草案版乙型鏈球菌 (Group B Streptococcus) 檢驗標準作業手冊 1. 目的 : 乙型鏈球菌 (Group B Streptococcus; GBS; 學名 Streptococcus agalactiae) 被認為是嬰兒出生前後感染及死亡的重要原因被乙型鏈球菌感染的嬰兒往往會

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向溥
6 years ago
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1 乙型鏈球菌 (Group B Streptococcus) 檢驗標準作業手冊 1. 目的 : 乙型鏈球菌 (Group B Streptococcus; GBS; 學名 Streptococcus agalactiae) 被認為是嬰兒出生前後感染及死亡的重要原因被乙型鏈球菌感染的嬰兒往往會導致嚴重的併發症, 包括敗血症肺炎及腦膜炎等, 嚴重則會造成死亡及永久性的神經性後遺症乙型鏈球菌感染新生兒的途徑, 通常是在分娩的時候經由母體感染, 所以若能在孕婦懷孕時期早期診斷出是否感染乙型鏈球菌, 就可以有效預防新生兒感染的危險因此, 美國疾病管制局建議懷孕週的婦女應做全面性的篩檢, 採檢的部位為陰道及直腸末端, 可以增加乙型鏈球菌的診斷機率約 50 %以上, 若在確定診斷後給予孕婦抗生素的治療, 新生兒感染乙型鏈球菌的機率則可以降低 75 %以上 2. 範圍 : 懷孕週的婦女 ( 包括計畫性剖腹產孕婦 ) 3. 材料及試劑 : 3.1 Amies 或 Stuart s 的運送培養基 3.2 增菌培養基 : 可選擇使用, 步驟中以 LIM broth 為例說明之 LIM broth ( 含 10 μg/ml 的 cloistin 及 15 μg/ml 的 nalidixic acid 之 Todd-Hewitt 培養液 ) 含 5% 綿羊血的 Trans-Vag broth ( 含 8 μg/ml 的 gentamicin 及 15 μg/ml 的 nalidixic acid 之 Todd-Hewitt 培養液 ) StrepB carrot broth( 含 Granada medium 可偵測溶血型的 GBS 菌株 ) 3.3 建議培養基 Blood agar plate (BAP) Columbia colistin-nalidixic acid agar (CNA) 乙型鏈球菌產色培養基 (CHROMagar GBS): 依產品說明使用 3.4 二氧化碳 (5%) 培養箱 3.5 觸媒 (3% catalase): 10 ml, 30% H 2 O ml 無菌水,2-8 保存 3.6 革蘭氏染色套組 (Gram stain kit) 3.7 標準菌株 Staphylococcus aureus ATCC 25923

2 3.7.2 Streptococcus agalactiae ATCC S. pyogenes ATCC Hippurate (1%) 試劑 :1 g sodium hippurate ml 無菌水, 分裝 0.4 ml 備用, 保存於 -20, 直到品管異常後丟棄 3.9 Ninhydrin (3.5%) 試劑 :50 ml acetone + 50 ml 1-butanol g ninhydrin; 存放於棕色瓶內, 室溫下可保存 6 個月 3.10 自動化鑑定儀器或其他商業試劑套組 4. 培養步驟 : 4.1 LIM broth 將陰道 - 肛門拭子接種到 LIM broth 中將接種後之 LIM broth 於 35-37, 二氧化碳 (5%) 培養箱中, 培養小時無論是否混濁, 將 LIM broth 次培養於 BAP( 或其他建議培養基 ) 上將次培養之 BAP( 或其他建議培養基 ) 於 35-37, 二氧化碳 (5%) 培養箱中培養小時若無懷疑菌落, 則延長培養小時後再行觀察 4.2 StrepB carrot broth 將陰道 - 肛門拭子接種到 StrepB carrot broth 中將接種後之 StrepB carrot broth 於培養箱中, 培養小時若 broth 產生橘色至紅色的變化, 則判定為 GBS 陽性 (1) 將 broth 次培養於 BAP( 或 CNA) 上 (2) 將次培養之培養基, 於 35-37, 二氧化碳 (5%) 培養箱中培養小時 (3) 挑取 GBS 菌落進行藥物感受性試驗若 broth 無顏色變化 (1) 將 broth 次培養於 BAP( 或 CNA) 上 (2) 將次培養之培養基於 35-37, 二氧化碳 (5%) 培養箱中培養小時 (3) 選取懷疑的菌落進行 5.2~5.4 之鑑定流程 5. 鑑定流程 ( 圖二 ): 5.1 觀察 BAP 培養基上灰色半透明菌落 ( 窄型之 Beta 溶血或無溶血 )

