方法图 1 显示了从 FFPE 样本中分离核酸的工作流程步骤 FFPE 样本先进行脱蜡, 然后使用蛋白酶 K 溶液酶切 在微量离 心管中手动处理利用 MagMX FFPE DN/RN Ultra 试剂 盒获得的抽提物, 或在 KingFisher Duo 系统或 KingFisher Flex 磁粒
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- 昆炮 梁
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1 应用指南 MagMX FFPE DN/RN Ultra Kit MagMX FFPE DN/RN Ultra 试剂盒 简介快速且准确的癌症基因组分析是癌症检测和治疗管理研 究的迫切要求 然而, 临床癌症研究样本通常为用于组 织病理学分析和组织保存的福尔马林固定石蜡包埋样本 (FFPE) 该方法可保护组织, 实现长期保存, 但大量的核 酸化学交联会使下游处理应用 ( 如下一代测序 (NGS)) 变得 复杂 pplied iosystems MagMX FFPE DN/RN Ultra 试剂盒可以从 FFPE 样本中快速 可靠地进行核酸分离 利用简单的工作流程, 可从同一样本中顺序抽提 DN 和 RN, 实现各种样本分析 此外, 还可以手动处理样本, 或使用开放式机器人等自动化系统同时处理至多 96 个样本 基于磁珠的实验方案和磁珠核酸酶处理有助于减少样本损失, 使该试剂盒适用于小量或有限的组织标本 该试剂盒还与 CitriSolv 清洁剂结合使用, 后者可代替二甲苯脱蜡, 毒性较小, 且无需在化学通风橱内使用 包括 qpcr gilent ioanalyzer 系统分析和 NGS, 即便是使用保存超过 25 年的 FFPE 组织亦可 MagMX FFPE DN/RN Ultra 试剂盒已经过验证, 适用于多种研究样本类型, 包括实体瘤活检 穿刺活检和细针抽吸样本 利用该试剂盒, 可从 5 μm FFPE 样本切片中分离核酸, 产量和质量与其他使用磁珠或离心柱的商品化的试剂盒相当, 与其他主要供应商的试剂盒相比, 手动操作时间缩短约 % 使用 MagMX FFPE DN/RN Ultra 试剂盒提取的 DN RN 和 microrn 可用于多种下游分子应用, 本应用指南介绍了使用 MagMX FFPE DN/RN Ultra 试剂盒, 从 5 μm 的人 FFPE 组织切片中抽提 DN 和 RN 并在 Thermo Scientific KingFisher Duo 系统或 KingFisher Flex 磁粒处理仪上处理的过程 我们检测了多种 FFPE 样本类型, 包括实体瘤切除 穿刺活检和细针抽吸样本 核酸产量 质量和功能已经过下游应用测试, 包括 Ion Torrent NGS 测序
2 方法图 1 显示了从 FFPE 样本中分离核酸的工作流程步骤 FFPE 样本先进行脱蜡, 然后使用蛋白酶 K 溶液酶切 在微量离 心管中手动处理利用 MagMX FFPE DN/RN Ultra 试剂 盒获得的抽提物, 或在 KingFisher Duo 系统或 KingFisher Flex 磁粒处理仪上自动处理 使用 Invitrogen Quant-iT dsdn 和 RN 分析试剂盒及 96 孔酶标仪定量核酸产量 对于 qpcr 分析, 使用 Invitrogen SuperScript VILO cdn 合成试剂盒对样本进行逆转录, 然后使用 pplied iosystems TaqMan 基因表达分析 对于 mirn 分析, 使用 pplied iosystems TaqMan MicroRN 逆转录试剂 盒对 RN 样本进行逆转录, 然后使用 pplied iosystems TaqMan MicroRN 分析 在 pplied iosystems 79HT 快速实时荧光定量 PCR 系统上运行样本, 自动测定 C t 值 为检测 NGS 兼容性, 我们使用 MagMX FFPE DN/RN Ultra 试剂盒或其他基于离心柱的商品化的抽提试剂盒抽提 FFPE 组织样本 使用两种试剂盒, 从连续的 FFPE 组织切 片中提取 DN 和 RN, 重复两次 参照其他供应商试剂盒 的实验方案, 对使用该试剂盒抽提的样本进行手动处理, 而 MagMX FFPE DN/RN Ultra 试剂盒样本在带有 96 孔板 头的 KingFisher Flex 处理仪上处理 文库制备和测序使用 Ion mpliseq 文库试剂盒 2. 及 Oncomine Focus ssay 检测板或 Ion mpliseq Cancer Hotspot Panel v2 和 RN Cancer Panel, 从 1 ng 起始 DN 或 RN 构建 NGS 文库 在 Ion Chef 系统上制备样本模板, 然后使用 Ion PGM 系统测序 利用 Torrent Suite 软件或 Ion Reporter 软件上的 Torrent Variant Caller ( 覆盖度分析插件 ), 分析这些检测板上的基因数据并检测变异 结果和讨论回收率和可重复性为检测核酸回收的可重复性, 我们使用 MagMX FFPE DN/RN Ultra 试剂盒及其他基于离心柱的商品化试剂盒 ( 试剂盒 Q) 处理保存的 FFPE 样本 等体积 (5 μl) 洗脱所有样本, 使用 Quant-iT dsdn 和 RN 分析试剂盒进行定量 使用 MagMX FFPE DN/RN Ultra 试剂盒获得的 DN 和 RN 产量等于或高于使用其他供应商试剂盒获得的产量 ( 图 2) 此外, 在 KingFisher Flex 系统上对使用 MagMX FFPE DN/ RN Ultra 试剂盒获得的样本进行自动化处理, 操作时间较使用试剂盒 Q 进行手动提取的时间缩短约 % Total DN yield (ng) Total RN yield (µg) DN yield ppendix ladder Testis Kidney Small intestine FFPE tissue type RN yield ppendix ladder Testis Kidney Small intestine FFPE tissue type MagMX Kit Q Colon MagMX Kit Q Colon 图 2. 核酸回收的可重复性 使用 MagMX FFPE DN/RN Ultra 试剂盒 或其他基于离心柱的商品化试剂盒 ( 试剂盒 Q), 从 FFPE 组织 ( 包埋时间 年 ) 中抽提的 () DN 和 () RN 的产量 MagMX FFPE 样本抽提 Ion mpliseq 文库制备 Ion Chef 样本 模板制备 Ion PGM 测序 Torrent Suite 软件分析 图 1. MagMX FFPE DN/RN Ultra 样本抽提和测序工作流程
