于海涛, 等援肿瘤细胞致死性人 α 鄄乳清蛋白的抗肿瘤作用及其机制的研究进展 圆圆员 力, 成为局部解折叠的 α 鄄乳清蛋白, 突变体不能诱导肿瘤细胞凋亡, 但突变体和油酸结合就形成类似 匀粤酝蕴耘栽的结构, 成为有杀伤肿瘤细胞功能的复合 [ 员圆物 ] 由此可见, 匀粤酝蕴耘栽特殊的 α 鄄乳清蛋

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1 圆圆园 中国肿瘤生物治疗杂志摇澡贼贼责 : 辕辕憎憎憎援遭蚤燥贼澡藻则援燥则早悦澡蚤灶允悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则, 云藻遭援圆园员员, 灾燥造援员愿, 晕燥援圆 阅韵陨 : 员园援猿愿苑圆辕躁援蚤泽泽灶援员园园苑鄄猿愿缘载援圆园员员援园圆援园圆园 综摇述 肿瘤细胞致死性人 α 鄄乳清蛋白的抗肿瘤作用及其机制的研究进展 粤灶贼蚤鄄糟葬灶糟藻则藻枣枣藻糟贼葬灶凿蚤贼泽皂藻糟澡葬灶蚤泽皂燥枣澡怎皂葬灶 α 鄄造葬糟贼葬造遭怎皂蚤灶皂葬凿藻造藻贼澡葬造贼燥贼怎皂燥则糟藻造造泽 : 粤灶葬凿增葬灶糟藻 员, 圆圆圆于海涛, 陈科达, 阎辉 ( 员援温州医学院检验医学院, 浙江温州猿圆缘园猿缘 ; 圆援浙江省医学科学院病毒病研究所, 浙江杭州猿员园园员猿 ) [ 摘摇要 ] 摇肿瘤细胞致死性人 α 鄄乳清蛋白 ( 澡怎皂葬灶 α 鄄造葬糟贼葬造遭怎皂蚤灶皂葬凿藻造藻贼澡葬造贼燥贼怎皂燥则糟藻造造泽, 匀粤酝蕴耘栽 ) 是人 α 鄄乳清蛋白与油酸结合后改变自身三级结构而形成的脂蛋白复合物, 能够选择性杀伤肿瘤细胞, 而对正常细胞几乎无影响 匀粤酝蕴耘栽杀伤肿瘤细胞的机制目前还未完全明确 早期研究显示, 匀粤酝蕴耘栽通过细胞凋亡机制杀伤肿瘤细胞 ; 进一步研究发现, 匀粤酝蕴耘栽并不主要依赖凋亡, 而是通过细胞自噬 内质网应激 蛋白酶体 溶酶体 组蛋白和阅粤晕等多种途径杀伤肿瘤细胞 匀粤酝蕴耘栽对皮肤乳头状瘤 膀胱癌局部用药的抗肿瘤临床试验已取得良好的效果, 它很可能成为具有良好应用前景的绿色抗肿瘤新药 [ 关键词 ] 摇肿瘤 ; 人 α 鄄乳清蛋白 ; 匀粤酝蕴耘栽 ; 自噬 ; 凋亡 [ 中图分类号 ] 摇砸怨苑怨援员 ; 砸苑猿园援缘摇摇摇摇 [ 文献标志码 ] 摇粤摇摇摇摇 [ 文章编号 ] 摇员园园苑鄄猿愿缘载 ( 圆园员员 ) 园圆鄄园圆圆园鄄园缘 摇摇肿瘤已成为目前人类主要的致死性疾病之一 传统的抗肿瘤治疗方法存在诸多局限性, 其中最严重的缺陷之一是肿瘤靶向性较差, 在临床应用时可 [ 员导致骨髓抑制等严重不良反应 ], 因而迫切需要更有效 更具靶向性的肿瘤治疗新方法 新的肿瘤治疗方法应该能够特异性杀伤肿瘤细胞, 而不影响正常组织细胞的功能 肿瘤细胞致死性人 α 鄄乳清蛋白 ( 澡怎皂葬灶 α 鄄造葬糟贼葬造遭怎皂蚤灶皂葬凿藻造藻贼澡葬造贼燥贼怎皂燥则糟藻造造泽, 匀粤酝蕴耘栽 ) 是人 α 鄄乳清蛋白与油酸结合形成的脂蛋白复合物, 匀粤酝蕴耘栽的功能是在研究人乳组分对细 [ 圆菌黏附肺癌细胞功能影响过程中偶然发现的 ] [ 猿 ] 后续研究发现, 匀粤酝蕴耘栽能杀伤肿瘤细胞和癌变前细胞, 而不影响正常细胞的功能 匀粤酝蕴耘栽导致细胞死亡的形态学改变类似于经典的细胞凋亡, 但 [ 猿又与经典的凋亡途径不同 ] 最新研究显示, [ 源匀粤酝蕴耘栽可以通过巨自噬 ] 内质网应激 蛋白酶 [ 缘 ] [ 远 ] 体和溶酶体途径杀伤肿瘤细胞 本文旨在对 匀粤酝蕴耘栽的分子结构 杀伤肿瘤细胞机制以及临床应用研究进展进行综述 员摇 匀粤酝蕴耘栽的分子结构及其形成机制 摇摇天然人 α 鄄乳清蛋白含有员圆猿个氨基酸残基, 相对分子质量约员源园园园, 是人乳中的主要蛋白, 在人乳中含量可以达圆皂早辕皂造 ( 员源园 μ 皂燥造辕蕴 ), 其正常功能 [ 苑是在乳糖合成时作为半乳糖转移酶辅酶 ] 天然人 α 鄄乳清蛋白并无肿瘤杀伤活性, 晶体衍射显示它含有 α 和 β 两个结构域,α 结构域包含猿个主要的 α 螺旋和圆个短猿员园螺旋,β 结构域包括猿个反向平行 β 折叠和圆个短的猿员园螺旋, 以及源个二硫键, 一个高亲和力的钙离子结合位点, 属于金属蛋 [ 愿白 ] 天然的 α 鄄乳清蛋白要维持稳定的三级结构需要与钙离子结合, 当 α 鄄乳清蛋在酸性环境或螯合剂耘阅栽粤存在时与钙离子解离, 继而与油酸 ( 悦员愿颐员 Δ 怨 ) 结合, 就成为具有杀肿瘤细胞活性的匀粤酝蕴耘栽 ( 图员 ) [ 圆 ] 匀粤酝蕴耘栽形成所要求的条件恰好与哺乳期婴儿胃内环境一致, 乳汁中的 α 鄄乳清蛋在低责匀值条件下分子构型发生局部解折叠并与钙离子解 [ 怨离 ] ; 同时酸敏感的脂肪酶水解乳汁中的甘油三酯释放油酸, 该油酸与局部结构解折叠的蛋白结合, 从而形成匀粤酝蕴耘栽复合体 匀粤酝蕴耘栽可杀死来自胃肠道的病毒转化细胞和癌变前细胞, 这可能正是哺 [ 员园乳期婴儿癌症发病率低的原因之一 ] 研究不同长度碳链 饱和状态 顺式反式结构的脂肪酸对匀粤酝蕴耘栽形成的影响, 结果表明,α 鄄乳清蛋白与脂肪酸的相互作用具有特异性, 只有顺式悦员愿多不饱和脂肪酸能与局部解折叠的 α 鄄乳清蛋白形成匀粤酝蕴耘栽, 而饱和脂肪酸 反式悦员愿多不饱和脂肪酸以及不同碳链脂肪酸都不能与 α 鄄乳清蛋 [ 员员白形成匀粤酝蕴耘栽 ] 突变牛 α 鄄乳清蛋白的钙结合位点的氨基酸 ( 阅愿苑粤 ), 使其丧失结合钙离子的能 [ 基金项目 ] 摇国家自然科学基金资助项目 ( 晕燥援猿园愿苑猿园圆源 ); 浙江省科技重大专项 ( 晕燥援圆园园愿悦员猿园猿员鄄员 ) 孕则燥躁藻糟贼泽怎责责燥则贼藻凿遭赠贼澡藻晕葬贼蚤燥灶葬造晕葬贼怎则葬造杂糟蚤藻灶糟藻云燥怎灶凿葬贼蚤燥灶燥枣悦澡蚤灶葬 ( 晕燥援猿园愿苑猿园圆源 ), 葬灶凿贼澡藻运藻赠杂糟蚤鄄藻灶糟藻葬灶凿栽藻糟澡灶燥造燥早赠孕则燥躁藻糟贼燥枣在澡藻躁蚤葬灶早孕则燥增蚤灶糟藻 ( 晕燥援圆园园愿悦员猿园猿员鄄员 ) [ 作者简介 ] 摇于海涛 ( 员怨愿猿鄄 ), 男, 山东省曲阜市人, 硕士, 主要从事肿瘤基因治疗方面的研究工作 耘鄄皂葬蚤造 : 澡葬蚤贼葬燥赠怎愿愿远岳员远猿援糟燥皂 [ 通信作者 ] 摇阎辉 ( 再粤晕匀怎蚤, 糟燥则则藻泽责燥灶凿蚤灶早葬怎贼澡燥则 ), 耘鄄皂葬蚤造 : 赠葬灶澡怨愿岳赠葬澡燥燥援糟燥皂

2 于海涛, 等援肿瘤细胞致死性人 α 鄄乳清蛋白的抗肿瘤作用及其机制的研究进展 圆圆员 力, 成为局部解折叠的 α 鄄乳清蛋白, 突变体不能诱导肿瘤细胞凋亡, 但突变体和油酸结合就形成类似 匀粤酝蕴耘栽的结构, 成为有杀伤肿瘤细胞功能的复合 [ 员圆物 ] 由此可见, 匀粤酝蕴耘栽特殊的 α 鄄乳清蛋白鄄油酸结构是其杀肿瘤细胞功能的基础, 仅有解离的人 α 鄄乳清蛋白或仅有油酸都不能杀伤肿瘤细胞 圆摇 图员摇 匀粤酝蕴耘栽结构形成的分子机制示意图 匀粤酝蕴耘栽的制备 匀粤酝蕴耘栽的制备首先是纯化 α 鄄乳清蛋白, 这既可从人乳中提取, 亦可通过基因工程大肠杆菌重组表达工艺获得 纯化的 α 鄄乳清蛋白再经钙离子螯合剂耘阅栽粤处理, 去除其结合的钙离子, 导致蛋白结构的局部解折叠, 再在酸性条件下与油酸结合 最后, 通过离子交换柱 ( 经酪蛋白预处理 ) 层析和高浓度盐离子洗脱, 纯化出具备肿瘤细胞杀伤活性的 [ 员猿匀粤酝蕴耘栽复合体 ] 去除了钙离子的 α 鄄乳清蛋白容易发生构象变化成为部分解折叠蛋白状态, 进而在酸性条件下与油酸相互作用, 成为脂蛋白复合物 匀粤酝蕴耘栽复合物一旦形成, 即具有较强的稳定性, 溶液中的钙离子与 α 鄄乳清蛋白分子中钙离子结合位点的饱和状态均不影响复合物的稳定性及其生物 [ 员源 ] 活性 运葬皂蚤躁蚤皂葬等将 α 鄄乳清蛋白与油酸按一定比例混合, 利用热处理直接得到由具有抗肿瘤活性的匀粤酝蕴耘栽复合物 采用不同工艺得到的匀粤酝鄄 [ 员缘蕴耘栽复合物中脂肪酸的分子数不同 ], 磁共振分析显示, 复合物中蛋白与脂肪酸的分子比在员颐缘援员耀 员颐缘援源 ( 蛋白 : 脂肪酸 ) 之间, 脂肪酸数目很可能与 匀粤酝蕴耘栽的细胞毒性和肿瘤细胞选择性有关 [ 员猿, 员远 ] 猿摇 匀粤酝蕴耘栽的抗肿瘤效应 目前肿瘤治疗药物因缺乏选择性而存在很多不良反应, 即杀伤肿瘤细胞的同时也损害正常组织 匀粤酝蕴耘栽选择性杀伤肿瘤细胞的特征引起了肿瘤治疗学研究者的极大兴趣, 迄今为止至少有源园种肿瘤细胞在体外研究中对匀粤酝蕴耘栽敏感, 包括肺癌 喉癌 肾癌 结肠癌 膀胱癌 前列腺癌 卵巢癌 黑素瘤 成神经胶质细胞瘤, 以及白血病细胞等, 其中淋 巴系统肿瘤细胞对匀粤酝蕴耘栽最敏感 ( 蕴阅缘园越园郾园员皂皂燥造辕蕴 ), 匀粤酝蕴耘栽对其他组织来源的肿瘤细 [ 猿胞的蕴阅缘园约为园援园圆皂皂燥造辕蕴 ] 自从发现匀粤酝蕴耘栽的抗肿瘤效应以来, 体内抗肿瘤研究和前期临床试验也已经成功开展 研究者采用裸鼠建立人胶质瘤异种移植颅内模型, 将 匀粤酝蕴耘栽注入颅内, 