2. 实验部分 2.1 仪器和试剂质谱仪 :TSQ 8000 Evo 质谱仪 ( 赛默飞世尔科技, 美国 ); 气相色谱仪 :Trace1310 气相色谱配 AI 1310 自动进样器 ( 赛默飞世尔科技, 美国 ); 色谱柱 :TG-5SILMS 30 m 0.25 mm 0.25 μm 毛细管色

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率掌丁
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1 应用指南赛默飞三重四极杆气质联用仪 TSQ 8000 Evo 一针进样筛查蔬菜中的 933 种农药残留以及环境污染物邢江涛朱曼洁赛默飞世尔科技 ( 中国 ) 有限公司 AN_C_GCMSMS_1_201609B 1. 前言诸如农药残留等的食品安全问题已经成为世界上各个国家的研究热点许多国家和国际性组织对农药的残留限量 (MRLs) 进行了严格的规定 [1] 在农残标准数量方面, 我国仍处于起步阶段据报道, 中国的农残限量指标分别是 CAC 的 7.0% 欧盟的 9.9%, 涉及到的农药种类分别是 CAC 的 35.6%, 欧盟的 68.4% 2014 年颁布实施的 GB 2763 食品中最大农药残留量规定了 387 种农药在 284 种 ( 类 ) 食品中 3650 项限量指标 ; 而 2014 年正式实施的香港规例则对 584 种 ( 类 ) 食品农产品中的 360 种农药, 制定了 7083 项残留限量标准未来, 我国政府仍将保持较快的农药标准制修订的速度, 逐步缩小同发达国家的差距这无疑对农药残留等食品安全的检测工作带来了巨大挑战气相色谱三重四极杆串接质谱 GC-MS/MS 由于其高通量高灵敏度高特异性的特性, 逐渐替代单四极杆气相色谱质谱 GC-MS, 从而成为食品安全检测领域的主力目前, 随着检测市场的发展以及检测手段的普及, 我国已经陆续出台 GC-MS/MS 相关的一系列检测法规, 如 YQ/T 烟 160 种烟草中常见农残的检测方法 ;2015 年新版药典规定应用 GC-MS/MS 检测中药中 74 种常见的农药残留等赛默飞 TSQ 8000 Evo 的设计旨在提高实验室效率本文介绍了应用 TSQ 8000 Evo 结合 Tracefinder 数据库及 T-SRM( 定时保留时间 - 选择反应监测 ), 一针进样同时检测 933 种化合物的方法, 可以帮助实验人员快速筛查并准确定量蔬菜及水果基质样品中的有害物质草及烟草制品多种农药残留量的测定, 此行业标准规定了

2. 实验部分 2.1 仪器和试剂质谱仪 :TSQ 8000 Evo 质谱仪 ( 赛默飞世尔科技, 美国 ); 气相色谱仪 :Trace1310 气相色谱配 AI 1310 自动进样器 ( 赛默飞世尔科技, 美国 ); 色谱柱 :TG-5SILMS 30 m 0.25 mm 0.25 μm 毛细管色谱柱 ; 试剂 : 正己烷, 丙酮 ; 2.2 仪器方法色谱方法升温程序 :40 (1.