3 为确定抽提的核酸是否适用于下游分子应用, 我们进行了实时荧光定量 PCR 分析 使用 SuperScript VILO cdn 合成试剂盒对 RN 样本进行逆转录, 在 79HT 快速实时荧光定量 PCR 系统上, 使用针对 GPDH 基因 ( 扩增片段长度 93 bp) 的 TaqMan 基因表达分析进行 qpcr 分析, 所有样本的起始体积相同 使用 MagMX FFPE DN/RN Ultra 试剂盒抽提的 RN 样本的 C t 值始终较使用试剂盒 Q 获得的样本的 Ct 值更低 ( 图 3) 脱蜡剂二甲苯是传统的 FFPE 样本脱蜡剂, 样本脱蜡后再进行核酸抽提 二甲苯可以高效去除组织切片上的石蜡, 但需要在化学通风橱内操作该溶剂 CitriSolv 清洁剂是一种毒性较低的脱蜡剂, 它已经过检测, 可与 MagMX FFPE DN/RN Ultra 试剂盒结合使用 使用二甲苯或 CitriSolv 溶液对三个不同 FFPE 样本中连续的 1 μm 切片进行脱蜡 脱蜡后, 在带有 96 孔板头的 KingFisher Flex 磁粒处理仪上自动酶切并抽提样本 使用 Quant-iT dsdn 和 RN 分析试剂盒定量 DN 和 RN 产量 ( 图 ) C t Total DN yield (µg) GPDH RN 39 MagMX Kit Q ppendix ladder Testis Kidney Small intestine Colon rchived FFPE tissue type 图 3. RN 样本的实时荧光定量 PCR 分析 FFPE 组织切片中, 使用 MagMX FFPE DN/RN Ultra 试剂盒提取的 GPDH 分析 RN 的 C t 值始终低于其他使用基于离心柱的商品化试剂盒 ( 试剂盒 Q) 获取的 RN DN yield Xylene CitriSolv Sample 1 Sample 2 Sample 3 RN yield Total RN yield (µg) Xylene CitriSolv Sample 1 Sample 2 Sample 3 图. CitriSolv 脱蜡剂与 MagMX FFPE DN/RN Ultra 试剂盒的兼容性 使用二甲苯或 CitriSolv 溶液进行脱蜡时,1 μm FFPE 组织切片中的 () DN 和 () RN 的产量相当
4 自动化和扩展性 MagMX FFPE DN/RN Ultra 试剂盒具有内在灵活性和扩展性, 利用 KingFisher Duo 系统可以同时处理多至 12 个样本, 或使用 KingFisher Flex 磁粒处理仪可处理多至 96 个样本 为确定自动和手动抽提方法是否可以获得相同的核酸产量和质量, 我们使用 MagMX FFPE DN/RN Ultra 试剂 盒 ( 手动抽提 ) 以及在 KingFisher Flex 和 KingFisher Duo 磁粒处理仪上处理连续的 FFPE 样本 上述三种方法的总核酸产量相当, 用于下游应用 ( 如使用 gilent ioanalyzer 系统进行 RN 分析 ) 的核酸质量亦相当 ( 图 5 和 6) (FU) 9 gilent RN 6 Nano Sample 1 (FU) 1 gilent RN 6 Nano Sample , 2,, [nt] , 2,, [nt] Fragment size Fragment size 图 5. 使用 gilent RN 6 Nano 试剂盒对 FFPE 样本进行 RN 分析 手动抽提的样本或在 KingFisher Flex 磁粒处理仪或 KingFisher Duo 系统上采用自动化实验方案抽提的样本, 具有相当的 RN 产量和片段大小 Total DN yield (ng) DN yield RN yield 5 µm 2 µm 5 µm 2 µm Total RN yield (ng) Sample 1 Sample 2 Sample 3 Sample 1 Sample 2 Sample 3 图 6. 起始样本扩展性 在 KingFisher Flex 系统上处理配对的 5 μm 和 2 μm FFPE 切片 所有样本的 () DN 和 () 总产量相应增加, 说明样本在一定的 FFPE 切片厚度范围内具有可扩展的功能
5 穿刺活检和细针抽吸样本为确定 MagMX FFPE DN/RN Ultra 试剂盒在常用的癌症研究样本中的通用性, 我们抽提了多种穿刺活检和细针抽吸样本 使用自动化的 Kingfisher Duo 实验方案抽提配对样本中的核酸 使用 Oncomine Focus ssay 检测板及 1 ng 起始样本制备文库 在 Ion Chef 系统上制备样本模板, 然后使用 Ion PGM 系统测序 所有的供体和组织类型均可获得一致的测序测量指标 DN 平均读取长度 19 bp, 均匀度为 97%, 无链偏差 所有 5 种内源性对照基因的 RN 平均读取长度 87 bp ( 图 7) Mean read length DN RN 12 ase pairs (bp) Sample 1 Sample 2 Sample 1 Sample 2 Sample 3 reast cancer Lung cancer Core needle biopsy Fine-needle aspirate 1 Percent (%) DN mapping and uniformity % Mapped % Uniformity Sample 1 Sample 2 Sample 1 Sample 2 Sample 3 reast cancer Lung cancer Core needle biopsy Fine-needle aspirate 图 7. 癌症研究样本的测序 从穿刺活检和细针抽吸样本中获取的测序测量指标 ( 如 () 平均读取长度和 () DN 映射和均匀度 ) 均一致, 证明了不同标本类型的核酸回收率 使用 Oncomine Focus ssay 检测板及 1 ng 起始样本制备 6 pm 文库 分别利用 Ion Chef 和 Ion PGM 系统制备样本模板并测序