观察其治疗效果, 发现与作为对照的 α 鄄乳清蛋白处理组相比, 匀粤酝蕴耘栽可以明显抑制肿瘤生长, 减小脑瘤体积, 延缓颅内压力症状的出现 栽哉晕耘蕴分析显示, 匀粤酝蕴耘栽诱导病灶部位肿 [ 员苑瘤细胞广泛凋亡, 而未影响邻近的正常脑组织 ] 皮肤乳头状瘤是第一个被用作研究匀粤酝蕴耘栽 [ 员愿 ] 在人体内抗肿瘤效果的模型 郧怎泽贼葬枣泽泽燥灶贼等采用严格的双盲安慰剂对照试验研究匀粤酝蕴耘栽治疗患者皮肤乳头状瘤的疗效, 治疗方案是, 病损局部施用匀粤酝蕴耘栽, 浓度为园援苑皂皂燥造辕蕴, 溶于生理盐水, 每天员次, 连续猿周 ; 治疗完成后员个月内病灶体积缩小苑缘豫或以上视为有效 结果显示, 治疗组有效率达员园园豫 ( 患者数圆园辕圆园, 瘤体数愿愿辕怨圆 ), 而安慰剂组有效率仅为员缘豫 ( 猿辕圆园, 员缘辕苑源 ) 后期试验中, 让最初作为对照治疗的患者应用匀粤酝蕴耘栽治疗, 病灶体积减少了愿圆豫, 圆年后随访发现, 匀粤酝蕴耘栽治疗的患者中瘤体完全消失者占愿猿豫 即使免疫能力较差的皮肤乳头状瘤患者接受匀粤酝蕴耘栽治疗后也无明显的不良反应, 表明局部应用匀粤酝蕴耘栽可以有效治疗人皮肤乳头状瘤, 而无任何不良反应 膀胱癌是另一个局部应用匀粤酝蕴耘栽治疗的临 [ 员怨 ] 床抗肿瘤试验 粤蚤贼泽等对怨例浅表性膀胱癌患者每天缘次定时向患处滴注匀粤酝蕴耘栽, 发现膀胱癌细胞脱落并从尿液排出, 内镜检查发现其中愿名患者的膀胱瘤体积减小 ; 栽哉晕耘蕴检测发现, 脱落的癌细胞与病人残留的癌组织细胞都显示出明显的凋亡特征, 而癌旁组织中的正常细胞未呈现任何凋亡特 [ 圆园 ] 征 最近酝燥泽泽遭藻则早等建立鼠膀胱癌细胞系酝月源怨 的悦缘苑月蕴辕远小鼠膀胱癌模型, 向肿瘤部位局部注射 匀粤酝蕴耘栽, 与对照组相比, 应用匀粤酝蕴耘栽组小鼠的肿瘤体积明显减小, 并能延缓肿瘤进展 栽哉晕耘蕴染色发现肿瘤部位细胞出现选择性凋亡效应, 而临近健康的膀胱组织细胞正常, 表明局部应用匀粤酝蕴耘栽 能延缓膀胱癌的发展 源摇 匀粤酝蕴耘栽的抗肿瘤机制 匀粤酝蕴耘栽的抗肿瘤机制目前还未完全明确, 最初研究认为匀粤酝蕴耘栽主要通过凋亡机制抗肿瘤细胞 ; 但随着研究的深入, 发现匀粤酝蕴耘栽的肿瘤细胞

3 圆圆圆 中国肿瘤生物治疗杂志, 圆园员员年圆月, 员愿 ( 员 ) 毒性并不依赖细胞凋亡, 而是通过多种形式的细胞 [ 猿死亡通路作用于多个细胞器发挥抗肿瘤效应 ] 源援员摇 匀粤酝蕴耘栽在肿瘤细胞中的转运 肿瘤细胞摄取匀粤酝蕴耘栽的机制目前还不明确 [ 圆员 ] 最新研究发现, 细胞膜对于不含脂肪酸的部分解折叠 α 乳清蛋白和匀粤酝蕴耘栽的亲和力不同, 表明 匀粤酝蕴耘栽进入细胞依赖其特殊的蛋白鄄脂肪酸结构 匀粤酝蕴耘栽与细胞膜结合并扰乱膜的完整性, 是其发挥抗肿瘤效应的第一步 激光共聚焦显微镜观察到肿瘤细胞和正常细胞均可摄取匀粤酝蕴耘栽, 但正常细胞摄取量远远低于肿瘤细胞, 并且只有肿瘤细胞内 [ 圆圆鄄圆猿的匀粤酝蕴耘栽能转运并累积在细胞核 ], 与细胞核的组蛋白和染色质结合 半数致死量浓度的匀粤酝鄄蕴耘栽可在员澡内将怨园豫转运至肿瘤细胞核, 而在正 [ 员苑常细胞匀粤酝蕴耘栽仍滞留在胞质 ] 另外, 进入肿瘤细胞和正常细胞胞质的匀粤酝蕴耘栽可形成聚集物, 但在肿瘤细胞内聚集程度更为强烈 匀粤酝蕴耘栽在肿瘤细胞向核周区转运的过程能被放线菌酮所抑 [ 圆源制, 说明这一过程还需要合成的蛋白质参与 ] 源援圆摇 匀粤酝蕴耘栽参与细胞凋亡和巨自噬 早期研究发现, 匀粤酝蕴耘栽处理的细胞出现类似 [ 圆凋亡特征, 即细胞皱缩 核浓缩 阅晕粤碎裂 ], 以及线粒体损伤 线粒体膜去极化和释放细胞色素悦 [ 圆缘糟葬泽责葬泽藻泽级联反应等 ], 但进一步研究发现, 凋亡并不是导致肿瘤细胞死亡的主要原因, 因为广谱 糟葬泽责葬泽藻抑制剂扎灾粤阅鄄枣皂噪和过表达抗凋亡因子月糟造鄄圆, 尽管能取消匀粤酝蕴耘栽产生的糟葬泽责葬泽藻反应和小 阅晕粤片段形成, 却并不能阻止匀粤酝蕴耘栽引起的肿瘤细胞死亡 用抗体阻断云粤杂辕悦阅怨缘受体介导的凋亡外源激活信号通路, 对匀粤酝蕴耘栽的杀肿瘤效应没有 [ 圆远鄄圆苑影响 ] 这些证据提示, 匀粤酝蕴耘栽的杀肿瘤细胞机制可能涉及非凋亡机制 后续研究进一步明确, 匀粤酝蕴耘栽虽然可触发凋亡反应, 但其杀肿瘤机制是 [ 圆愿不依赖糟葬泽责葬泽藻泽 月糟造鄄圆和责缘猿信号转导通路的 ] 由此看来, 匀粤酝蕴耘栽的抗肿瘤效应可能并不依赖细胞凋亡途径 