44 藥物食品檢驗局調查研究年報 nn. Rept. FD 覆盆子. mg.6 mg 川芎.8 mg 天門冬.8 mg 製首烏7.68 mg 菟絲子. mg 肉蓯蓉.6 mg 玉竹.6 mg 五加皮.6 mg 丁香.8 mg 乾地黃.6 mg 當歸.6 mg 龍眼肉. mg.6 mg 茯神.6 mg

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1 4 藥物食品檢驗局調查研究年報. : nn Rept. FD Taiwan R.O.. : 中藥藥酒指標成分鑑別及含量測定之研究 秦玲 黃坤森 林秀珍 盧芬鈴 林雅姿 張華軒 鄭淑晶 黃秋羽 黃成禹 林哲輝 第三組 摘 要 為管制市售中藥藥酒品質 本計畫選擇中藥藥酒基準方之五加皮藥酒等8種處方 應用高效液相 層析法 建立處方藥材中指標成分之鑑別及含量測定方法 經實驗結果顯示 8種處方均使用-8之 層析管 以..%磷酸溶液與乙腈溶媒不同比例梯度沖提 其分離效果良好 各方法檢量線之相 關係數均在.999以上 而添加回收率則介於9. 4.%之間 另各指標成分亦探討其最低檢測濃 度及最低定量濃度 關鍵詞 中藥藥酒 指標成分 高效液相層析法 鑑別 含量測定 前 言 中藥酒劑在我國藥品管理制度上屬乙類成藥()販售 通路較為廣泛 不限定於藥局 在百貨店 雜貨店及 餐飲服務商均可兼營零售之 又由於國人常有冬令進 補或小飲藥酒以補氣血 促進血液循環的飲用習慣 中藥酒劑在台灣的中藥市場佔有一席之地 往年政府對中藥酒劑的品管 著重質方面之控 管 包括產品性狀 比重 成分鑑別 重金屬及含醇 量等項目之檢驗 但於歷年藥酒之品質抽驗調查中 曾發現不肖廠商利用未添加或添加不足量之原料藥材 製造一般酒類販賣之嚴重違規情形 據我國煙酒管理 法第四條之規定 依相關法規認屬藥品之酒類製劑得 免課徵菸酒稅 該行為實有逃稅及欺騙消費者之嫌 為遏止此類情形之再發 行政院衛生署於9年月4日 公告 () 增修中藥藥酒基準方方時 規定其申請藥品 查驗登記 除需檢附原檢驗規格及方法外 並應加作 處方中二個指標成分之高效液相層析法之定性 定量 分析 為因應衛生署有關中藥酒劑相關管理規定之公 告 本年度計劃選擇五加皮藥酒等中藥藥酒基準方8 方 建立其指標成分之高效液相層析法 得運用於市 售藥酒成分之定性 定量分析 以提升中藥藥酒品質 之管制 並可作為業者品管之參考 材料與方法 一 材料 灱材料來源 市售中藥材 度米酒 臺灣菸酒公 司 牞自配藥酒 依公告之藥酒基準方組成份量 原料 酒加至. ml. 五加皮藥酒 五加皮8.4 mg 熟地黃8.4 mg 丹參8.4 mg 杜仲8.4 mg 8.4 mg 乾薑8.4 mg 枸杞子8.4 mg 天門冬.8 mg 鐘乳石. mg. 十全大補藥酒 當歸7. mg 川芎. mg 白芍. mg 熟 地黃. mg 黨參. mg 茯苓. mg 白 朮. mg. mg. mg 黃耆. mg. 史國公藥酒去虎脛骨 當歸.8 mg 鱉甲.8 mg 羌活.8 mg 防 風.8 mg 萆薢.8 mg.8 mg 川牛 膝.8 mg 蠶砂.8 mg 松節.8 mg 乾茄 根. mg 枸杞子. mg 4. 周公百歲藥酒 黃耆7. mg 茯神7. mg. mg 當歸 4. mg 生地黃4. mg 熟地黃4. mg 黨參.7 mg 白朮.7 mg 麥門冬.7 mg 茯苓.7 mg 陳皮.7 mg 山茱萸.7 mg 枸杞 子.7 mg 川芎.7 mg 防風.7 mg 龜板 膠.7 mg mg 羌活 mg. 東引黃龍藥酒 茯神.87 mg 龍眼肉. mg 遠志.6 mg 覆盆子.87 mg 續斷. mg 紅花.8 mg 黨參.6 mg 肉蓯蓉.774 mg 蛇 床子.87 mg 熟地黃.744 mg 金櫻子.8 mg 五加皮.89 mg 當歸.87 mg 黃耆.69 mg 補骨脂.87 mg 枸杞子.744 mg 黃精.89 mg 乾地黃.8 mg.8 mg 淫羊藿.744 mg 菟絲子.6 mg 鎖陽.77 mg 川芎.77 mg 6. 東引千歲藥酒 人參.4 mg 山萸肉.6 mg 黃耆.6 mg

