45 262.8 193.0(35) 316.7 280.8(5) 9.00~540.00 y=0.247 321x 0.001 082 0.998 2 中国现代应用药学 2018 年 11 月第 35 卷第 11 期 Chin J Mod Appl Pharm, 2018 November, Vol.35 No.11 1705
续表 1 中文名 RT/min 定量离子对 (CE/eV) 定性离子对 (CE/eV) 线性范围 /μg ml 1 回归方程 相关系数 r 除草醚 25.65 202.1 139.1(25) 283.1 253.1(12) 18.00~1 080.00 y=0.425 856x 0.013 836 0.999 3 β- 硫丹 25.84 206.9 172.0(15) 194.9 158.9(10) 33.89~2 033.18 y=0.0467 99x+0.001 584 0.998 6 溴虫腈 25.93 246.9 227.0(15) 327.8 246.8(15) 45.09~2 705.29 y=0.045 237x+0.012 986 0.999 6 p,p'- 滴滴滴 26.29 235.0 165.2(20) 234.9 199.1(15) 4.50~270.00 y=5.876 98x+0.000 795 091 4 0.999 5 o,p'- 滴滴涕 26.42 235.0 165.2(20) 235.0 199.1(15) 4.50~270.00 y=4.083 657x 0.019 692 0.997 0 p,p'- 滴滴涕 27.52 235.0 165.2(20) 235.0 199.2(15) 9.00~270.00 y=1.483 657x 0.026 45 0.993 6 溴螨酯 29.03 338.8 182.9(20) 341.0 185.0(30) 4.50~270.00 y=1.274 161x 0.001 356 0.998 6 联苯菊酯 29.20 181.2 165.2(25) 181.0 166.0(20) 9.00~270.00 y=6.613 729x+0.108 43 0.997 4 甲氧滴滴涕 29.22 227.0 141.1(40) 227.0 169.1(25) 7.50~225.00 y=1.121 928x+0.023 074 0.993 6 甲氰菊酯 29.33 207.9 181.0(5) 265.0 210.0(8) 22.43~1 345.51 y=0.362 952x 0.001 225 0.999 3 苯醚菊酯 29.77,29.91 183.0 168.0(10) 183.0 153.0(12) 24.91~1 494.33 y=0.633 333x+0.352 420 0.997 3 氯氟氰菊酯 30.62 208.0 181.0(5) 181.2 152.1(25) 13.73~824.07 y=0.614 428x 0.003 793 0.996 3 氯菊酯 31.59,31.75 183.1 153.1(15) 183.1 165.1(10) 49.45~1 483.54 y=1.093 781x+0.038 795 0.998 8 氟氯氰菊酯 32.42,32.55,32.67,32.73 226.0 206.0(12) 162.9 127.0(5) 45.01~2 700.40 y=0.527 239x 0.065 769 0.996 0 氯氰菊酯 32.89,33.04,33.17,33.24 163.0 127.0(5) 181.0 127.0(30) 106.95~3 208.48 y=0.488 842x 0.032 379 0.994 5 喹禾灵 33.16 163.0 100.0(20) 163.0 136.0(10) 45.24~2 714.55 y=0.349 349x 0.011 625 0.997 5 氟氰戊菊酯 33.25,33.55 156.9 107.1(15) 198.9 157.0(10) 23.91~1 434.60 y=1.785 761x 0.066 002 0.996 7 氰戊菊酯 34.45,34.85 167.0 125.1(5) 181.0 152.1(20) 22.54~1 352.58 y=0.612 765x 0.045 187 0.995 6 2.4.3 重复性试验和加样回收率试验取供试品 12 份, 分别进行低 中 高 (20,100,200 μg kg 1 )3 个不同添加水平的加样回收率试验, 其中中水平进行 6 次平行试验, 同时用于重复性试验测定, 低 高 2 水平分别进行 3 次平行试验, 计算各样品加样回收率及其 RSD 结果显示, 大部分农药化合物加样回收率均在 70.0%~120.0% 之间,RSD 为 0.4%~13.9%, 其中有 5 种农药化合物的加样回收率 <70.0% 或 >120.0%, 分别为六氯苯 甲基五氯苯硫醚 苯氟磺胺 p, p'- 滴滴伊和氯氟氰菊酯, RSD 为 1.8%~7.8%, 结果见表 2 2.4.4 检出限 (LOD) 与定量限 (LOQ) 取低浓度加样样品进行分析, 测定信噪比, 取信噪比约为 3 的溶液浓度作为方法中农药的 LOD, 为 0.2~ 25.6 μg kg 1, 取信噪比约为 10 