2 2. 实验部分 2.1 仪器和试剂质谱仪 :TSQ 8000 Evo 质谱仪 ( 赛默飞世尔科技, 美国 ); 气相色谱仪 :Trace1310 气相色谱配 AI 1310 自动进样器 ( 赛默飞世尔科技, 美国 ); 色谱柱 :TG-5SILMS 30 m 0.25 mm 0.25 μm 毛细管色谱柱 ; 试剂 : 正己烷, 丙酮 ; 2.2 仪器方法色谱方法升温程序 :40 (1.5min)_25 /min_90 (1.5min)_25 / min_180 _5 /min_280 _10 /min_ (5 min); 进样方式 : 不分流进样 ( 不分流时间 :1min), 进样口温度 270 ; 载气流速 :1.2 ml/min( 恒流 ) 进样体积 :1.0 μl 质谱方法传输线温度 :280 离子源温度 :300 扫描方式 : 定时扫描 -SRM 模式 (Timed -SRM) 2.3 样品前处理方法实验前处理方法参照 NY/T 蔬菜和水果中有机磷有机氯拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定 3. 实验结果及分析 3.1 RT alignment 保留时间作为重要的定性依据, 其准确性至关重要使用 RT alignment 功能, 可快速的将当前色谱状态下的保留时间校准到数据库里的保留时间当然, 也可以根据实际需要, 校准到先前某个状态下的保留时间两者相差最大不会超过 0.2min 结合独有的 T-SRM 扫描功能, 也可提高保留时间漂移的容忍度由此, 无需任何标准品, 即可快速的建立筛查方法, 完成筛查或定量分析图 1. 校准后的保留时间与数据库里的保留时间 2

Compounds column1 表 1. RT alignment 结果示例 column 2 No corrected column 2 Corrected Δ Corrected (min) Tetrachloro-m-xylene 10.8331 11.3698 10.8672-0.0341 beta-bhc 12.4820 13.0810 12.4852-0.

3 Compounds column1 表 1. RT alignment 结果示例 column 2 No corrected column 2 Corrected Δ Corrected (min) Tetrachloro-m-xylene beta-bhc delta-bhc Aldrin Heptachlor epoxide gamma-chlordane alpha-chlordane Endosulfan II Endrin aldehyde Endosulfan sulfate Endrin ketone Decachlorobiphenyl 快速筛查方法建立赛默飞 TSQ 8000 Evo 的数据库共有食品安全及环境领域中常见的有机污染物 1142 种, 每种化合物包含定量离子对定性离子对碰撞能量保留时间和 CAS 号等相关信息本次实验主要筛查农药以及部分常见的环境污染物, 因此选择了其中 933 种作为筛查的对象对基质样品进行分析 TraceFinder 的主方法包含采集方法和数据处理方法, 通过从 TraceFinder 的数据库中选择所有的化合物加入到空白主方法中, 编辑相关数据处理参数, 同时关联到采集方法, 可快速建立方法, 同时完成样品的采集及数据处理 ( 如图 2 3 所示 ) 933 个化合物图 2. 应用 TraceFinder 数据库中 933 种化合物进行主方法的设定 3

4 图 2 应用 TraceFinder 数据库中 933 种化合物进行主方法的设定 2797 个离子对图 3. TraceFinder 数据库中 933 种化合物关联进入仪器方法界面 3.3 快速筛查方法实现的前提 TSQ 8000 Evo 独有的 T-SRM 扫描不同于传统的分段式扫描传统分段扫描模式按照目标化合物的保留时间进行不重叠的划分时间段, 每个时间段里根据流出的目标化合物设定相应的参数随着目标化合物数目的增加, 受质谱扫描速度及数据扫描点数的限制, 必然需要尽可能的细分时间段, 确保每个时间段内的组分尽可能的少由此, 保留时间的微小漂移势必导致部分化合物不能完全采集的情况发生需要定期用混标重新定位保留时间, 进而重新分段, 工作量很大另一方面, 每个时间段得到的化合物的扫描点数可能由于扫描时间的限制而过少 T-SRM 可以有针对性地进行方法编辑, 简单来说, 即化合物出现的时候才对化合物进行扫描, 每个化合物都是一个独立的时间段, 而各个时间段可以适当调整, 大大减少重叠的部分 ( 如图 4 所示 ), 使得仪器扫描的效率得到最大化并且, 不需要像分段扫描那样, 设置每个离子对的 dwelltime, 而是直接设置每个峰的扫描点数, 至于扫描速度的调节, 是由软件本身自己完成的, 这样就使建立方法更加简便图 4. 传统分段式 SRM 和 T-SRM 的效率比较