6 Ion Torrent 测序的准确度和灵敏度许多 FFPE 样本的供应都十分有限, 这就要求提取方法不仅要具有可重复性, 还必须从极少的起始样本中获得准确的结果 为检测分析灵敏度, 我们对 FFPE 样本进行酶切, 然后稀释至起始样本量的 1%, 用于剩下的提取实验方案 在全部起始样本滴度范围内, 核酸产量具有高线性度, 说明该分析的 DN 和 RN 回收率高 ( 图 8) 为测定样本是否具有高功能质量, 我们使用 Ion mpliseq Cancer Hotspot Panel v2 制备了 NGS 文库 所有文库均使用 1 ng 起始样本制备, 并在 Ion PGM 系统上测序 使用 Torrent Variant Caller 插件分析 DN 变异 抽提的起始样本的滴度对平均读取长度或均匀度无影响 此外, 在所有起始 DN 样本百分比范围内均检测出了相同的单核苷酸多态性 (SNP) 变异 ( 表 1) 1 DN concentration Colorectal cancer 1 RN concentration Colorectal cancer DN concentration (ng/µl) R =.98 RN concentration (ng/µl) R = Input (% total digest volume) Input (% total digest volume) 7 DN concentration reast cancer 5 RN concentration reast cancer DN concentration (ng/µl) R = Input (% total digest volume) RN concentration (ng/µl) R = Input (% total digest volume) 图 8. 从 FFPE 癌症样本中回收 DN 和 RN 1 μm FFPE 结直肠癌和乳腺癌样本切片中的 () DN 和 () RN 产量 使用蛋白酶 K 溶液进行酶切, 然后稀释样本至起始样本的 1%, 用于剩下的提取实验方案 产量和起始样本百分比之间的线性相关度说明了 DN 和 RN 的高核酸回收率 表 1. 癌症样本中的变异检测 蛋白酶 K 酶切后, 用新鲜的酶切缓冲液稀释 FFPE 样本至不同的起始百分比 参照实验方案进行抽提, 使用 Ion mpliseq Cancer Hotspot Panel v2 制备文库, 进行 Ion PGM 测序 对于结直肠癌和乳腺癌肿瘤类型, 我们可以检测到完全相同的癌症热点变异, 验证了起始滴度范围内分析的灵敏度和功能性 FFPE 组织类型 起始样本 (% 总酶切产物 ) 平均读取长度 (bp) 检测的热点变异数 热点基因 ID Colorectal cancer 1% PDGFR, PC, PTEN, HRS, KRS, TP53, SMRC1 8% PDGFR, PC, PTEN, HRS, KRS, TP53, SMRC1 5% PDGFR, PC, PTEN, HRS, KRS, TP53, SMRC1 3% PDGFR, PC, PTEN, HRS, KRS, TP53, SMRC1 1% PDGFR, PC, PTEN, HRS, KRS, TP53, SMRC1 reast cancer 1% 19 3 KIT, MET, HRS 8% 18 3 KIT, MET, HRS 5% 19 3 KIT, MET, HRS 2% 19 3 KIT, MET, HRS 1% 18 3 KIT, MET, HRS
7 结论 MagMX FFPE DN/RN Ultra 试剂盒提供了高度可靠 通用且可扩展的核酸提取方法, 适用于各种分子分析和应 用 该试剂盒适用于多种 FFPE 组织类型, 即便是保存超过 25 年的组织块亦可 此外还可以从多种活检样本中轻松地 回收核酸, 包括实体瘤切片 细针抽吸和穿刺活检样本 分析参数灵活, 可用于多种处理方案 例如, 从各种厚度的切片中抽提的样本具有相当的核酸产量和质量 您可以手动进行分析, 也可自动化操作, 同时处理多至 96 个样本 此外, 该试剂盒还可与其他脱蜡试剂 ( 如 CitriSolv 溶液 ) 结合使用, 提供一种毒性较低的流程, 且无需使用化学通风橱 使用 MagMX FFPE Ultra 试剂盒提取的 DN 和 RN 适用于多种下游应用, 包括 qpcr, 使用 gilent ioanalyzer 系统和 Ion Torrent NGS 进行分析 利用 Ion mpliseq 技术还可制备高质量的 NGS 文库, 只需 1 ng 起始样本, 使得从珍贵且不可替代的 FFPE 样本中采集的数据最大化
8 如需了解更多信息, 请登录 thermofisher.com/ffpeisolation
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Ion PGM 400bp ... 3 1.... 3 2.... 3 3.... 3 PGM... 4 1.... 4 2.... 4 PGM... 5 1. W2... 5 2. W1 W3... 6 3.... 6... 8 1.... 8 2. 314 V2... 9 2.1... 9 2.2... 10 2.3 ISPs... 10 2.4... 11 2.5... 11 2.6... 12