自噬是凋亡之外的第二种程序性细胞死亡方式, 其分为三种主要方式 : 巨自噬 ( 皂葬糟则燥葬怎贼燥责澡葬早赠 ) 微自噬 ( 皂蚤糟则燥葬怎贼燥责澡葬早赠 ) 和分子伴侣介导的自噬 ( 糟澡葬责藻则燥灶藻鄄皂藻凿蚤葬贼藻凿葬怎贼燥责澡葬早赠 ) [ 圆怨 ] 在巨自噬中, 胞质中可溶性蛋白和变性坏死的细胞器被非溶酶体来源的双层膜结构所包裹, 即形成自噬体 ( 葬怎贼燥责澡葬鄄早燥泽燥皂藻 ), 并由自噬体将其携带到溶酶体中降解 加工, 实现再循环 ( 图圆 ) [ 猿园 ], 以维持细胞自身的稳定 [ 猿员巨自噬由磷酸肌醇猿磷酸激酶 ( 孕陨猿运泽 ) 控制 ],Ⅲ 型磷脂酰肌醇猿磷酸激酶 ( 糟造葬泽泽 Ⅲ 孕陨猿运 ) 与自噬基因月藻糟造蚤灶鄄员促进自噬体形成,Ⅰ 型磷脂酰肌醇猿磷酸激酶 ( 糟造葬泽泽 Ⅰ 孕陨猿运 ) 辕粤噪贼信号和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 ( 皂栽韵砸 ) 通路可以抑制巨自噬作用, 另外还涉及多个自噬相关蛋白 ( 粤贼早泽 ) [ 猿圆 ] 匀粤酝蕴耘栽可以诱发巨自噬作用, 匀粤酝蕴耘栽处理的肿瘤细胞呈现典型的巨自噬形态学改变, 匀粤酝蕴耘栽引起的线粒体损伤 有活性的皂栽韵砸下降 以及细胞质空泡等将导致双膜包裹的自噬泡的形成 利用砸晕粤干扰抑制自噬基因月藻糟造蚤灶鄄员和自噬相关蛋白缘 ( 粤贼早缘 ), 能延长匀粤酝蕴耘栽处理肿瘤细胞株的生存期, 降低肿瘤 [ 源细胞的死亡率 ] 可见匀粤酝蕴耘栽通过巨自噬途径杀伤肿瘤细胞 源援猿摇 图圆摇 匀粤酝蕴耘栽诱导肿瘤细胞巨自噬示意图 匀粤酝蕴耘栽作用于组蛋白和染色体 [ 圆缘 ] 研究者从细胞中纯化出具有生物学活性的天然组蛋白, 用来研究与匀粤酝蕴耘栽相互作用, 结果显示 : 匀粤酝蕴耘栽与组蛋白匀圆月 匀猿以及匀源等具有较高亲和力, 这种相互作用在表达绿色荧光蛋白标记的组蛋白的匀藻蕴葬细胞内得到证实 ; 共定位显示, 匀粤酝蕴耘栽与组蛋白相互作用导致整个染色体结构的改变, 然后染色质在核周浓缩 匀粤酝蕴耘栽可以与各种结构和功能的组蛋白结合, 胞质中的匀粤酝蕴耘栽 可以与核小体组装蛋白员 ( 晕粤孕员 ) 等分子伴侣竞争结合新合成的组蛋白, 阻碍其向细胞核的转运, 从而阻断组蛋白与阅晕粤形成核小体, 破坏染色质合 [ 猿猿成 ] 而在细胞核内的匀粤酝蕴耘栽与染色质中的组蛋白结合, 将其与阅晕粤分离, 导致后者暴露于内切核酸酶类而遭受剪切破坏, 或者直接与核小体结合, 形成不溶性染色质复合物, 干扰其功能 与染色质结合的匀粤酝蕴耘栽又可以直接导致阅粤晕损伤, 而染色质合成缺陷亦可导致阅晕粤双链破坏, 从而激活细胞周期检查点, 阻断细胞周期进程 然而匀粤酝蕴耘栽 损伤阅晕粤的具体机制, 还需要进一步研究来阐述 源援源摇 匀粤酝蕴耘栽诱导内质网应激 内质网应激 ( 耘砸泽贼则藻泽泽 ) 是由于内质网内解折叠蛋白堆积到一定程度引起的一种真核细胞应激现象, 是近年来新发现的重要的凋亡起始机制之一

4 于海涛, 等援肿瘤细胞致死性人 α 鄄乳清蛋白的抗肿瘤作用及其机制的研究进展 圆圆猿 当细胞内解折叠蛋白增多时将会干扰内质网的功能, 导致应激信号程序激活, 除非细胞内解折叠蛋白减少, 否则, 内质网应激最终将导致细胞程序性死 [ 猿源亡 ] 在匀粤酝蕴耘栽处理肿瘤细胞猿园皂蚤灶后, 参与内质网应激信号程序的磷酸化转录起始因子藻陨云圆葬 激活的转录因子远 ( 粤栽云远 ) 裂解物 载盒结合蛋白员 ( 载月孕员 ) 剪接的皂砸晕粤等分子很快增加, 然后内质网应激反应相关的促凋亡转录因子悦匀韵孕表达明显上调, 最终导致内质网应激信号激活的程序性细胞 [ 缘, 猿缘死亡 ] 源援缘摇 匀粤酝蕴耘栽影响蛋白酶体和溶酶体 蛋白酶体能够降解细胞内解折叠的蛋白质和经泛素修饰的蛋白质, 这对维持细胞正常功能非常重要, 如内质网相关降解 ( 耘砸粤阅 ) 系统从内质网清除的解折叠蛋白最终都要经蛋白酶体分解 大量 匀粤酝蕴耘结合细胞膜并进入胞质并不被泛素修饰, 与降解仅仅解折叠蛋白相比, 蛋白酶体酶在降解 匀粤酝蕴耘栽时相当低效, 藉此机制将匀粤酝蕴耘栽从细胞 [ 缘 ] 内清除的过程非常缓慢 有研究发现, 匀粤酝蕴耘栽 活化的蛋白酶体发生了结构和催化亚单位的降解性改变, 导致其在降解匀粤酝蕴耘栽时蛋白酶体活性下降 圆园杂蛋白酶体可以降解未经泛素修饰的解折叠蛋白, 而匀粤酝蕴耘结合圆园杂蛋白酶体, 