5 3.4 筛查结果选取常见蔬菜如丝瓜辣椒为实验用基质样品, 参考 2.3 前处理方法平行处理 2 份一份为对照样品, 一份添加低浓度的混标 (<10ppb), 作为验证样品应用建立的 933 种化合物的筛查方法, 进行分析所有添加农残均检出, 并得到准确定量筛查结果如下表表 2. 筛查结果农药中文名称丝瓜样品 ( 空白 ) 丝瓜样品 ( 加标 ) 辣椒样品 ( 空白 ) 辣椒样品 ( 加标 ) Acephate 乙酰甲胺磷 NF 2.33 NF 2.63 Acetamiprid 啶虫脒 NF 2.36 NF 2.41 Bifenthrin 联苯菊酯 NF 4.14 NF 3.42 Carbofuran 呋喃丹 (Carbofuran, 3-Hydroxy) ( 包括 3- 羟基克百威 ) NF 4.78 NF 4.02 Chlorpyrifos-ethyl 毒死蜱 NF 6.45 NF 5.67 Cyfluthrin 4 peaks 氟氯氰菊酯 NF 3.72 NF 3.66 Cyhalothrin 2 peaks 氯氟氰菊酯 NF 3.88 NF 3.45 Cypermethrin 4 peaks 氯氰菊酯 NF 4.75 NF 4.26 Deltamethrin 溴氰菊酯 NF 3.69 NF 3.68 Dichlorvos 敌敌畏 NF 5.48 NF 3.81 Dicofol 三氯杀螨醇 NF 3.24 NF 2.95 Dimethoate 乐果 NF 5.04 NF 3.83 Endosulfan 2 peaks 硫丹 NF 3.93 NF 3.43 Fenitrothion 杀螟硫磷 NF 4.95 NF 4.07 Fenpropathrin 甲氰菊酯 NF 3.84 NF 3.57 Fenvalerate 氰戊菊酯 (Esfenvalerate) ( 包括顺式氰戊菊脂 ) NF 3.93 NF 3.37 Fipronil 氟虫腈 NF 3.65 NF 3.79 Isocarbophos 水胺硫磷 NF 4.64 NF 3.99 Isofenphos-methyl 甲基异柳磷 NF 4.37 NF 3.67 Malathion 马拉硫磷 NF 4.28 NF 4.60 Methamidophos 甲胺磷 NF 2.56 NF 2.61 Omethoate 氧化乐果 NF 2.46 NF 2.74 Parathion (ethyl) 对硫磷 NF 6.06 NF 5.60 Parathion-methyl 甲基对硫磷 NF 3.93 NF 3.72 Permethrin 2 peaks 氯菊酯 NF 4.89 NF 3.51 Phorate 甲拌磷 NF 3.54 NF 3.01 Procymidone 腐霉利 NF 6.24 NF 4.84 Profenofos 丙溴磷 NF 6.43 NF 5.10 Sulfotep 治螟磷 NF 4.63 NF 3.69 Terbufos 特丁磷 NF 4.12 NF 3.22 Triadimefon 三唑酮 NF 4.06 NF 3.50 Triazophos 三唑磷 NF 3.33 NF 3.41 分别配制浓度为 1ppb 10ppb 20ppb 40ppb 100ppb 及 200ppb 的溶剂混标, 每个浓度水平连续进样 6 针, 通过比较回读值与理论值的偏差及 RSD, 进一步考察线性范围稳定性及标曲的准确性结果见表 3 5

6 表 3. 部分农药组分标曲回读值与理论浓度的偏差及 RSD 结果 Chlorpyrifos-ethyl STD Average Deviation(%) RSD(%) Permethrin 2peaks STD Average Deviation(%) RSD(%) Methamidophos STD Average Deviation(%) RSD(%) 分别对丝瓜 ( 加标 ) 及辣椒 ( 加标 ) 样品, 连续进样 10 针通过峰面积计算 RSD 值结果见表 2 图 5. 基质样品 RSD 结果 6

