胡佳乐, 等援结直肠癌中砸粤杂杂云员粤启动子甲基化与悦赠糟造蚤灶阅员和孕缘猿表达的关系 源源缘 摇摇结直肠癌是我国大中城市发病率居第二 三位的恶性肿瘤, 目前我国早期诊断率不足员园豫, 探索有效的诊断标志物很有必要 砸葬泽相关区域家族员粤基因 ( 则葬泽鄄葬泽泽燥糟蚤葬贼蚤燥灶凿燥皂葬蚤灶枣葬皂蚤造

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1 源源源 中国肿瘤生物治疗杂志摇澡贼贼责 : 辕辕憎憎憎援遭蚤燥贼澡藻则援燥则早悦澡蚤灶允悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则, 粤怎早援圆园员园, 灾燥造援员苑, 晕燥援源 阅韵陨 : 员园援猿愿苑圆辕躁援蚤泽泽灶援员园园苑鄄猿愿缘载援圆园员园援园源援园员远 临床研究 结直肠癌中砸粤杂杂云员粤启动子甲基化与悦赠糟造蚤灶阅员和孕缘猿表达的关系 葬遭葬葬遭胡佳乐, 陈摇云, 刘摇胜, 陈森林, 蒋梦洁 ( 中国人民解放军第源员员医院葬援普通外科 ; 遭援检验病理科, 上海 圆园园园愿员 ) [ 摘摇要 ] 摇目的 : 检测结直肠癌组织中砸葬泽相关区域家族员粤 ( 则葬泽鄄葬泽泽燥糟蚤葬贼蚤燥灶凿燥皂葬蚤灶枣葬皂蚤造赠员粤, 砸粤杂杂云员粤 ) 基因启动子甲基化以及悦赠糟造蚤灶阅员和孕缘猿蛋白的表达, 分析它们与结直肠癌临床病理特征的关系 方法 : 收集圆园园愿年愿月至圆园园怨年愿月长海医院病理科猿苑例结直肠癌组织和员源例癌旁组织 ( 癌灶边缘缘糟皂以外组织 ) 标本 甲基化特异性孕悦砸 ( 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶鄄泽责藻糟蚤枣蚤糟孕悦砸, 酝杂孕 ) 检测结直肠癌组织中砸粤杂杂云员粤基因启动子的甲基化, 免疫组织化学法检测结直肠癌组织中悦赠糟造蚤灶阅员和孕缘猿蛋白的表达, 分析砸粤杂杂云员粤启动子甲基化 悦赠糟造蚤灶阅员和孕缘猿表达的关联性以及三者与结直肠癌临床病理特征的相关性 结果 : 猿苑例结直肠癌组织中砸粤杂杂云员粤启动子甲基化有圆猿例 ( 远圆援员远豫 ), 员源例癌旁组织中砸粤杂杂云员粤启动子甲基化有员圆例 ( 愿缘援苑员豫 ); 猿苑 例癌组织中悦赠糟造蚤灶阅员阳性员源例 ( 猿苑援愿源豫 ) 孕缘猿阳性员缘例 ( 源园援缘源豫 ), 员源例癌旁组织中悦赠糟造蚤灶阅员和责缘猿表达均为阴性 直肠癌组织中砸粤杂杂云员粤启动子甲基化阳性率高于结肠癌 ( 孕约园援园缘 ) 结直肠癌患者年龄与悦赠糟造蚤灶阅员表达呈负相关 ( 孕约园郾园缘 ), 淋巴结转移与孕缘猿表达呈正相关 ( 孕约园援园缘 ) 结直肠癌组织中砸粤杂杂云员粤启动子甲基化与悦赠糟造蚤灶阅员和孕缘猿的表达无相关性 结论 : 砸粤杂杂云员粤启动子甲基化 悦赠糟造蚤灶阅员和孕缘猿蛋白表达三者的联合检测对研究结直肠癌的发生 发展有一定意义 [ 关键词 ] 摇结直肠癌 ; 悦赠糟造蚤灶阅员 ; 孕缘猿 ; 砸葬泽相关区域家族员粤基因 [ 中图分类号 ] 摇砸猿怨圆援圆 ; 砸苑猿缘援猿摇摇摇摇 [ 文献标志码 ] 摇粤摇摇摇摇 [ 文章编号 ] 摇员园园苑鄄猿愿缘载 ( 圆园员园 ) 园源鄄园源源源鄄园远 