的溶液浓度作为方法中农药的 LOQ, 为 0.8~85.5 μg kg 1, 结果见表 2 采用加样回收的方法分别测定 68 种农药在定量限附近的回收率, 为 72.0%~113.1%,RSD 为 0.4%~10.6% 表 2 68 种农药的回收率 LOD 和 LOQ Tab. 2 The recovery rate, LOD and LOQ of 68 pesticides 低水平 (n=3) 中水平 (n=6) 高水平 (n=3) LOD/ 中文名回收率 /% RSD/% 回收率 /% RSD/% 回收率 /% RSD/% μg kg 1 敌敌畏 95.9 6.1 97.2 6.7 87.4 5.4 1.5 5.2 四氯硝基苯 93.8 9.3 85.5 10.2 85.8 4.9 0.8 2.7 二苯胺 97.6 4.2 93.9 5.6 90.8 3.5 2.4 8.1 氟乐灵 119.3 4.2 110.0 7.7 109.7 3.8 0.7 2.5 α- 六六六 117.4 2.9 111.9 10.2 107.1 4.1 1.1 3.8 六氯苯 74.7 9.9 63.8 7.0 69.1 4.0 1.2 4.1 五氯甲氧基苯 90.4 11.7 79.5 11.1 86.0 5.2 1.5 5.0 氯硝胺 77.5 3.6 82.2 4.9 77.6 3.5 6.3 24.9 β- 六六六 92.3 4.8 98.1 7.1 84.3 2.8 1.3 4.4 γ- 六六六 105.8 3.0 101.0 7.1 100.3 4.5 1.3 4.4 五氯硝基苯 92.2 2.9 88.9 9.9 91.6 5.4 3.9 13.2 特丁硫磷 97.5 3.1 101.8 11.0 99.5 8.8 0.7 2.2 δ- 六六六 94.4 2.7 105.8 2.8 106.2 4.8 9.7 32.2 七氟菊酯 98.9 7.7 95.6 13.0 97.1 10.5 0.9 2.9 五氯苯胺 74.0 13.9 72.5 12.5 70.1 4.6 3.4 7.2 甲基毒死蜱 118.5 3.5 110.4 10.4 108.2 8.2 3.2 10.6 甲基对硫磷 117.5 5.3 110.3 12.4 109.9 11.9 12.3 23.5 LOQ/ μg kg 1 1706 Chin J Mod Appl Pharm, 2018 November, Vol.35 No.11 中国现代应用药学 2018 年 11 月第 35 卷第 11 期
续表 2 中文名 低水平 (n=3) 中水平 (n=6) 高水平 (n=3) LOD/ 回收率 /% RSD/% 回收率 /% RSD/% 回收率 /% RSD/% μg kg 1 乙烯菌核利 107.1 6.1 103.2 11.5 101.0 4.6 4.2 10.9 七氯 91.1 3.5 91.7 12.0 89.8 7.7 0.4 1.2 皮蝇磷 107.5 4.4 104.9 12.1 101.5 7.7 1.5 3.1 八氯二丙醚 115.3 10.1 114.2 4.5 107.4 3.5 1.8 4.7 甲基五氯苯硫醚 65.1 4.4 64.4 6.3 66.3 5.2 1.6 1.6 杀螟硫磷 118.9 7.1 115.1 9.4 118.7 9.5 7.7 25.7 苯氟磺胺 124.8 1.8 118.2 2.6 124.6 4.4 5.6 13.4 艾氏剂 73.5 3.2 70.4 6.3 73.3 3.7 2.4 5.4 毒死蜱 114.6 4.2 106.5 5.3 109.1 5.9 4.7 15.5 对硫磷 117.7 4.8 115.3 4.3 119.5 5.0 5.6 18.7 三氯杀螨醇 78.1 1.6 70.2 2.9 70.1 4.3 8.8 22.5 氯酞酸二甲酯 106.8 0.6 103.4 5.5 104.4 2.9 0.8 2.8 三唑酮 110.6 4.9 104.5 5.1 108.1 3.4 3.3 11.1 溴硫磷 117.6 5.2 108.2 8.9 101.5 8.7 2.6 8.5 仲丁灵 107.8 7.6 102.0 6.5 104.0 7.1 6.2 20.7 顺式环氧七氯 105.2 11.3 95.4 9.2 97.4 6.7 2.1 7.1 氧化氯丹 95.7 7.7 84.8 10.7 87.5 7.5 2.2 7.2 反式环氧七氯 103.4 7.7 94.3 5.6 91.7 1.3 2.1 7 二甲戊乐灵 104.0 8.3 93.0 9.1 98.7 6.8 7.2 24 哌草丹 109.5 5.9 97.4 10.1 96.9 7.5 0.9 3.0 三唑醇 106.7 7.4 100.0 8.5 105.1 5.2 17.1 38.5 腐霉利 117.3 11.4 97.4 11.8 95.7 10.6 1.5 2.8 氟虫腈 117.7 9.2 96.7 10.9 102.3 6.8 1.5 5.1 反式氯丹 92.9 7.9 80.7 10.0 82.7 7.7 0.9 3.1 o,p'- 滴滴伊 81.8 9.8 75.6 10.8 76.6 6.1 0.4 1.4 乙基溴硫磷 98.9 6.6 86.5 8.7 90.2 7.9 1.0 3.5 α- 硫丹 110.2 