前言 实验部分 结果和讨论 最常用的临床样品保存和存档方法之一材料是制备福尔马林固定石蜡包埋 (FFPE) 组 FFPE 及新鲜冷冻组织的 DNA 由西奈织 全世界的组织库 医院及实验室内存山医学院捐赠 ( 美国纽约州纽约市 ), 档的 FFPE 组织样本数超过 4 亿个 组织 NA
靶向序列捕获和新一代测序前对福尔马林固定石蜡包埋组织及新鲜冷冻组织进行 DNA 质量控制 应用简报 核酸分析 作者 Melissa Huang Liu 安捷伦科技有限公司美国加利福尼亚州拉霍亚 Maria Celeste Ramirez 安捷伦科技有限公司美国加利福尼亚州圣克拉拉 摘要 本文将介绍利用 Agilent 2100 生物分析仪系统的微流控芯片电泳, 在新一代测序工作流程的 SureSelect
技术详情 使用配有 Agilent TapeStation 分析软件 (A 版 ) 的 Agilent 4200 TapeStation 系统 RNA ScreenTape( 部件号 67-76) 和试剂 ( 部件号 和 67-78), 以及安捷伦高灵敏度 RNA Scree
技术概述 采用 RNA ScreenTape 分析法进行 DV 200 评估 作者 Eva Graf 安捷伦科技有限公司 Waldbronn, Germany 摘要 RNA 测序文库制备工作流程的成功与否在很大程度上取决于 RNA 起始材料的质量 采用 Agilent RNA ScreenTape 分析法获得的 RNA 完整值当量 (RIN e ) 是一种评估标准 RNA 测序的样品完整性的可靠且可重现的指标
如 果 第 六 識 說 呢 當 然 前 五 識 所 緣 的 第 六 識 也 能 緣 前 五 識 所 不 能 緣 的 它 也 能 緣 乃 至 到 第 八 識 所 變 現 的 一 切 它 都 能 緣 所 以 是 非 常 廣 大 的 當 然 所 變 的 根 身 器 界 它 是 能 緣 謂 一 切 法 如
庚 二 所 依 分 二 科 辛 一 等 無 間 依 彼 所 依 者 : 等 無 間 依, 謂 意 彼 所 依 者 等 無 間 依 謂 意 種 子 依 謂 如 前 說 一 切 種 子 阿 賴 耶 識 彼 所 緣 者 謂 一 切 法 如 其 所 應 這 是 十 七 地 裡 面 的 第 二 地 意 地 意 地 裡 面 也 是 分 五 科 第 一 是 自 性 這 一 科 解 釋 完 了 現 在 是 第 二
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30 3 70 200 103 0 10 9 6, 000 3, 0005, 000 5003, 000 7 206 5 30 16 200411 383 4 56 0 1 5 515 90 2003 00 ph 2 5 4560 3, 000 p pm ph 89 200411 383 17 9 0 26 2452 001 601 80 170 18 200411 383 501 50 150 150
第一章
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壹：教育文化公益慈善機關或團體免納所得稅適用標準
教 育 文 化 公 益 慈 善 機 關 或 團 體 結 算 申 報 重 要 法 令 目 錄 壹 : 教 育 文 化 公 益 慈 善 機 關 或 團 體 免 納 所 得 稅 適 用 標 準 02 貳 : 教 育 文 化 公 益 慈 善 機 關 或 團 體 所 得 稅 結 算 申 報 須 知 05 參 : 教 育 文 化 公 益 慈 善 機 關 或 團 體 結 算 申 報 重 要 法 令 彙 整 10
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微信订购 : 扫一扫右侧二维码 网站订购 :www.cwbiotech.com 服务热线 :4006-222-360 版本号 :10/2016 NGS Fast DNA Library Prep Set for Ion Torrent 目录号 :CW2639S (24 rxns) CW2639M (96 rxns) 保存条件 :-20 保存, 干冰运输 产品内容 Component CW2639S
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2. 四 诊 2.1. [b] 总 括 [/b] 儿 科 自 古 再 为 难 事 盖 以 小 儿 形 质 柔 脆, 易 虚 易 实, 调 治 少 乖, 则 毫 厘 之 差, 遂 至 千 里 之 愆 而 气 血 尚 未 充 盈, 难 只 以 据 脉 为 准 ; 神 识 未 发, 不 知 言 其 疾 苦
![2. 四 诊 2.1. [b] 总 括 [/b] 儿 科 自 古 再 为 难 事 盖 以 小 儿 形 质 柔 脆, 易 虚 易 实, 调 治 少 乖, 则 毫 厘 之 差, 遂 至 千 里 之 愆 而 气 血 尚 未 充 盈, 难 只 以 据 脉 为 准 ; 神 识 未 发, 不 知 言 其 疾 苦](/thumbs/40/21940797.jpg "2. 四 诊 2.1. [b] 总 括 [/b] 儿 科 自 古 再 为 难 事 盖 以 小 儿 形 质 柔 脆, 易 虚 易 实, 调 治 少 乖, 则 毫 厘 之 差, 遂 至 千 里 之 愆 而 气 血 尚 未 充 盈, 难 只 以 据 脉 为 准 ; 神 识 未 发, 不 知 言 其 疾 苦")
1. 叙 1.1. 医 国 者, 尝 以 小 人 女 子 为 难 养, 而 医 人 者, 亦 惟 女 子 与 小 人 为 难 医 盖 妇 孺 有 病, 恒 不 能 自 道 其 所 苦, 即 言 之 而 有 所 不 能 尽 医 者 所 持 以 诊 察 之 术, 曰 望 闻 问 切 者, 四 端 之 中, 其 一 已 完 全 失 效, 故 曰 难 也 知 其 难 而 更 端 以 明 之, 曲 折 以 验