砸藻造葬贼蚤燥灶泽澡蚤责燥枣砸粤杂杂云员粤责则燥皂燥贼藻则皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶憎蚤贼澡藻曾责则藻泽泽蚤燥灶泽燥枣悦赠糟造蚤灶阅员葬灶凿孕缘猿蚤灶糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则 葬遭葬葬遭匀哉允蚤葬鄄造藻, 悦匀耘晕再怎灶, 蕴陨哉杂澡藻灶早, 悦匀耘晕杂藻灶鄄造蚤灶, 允陨粤晕郧酝藻灶早鄄躁蚤藻 ( 葬援阅藻责葬则贼皂藻灶贼燥枣郧藻灶藻则葬造杂怎则早藻则赠 ; 遭援阅藻责葬则贼鄄皂藻灶贼燥枣蕴葬遭燥则葬贼燥则赠酝藻凿蚤糟蚤灶藻葬灶凿孕葬贼澡燥造燥早赠, 晕燥援源员员匀燥泽责蚤贼葬造燥枣孕蕴粤, 杂澡葬灶早澡葬蚤圆园园园愿员, 悦澡蚤灶葬 ) [ 粤遭泽贼则葬糟贼 ] 摇韵遭躁藻糟贼蚤增藻 : 栽燥藻曾葬皂蚤灶藻砸粤杂杂云员粤责则燥皂燥贼藻则皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶葬灶凿悦赠糟造蚤灶阅员葬灶凿孕缘猿藻曾责则藻泽泽蚤燥灶泽蚤灶糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则贼蚤泽泽怎藻泽, 葬灶凿贼燥葬灶葬造赠扎藻贼澡藻蚤则则藻造葬贼蚤燥灶泽澡蚤责憎蚤贼澡贼澡藻糟造蚤灶蚤糟燥责葬贼澡燥造燥早蚤糟糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽燥枣糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则援酝藻贼澡燥凿泽 : 栽澡蚤则贼赠鄄泽藻增藻灶糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则葬灶凿员源责藻则蚤鄄糟葬灶糟藻则贼蚤泽泽怎藻泽葬皂责造藻泽憎藻则藻燥遭贼葬蚤灶藻凿枣则燥皂悦澡葬灶早澡葬蚤匀燥泽责蚤贼葬造凿怎则蚤灶早粤怎早援圆园园愿贼燥粤怎早援圆园园怨援砸粤杂杂云员粤责则燥皂燥贼藻则皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶蚤灶糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则贼蚤泽泽怎藻泽憎葬泽凿藻贼藻糟贼藻凿遭赠皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶鄄泽责藻糟蚤枣蚤糟孕悦砸 ( 酝杂孕 ); 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶泽燥枣悦赠糟造蚤灶阅员葬灶凿孕缘猿蚤灶糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则贼蚤泽泽怎藻泽憎藻则藻藻曾葬皂蚤灶藻凿遭赠蚤皂皂怎灶燥澡蚤泽贼燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠葬泽泽葬赠援栽澡藻则藻造葬贼蚤燥灶泽澡蚤责葬皂燥灶早砸粤杂杂云员粤责则燥皂燥贼藻则皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶, 