2 44 藥物食品檢驗局調查研究年報 nn. Rept. FD 覆盆子. mg.6 mg 川芎.8 mg 天門冬.8 mg 製首烏7.68 mg 菟絲子. mg 肉蓯蓉.6 mg 玉竹.6 mg 五加皮.6 mg 丁香.8 mg 乾地黃.6 mg 當歸.6 mg 龍眼肉. mg.6 mg 茯神.6 mg 遠志.6 mg 玄參.6 mg 紅花. mg 淫羊藿. mg 枸杞子.84 mg 烏藥.6 mg 7. 金門龍鳳藥酒 6. mg 山萸肉. mg 巴戟天6. mg 肉蓯蓉. mg. mg 當歸.8 mg 8. 虎骨木瓜藥酒 去虎骨 木瓜9.6 mg 川芎. mg 川牛膝. mg 當歸. mg 天麻. mg 五加皮. mg 紅花. mg 續斷. mg 白茄根. mg 玉竹6.4 mg.6 mg 防風.6 mg 桑枝. mg 犴標準品. 標準品innamic acid innamic aldehyde 6-Gingerol Liquiritin 及Paeoniflorine購自nacalai tesque. 標準品購自IHIMRU PHROS O.,LTD. 標準品Loganin購自EXTRSYNTHESE 4. 標準品購自Wako. 標 準 品 Ta n s h i n o n e I I a 購 自 中 國 藥 品 生 物 製 品檢驗所 另mylparaben Ethylparaben 4-Hydroxy benzoic acid n-amyl ester 4-Hydroxybenzoic acid n-hexyl ester n-hexyl 4-hydroxybenzoate Methylparaben均採試藥級 灱 試 藥 甲醇 乙腈採HPL級 磷酸均採試藥 級 二 儀器裝置 灱 高效液相層析儀. 溶媒傳送系統 gilent series. 檢測器 gilent series. 自動注射裝置 gilent series 牞 高效液相層析儀. 溶媒傳送系統 HITHI L-. 檢測器 HITHI L-4. 自動注射裝置 HITHI L- 三 實驗方法 灱 高效液相層析法之分析條件. 五加皮藥酒 分析成分 6-Gingerol Osthol Tanshinone IIa 內部標準品 mylparaben ⑴層析管 iosil ODS-U µm 4.6 x mm ⑵層析管溫度 º ⑶移動相.%磷酸溶液 乙腈 Time () F.R. (ml/) ⑷檢測波長 8 nm ⑸注入量 µl. 十全大補藥酒() 分析成分 Liquiritin innamic acid Paeoniflorin 內部標準品 Methylparaben ⑴層析管 GL Sciences Inc. Inertsil ODS- µm 4.6 x mm ⑵層析管溫度 º ⑶移動相.%磷酸溶液 乙腈 Time () F.R. (ml/) ⑷檢測波長 4 nm ⑸注入量 µl. 史國公藥酒去虎脛骨() 分析成分 內部標準品 Methylparaben ⑴層析管 Inertsil ODS- µm 4.6 x mm ⑵層析管溫度 º ⑶移動相.%磷酸溶液 乙腈 Time () F.R. (ml/) ⑷檢測波長 8 nm ⑸注入量 µl 4. 周公百歲藥酒 分析成分 innamic aldehyde 內部標準品 4-Hydroxy benzoic acid n-amyl ester ⑴層析管 E 8 µm 4.6 mm ⑵層析管溫度 º ⑶移動相. 磷酸溶液 乙腈