; 临 风 池 兮 脑 空 鸣, 穷 窍 阴 兮 完 骨 明 ; 举 浮 白 于 天 冲, 接 承 灵 于 正 营, 目 窗 兮 临 泣, 阳 白 兮 本 神 ; 率 谷 回 兮 曲 鬓 出, 悬 厘 降 兮 悬 颅 承 ; 颔 厌 兮 佳 客 主 人, 听 会 兮 童 子 迎 厥 阴 在 足, 肝
1. 周 身 经 穴 赋 1.1. 手 太 阴 肺 大 指 侧, 少 商 鱼 际 兮 太 渊 穴 ; 经 渠 兮 列 缺, 孔 最 兮 尺 泽 ; 侠 白 共 天 府 为 邻 云 门 与 中 府 相 接 手 阳 明 兮 大 肠 之 经, 循 商 阳 二 间 三 间 而 行 ; 历 合 谷 阳 之, 过 偏 历 温 溜 之 滨 ; 下 迎 香 鼻 迫 胃 乃 足 之 阳 明, 厉 兑 趋 乎 内 庭
摘 要 2008 年 5 月, 受 南 海 区 妇 联 委 托, 中 山 大 学 课 题 组 赴 南 海 区 八 镇 就 南 海 新 农 村 建 设 中 如 何 实 现 妇 女 与 当 地 经 济 社 会 和 谐 发 展 课 题 进 行 了 实 地 调 研, 以 真 实 掌 握 南 海 区 农 村
南 海 新 农 村 建 设 中 妇 女 与 社 会 和 谐 发 展 调 查 报 告 摘 要 2008 年 5 月, 受 南 海 区 妇 联 委 托, 中 山 大 学 课 题 组 赴 南 海 区 八 镇 就 南 海 新 农 村 建 设 中 如 何 实 现 妇 女 与 当 地 经 济 社 会 和 谐 发 展 课 题 进 行 了 实 地 调 研, 以 真 实 掌 握 南 海 区 农 村 妇 女 的 整 体
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124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na
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生物技术通报 黄艳燕 黄靖华 卢福芝 孙靓 彭立新 周兴 黄日波 利用 的方法从鼠李糖乳杆菌基因组 中扩增到 乳酸脱氢酶基因 并连接到载体 上 构建表达质粒 将重组质粒 转化大肠杆菌 重组菌株经 诱导表达 电泳分 析表明 在大肠杆菌中实现了表达 表达产物的分子量约为 同时采用紫外分光光度法测定 乳酸脱氢酶的酶活 测得重组菌株的 乳酸脱氢酶活力为 最适反应温度为 最适 乳酸脱氢酶 克隆 表达 鼠李糖乳杆菌
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甘 组 通 2016 68 号 关 于 在 全 州 党 员 中 开 展 正 反 典 型 学 习 教 育 活 动 的 通 知 各 县 ( 市 ) 委, 州 委 各 部 委, 州 级 各 部 门 党 组 ( 党 委 党 工 委 ), 省 州 属 行 政 企 事 业 单 位 党 委 ( 党 组 ): 为 深 入 推 进 全 州 两 学 一 做 学 习 教 育, 教 育 引 导 全 州 党 员 以 身 边
度定生老病死
溫度決定生老病死作者: 馬悅淩 江蘇文藝出版社 1 受寒涼的途徑 我遇到的許多患癌症或其他重病的人 都有受寒涼的經歷 一位 44 歲的女士 患有肺癌 骨癌 腎癌 該女士總是發低熱 常規治 療一個月後效果不明顯 CT 檢查發現肺部有兩個腫塊 又繼續做進一步檢查 結果令所有人大吃一驚 腫瘤已全身轉移 3 個月後去世 家人不能理解 說 她身體一向不錯 很少生病 只是這一兩年身體弱一些 怎麼會突然得這麼重
按 照 卫 计 委 的 规 划, 对 于 县 级 医 院 主 要 做 一 下 工 作 加 强 临 床 重 点 专 科 建 设, 提 升 县 级 医 院 医 疗 技 术 水 平, 并 配 备 与 专 科 建 设 目 标 一 致 的 适 宜 设 备 1. 县 医 院 除 了 将 健 全 一 级 诊 疗
首 批 卫 计 委 重 点 扶 持 500 家 县 医 院 名 单 公 布 新 医 改 以 来, 分 级 诊 疗 强 基 层 一 直 都 是 重 点, 县 级 医 疗 市 场 增 长 快 速, 但 是 离 最 理 想 的 状 态 仍 有 较 大 的 差 距, 大 医 院 尤 其 是 知 名 的 三 甲 医 院 仍 是 人 满 为 患, 离 达 到 县 域 就 诊 率 达 到 90%, 基 本 做 到
专科疾病诊治（二十四）
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改 觀 王 碧 雲 顏 面 麻 痺, 臉 腫 如 水 月, 雙 目 無 神, 左 眼 圓 瞠 暴 突, 右 眼 凹 陷 崩 垂, 下 顎 頦 部 鬆 弛 右 傾, 笑 起 來 嘴 歪 眼 斜, 兩 頰 連 接 頸 項 一 帶 猶 有 灼 傷 過 的 痕 跡 一 張 令 人 見 識 過 後 猶 帶 了 個 揮 之 不 去 的 夢 魘 般 的 鬼 臉, 正 張 牙 舞 爪 地 衝 擊 著 我 乍 然 回
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何 祚 庥 : 中 医 理 论 的 核 心 是 伪 科 学 环 球 人 物 记 者 路 琰 何 祚 庥 曾 经 有 言 : 中 国 传 统 文 化 有 90% 是 糟 粕 这 句 话 曾 引 起 的 一 场 笔 战 这 段 时 间, 一 些 学 者 发 布 告 别 中 医 的 言 论 再 次 引 起 了 何 祚 庥 对 中 医 的 关 注 开 始 谈 话 之 前, 他 手 里 拿 着 两 份 资 料
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目 录 第 一 章 认 识 亚 健 康 (1) 第 二 章 亚 健 康 状 况 (19) 第 三 章 与 亚 健 康 相 关 的 疾 病 (57) 第 四 章 防 治 亚 健 康 (65) 第 五 章 新 森 田 疗 法 (112) 摆 脱 亚 健 康 的 困 扰 第 一 章 认 识 亚 健 康 第 一 节 亚 健 康 的 症 状 亚 健 康 状 态 涉 及 的 内 容 很 广 泛, 各 种 内 脏