3 5.2 做觸媒 (3% catalase) 試驗 5.3 若觸媒試驗陰性, 進一步做革蘭氏染色 5.4 若染色呈現革蘭氏陽性鏈球菌 (Gram positve coccus in chains), 則進行下列任一個確定試驗來鑑定 CAMP test (Christie, Atkins, Munch-Peterson test)( 圖一 ) (1) 以直線劃法將標準菌株 Staphylococcus aureus ATCC 劃於 BAP 中間的位置 (2) 同樣以直線劃法, 將測試菌株垂直步驟 (1) 之菌線劃於 BAP 上, 切勿碰觸步驟 (1) 之菌線 (3) 將 BAP 於 35-37, 二氧化碳 (5%) 培養箱中培養小時 (4) 觀察在 Staphylococcus aureus 與測試菌株之交界處是否產生箭頭狀 (arrowhead) 的加強溶血現象, 有的話則為陽性反應, 確認為乙型鏈球菌 (5) 陰性則不會產生箭頭狀 (arrowhead) 的加強溶血現象 Hippurate hydrolysis test (1) 取出三管已分裝好的 Hippurate 試劑 ( 每管 0.4 ml) (2) 分別加入培養小時的測試菌株陽性對照菌株 (S. agalactiae ATCC 12386) 與陰性對照菌株 (S. pyogenes ATCC 19615), 濃度約需達 McFarland No.3. ( 注意勿將培養基挑起, 以免內含之蛋白質影響試驗結果 ) (3) 於培養 2 小時 (4) 加入 4 滴的 ninhydrin 試劑 (5) 於培養 30 分鐘 (6) 每隔 10 分鐘觀察一次顏色, 陽性反應會於 30 分鐘內出現深藍色變化, 陰性則呈現淡淡的紫色或不變色鏈球菌血清分型乳膠凝集試驗 (Latex serologic test for streptococcal grouping): 依試劑操作說明執行自動化鑑定儀器或商業化套組 (Vitek 2, Phoenix, 或 API 等 ): 依儀器或套組操作說明執行 6. 報告 : 6.1 陰性報告 : 乙型鏈球菌培養陰性 6.2 陽性報告 : 乙型鏈球菌培養陽性 7. 品管 :

4 7.1 CLSI M22-A3 規範之排除品管項目 :Lim broth, BAP, CNA. 7.2 觸媒 (3% catalase) 陽性對照 :S. aureus ATCC 25923, 產生氣泡陰性對照 :S. pyogenes ATCC 19615, 無氣泡產生 7.3 CAMP test 陽性對照 :S. agalactiae ATCC 12386, 產生箭頭狀加強溶血陰性對照 :S. pyogenes ATCC 19615, 無加強溶血的現象 7.4 Hippurate test 陽性對照 :S. agalactiae ATCC 12386, 30 分鐘內出現深藍色反應陰性對照 :S. pyogenes ATCC 19615, 淡紫色或不變色 7.5 StrepB carrot broth 陽性對照 :S. agalactiae ATCC 12386, 產生橘色至紅色陰性對照 :S. pyogenes ATCC 19615, 無顏色變化 8. 參考文獻 : 8.1 Clinical microbiology procedure handbook, 3 rd ed., Section 3.9.2, Group B Streptococcus Culture. 8.2 CDC website: Clinical Laboratory Standard Institute M22-A3 8.4 CDC. Morbidity and Mortality Weekly Report, No. RR-10, Vol. 59, 附圖 : 9.1 圖一,CAMP test 操作結果示意圖 9.2 圖二, 乙型鏈球菌檢驗鑑定流程圖

附圖一 CAMP test BAP 中間直立菌線 :Staphylococcus aureus ATCC 25923; 左側水平菌線 :Group B streptococcus, 與 Staphylococcus aureus ATCC 25923 交界處可見箭頭狀加強溶血區 ; 右側水平菌線 :Group A streptococcus, 與

5 附圖一 CAMP test BAP 中間直立菌線 :Staphylococcus aureus ATCC 25923; 左側水平菌線 :Group B streptococcus, 與 Staphylococcus aureus ATCC 交界處可見箭頭狀加強溶血區 ; 右側水平菌線 :Group A streptococcus, 與 Staphylococcus aureus ATCC 交界處可見無加強溶血的現象 CAMP test positive control: Group B streptococcus Staphylococcus aureus ATCC CAMP test negative control: Group A streptococcus

6 附圖二乙型鏈球菌檢驗鑑定流程圖資料來源 : 參考自美國 CDC 網站 ( 部分修改 )

乙型鏈球菌篩檢檢體採集標準作業、保存與運輸作業等須知

乙型鏈球菌篩檢檢體採集標準作業、保存與運輸作業等須知孕婦乙型鏈球菌篩檢檢體採集標準作業保存與運輸作業等須知 101 年 12 月 31 日修訂版 1. 目的 : 乙型鏈球菌 (Group B Streptococcus; 以下簡稱 GBS) 是新生兒細菌感染疾病中最常見細菌之一, 可引起新生兒敗血症腦膜炎肺炎等嚴重感染, 造成新生兒死亡或留下神經系統後遺症執行孕婦產前陰道和肛門口 ( 或直腸 ) 乙型鏈球菌篩檢, 可有效預防及降低新生兒乙型鏈球菌感染

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