通过改变不同亚基的分子大小影响其结构, 抑制其降解蛋白的活性, 使其不能充分发挥降解解折叠蛋白的功能 不过, 匀粤酝蕴耘栽的细胞毒效应并非由蛋白酶体活性受抑所致, 因为传统的蛋白酶体抑制剂减少而不是增强匀粤酝蕴耘栽的细胞毒效应 目前认为, 细胞内 匀粤酝蕴耘栽的大量导致解折叠蛋白蓄积, 从而影响细胞正常的蛋白合成和细胞功能稳定, 最终导致细胞死亡 其他哺乳动物中部分解折叠的 α 鄄乳清蛋白与 [ 猿远油酸也可以形成类似匀粤酝蕴耘栽的复合物 ], 并具 [ 远 ] 有相似的生物学功能 研究发现, 利用牛 α 鄄乳清蛋白与油酸形成的月粤酝蕴耘栽能够快速在肿瘤细胞内的溶酶体蓄积, 导致溶酶体内组织蛋白酶类渗漏到细胞质中, 组织蛋白酶类物质又能激活促凋亡蛋白月粤载等 热休克蛋白苑园 ( 匀泽责苑园 ) 匀泽责苑园鄄圆和晶状体上皮细胞生长因子等三种蛋白能够稳定溶酶体, 并能够显著保护细胞免受月粤酝蕴耘栽诱导的死亡 这一结果表明, 月粤酝蕴耘栽能在肿瘤细胞中引发溶酶体细胞死亡通路, 并能杀伤凋亡耐受的肿瘤细胞, 匀粤酝蕴耘栽是否也存在类似机制还有待进一步研 [ 员远究 ] 缘摇结摇语综上所述, 源于人 α 鄄乳清蛋白的匀粤酝蕴耘栽就像一个多面杀手, 通过多条通路杀伤肿瘤细胞, 当其中一条途径被阻断时, 另一条途径仍可以发挥作用, 这可能是匀粤酝蕴耘栽具有广泛而快速抗肿瘤效应的原 [ 猿苑因 ] 体外研究和临床试验证明, 匀粤酝蕴耘栽具有较理想抗肿瘤效果, 并且未发现对正常细胞造成可检测到的毒性作用 随着研究的深入, 发现其他哺乳动物部分解折叠的 α 鄄乳清蛋白与油酸也可以形成类似匀粤酝蕴耘栽的复合物, 并具有相似的生物学功能, 从而为抗癌药物的开发提供了丰富的原料, 降低制药成本 目前应用匀粤酝蕴耘栽治疗肿瘤的临床试验研究主要采用局部用药的方式, 如皮肤乳头瘤 膀胱癌等, 但体内和全身用药的研究较少, 可能因其口服将被消化酶降解而不能进入体内发挥作用, 这正是其作为抗癌药治疗某些体内肿瘤的瓶颈, 如何突破这一瓶颈限制将成为匀粤酝蕴耘栽未来抗肿瘤研究的重点 尽管还需要更多的研究来阐述匀粤酝蕴耘栽对肿瘤细胞选择性杀伤的分子机制, 但是可以预见, 随着研究的不断深入, 匀粤酝蕴耘栽很可能成为一种安全有效的新型绿色抗癌药物, 并得到广泛应用 参考文献 [ 员 ] 摇在澡燥怎月月, 在澡葬灶早匀, 阅葬皂藻造蚤灶酝, 藻贼葬造援栽怎皂燥怎则鄄蚤灶蚤贼蚤葬贼蚤灶早糟藻造造泽 : 悦澡葬造造藻灶早藻泽葬灶凿燥责责燥则贼怎灶蚤贼蚤藻泽枣燥则葬灶贼蚤糟葬灶糟藻则凿则怎早凿蚤泽糟燥增藻则赠 [ 允 ] 援晕葬贼砸藻增阅则怎早阅蚤泽糟燥增, 圆园园怨, 愿 ( 员园 ): 愿园远鄄愿圆猿援 [ 圆 ] 摇匀葬噪葬灶泽泽燥灶粤, 在澡蚤增燥贼燥增泽噪赠月, 韵则则藻灶蚤怎泽杂, 藻贼葬造援粤责燥责贼燥泽蚤泽蚤灶鄄凿怎糟藻凿遭赠葬澡怎皂葬灶皂蚤造噪责则燥贼藻蚤灶 [ 允 ] 援孕则燥糟晕葬贼造粤糟葬凿杂糟蚤哉杂粤, 员怨怨缘, 怨圆 ( 员苑 ): 愿园远源鄄愿园远愿援 [ 猿 ] 摇杂增葬灶遭燥则早悦, 粤早藻则泽贼葬皂匀, 粤则燥灶泽燥灶粤, 藻贼葬造援匀粤酝蕴耘栽噪蚤造造泽贼怎皂燥则糟藻造造泽遭赠葬灶葬责燥责贼燥泽蚤泽鄄造蚤噪藻皂藻糟澡葬灶蚤泽皂原糟藻造造怎造葬则, 皂燥造藻糟怎造葬则, 葬灶凿贼澡藻则葬责藻怎贼蚤糟葬泽责藻糟贼泽 [ 允 ] 援粤凿增悦葬灶糟藻则砸藻泽, 圆园园猿, 愿愿 : 员鄄圆怨援 [ 源 ] 摇粤蚤贼泽杂, 郧怎泽贼葬枣泽泽燥灶蕴, 匀葬造造早则藻灶韵, 藻贼葬造援匀粤酝蕴耘栽 ( 澡怎皂葬灶葬造鄄责澡葬鄄造葬糟贼葬造遭怎皂蚤灶皂葬凿藻造藻贼澡葬造贼燥贼怎皂燥则糟藻造造泽 ) 贼则蚤早早藻则泽葬怎贼燥责澡葬早蚤糟贼怎皂燥则糟藻造造凿藻葬贼澡 [ 允 ] 援陨灶贼允悦葬灶糟藻则, 圆园园怨, 员圆源 ( 缘 ): 员园园愿鄄员园员怨援 [ 缘 ] 摇郧怎泽贼葬枣泽泽燥灶蕴, 粤蚤贼泽杂, 韵灶灶藻则枣躁燥则凿孕, 藻贼葬造援悦澡葬灶早藻泽蚤灶责则燥贼藻葬泽燥皂藻泽贼则怎糟贼怎则藻葬灶凿枣怎灶糟贼蚤燥灶糟葬怎泽藻凿遭赠匀粤酝蕴耘栽蚤灶贼怎皂燥则糟藻造造泽 [ 允 ] 援孕蕴燥杂韵灶藻, 圆园园怨, 源 ( 源 ): 藻缘圆圆怨援 [ 远 ] 摇砸葬皂皂藻则孕, 郧则燥贼澡鄄孕藻凿藻则泽藻灶蕴, 运蚤则噪藻早葬葬则凿栽, 藻贼葬造援月粤酝蕴耘栽葬糟鄄贼蚤增葬贼藻泽葬造赠泽燥泽燥皂葬造糟藻造造凿藻葬贼澡责则燥早则葬皂蚤灶糟葬灶糟藻则糟藻造造泽 [ 允 ] 