7.2 105.3 6.2 101.1 1.3 25.6 85.5 顺式氯丹 89.4 12.9 79.8 10.7 80.5 5.8 0.9 2.9 氟节胺 119.1 4.8 111.1 8.3 109.5 8.4 1.3 4.2 狄氏剂 96.6 3.5 92.8 9.6 94.6 7.2 5.4 8.4 p,p'- 滴滴伊 65.9 3.7 66.5 7.8 66.4 4.0 0.4 1.3 o,p'- 滴滴滴 88.7 4.4 84.8 8.3 85.4 7.2 0.4 1.4 异狄氏剂 99.6 4.8 92.8 8.3 94.8 5.9 3.4 14.3 除草醚 84.0 3.5 83.3 4.3 78.3 3.0 8.9 15.6 β- 硫丹 108.7 2.9 103.0 6.2 103.6 5.2 12.4 26.9 溴虫腈 104.0 4.9 107.2 4.6 104.3 3.0 6.9 23.1 p,p'- 滴滴滴 93.7 9.7 87.8 7.5 86.1 8.8 1.1 3.7 o,p'- 滴滴涕 93.2 2.3 92.1 9.6 108.0 2.4 0.9 2.9 p,p'- 滴滴涕 118.7 11.4 99.7 5.4 98.0 1.1 6.3 3.0 溴螨酯 108.5 10.7 99.1 6.3 94.9 6.4 0.2 0.8 联苯菊酯 77.9 6.3 84.0 3.8 78.6 6.2 1.1 3.8 甲氧滴滴涕 115.5 8.3 110.3 1.6 107.5 1.9 1.9 6.3 甲氰菊酯 112.7 9.1 104.1 4.8 97.6 5.6 4.4 14.6 苯醚菊酯 90.1 5.1 87.8 5.0 90.2 2.7 4.9 16.2 氯氟氰菊酯 124.6 5.3 117.6 8.0 112.9 4.8 1.5 5.0 氯菊酯 95.4 3.1 86.2 3.9 86.0 2.9 6.9 22.8 氟氯氰菊酯 117.7 2.1 95.9 5.1 89.5 3.6 17.9 33.7 氯氰菊酯 109.5 0.4 98.8 7.4 89.3 2.3 14.4 48.2 喹禾灵 99.8 8.0 94.5 2.0 90.5 3.5 6.2 20.8 氟氰戊菊酯 90.4 6.9 82.4 3.1 75.1 2.5 7.6 25.2 氰戊菊酯 115.6 3.7 100.9 6.9 95.9 2.7 11.9 20.4 LOQ/ μg kg 1 中国现代应用药学 2018 年 11 月第 35 卷第 11 期 Chin J Mod Appl Pharm, 2018 November, Vol.35 No.11 1707
2.5 样品测定按照上述方法对 40 批菊花进行农药残留测定, 结果所监测的 68 种农药中共检出 5 种, 分别为毒死蜱 溴虫腈 甲氧滴滴涕 苯醚菊酯和氯菊酯 毒死蜱检出范围为 0.02~0.51 mg kg 1, 检出率为 50.0% 溴虫腈检出范围为 0.05~0.08 mg kg 1, 检出率为 10.0% 甲氧滴滴涕检出范围为 0.01~ 0.02 mg kg 1, 检出率为 85.0% 苯醚菊酯检出范围为 0.03~0.07 mg kg 1, 检出率为 45.0% 氯菊酯检出范围为 0.01~0.02 mg kg 1, 检出率为 12.5% 经查阅日本肯定列表 欧洲药典 欧盟农药残留限量标准及 GB 2763-2016 食品中农药最大残留限量, 拟定毒死蜱 溴虫腈 甲氧滴滴涕 苯醚菊酯和氯菊酯 5 种农药的参考农药最高残留限量值分别为 1,10,0.05,0.05,1 mg kg 1, 对比发现 3 批样品存在苯醚菊酯残留超标的现象 总体来看,40 批样品中农药检出品种不多, 除个别批次外, 农药检出量也大部分在限量范围内, 结合实际调研了解, 随着人们对食品药品安全意识的提高, 在中药材种植过程中, 种植基地已渐渐趋向于选择低毒低残留农药, 以兼顾中药材品质 产量及食用安全 3 讨论试验对 7 种不同提取溶剂进行了比较, 结果发现石油醚 (60~90 ) 正己烷 环己烷提取效果欠佳, 乙腈 丙酮 乙酸乙酯 环己烷 乙酸乙酯 (1 1)4 种提取溶剂对各农药提取效果相对较好 但丙酮 乙酸乙酯 环己烷 乙酸乙酯 (1 1) 极性较小, 对色素等杂质化合物也有较好的溶解力, 提取样品中农药化合物的同时, 也易造成其他杂质化合物的共萃取, 对测定结果干扰严重, 增加仪器污染负担, 而且这 3 种溶剂沸点较低, 易挥发, 容易引起提取溶剂体积的变化, 使得最终测定结果的偏差较大 因此, 最终选择乙腈作为提取溶剂 试验对净化填料石墨化炭黑的使用量做了比较, 结果发现石墨化炭黑用量分别为 90,150,200, 250 mg 时, 提取溶液颜色及测定结果均无明显差异, 最终选择石墨化炭黑的用量为 90 mg 本研究应用高灵敏的气相色谱 - 三重四极杆质谱联用仪, 结合能够实现样品快速提取净化的 QuEChERS 前处理技术, 建立了同时测定杭白菊中 68 种农药残留的分析方法 该方法不仅简单 快速 高效, 而且选择性好, 灵敏度高, 通过基体匹配校准法与同位素内标法相结合, 有效降低了基质效应对测定的干扰, 可用于杭白菊中农药多残留的筛查和痕量分析 REFERENCES [1] 中国药典. 一部 [S]. 