把生命托付给谁？
把 生 命 托 付 给 谁? 一 个 癌 症 患 者 的 重 生 感 悟 本 报 首 席 评 论 徐 迅 雷 2012-11-11 癌 症, 不 等 于 绝 症 癌 症, 不 等 于 死 亡 著 名 作 家 记 者 凌 志 军, 将 自 己 5 年 抗 癌 的 经 历, 写 成 重 生 手 记 一 个 癌 症 患 者 的 康 复 之 路 一 书, 日 前 出 版 在 有 个 购 书 网 站 上, 我
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《中老年男性养生保健》
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团 学 要 闻 我 校 召 开 共 青 团 五 届 九 次 全 委 ( 扩 大 ) 会 议 3 月 17 日, 我 校 共 青 团 五 届 九 次 全 委 ( 扩 大 ) 会 议 在 行 政 办 公 楼 五 楼 会 议 室 举 行, 校 团 委 委 员 各 院 ( 系 ) 团 委 书 记 校 学 生
共 青 团 工 作 简 报 2011 年 第 1 期 共 青 团 大 连 海 洋 大 学 委 员 会 团 学 要 闻 : 导 读 我 校 召 开 共 青 团 五 届 九 次 全 委 ( 扩 大 ) 会 议 我 校 在 大 连 市 大 学 生 创 新 创 意 作 品 大 赛 中 取 得 佳 绩 校 团 委 召 开 学 生 干 部 思 想 动 态 座 谈 会 校 团 委 组 织 开 展 弘 扬 雷 锋
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习 近 平 总 书 记 2016 两 会 新 语 一 年 一 度 的 两 会 已 经 落 下 帷 幕 会 议 期 间, 习 近 平 总 书 记 谈 改 革 聊 民 生, 在 供 给 侧 改 革 打 赢 脱 贫 攻 坚 战 保 护 生 态 环 境 和 实 现 强 军 目 标 等 多 个 方 面 发 表
西 咸 研 究 ( 增 刊 第 3 期 ) 西 咸 研 究 院 2016 年 3 月 24 日 本 期 导 读 : 1 习 近 平 总 书 记 2016 两 会 新 语 2 2016 年 政 府 工 作 报 告 摘 要 3 解 读 2016 年 政 府 工 作 报 告 十 大 新 词 1 习 近 平 总 书 记 2016 两 会 新 语 一 年 一 度 的 两 会 已 经 落 下 帷 幕 会 议 期
标题
中 共 青 岛 市 委 文 件 青 发 2013 22 号 中 共 青 岛 市 委 青 岛 市 人 民 政 府 关 于 印 发 贯 彻 落 实 习 近 平 总 书 记 视 察 山 东 重 要 讲 话 精 神 行 动 纲 要 的 通 知 各 区 市 党 委 和 人 民 政 府, 市 委 各 部 委, 市 政 府 各 部 门, 市 直 各 单 位, 中 央 省 驻 青 各 单 位, 青 岛 警 备 区
老 床 位 1267 张, 五 年 累 计 建 设 养 老 床 位 3394 张 年 初 确 定 的 24 项 重 大 项 目 总 体 进 展 顺 利,9 方 面 区 政 府 实 事 项 目 全 面 完 成 ( 一 ) 区 域 经 济 转 型 升 级 成 效 明 显 现 代 服 务 业 为 主 导
上 海 市 徐 汇 区 十 五 届 人 大 八 次 会 议 文 件 (13) 政 府 工 作 报 告 2016 年 1 月 6 日 在 上 海 市 徐 汇 区 第 十 五 届 人 民 代 表 大 会 第 八 次 会 议 上 上 海 市 徐 汇 区 人 民 政 府 区 长 鲍 炳 章 各 位 代 表 : 现 在, 我 代 表 徐 汇 区 人 民 政 府, 向 大 会 作 政 府 工 作 报 告, 请
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目 錄 1. 越 籍 新 住 民 妊 娠 醫 療 照 護 田 野 調 查 問 卷 ( 一 )------------------01 2. 田 調 紀 實 ( 梁 氏 安 芳 )------------------ 黃 昕 瑤 撰 -------------------------13 3. 越 籍 新 住 民 妊 娠 醫 療 照 護 田 野 調 查 問 卷 ( 二 )----------------16
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程汉良 夏德全 吴婷婷 孟学平 吉红九 董志国 陈淑吟 对文蛤 青蛤 硬壳蛤 江户布目蛤 薄片镜蛤 和菲律宾蛤仔 种帘蛤科贝类和 个地理种 群文蛤 大连 连云港 湛江 防城港 的细胞色素 氧化酶亚基 基因片段的核苷酸序列进行了分析 以探讨这一序列在种质鉴定 种群遗传结构和分子系统发生研究中的应用价值 测序结果 表明 所有物种扩增片段长度均为 序列 含量 明显高于 含量 物种间共有变异位点 个 其中简约信息位点
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技术手册 MagneSil 固定组织基因组 DNA 纯化系统 MagneSil Genomic, Fixed Tissue System MD1490 产品使用说明 CTB319 修订时间 2011.9 MagneSil 固定组织基因组 DNA 纯化系统 所有技术文献的英文原版均可在 www.promega.com/tbs 网站获得 请访问该网址以确定您所使用的技术手册是否为最新版本 如果您在使用本试剂盒的过程中有任何问题,
荧光定量PCR
荧 光 定 量 PCR 荧 光 定 量 PCR 原 理 荧 光 定 量 PCR 最 早 称 TaqMan PCR, 后 来 也 叫 Real-Time PCR, 是 美 国 PE(Perkin Elmer) 公 司 1995 年 研 制 出 来 的 一 种 新 的 核 酸 定 量 技 术 该 技 术 是 在 常 规 PCR 基 础 上 加 入 荧 光 标 记 探 针 或 相 应 的 荧 光 染 料