援酝燥造悦葬灶糟藻则栽澡藻则, 圆园员园, 怨 ( 员 ): 圆源鄄猿圆援 [ 苑 ] 摇杂贼蚤灶灶葬噪则藻酝郧, 灾蚤造燥贼贼藻允蕴, 杂燥怎造蚤藻则杂, 藻贼葬造援悦则藻葬贼蚤燥灶葬灶凿责澡藻灶燥鄄贼赠责蚤糟葬灶葬造赠泽蚤泽燥枣葬造责澡葬鄄造葬糟贼葬造遭怎皂蚤灶鄄凿藻枣蚤糟蚤藻灶贼皂蚤糟藻 [ 允 ] 援孕则燥糟晕葬贼造粤糟葬凿杂糟蚤哉杂粤, 员怨怨源, 怨员 ( 员源 ): 远缘源源鄄远缘源愿援 [ 愿 ] 摇粤糟澡葬则赠葬运砸, 砸藻灶允杂, 杂贼怎葬则贼阅陨, 藻贼葬造援悦则赠泽贼葬造泽贼则怎糟贼怎则藻燥枣澡怎皂葬灶葬造责澡葬鄄造葬糟贼葬造遭怎皂蚤灶葬贼员援苑粤则藻泽燥造怎贼蚤燥灶 [ 允 ] 援允酝燥造月蚤燥造, 员怨怨员, 圆圆员 ( 圆 ): 缘苑员鄄缘愿员援 [ 怨 ] 摇运怎憎葬躁蚤皂葬运援栽澡藻皂燥造贼藻灶早造燥遭怎造藻泽贼葬贼藻燥枣葬造责澡葬鄄造葬糟贼葬造遭怎皂蚤灶 [ 允 ] 援

5 圆圆源 中国肿瘤生物治疗杂志, 圆园员员年圆月, 员愿 ( 员 ) 云葬泽藻遭允, 员怨怨远, 员园 ( 员 ): 员园圆鄄员园怨援 [ 员园 ] 杂增藻灶泽泽燥灶酝, 云葬泽贼允, 酝燥泽泽遭藻则早粤运, 藻贼葬造援粤造责澡葬鄄造葬糟贼葬造遭怎皂蚤灶怎灶鄄枣燥造凿蚤灶早蚤泽灶燥贼泽怎枣枣蚤糟蚤藻灶贼贼燥糟葬怎泽藻葬责燥责贼燥泽蚤泽, 遭怎贼蚤泽则藻择怎蚤则藻凿枣燥则贼澡藻糟燥灶增藻则泽蚤燥灶贼燥匀粤酝蕴耘栽 ( 澡怎皂葬灶葬造责澡葬鄄造葬糟贼葬造遭怎皂蚤灶皂葬凿藻造藻贼澡葬造贼燥贼怎皂燥则糟藻造造泽 )[ 允 ] 援孕则燥贼藻蚤灶杂糟蚤, 圆园园猿, 员圆 ( 员圆 ): 圆苑怨源鄄圆愿园源援 [ 员员 ] 杂增藻灶泽泽燥灶酝, 酝燥泽泽遭藻则早粤运, 孕藻贼贼藻则泽泽燥灶允, 藻贼葬造援蕴蚤责蚤凿泽葬泽糟燥枣葬糟贼燥则泽蚤灶责则燥贼藻蚤灶枣燥造凿蚤灶早 : 杂贼藻则藻燥鄄泽责藻糟蚤枣蚤糟造蚤责蚤凿鄄责则燥贼藻蚤灶蚤灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶泽葬则藻则藻鄄择怎蚤则藻凿贼燥枣燥则皂匀粤酝蕴耘栽 ( 澡怎皂葬灶葬造责澡葬鄄造葬糟贼葬造遭怎皂蚤灶皂葬凿藻造藻贼澡葬造贼燥贼怎皂燥则糟藻造造泽 )[ 允 ] 援孕则燥贼藻蚤灶杂糟蚤, 圆园园猿, 员圆 ( 员圆 ): 圆愿园缘鄄圆愿员源援 [ 员圆 ] 孕藻贼贼藻则泽泽燥灶鄄运葬泽贼遭藻则早允, 酝燥泽泽遭藻则早粤运, 栽则怎造泽泽燥灶酝, 藻贼葬造援粤造责澡葬鄄蕴葬糟贼葬造遭怎皂蚤灶, 藻灶早蚤灶藻藻则藻凿贼燥遭藻灶燥灶灶葬贼蚤增藻葬灶凿蚤灶葬糟贼蚤增藻, 噪蚤造造泽贼怎皂燥则糟藻造造泽憎澡藻灶蚤灶糟燥皂责造藻曾憎蚤贼澡燥造藻蚤糟葬糟蚤凿 : 粤灶藻憎遭蚤燥造燥早蚤糟葬造枣怎灶糟贼蚤燥灶则藻泽怎造贼蚤灶早枣则燥皂责葬则贼蚤葬造怎灶枣燥造凿蚤灶早 [ 允 ] 援允酝燥造月蚤燥造, 圆园园怨, 猿怨源 ( 缘 ): 怨怨源鄄员园员园援 [ 员猿 ] 杂增藻灶泽泽燥灶酝, 匀葬噪葬灶泽泽燥灶粤, 酝燥泽泽遭藻则早粤运, 藻贼葬造援悦燥灶增藻则泽蚤燥灶燥枣葬造鄄责澡葬鄄造葬糟贼葬造遭怎皂蚤灶贼燥葬责则燥贼藻蚤灶蚤灶凿怎糟蚤灶早葬责燥责贼燥泽蚤泽 [ 允 ] 援孕则燥糟晕葬贼造粤糟葬凿杂糟蚤哉杂粤, 圆园园园, 怨苑 ( 愿 ): 源圆圆员鄄源圆圆远援 [ 员源 ] 运葬皂蚤躁蚤皂葬栽, 韵澡皂怎则葬粤, 杂葬贼燥栽, 藻贼葬造援匀藻葬贼鄄贼则藻葬贼皂藻灶贼皂藻贼澡燥凿枣燥则责则燥凿怎糟蚤灶早枣葬贼贼赠葬糟蚤凿鄄遭燥怎灶凿葬造责澡葬鄄造葬糟贼葬造遭怎皂蚤灶贼澡葬贼蚤灶凿怎糟藻泽贼怎皂燥则糟藻造造凿藻葬贼澡 [ 允 ] 援月蚤燥糟澡藻皂月蚤燥责澡赠泽砸藻泽悦燥皂皂怎灶, 圆园园愿, 猿苑远 ( 员 ): 圆员员鄄圆员源援 [ 员缘 ] 运灶赠葬扎藻增葬耘蕴, 郧则蚤泽澡糟澡藻灶噪燥灾酝, 云葬凿藻藻增砸杂, 藻贼葬造援宰澡燥蚤泽酝则援匀粤酝蕴耘栽? 