悦赠糟造蚤灶阅员葬灶凿孕缘猿藻曾责则藻泽泽蚤燥灶泽葬灶凿贼澡藻蚤则则藻造葬贼蚤燥灶泽澡蚤责憎蚤贼澡糟造蚤灶蚤糟鄄责葬贼澡燥造燥早蚤糟糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽燥枣糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则憎葬泽葬灶葬造赠扎藻凿援砸藻泽怎造贼泽 : 酝藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶燥枣砸粤杂杂云员粤责则燥皂燥贼藻则憎葬泽枣燥怎灶凿圆猿 ( 远圆郾员远豫 ) 燥枣贼澡藻猿苑糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则贼蚤泽泽怎藻泽葬灶凿员圆 ( 愿缘援苑员豫 ) 燥枣贼澡藻员源责藻则蚤鄄糟葬灶糟藻则贼蚤泽泽怎藻泽 ; 员源 ( 猿苑援愿源豫 ) 燥枣贼澡藻猿苑糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则贼蚤泽泽怎藻泽澡葬凿悦赠糟造蚤灶阅员藻曾责则藻泽泽蚤燥灶葬灶凿员缘 ( 源园援缘源豫 ) 澡葬凿孕缘猿藻曾责则藻泽泽蚤燥灶援悦赠糟造蚤灶阅员葬灶凿孕缘猿藻曾责则藻泽泽蚤燥灶泽憎葬泽灶藻早葬贼蚤增藻蚤灶员源责藻则蚤鄄糟葬灶糟藻则贼蚤泽泽怎藻泽援砸粤杂杂云员粤责则燥皂燥贼藻则皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶则葬贼藻蚤灶则藻糟贼怎皂糟葬灶糟藻则憎葬泽澡蚤早澡藻则贼澡葬灶贼澡葬贼蚤灶贼澡藻糟燥造燥灶糟葬灶糟藻则 ( 孕约园援园缘 ) 援悦赠糟造蚤灶阅员藻曾责则藻泽泽蚤燥灶憎葬泽灶藻早葬贼蚤增藻造赠糟燥则则藻造葬贼藻凿憎蚤贼澡责葬贼蚤藻灶贼葬早藻 ( 孕约园援园缘 ), 葬灶凿孕缘猿藻曾责则藻泽鄄泽蚤燥灶憎葬泽责燥泽蚤贼蚤增藻造赠糟燥则则藻造葬贼藻凿憎蚤贼澡造赠皂责澡灶燥凿藻皂藻贼葬泽贼葬泽蚤泽 ( 孕约园援园缘 ); 砸粤杂杂云员粤责则燥皂燥贼藻则皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶澡葬凿灶燥则藻造葬贼蚤燥灶泽澡蚤责憎蚤贼澡悦赠糟造蚤灶阅员燥则孕缘猿藻曾责则藻泽泽蚤燥灶泽 ( 孕跃园援园缘 ) 援悦燥灶糟造怎泽蚤燥灶 : 悦燥皂遭蚤灶藻凿凿藻贼藻糟贼蚤燥灶燥枣砸粤杂杂云员粤责则燥皂燥贼藻则皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶, 悦赠鄄糟造蚤灶阅员葬灶凿孕缘猿藻曾责则藻泽泽蚤燥灶泽皂葬赠造葬赠葬枣燥怎灶凿葬贼蚤燥灶枣燥则泽贼怎凿赠蚤灶早凿藻增藻造燥责皂藻灶贼葬灶凿责则燥早则藻泽泽蚤燥灶燥枣糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则援 [ 运藻赠憎燥则凿泽 ] 摇糟燥造燥则藻糟贼葬造灶藻燥责造葬泽皂泽 ; 悦赠糟造蚤灶阅员 ; 孕缘猿 ; 则葬泽鄄葬泽泽燥糟蚤葬贼蚤燥灶凿燥皂葬蚤灶枣葬皂蚤造赠员粤早藻灶藻 ( 砸粤杂杂云员粤 ) [ 悦澡蚤灶允悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则, 圆园员园, 员苑 ( 源 ): 源源源鄄源源怨 ] 摇摇 [ 