Phire Hot StartII DNA 聚合酶
重 要 提 示 Phusion 人 源 样 本 直 接 PCR 试 剂 盒 产 品 货 号 :F-150,200rxns x 20μl 变 性 温 度 为 98 C 退 火 温 度 与 众 多 常 规 DNA 聚 合 酶 ( 如 Taq DNA 聚 合 酶 ) 不 同, 具 体 请 参 照 6.3 延 伸 时, 若 扩 增 子 片 段 1kb, 则 延 伸 时 间 设 定 为 15s 即 可 ; 若
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福建农业学报 林 甦 朱春华 陈 珍 刘斌琼 施少华 江 斌 蔡国漳 林 羽 黄 瑜 甦 男 硕士 助理研究员 主要从事病毒学和动物传染病学研究 福建农业学报 材料与方法 毒株 主要仪器 主要试剂 引物设计 的培养 反应条件的建立 荧光定量 检测临床样本 结果与分析 林 甦等 鸡 亚型白血病病毒荧光定量 检测方法的建立 福建农业学报 讨 论 林 甦等 鸡 亚型白血病病毒荧光定量 检测方法的建立 责任编辑
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材料导报 研究篇 年 月 下 第 卷第 期 种球的制备 单步溶胀法制备分子印迹聚合物微球 洗脱处理 种子溶胀聚合机理 种球用量的影响
水相中 组氨酸单分散分子印迹聚合物微球的合成 表征及其识别性能研究 李思平等 李思平 徐伟箭 较佳工艺条件下 在水性体系中选用无皂乳液聚合法制得的单分散微米级聚苯乙烯微球为种球 分别以组氨酸 甲基丙烯酸 或丙烯酸胺 乙二醇二甲基丙烯酸酯 为模板分子 功能单体和交联剂 合成了 组氨酸分子印迹聚合物微球 研究了形貌 粒径及其分布以及模板分子与功能单体之间的相互作用 分别以 激光粒度分析仪紫外分光光度法和红外光谱表征功能单体与交联剂之间的共聚情况
Volume 2.Number 5.2007 Volume 2.Number 5.2007 Volume 2.Number 5.2007 Volume 2.Number 5.2007 Volume 2.Number 5.2007 Volume 2.Number 5.2007 Volume 2.Number 5.2007 Volume 2.Number 5.2007 Volume 2.Number
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依 據 教 育 部 102 年 10 月 29 日 臺 技 ( 四 ) 字 第 1020159022 號 函 核 定 之 高 苑 科 技 大 學 招 收 大 學 部 暨 附 設 專 科 部 轉 學 生 招 生 規 定 訂 定 高 苑 科 技 大 學 日 間 部 進 修 部 聯 合 招 收 大 學 部 轉 學 生 104 學 年 度 第 2 學 期 招 收 轉 學 生 簡 章 主 辦 學 校 : 高
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木 子 集 新 界 西 貢 坑 口 區 鄭 植 之 中 學 2013-2014 年 度 目 錄 序 木 子 集 釋 名 4 開 卷 有 益 年 度 作 家 介 紹 西 西 5 西 西 作 品 讀 後 感 比 賽 ( 初 中 組 ) 冠 軍 : 剪 貼 冊 非 馬 2C 陳 麗 瀅 6 亞 軍 : 剪 貼 冊 非 馬 1B 杜 學 柔 6 季 軍 : 剪 貼 冊 主 任 2C 梁 漢 帆 7 優 異
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( )016 56 4 JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)016Vol.56No.4 1-1 a b a a a ( a. ; b. 330006) : -l(fibroblast-specificprotein-1fsp-l) Transwel MD-M-31 ESF; RT-qPCR MD-M-31 ESF FSP-1 mrn ; MD-M-31
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东吴证券研究所
证 券 研 究 报 告 公 司 研 究 基 因 测 序 行 业 基 因 测 序 行 业 分 析 这 里 的 黎 明 静 悄 悄 行 业 评 级 ( 看 好 ) 报 告 摘 要 : 基 因 测 序 行 业 蓄 势 待 发 : 近 几 年 基 因 测 序 市 场 飞 速 发 展, 尤 其 是 二 代 测 序 技 术 高 通 量, 高 准 确 率, 低 成 本 等 优 点 让 其 得 到 更 广 泛 的
肿瘤样品回顾性分析LCM-qPCR-PGM
应用说明 Arcturus XT LCM, ViiA 7, 以及 Ion PGM 系统 肿瘤样品回顾性分析时, 通过激光捕获显微切割 实时 PCR 和二代测序技术进行遗传异质性分析的方法 Kenji Amemiya, 1 Yosuke Hirotsu, 1 Shinsaku Ohtaki, 2 Manabu Watanabe, 2 Junko Kusano, 2 Takashi Ishikura,
梁启超
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2. 论 痘 疹 受 病 之 由 2.1. 夫 小 儿 在 胎 之 时. 乃 母 五 脏 之 液 所 养 成 形 也. 其 母 不 知 禁 戒. 纵 情 浓 味. 好 啖 辛 酸. 或 食 毒 物. 其 气 传 于 胞 胎 之 中. 此 毒 发 为 疮 疹. 名 曰 三 秽 液 毒. 一 五 脏 六