7 为了考察仪器灵敏度, 不断稀释标品, 大多数农残在浓度为 0.5ppb 时, 依然有较好的响应, 部分农药在其他浓度有较好的峰形和灵敏度, 相关色谱图见图 6-8 图 6. 乐果 (1ppb) 图 7. 啶虫脒 (2ppb) Cyfluthrin 4 peaks Chlorpyrifos-ethyl Cypermethrin 4 peaks Fenitrothion Fenpropathrin Fipronil Isocarbophos Isofenphos-methyl Malathion 7

Parathion (ethyl) Parathion-methyl Permethrin 2 peaks

扫描进行筛查或定量的同时, 进行 FullScan 扫描由此, 既可以对目标物进行定量,

8 Parathion (ethyl) Parathion-methyl Permethrin 2 peaks Phorate Procymidone Profenofos Sulfotep Terbufos Triadimefon 图 8. 部分农药组分色谱图 (0.5ppb) 4. FullScan 与 SRM 交替扫描赛默飞 TSQ 8000 Evo 快速的扫描速度, 能够满足在利用 T-SRM 扫描进行筛查或定量的同时, 进行 FullScan 扫描由此, 既可以对目标物进行定量, 也可以对可疑物质进行谱库检索定性, Tracefinder 软件可以同时提供定性与定量结果图 9 FullScan 与 SRM 交替扫描仪器方法截图图 9. FullScan 与 SRM 交替扫描仪器方法截图

9 图 10. 交替扫描离子对通道图 11. 实际质谱图与 NIST 谱库比较图 9

5. 结论本文应用赛默飞三重四极杆气质联用仪 TSQ 8000 Evo, 结合参考文献 : [1] http: / /www.mrldatabase.com/results.

高稳定性和高通量的特点, 完全能够胜任监管部门要求的实际样品中不确定农药的低浓度筛查确认和定量分析的要求另一方面,TSQ 8000 Evo 能够实现 SRM 与 FullScan 的交替扫描, 能够同时完成定性与定量的分析工作,

10 5. 结论本文应用赛默飞三重四极杆气质联用仪 TSQ 8000 Evo, 结合参考文献 : [1] http: / / TraceFinder 软件实现了一针进样同时筛查 933 种农药及部分环境污染物的在此条件下, 依然能够得到很好的方法学指标 TSQ8000 Evo 在农产品农药残留定性定量应用领域, 具有高选择性高灵敏度高稳定性和高通量的特点, 完全能够胜任监管部门要求的实际样品中不确定农药的低浓度筛查确认和定量分析的要求另一方面,TSQ 8000 Evo 能够实现 SRM 与 FullScan 的交替扫描, 能够同时完成定性与定量的分析工作, 能够节约分析时间, 大大提高实验室的效率 Orbitrap 组学俱乐部赛默飞小分子质谱应用技术群赛默飞世尔科技 ( 中国 ) 有限公司全国服务热线 : ( 支持手机用户 ) AN_C_GC_1_201609B

GC-MS/MS 测定土壤中多农药残留摘要 : 建立了三重四极杆气质联用仪 GC-MS/MS 结合改良的 QuEChERS 方法同时检测土壤中 42 种农药残留的分析方法在 5.0~100 µg/l 浓度范围内, 各农药组分相关系数均在以上对 30 µg/l 的标准溶液连续 5

GC-MS/MS 测定土壤中多农药残留摘要 : 建立了三重四极杆气质联用仪 GC-MS/MS 结合改良的 QuEChERS 方法同时检测土壤中 42 种农药残留的分析方法在 5.0~100 µg/l 浓度范围内, 各农药组分相关系数均在以上对 30 µg/l 的标准溶液连续 5 GC-MS/MS 测定土壤中多农药残留摘要 : 建立了三重四极杆气质联用仪 GC-MS/MS 结合改良的 QuEChERS 方法同时检测土壤中 42 种农药残留的分析方法在 5.0~100 µg/l 浓度范围内, 各农药组分相关系数均在 0.996 以上对 30 µg/l 的标准溶液连续 5 针进样, 峰面积的 RSD% 均小于 5% 加标浓度为 60 µg/l,42 种农药的加标回收率在 94.4~128.1%