基金项目 ] 摇上海市虹口区卫生局重点课题资助 [ 虹卫 ( 圆园园苑 ) 员缘员号 ] 孕则燥躁藻糟贼泽怎责责燥则贼藻凿遭赠贼澡藻运藻赠砸藻泽藻葬则糟澡云燥怎灶凿葬贼蚤燥灶枣则燥皂匀藻葬造贼澡月怎则藻葬怎燥枣匀燥灶早噪燥怎阅蚤泽贼则蚤糟贼燥枣杂澡葬灶早澡葬蚤 [ 晕燥援 ( 圆园园苑 ) 员缘员 ] [ 作者简介 ] 摇胡佳乐 ( 员怨远远原 ), 男, 浙江省嘉兴市人, 博士, 副主任医师, 主要从事肿瘤治疗基础和临床的研究 现工作单位 : 中国人民解放军第员园园医院, 苏州, 圆员缘园园苑 耘鄄皂葬蚤造 : 凿则澡怎员怨远远岳赠葬澡燥燥援糟燥皂援糟灶

2 胡佳乐, 等援结直肠癌中砸粤杂杂云员粤启动子甲基化与悦赠糟造蚤灶阅员和孕缘猿表达的关系 源源缘 摇摇结直肠癌是我国大中城市发病率居第二 三位的恶性肿瘤, 目前我国早期诊断率不足员园豫, 探索有效的诊断标志物很有必要 砸葬泽相关区域家族员粤基因 ( 则葬泽鄄葬泽泽燥糟蚤葬贼蚤燥灶凿燥皂葬蚤灶枣葬皂蚤造赠员粤, 砸粤杂杂云员粤 ) 在正常组织中广泛表达, 而在多种原发性恶性肿瘤中, 常因启动子区的甲基化而表达缺失 砸粤杂杂云员粤基因启动子悦责郧岛的甲基化在多种肿瘤组织和肿瘤患者的体液中可以检测到, 由此说明其具有肿瘤标志物的价 [ 员值 ] 但砸粤杂杂云员粤在结直肠癌患者的表达情况国内鲜有报道 细胞周期素阅员 ( 悦赠糟造蚤灶阅员 ) 是参与细胞周期调控的一种重要因子, 在人类多种肿瘤中存在着过度表达现象 ; 孕缘猿是研究最为广泛深入的肿瘤基因之一 探讨砸粤杂杂云员粤甲基化及与悦赠糟造蚤灶阅员和孕缘猿的关系有助于加深对散发性结直肠癌发生 发展的认识 员摇材料与方法员援员摇标本来源和主要试剂收集圆园园愿年愿月至圆园园怨年愿月长海医院病理科的结直肠癌根治术患者新鲜组织猿苑例, 分别取癌组织猿苑例 癌旁组织 ( 瘤灶边缘缘糟皂以外的组织 ) 员源例 标本离体后立即置于原愿园益冰箱冻存, 同步取材组织作石蜡包埋 本组患者中男圆缘例 女员圆例, 年龄猿园耀耀耀耀耀耀耀愿远岁, 中位年龄为远苑岁 按肿瘤部位分为直肠圆员例, 结肠员远例 ( 乙状结肠苑例, 升 降结肠远例, 横结肠圆例, 盲肠员例 ) 按宰匀韵分类标准, 猿苑例结直肠癌中高分化癌圆例, 中分化癌猿员例, 低分化癌源例 术后病理有淋巴结转移者愿例 所有患者术前均未接受放 化疗及生物治疗 鼠抗人悦赠糟造蚤灶阅员单克隆抗体购自上海太阳生物技术有 限公司, 鼠抗人孕缘猿单克隆抗体 耘灶增蚤泽蚤燥灶二步法免疫组化检测试剂盒及阅粤月显色剂为阅粤运韵公司产品 抗体工作稀释度均为员颐缘园 员援圆摇阅晕粤提取新鲜癌组织和癌旁组织制成匀浆, 采用匝蚤葬早藻灶公司的匝陨粤葬皂责阅晕粤抽提试剂盒 ( 悦葬贼援晕燥援缘员猿源园 ) 提取组织阅晕粤 阅晕粤纯品的阅圆远园辕阅圆愿园值为员援远耀耀耀耀耀耀耀员郾怨 本实验样本抽提基因组阅晕粤的阅圆远园辕阅圆愿园值符合要求, 可以进行后续甲基化实验 员援猿摇亚硫酸氢钠化学修饰阅晕粤采用匝蚤葬早藻灶公司的耘责蚤栽藻糟贼月蚤泽怎造枣蚤贼藻运蚤贼 ( 悦葬贼援晕燥援缘怨员园源 ) 处理已提取的各样本阅晕粤, 按照说明书要求在圆园园 μ 造的孕悦砸管中准备反应体系 : 阅晕粤员灶早耀耀耀耀耀耀耀圆园 μ ( 早砸晕葬泽藻原枣则藻藻水补到圆园 μ 造 ), 亚硫酸盐缓冲液愿缘 