陨灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶燥枣澡怎皂葬灶葬造责澡葬鄄造葬糟贼葬造遭怎皂蚤灶憎蚤贼澡皂燥灶燥皂藻则蚤糟燥造藻蚤糟葬糟蚤凿 [ 允 ] 援月蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠, 圆园园愿, 源苑 ( 源怨 ): 员猿员圆苑鄄员猿员猿苑援 [ 员远 ] 酝燥泽泽遭藻则早粤运, 匀怎灶酝燥噪运, 酝燥则燥扎燥增葬鄄砸燥糟澡藻蕴粤, 藻贼葬造援杂贼则怎糟贼怎则藻葬灶凿枣怎灶糟贼蚤燥灶燥枣澡怎皂葬灶葬造责澡葬鄄造葬糟贼葬造遭怎皂蚤灶皂葬凿藻造藻贼澡葬造贼燥贼怎皂燥则糟藻造造泽 ( 匀粤酝蕴耘栽 ) 鄄贼赠责藻糟燥皂责造藻曾藻泽 [ 允 ] 援云藻遭泽允, 圆园员园, 圆苑苑 ( 圆圆 ): 源远员源鄄源远圆缘援 [ 员苑 ] 云蚤泽糟澡藻则宰, 郧怎泽贼葬枣泽泽燥灶蕴, 酝燥泽泽遭藻则早粤运, 藻贼葬造援匀怎皂葬灶葬造责澡葬鄄造葬糟贼鄄葬造遭怎皂蚤灶皂葬凿藻造藻贼澡葬造贼燥贼怎皂燥则糟藻造造泽 ( 匀粤酝蕴耘栽 ) 噪蚤造造泽澡怎皂葬灶早造蚤燥鄄遭造葬泽贼燥皂葬糟藻造造泽蚤灶遭则葬蚤灶曾藻灶燥早则葬枣贼泽遭赠葬灶葬责燥责贼燥泽蚤泽鄄造蚤噪藻皂藻糟澡葬灶蚤泽皂葬灶凿责则燥造燥灶早泽泽怎则增蚤增葬造 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则砸藻泽, 圆园园源, 远源 ( 远 ): 圆员园缘鄄圆员员圆援 [ 员愿 ] 郧怎泽贼葬枣泽泽燥灶蕴, 蕴藻蚤躁燥灶澡怎枣增怎凿陨, 粤则燥灶泽泽燥灶粤, 藻贼葬造援栽则藻葬贼皂藻灶贼燥枣泽噪蚤灶责葬责蚤造造燥皂葬泽憎蚤贼澡贼燥责蚤糟葬造葬造责澡葬鄄造葬糟贼葬造遭怎皂蚤灶鄄燥造藻蚤糟葬糟蚤凿 [ 允 ] 援晕耘灶早造允酝藻凿, 圆园园源, 猿缘园 ( 圆远 ): 圆远远猿鄄圆远苑圆援 [ 员怨 ] 酝燥泽泽遭藻则早粤运, 宰怎造造贼月, 郧怎泽贼葬枣泽泽燥灶蕴, 藻贼葬造援月造葬凿凿藻则糟葬灶糟藻则泽则藻鄄泽责燥灶凿贼燥蚤灶贼则葬增藻泽蚤糟葬造蚤灶泽贼蚤造造葬贼蚤燥灶燥枣匀粤酝蕴耘栽 ( 澡怎皂葬灶葬造责澡葬鄄造葬糟贼葬造鄄遭怎皂蚤灶皂葬凿藻造藻贼澡葬造贼燥贼怎皂燥则糟藻造造泽 )[ 允 ] 援陨灶贼允悦葬灶糟藻则, 圆园园苑, 员圆员 ( 远 ): 员猿缘圆鄄员猿缘怨援 [ 圆园 ] 酝燥泽泽遭藻则早粤运, 匀燥怎再, 杂增藻灶泽泽燥灶酝, 藻贼葬造援匀粤酝蕴耘栽贼则藻葬贼皂藻灶贼凿藻鄄造葬赠泽遭造葬凿凿藻则糟葬灶糟藻则凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 [ 允 ] 援允哉则燥造, 圆园员园, 员愿猿 ( 源 ): 员缘怨园鄄员缘怨苑援 [ 圆员 ] 酝燥泽泽遭藻则早粤运, 孕怎糟澡葬凿藻泽酝, 匀葬造泽噪葬怎韵, 藻贼葬造援匀粤酝蕴耘栽蚤灶贼藻则葬糟贼泽憎蚤贼澡造蚤责蚤凿皂藻皂遭则葬灶藻泽葬灶凿责藻则贼怎则遭泽贼澡藻蚤则泽贼则怎糟贼怎则藻葬灶凿蚤灶贼藻早则蚤贼赠 [ 允 ] 援孕蕴燥杂韵灶藻, 圆园员园, 缘 ( 圆 ): 藻怨猿愿源援 [ 圆圆 ] 匀葬噪葬灶泽泽燥灶粤, 粤灶凿则藻葬泽泽燥灶允, 在澡蚤增燥贼燥增泽噪赠月, 藻贼葬造援酝怎造贼蚤皂藻则蚤糟葬造鄄责澡葬鄄造葬糟贼葬造遭怎皂蚤灶枣则燥皂澡怎皂葬灶皂蚤造噪蚤灶凿怎糟藻泽葬责燥责贼燥泽蚤泽贼澡则燥怎早澡葬凿蚤鄄则藻糟贼藻枣枣藻糟贼燥灶糟藻造造灶怎糟造藻蚤 [ 允 ] 援耘曾责悦藻造造砸藻泽, 员怨怨怨, 圆源远 ( 圆 ): 源缘员鄄源远园援 [ 圆猿 ] 杂增藻灶泽泽燥灶酝, 杂葬遭澡葬则憎葬造匀, 匀葬噪葬灶泽泽燥灶粤, 藻贼葬造援酝燥造藻糟怎造葬则糟澡葬则葬糟鄄贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶燥枣葬造责澡葬鄄造葬糟贼葬造遭怎皂蚤灶枣燥造凿蚤灶早增葬则蚤葬灶贼泽贼澡葬贼蚤灶凿怎糟藻葬责燥责贼燥泽蚤泽蚤灶贼怎皂燥则糟藻造造泽 [ 允 ] 援允月蚤燥造悦澡藻皂, 员怨怨怨, 圆苑源 ( 员园 ): 远猿愿愿鄄远猿怨远援 [ 圆源 ] 阅怎则蚤灶早藻则悦, 匀葬皂蚤糟澡藻粤, 郧怎泽贼葬枣泽泽燥灶蕴, 藻贼葬造援匀粤酝蕴耘栽蚤灶贼藻则葬糟贼泽憎蚤贼澡澡蚤泽贼燥灶藻泽葬灶凿糟澡则燥皂葬贼蚤灶蚤灶贼怎皂燥则糟藻造造灶怎糟造藻蚤 [ 允 ] 援允月蚤燥造悦澡藻皂, 圆园园猿, 圆苑愿 ( 源猿 ): 源圆员猿员鄄源圆员猿缘援 [ 圆缘 ] 匀葬造造早则藻灶韵, 郧怎泽贼葬枣泽泽燥灶蕴, 陨则躁葬造葬匀, 藻贼葬造援匀粤酝蕴耘栽贼则蚤早早藻则泽葬责燥责鄄贼燥泽蚤泽遭怎贼贼怎皂燥则糟藻造造凿藻葬贼澡蚤泽蚤灶凿藻责藻灶凿藻灶贼燥枣糟葬泽责葬泽藻泽, 月糟造鄄圆葬灶凿责缘猿 [ 允 ] 援粤责燥责贼燥泽蚤泽, 圆园园远, 员员 ( 圆 ): 圆圆员鄄圆猿猿援 [ 圆远 ] 运燥澡造藻则悦, 郧燥早增葬凿扎藻灾, 匀葬噪葬灶泽泽燥灶粤, 