3 4 中藥藥酒指標成分鑑別及含量測定之研究 mm ⑵層析管溫度 º ⑶移動相.%磷酸溶液 Time () F.R. (ml/) Time () F.R. (ml/) ⑷檢測波長 6 nm ⑸注入量 µl. 東引黃龍藥酒及東引千歲藥酒(4) 分析成分 內部標準品 4-Hydroxybenzoic acid n-hexyl ester (n-hexyl 4-hydroxybenzoate) ⑴層析管 E 8 µm 4.6 x mm ⑵層析管溫度 º ⑶移動相.%磷酸溶液 乙腈 Time () F.R. (ml/) ⑷檢測波長 4 nm ⑸注入量 µl 6. 金門龍鳳藥酒 分析成分 Loganin 內部標準品 4-Hyroxybenzoic acid n-amyl ester ⑴層析管 osmosil MS 8 µm 4.6 x mm ⑵層析管溫度 º ⑶移動相.%磷酸溶液 乙腈 Time () F.R. (ml/) ⑷檢測波長 4 nm ⑸注入量 µl 7. 虎骨木瓜藥酒 去虎骨 () 分析成分 內部標準品 Paeoniflorin ⑴層析管 osmosil 8 R-II µm 4.6 x 乙腈 ⑷檢測波長 4 nm ⑸注入量 µl 牞儀器檢出量 最低定量濃度 精確稱取各對照用標準品 分別稀釋調配成一系 列濃度 以高效液相層析儀分析之 選擇以訊號 雜訊比為 時之濃度 作為儀器最低檢出濃 度 時之濃度 作為最低定量濃度 犴標準曲線之製作 精確稱取各對照用標準品 稀釋調配成一系列至 少五種濃度之溶液 最低濃度不得低於最低定量 濃度 分別取不同濃度之標準品溶液 µl 注入 高效液相層析儀分析 以標準品之濃度為X軸 波 峰面積為Y軸 製作標準曲線 並求出線性迴歸方 程式 Y = mx + b 及相關係數 犵檢液之配製. 自配藥酒 原料藥材研為粗末 依公告基準方 之藥材份量稱取之 加入度米酒 浸泡 天 濾清定容即得. 自配藥酒空白液 個別去除欲探討成分之藥 材 依前法浸泡配製 玎精密度. 同日內試驗 取處方中之受測成分 其濃度均 在檢量線內 一日內定量六次. 異日間試驗 取處方中之受測成分 其濃度均 在檢量線內 連續定量五天 甪添加回收實驗 分別取各定量成分檢量線內三種濃度 分別加入 該受測成分處方之檢液 再以高效液相層析儀分 析 並計算其回收率 結果與討論 一 高效液相層析法條件之探討 選擇行政院衛生署公告中藥藥酒基準方中之8種 處方 依實驗方法 四 之步驟模擬配製藥酒製劑及 其空白液 再依實驗方法 一 之HPL方法條件分析 之 選擇各藥酒指標成分滯留時間處未受到其他成分 干擾之方法為其檢驗方法 空白液不添加內部標準品 IS 方可檢視該處亦不受其他成分干擾 其結果顯

4 46 藥物食品檢驗局調查研究年報 nn. Rept. FD 示 Methylparaben 如圖二. 史國公藥酒去虎脛骨 分析成分為當歸之 之 內部標準品為 Methylparaben 如圖三 4. 虎骨木瓜藥酒去虎骨 分析成分為當歸 川芎 之 之 內部標 準品為Paeoniflorin 如圖四. 五加皮藥酒 分析成分為乾薑之6-Gingerol 蛇 床子之 丹參之Tanshinone II 內部標 準品為mylparaben 如圖一. 十全大補藥酒 分析成分為之 Liquiritin 之innamic acid 當歸之 白芍之Paeoniflorin 內部標準品為 DD, Sig=8,6 Ref=off (LYT\WIN-6.D) DD, Sig=8,6 Ref=off (LYT\WIN-66.D) DD, Sig=8,6 Ref=off (LYT\WIN-67.D) DD, Sig=8,6 Ref=off (LYT\WIN-9.D) 4 DD, Sig=8,6 Ref=off (LYT\WIN-6.D) mi mi mi mi D DD, Sig=8,6 Ref=off (LYT\WIN-6.D) E DD, Sig=8,6 Ref=off (LYT\WIN-64.D) F 圖一 五加皮藥酒.標準品.自配藥酒 稀釋.空白液-去 稀釋 D.自配藥酒 E.空白液-去生薑 F.空白液去丹參. 6-Gingerol. mylparaben I.S.. Osthol 4. Tanshinone IIa