1. 序 1.1. 尝 谓 小 儿 病 证 虽 多. 而 疮 疹 最 为 重 病. 何 则. 疮 疹 之 病. 盖 初 起 疑 似 难 辨. 投 以 他 药. 不 惟 无 益. 抑 又 害 之. 况 不 言 受 病 之 状. 孰 知 畏 恶 之 由. 父 母 爱 子. 急 于 救 疗 医 者 失 察. 用 药 差 舛. 鲜 有 不 致 夭 横 者. 文 中 每 思 及 此. 恻 然 于 心. 因 取
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河 北 省 " 十 一 五 " 综 合 交 通 体 系 发 展 规 划 十 一 五 是 我 省 建 设 沿 海 经 济 社 会 发 展 强 省 的 重 要 时 期, 打 造 沿 海 经 济 隆 起 带, 构 筑 东 出 西 联 的 开 放 交 通 格 局, 必 须 统 筹 协 调 铁 路 公 路 水 运 民 航 发 展, 充 分 发 挥 各 种 运 输 方 式 的 组 合 效 率 和 集 成 优 势,
光绪帝
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疾 病 名 小 肠 腺 癌 英 文 名 adenocarcinoma of small intestine 缩 写 别 名 intestinal adenocarcinoma;glands of small intestine; 系 膜 小 肠 癌 ICD 号 C17 概 述 小 肠 腺 癌 是 来 自 小 肠 黏 膜 的 恶 性 肿 瘤, 多 位 于 十 二 指 肠 乳 头 部 周 围 空 肠 和
Gene Express 基因快讯 2010 年第 2 期 特殊样本的 RNA 提取 RNA 提取是分子生物学研究的基础实验之一, 在进行 RNA 芯片 cdna 测序 cdna 文库构建 qpcr Northern Blot 等研究时都需要高质量的 RNA 但是有些样本因为细胞结构特殊 代谢产物极
特殊样本的 是分子生物学研究的基础实验之一, 在进行 RNA 芯片 cdna 测序 cdna 文库构建 qpcr Northern Blot 等研究时都需要高质量的 RNA 但是有些样本因为细胞结构特殊 代谢产物极其丰富 本身 RNA 含量少等这些因素, 影响到 的质量 另外, 由于 RNA 酶的广泛存在并难以消减的顽强特性, 使得 RNA 的抽提纯化更为困难 本文将针对几种特殊样本的 展开介绍 一.
2 作 者 保 证 报 告 所 采 用 的 数 据 均 来 自 合 规 渠 用 处 于 无 监 管 状 态,2014 年 以 来,CFDA 和 卫 计 委 联 合 发 布 了 多 项 道, 分 析 逻 辑 基 于 本 人 的 职 业 理 解, 通 过 合 临 床 试 点 名 单, 具 备 高 通 量
1 证 券 研 究 报 告 泡 沫 里 的 金 矿 精 准 医 疗 大 时 代 医 药 行 业 2015 年 11 月 25 日 评 级 : 推 荐 基 因 测 序 行 业 研 究 报 告 主 要 观 点 : 180.00% 160.00% 140.00% 120.00% 100.00% 80.00% 60.00% 40.00% 20.00% 0.00% -20.00% 18000.00 16000.00
『台越幼兒緣
台 越 幼 兒 緣 - 分 享 愛 與 文 化 2008 年 大 專 校 院 學 生 國 際 志 工 服 務 結 案 報 告 2008 年 GYSD 台 灣 青 年 國 際 志 工 服 務 結 案 報 告 指 導 單 位 : 教 育 部 國 際 文 教 處 行 政 院 青 年 輔 導 委 員 會 主 辦 單 位 : 馬 偕 醫 護 管 理 專 科 學 校 協 辦 單 位 : 越 南 平 陽 省 台
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公 寓 大 廈 管 理 服 務 人 培 訓 講 習 招 生 簡 章 委 託 單 位 : 內 政 部 營 建 署 受 託 單 位 : 中 華 民 國 物 業 管 理 經 理 人 協 會 委 託 期 間 : 即 日 起 至 105 年 6 月 30 日 內 政 部 營 建 署 委 託 中 華 民 國 物 業 管 理 經 理 人 協 會 辦 理 事 務 管 理 公 寓 大 廈 技 術 服 務 人 員 培
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104 年 第 二 次 專 門 職 業 及 技 術 人 員 高 等 考 試 中 醫 師 考 試 分 階 段 考 試 營 養 師 心 理 師 護 理 師 社 會 工 作 師 考 試 104 年 專 門 職 業 及 技 術 人 員 高 等 考 試 法 醫 師 語 言 治 療 師 聽 力 師 牙 體 技 術 師 考 試 試 題 代 號 :3101 頁 次 :8-1 等 別 : 高 等 考 試 類 科 :
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诸 病 源 候 论 巢 元 方 六 二 易 学 中 医 网 提 供 千 本 中 医 易 学 电 子 书 的 在 线 阅 读 和 下 载 服 务, 本 网 为 弘 扬 中 国 传 统 文 化, 振 兴 中 医 提 供 一 个 平 台, 尽 自 己 一 点 微 薄 之 力. 我 们 还 有 一 个 姊 妹 网 站, 蓄 德 网, 提 供 道 家 和 其 他 宗 教 的 书 籍, 包 含 整 部 道 藏,
2004级研究生现代免疫学实验技术结业报告
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广州市增城区口口口（部门）2016 年部门预算
广 州 市 增 城 区 林 业 和 园 林 局 2016 年 部 门 预 算 目 录 第 一 部 分 广 州 市 增 城 区 林 业 和 园 林 局 概 况 一 部 门 主 要 职 能 二 部 门 位 构 成 三 部 门 人 员 构 成 第 二 部 分 2016 年 部 门 预 算 安 排 情 况 说 明 第 三 部 分 2016 年 部 门 预 算 报 表 一 收 支 预 算 总 表 二 收 入