2015: 310-311. [2] LIU H B, ZHAO X F, SHI G Y, et al. Determination of five pyrethroid pesticides residues in Anoectochilus roxburghii by cloud point extraction-back extraction and GC-MS[J]. China J Chin Mater Med( 中国中药杂志 ), 2014, 39(15): 2859-2862. [3] WANG J G, WEI Y X, WANG F, et al. Rapid determination of 85 pesticide residues in Chinese medicinal herbs by triple quadrupole gas chromatography-tandem mass spectrometry [J]. Chin J Health Lab Technol( 中国卫生检验杂志 ), 2017, 27(3): 324-330. [4] JIN C L, SHI Z H, FAN C L, et al. Simultaneous determination of 155 pesticide residues in four kinds of Chinese herbal medicines by DSPE-SPE-LC-MS/MS [J]. Chin J Anal Lab( 分析试验室 ), 2012, 31(5): 84-92. [5] LING Y Q, LIN L, LIU G Z, et al. Determination of 156 pesticide residues in Trichosanthis Fructus by QuEChERS- SPE-UHPLC-MS/MS [J]. Chin J Mod Appl Pharm( 中国现代应用药学 ), 2018, 35(1): 17-23. [6] LIU X Q, LI Y F, MENG W T, et al. A multi-residue method for simultaneous determination of 74 pesticides in Chinese material medica using modified QuEChERS sample preparation procedure and gas chromatography tandem mass spectrometry [J]. J Chromatography B, 2016, 1016: 1-12. [7] LI H, XIAO Y, DU G, et al. Determination of 52 kinds of pesticides in four traditional Chinese medicine by accelerated solvent extraction method [J]. West China J Pharm Sci( 华西药学杂志 ), 2014, 29(6): 693-695. [8] HE P, YU S S. Simultaneous determination of 10 pesticide residues in Menthae Haplocalycis Herba by SPE and GC-MS [J]. Chin J Mod Appl Pharm( 中国现代应用药学 ), 2015, 32(12): 1471-1476. [9] HE M L, XIE J J, CHEN J, et al. Determination of 17 organochlorine pesticide residues in traditional Chinese medicinal herbs by gel permeation chromatography-solid phase extraction-gas chromatography method [J]. J Food Safety Qual( 食品安全质量检测学报 ), 2015, 6(3): 893-901. [10] HUANG X H, XUE J, XU X L, et al. Determination of 25 organochlorine pesticides in Flos Chrysanthemi by gas chromatography [J]. J Anal Sci( 分析科学学报 ), 2013, 29(3): 409-412. [11] LIU H B. Five pyrethroid pesticide residues for three kinds of traditional Chinese medicines using GC-MS [J]. J Zhejiang A&F Univ( 浙江农林大学学报 ), 2015, 32(1):110-115. [12] 中国药典. 四部 [S]. 2015: 209-224. 收稿日期 :2018-03-08 ( 本文责编 : 曹粤锋 ) 1708 Chin J Mod Appl Pharm, 2018 November, Vol.35 No.11 中国现代应用药学 2018 年 11 月第 35 卷第 11 期