5 47 中藥藥酒指標成分鑑別及含量測定之研究 圖二 十全大補藥酒.標準品.自配藥酒.空白液-去當歸. Paeoniflorin. Liquiritin. 4. Methylparaben (I.S.).innamic acid 6.. 周公百歲藥酒 分析成分為之innamic aldehyde 之 內部標準品為 4-Hydroxy benzoic acid n-amyl ester 如圖五 6. 東引 黃龍藥酒及千歲藥酒 分析成分為 之 之 內部 標準品為4-Hydroxybenzoic acid n-hexyl ester n-hexyl 4-hydroxybenzoate 如圖六 七 7. 金門龍鳳藥酒 分析成分為山茱萸之Loganin 之 內部標準品為4-Hyroxybenzoic acid n-amyl ester 如圖八 8種藥酒處方之HPL分析條件 均使用逆相層析 管柱 8 層析管溫度 除十全大補藥酒分析設定 為º外 其餘七方均為º 檢測波長 依不同成 分而異 介於6 8 nm之間 而移動相方面 則8 個處方均以..%磷酸溶液與乙腈不同比例梯度沖 提 均得到良好分離效果 二 分析成分之線性關係 分析各藥酒指標成分 其對照標準品在適當濃度 範圍內 其線性迴歸方程式及相關係數 r 分別為表 一所示 r值均在.999以上 顯示各分析方法均有良 好的線性關係 三 分析成分之精密度 各藥酒指標成分 在其檢量線之線性範圍內 選擇一濃度標準品溶液內含內部標準品分別於一天內 重覆注入分析6次 及不同之五天重覆注入分析次 所得之面積比計算其同日內 Intra-day test 與異日 間 Inter-day test 之標準偏差 Standard deviation

6 48 nn. Rept. FD D D Methylparaben (I.S.)

7 49 Norm Norm Norm Norm. 8 D D. -.. Paeoniflorin (I.S.).

8 nn. Rept. FD m U D D. -. innamic aldehyde. Hydroxy benzoic acid n-myl ester(i.s.). Minutes. m U m U D D n-hexyl -4-hydroxybenzoate (I.S.) Minutes

9 中藥藥酒指標成分鑑別及含量測定之研究 m U m U D 4 4 Minutes 圖七 千歲藥酒.標準品.自配藥酒.空白液-去 D.空白液-去... n-hexyl 4-hydroxybenzoate (I.S.) S.D. 及相對標準偏差 Relative standard deviation R.S.D. 結果如表二所示 異日間試驗除虎骨木瓜藥 酒 去虎骨 外 其他處方之RSD值均在.%以下 而同日內試驗之RSD值均在.%以下 四 分析成分之添加回收率 在五加皮藥酒等8種處方 受測成分處方之檢液中 添加各定量成分之三種濃度 再以高效液相層析儀分 析 計算其添加回收率 結果如表三所示 8個處方之 添加回收率介於9. 4.% 相對標準偏差為.%.% 五 各藥酒指標成分於高效液相層析儀之最低 檢出量及最低定量濃度 精確稱取各藥酒指標成分之對照用標準品 分別 稀釋調配成一系列濃度 以高效液相層析儀分析之 選擇以訊號雜訊比為 時之濃度 作為儀器最低檢 出濃度 訊號雜訊比為 時之濃度 作為最低定量 濃度 結果如表四所示 參考文獻. 成藥及固有成方製劑管理辦法 6.4.行政院衛 生署公布. 行政院衛生署 9..4衛署中會字第94 號公告. Lin, S. J., Liu, F. S., Lu, F. L., Huang,. Y. and Wen, K Stability of Geniposide, erberine and Paeoniflorin in Uen-hing-Yiin, San-Hwang-Shieh-shinTang and Sheau-hing-Long-Tang. Journal of Food and Drug nalysis (): Lin, S. J., Huang,. Y., Wen, K.. and Suen, T. T Quantitative naiysis of Paeonitflorin, Geniposide and in Jing-Jieh-Lian-hyau-Tong by High PerformanceLiquid hromatography. Journal of Food and Drug nalysis. (): -4.. Lin, S. J., Tseng, H. S., Wen, K.. and Suen, T. T Deteration of,mangiferin, Palmatine, erberine,wogonin and in Traditional hinese medicinal preparation Sann-JianKuey-Jian-Tang by HPL. Journal of hromatography 7: Ku, Y. R. Lin, J. H., Wen, K.. and Liao,. H Deteration of Polar onstituents in Scrophulariae Radix by Micellar Electrokinetic apillary apillary hromatorgraphy. Journal of Food and Drug nalysis 6(): 4-4.