藻贼葬造援粤枣燥造凿蚤灶早增葬则蚤葬灶贼燥枣澡怎皂葬灶葬造责澡葬鄄造葬糟贼葬造遭怎皂蚤灶蚤灶凿怎糟藻泽皂蚤贼燥糟澡燥灶凿则蚤葬造责藻则皂藻葬遭蚤造蚤贼赠贼则葬灶鄄泽蚤贼蚤燥灶蚤灶蚤泽燥造葬贼藻凿皂蚤贼燥糟澡燥灶凿则蚤葬 [ 允 ] 援耘怎则允月蚤燥糟澡藻皂, 圆园园员, 圆远愿 ( 员 ): 员愿远鄄员怨员援 [ 圆苑 ] 运燥澡造藻则悦, 匀葬噪葬灶泽泽燥灶粤, 杂增葬灶遭燥则早悦, 藻贼葬造援孕则燥贼藻葬泽藻葬糟贼蚤增葬贼蚤燥灶蚤灶葬责燥责贼燥泽蚤泽蚤灶凿怎糟藻凿遭赠酝粤蕴 [ 允 ] 援耘曾责悦藻造造砸藻泽, 员怨怨怨, 圆源怨 ( 圆 ): 圆远园鄄圆远愿援 [ 圆愿 ] 匀葬造造早则藻灶韵, 粤蚤贼泽杂, 月则藻泽贼孕, 藻贼葬造援粤责燥责贼燥泽蚤泽葬灶凿贼怎皂燥则糟藻造造凿藻葬贼澡蚤灶则藻泽责燥灶泽藻贼燥匀粤酝蕴耘栽 ( 澡怎皂葬灶葬造责澡葬鄄造葬糟贼葬造遭怎皂蚤灶皂葬凿藻造藻贼澡葬造贼燥贼怎皂燥则糟藻造造泽 )[ 允 ] 援粤凿增耘曾责酝藻凿月蚤燥造, 圆园园愿, 远园远 : 圆员苑鄄圆源园援 [ 圆怨 ] 郧燥扎怎葬糟蚤噪阅, 运蚤皂糟澡蚤粤援粤怎贼燥责澡葬早赠葬灶凿糟藻造造凿藻葬贼澡 [ 允 ] 援悦怎则则栽燥责阅藻增月蚤燥造, 圆园园苑, 苑愿 : 圆员苑鄄圆源缘援 [ 猿园 ] 匀燥赠藻则鄄匀葬灶泽藻灶酝, 允葬葬贼贼藻造葬酝援粤怎贼燥责澡葬早赠 : 粤灶藻皂藻则早蚤灶早贼葬则早藻贼枣燥则糟葬灶糟藻则贼澡藻则葬责赠 [ 允 ] 援粤怎贼燥责澡葬早赠, 圆园园愿, 源 ( 缘 ): 缘苑源鄄缘愿园援 [ 猿员 ] 孕藻贼蚤燥贼粤, 韵早蚤藻则鄄阅藻灶蚤泽耘, 月造燥皂皂葬葬则贼耘云, 藻贼葬造援阅蚤泽贼蚤灶糟贼糟造葬泽泽藻泽燥枣责澡燥泽责澡葬贼蚤凿赠造蚤灶燥泽蚤贼燥造猿鸳鄄噪蚤灶葬泽藻泽葬则藻蚤灶增燥造增藻凿蚤灶泽蚤早灶葬造蚤灶早责葬贼澡憎葬赠泽贼澡葬贼糟燥灶贼则燥造皂葬糟则燥葬怎贼燥责澡葬早赠蚤灶匀栽鄄圆怨糟藻造造泽 [ 允 ] 援允月蚤燥造悦澡藻皂, 圆园园园, 圆苑缘 ( 圆 ): 怨怨圆鄄怨怨愿援 [ 猿圆 ] 再燥则蚤皂蚤贼泽怎栽, 运造蚤燥灶泽噪赠阅允援粤怎贼燥责澡葬早赠 : 酝燥造藻糟怎造葬则皂葬糟澡蚤灶藻则赠枣燥则泽藻造枣鄄藻葬贼蚤灶早 [ 允 ] 援悦藻造造阅藻葬贼澡阅蚤枣枣藻则, 圆园园缘, 员圆 ( 杂怎责责造圆 ): 员缘源圆鄄员缘缘圆援 [ 猿猿 ] 月则藻泽贼孕, 郧怎泽贼葬枣泽泽燥灶酝, 酝燥泽泽遭藻则早粤运, 藻贼葬造援匀蚤泽贼燥灶藻凿藻葬糟藻贼赠造葬泽藻蚤灶澡蚤遭蚤贼燥则泽责则燥皂燥贼藻贼澡藻贼怎皂燥则蚤糟蚤凿葬造藻枣枣藻糟贼燥枣匀粤酝蕴耘栽 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则砸藻泽, 圆园园苑, 远苑 ( 圆猿 ): 员员猿圆苑鄄员员猿猿源援 [ 猿源 ] 耘蚤扎蚤则蚤噪阅蕴, 悦葬则凿燥扎燥粤运, 悦灶燥责酝援栽澡藻则燥造藻枣燥则藻灶凿燥责造葬泽皂蚤糟则藻贼蚤糟怎鄄造怎皂泽贼则藻泽泽蚤灶凿蚤葬遭藻贼藻泽皂藻造造蚤贼怎泽 [ 允 ] 援耘灶凿燥糟则砸藻增, 圆园园愿, 圆怨 ( 员 ): 源圆鄄远员援 [ 猿缘 ] 孕藻贼贼藻则泽泽燥灶鄄运葬泽贼遭藻则早允, 粤蚤贼泽杂, 郧怎泽贼葬枣泽泽燥灶蕴, 藻贼葬造援悦葬灶皂蚤泽枣燥造凿藻凿责则燥贼藻蚤灶泽遭藻遭藻灶藻枣蚤糟蚤葬造? 栽澡藻匀粤酝蕴耘栽糟葬泽藻 [ 允 ] 援粤灶灶酝藻凿, 圆园园怨, 源员 ( 猿 ): 员远圆鄄员苑远援 [ 猿远 ] 蕴蚤泽噪燥增葬运, 运藻造造赠粤蕴, 韵鸳月则蚤藻灶晕, 藻贼葬造援耘枣枣藻糟贼燥枣凿藻灶葬贼怎则葬贼蚤燥灶燥枣葬造责澡葬鄄造葬糟贼葬造遭怎皂蚤灶燥灶贼澡藻枣燥则皂葬贼蚤燥灶燥枣月粤酝蕴耘栽 ( 遭燥增蚤灶藻葬造责澡葬鄄造葬糟贼鄄葬造遭怎皂蚤灶皂葬凿藻造藻贼澡葬造贼燥贼怎皂燥则糟藻造造泽 )[ 允 ] 援允粤早则蚤糟云燥燥凿悦澡藻皂, 圆园员园, 缘愿 ( 苑 ): 源源圆员鄄源源圆苑援 [ 猿苑 ] 阅憎蚤增藻凿蚤粤运, 郧燥藻造粤, 杂澡葬灶噪澡憎葬则杂晕, 藻贼葬造援匀怎皂葬灶葬造责澡葬鄄造葬糟贼葬造鄄遭怎皂蚤灶皂葬凿藻造藻贼澡葬造贼燥贼怎皂燥则泽 : 悦葬灶蚤贼遭藻葬灶藻憎蚤灶贼则葬增藻泽蚤糟葬造贼澡藻则葬责赠枣燥则遭造葬凿凿藻则糟葬灶糟藻则?[ 允 ] 援陨灶凿蚤葬灶允哉则燥造, 圆园员园, 圆远 ( 猿 ): 源远源鄄源远缘援 [ 收稿日期 ] 摇圆园员园原员圆原圆园 [ 修回日期 ] 摇圆园员员原园圆原猿园 [ 本文编辑 ] 摇王摇莹