10 nn. Rept. FD D D. -. Loganin.. 4- Hyroxybenzoic acid n-amyl ester (I.S.)

11 中藥藥酒指標成分鑑別及含量測定之研究 表一 各藥酒指標成分之線性關係 處方名 五加皮藥酒 十全大補藥酒 史國公藥酒去虎脛骨 周公百歲藥酒 東引黃龍藥酒 東引千歲藥酒 金門龍鳳藥酒 虎骨木瓜藥酒去虎骨 藥材 分析成分 濃度範圍 r 乾薑 6-Gingerol -6 µg/ml.9999 Osthol.-6 µg/ml.9999 丹參 Tanshinone IIa.-6 µg/ml µg /ml. Liquiritin µg /ml.9996 innamic acid µg /ml. 當歸.-6.4 µg /ml.9999 白芍 Paeoniflorin.8-.6 µg /ml.9999 當歸 mg/ml mg/ml. innamic aldehyde nl/ml ppm µg/ml ppm µg/ml µg/ml µg/ml µg/ml. 山茱萸 Loganin µg/ml µg/ml.9998 當歸 川芎.-.4 mg/ml mg/ml.9996 表二 各藥酒指標成分之精密度 處方名 項目 五加皮藥酒 十全大補藥酒 史國公藥酒去虎脛骨 周公百歲藥酒 東引黃龍藥酒 東引千歲藥酒 金門龍鳳藥酒 虎骨木瓜藥酒去虎骨 藥材 分析成分 Inter-day test Mean ± S.D. (RSD:% Intra-day test Mean ± S.D. (RSD:% 乾薑 6-Gingerol.4 ±.78 (.78.7 ±.8 (.8 Osthol.89 ±.6688 (.. ±.9 (. 丹參 Tanshinone IIa.8 ±.848 (.4.8 ±.7 (.7. ±.78 (.. ±.6 (.8 Liquiritin 4. ±.4 ( ±. (. innamic acid 4.7 ±.4 ( ±.6 (.9 當歸. ±..4 (.4.8 ±.9 (.9 白芍 Paeoniflorin 7.6 ±.67 ( ±.49 (. 當歸.9 ±. (.7. ±. (.4.88 ±.4 (..88 ±. (. innamic aldehyde. ±.9 (.7. ±.6 (.4. ±. (.7. ±. (.9.84 ±.4 (.9.84 ±.4 (.4.8 ±.6 (.7.8 ±.4 (..84 ±.4 (.9.84 ±.4 (.4.8 ±.6 (.7.8 ±.4 (. 山茱萸 Loganin.88 ±.6 (.7.88 ±.6 (.7.4 ±.8 (.7.4 ±. (.9 當歸 川芎.7 ±.6 (.64.8 ±.8 (.6. ±.8 (4..4 ±.8 (.6

12 4 藥物食品檢驗局調查研究年報 nn. Rept. FD 表三 各藥酒指標成分之添加回收試驗 項目 處方名 藥材 分析成分 五加皮藥酒 乾薑 丹參 6-Gingerol Osthol Tanshinone IIa 十全大補藥酒 白芍 Liquiritin innamic acid Paeoniflorin 史國公藥酒去虎脛骨 當歸 周公百歲藥酒 innamicaldehyde 添加濃度(µg/mL) 回收率:Mean% ± S.D. (RSD:%) 98. ±. (.). ±. (.4).8 ±.48 (.) 99.9 ±. (.) 97. ±.8 (.9).. ±.9 (.9) ±.69 (.7) 96. ±.4 (.44) 97. ±.4 (.).. ±. (.48). 99. ±.7 (.). 99. ±. (.). 97. ±.4 (.4). 98. ±. (.). 99. ±. (.) ±. (.87) ±.96 (.88).9 4. ±. (.) ±.47 (.9) ±.6 (.9) ±.6 (.46).74. ±.7 (.7).9. ±. (.). 98. ±.4 (.4) ±. (.).4 4. ±. (.). 4. ±.8 (.7) ±.8 (.86) ±.8 (.8) ±. (.)

13 中藥藥酒指標成分鑑別及含量測定之研究 表三 各藥酒指標成分之添加回收試驗 續 項目 處方名 藥材 分析成分 東引黃龍藥酒 東引千歲藥酒 金門龍鳳藥酒 山茱萸 Loganin 虎骨木瓜藥酒 去虎骨 當歸 川 芎 添加濃度(µg/mL) 回收率:Mean% ± S.D. (RSD:%) ±. (.4) 8..9 ±. (.) ±.9 (.9)...8 ±.8 (.8) ±. (.) ±.4 (.) ±.9 (.8) 8.6. ±. (.).4.6 ±.4 (.4)...8 ±.8 (.8) ±. (.) ±.4 (.) ±.9 (.8) 8.6. ±. (.).4.6 ±.4 (.4). 6. ±.7 (.69). 4.8 ±. (.).. ±. (.8). 9.6 ±.7 (.7).6 9. ±.4 (.46).9 9. ±.8 (.4).9 9. ±. (.). 98. ±.7 (.4) ±.6 (.).44.8 ±. (.87) ±.96 (.88).9 4. ±. (.)

14 6 藥物食品檢驗局調查研究年報 nn. Rept. FD 表四 各藥酒指標成分之最低檢測濃度及最低定量濃度 項目 處方名 五加皮藥酒 十全大補藥酒 史國公藥酒去虎脛骨 周公百歲藥酒 東引黃龍藥酒 東引千歲藥酒 金門龍鳳藥酒 虎骨木瓜藥酒去虎骨 藥材 分析成分 最低檢測濃度(µg/mL) 最低定量濃度 (µg /ml) 乾薑 6-Gingerol 7. ng/ml. Osthol. ng/ml. 丹參 Tanshinone IIa Liquiritin..6 innamic acid 當歸..7 白芍 Paeoniflorin..4 當歸 innamic aldehyde. ng/ml.8 ng/ml 山茱萸 Loganin 當歸 川芎 hristopherson, M. J., Yoder, K. J. and Miller, R.. Validation of a Stability-lndicating HPL Method for the Deteration of miodarone Hl and its Related Substances in miodarone Hl Injection.

15 7 Identification and Quantification of Target ompounds in Herbal Wine LING HIN, KUEN-SEN HUNG, SHION-JNE LIN, FEN-LING LU, Y-TZY LIN, HU-HSUN HNG, SHU-HONG HENG, HIU-YU HUNG, HENG-YU HUNG ND JER-HUEI LIN Pharmacognosy Division STRT High performance liquid chromatography method was employed to detere target compounds in herbal wine. These compounds included 6-gingerol, osthole, tanshinone II, glycyrrhizin, liquiritin, cinnamic acid, ferulic acid, paeoniflorin, gentiopicroside, cinnamic aldehyde, schizandrin and loganin. Each of them was from eight different formulations of herbal wine. Separations were effected using a 8 column by gradient elution with different ratio of..% phosphoric acid and acetonitrile. The linear coefficients of regression equations were all above.999 with the recoveries of eight samples of 9. 4.%. The limitations of quantitation and detection were also reported. Key words: herbal wine, target compounds, high performance liquid chromatography, identification, quantification

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