μ 造, 阅晕粤保护缓冲液猿缘 μ 造, 总体积员源园 μ 造 在孕悦砸仪上进行下述反应, 计缘澡 : 怨怨益缘皂蚤灶, 远园益圆缘皂蚤灶, 怨怨益缘皂蚤灶, 远园益愿缘皂蚤灶, 怨怨益缘皂蚤灶, 远园益员苑缘皂蚤灶, 圆园益恒温 续之月蕴 月宰 月阅等缓冲液处理, 最后加圆园 μ 造的溴化乙锭缓冲液到离心柱中间的硅胶膜上, 离心收集阅晕粤 员援源摇酝杂孕法检测结直肠癌及癌旁组织中砸粤杂杂云员粤基因启动子区甲基化的情况采用阅晕粤甲基化特异性孕悦砸 ( 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶鄄泽责藻鄄糟蚤枣蚤糟责燥造赠皂藻则葬泽藻糟澡葬蚤灶则藻葬糟贼蚤燥灶, 酝杂孕 ) 法进行检测 采用猿对引物对已完成化学修饰的各样本阅晕粤进行孕悦砸扩增 引物参照文献 [ 圆 ], 其序列见表员 孕悦砸反应为两轮反应的巢式孕悦砸, 经过第二轮后, 甲基化 ( 酝 ) 孕悦砸产物为苑远遭责, 非甲基化 ( 哉 ) 孕悦砸产物为愿员遭责, 圆援缘豫琼脂糖电泳鉴定孕悦砸反应结果 结直肠癌标本的酝杂孕产物各员例送检测序 栽葬遭援员摇 表员摇 酝杂孕引物序列及反应条件 孕则蚤皂藻则泽藻择怎藻灶糟藻泽葬灶凿则藻葬糟贼蚤燥灶糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶燥枣酝杂孕 摇摇孕则蚤皂藻则摇摇摇摇杂藻择怎藻灶糟藻泽 粤灶灶藻葬造蚤灶早贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 ( 贼辕益 ) 悦赠糟造蚤灶早灶怎皂遭藻则 砸粤杂杂云员粤赃云员缘忆鄄郧栽栽栽粤郧栽栽栽郧郧粤栽栽栽栽郧郧郧郧郧粤郧鄄猿忆缘怨圆猿 砸粤杂杂云员粤赃砸员 缘忆鄄悦悦悦砸悦粤粤悦栽悦粤粤栽粤粤粤悦栽悦粤粤粤悦栽悦鄄猿忆 砸粤杂杂云员粤赃酝云员缘忆鄄郧郧郧栽栽悦郧栽栽栽栽郧栽郧郧栽栽栽悦郧栽栽悦鄄猿忆远猿猿园 砸粤杂杂云员粤赃酝砸员 缘忆鄄栽粤粤悦悦悦郧粤栽栽粤粤粤悦悦悦郧栽粤悦栽栽悦郧鄄猿忆 砸粤杂杂云员粤赃哉云员缘忆鄄郧郧郧郧栽栽栽郧栽栽栽栽郧栽郧郧栽栽栽栽郧栽栽栽鄄猿忆远猿猿园 砸粤杂杂云员粤赃哉砸员 缘忆鄄粤粤悦粤栽粤粤悦悦悦粤粤栽栽粤粤粤悦悦悦粤栽粤悦栽栽悦粤鄄猿忆

3 源源远 中国肿瘤生物治疗杂志, 圆园员园年愿月, 员苑 ( 源 ) 员援缘摇 免疫组织化学法检测结直肠癌及癌旁组织中 悦赠糟造蚤灶阅员和孕缘猿蛋白的表达 甲基化检测病例的同步石蜡包埋蜡块, 源 μ 皂连续切片 常规脱蜡至水, 园援园员皂燥造辕蕴柠檬酸盐缓冲液电饭煲抗原修复圆园皂蚤灶, 取出冷却 孕月杂冲洗后切片分别滴加一抗 ( 鼠抗人悦赠糟造蚤灶阅员, 孕缘猿 ), 源益冰栽酝箱过夜, 孕月杂冲洗后滴加悦澡藻皂酝葬贼藻耘灶灾蚤泽蚤燥灶辕匀砸孕 兔辕小鼠检测试剂, 室温湿盒中放置猿园皂蚤灶, 孕月杂冲洗后应用阅粤月显色缘耀耀耀耀耀耀耀员园皂蚤灶, 苏木精复染, 封片, 光镜下观察 以上步骤中, 以孕月杂代替一抗为阴性对照, 已知阳性切片为阳性对照 染色结果判定标准 : 每个高倍视野员园园个细胞中阳性细胞的百分比跃员园豫为阳性 员园豫为阴性 员援远摇 统计学处理 砸粤杂杂云员粤甲基化率 悦赠糟造蚤灶阅员和孕缘猿表达率的组间比较采用云蚤泽澡藻则忆泽精确检验 ; 指标间的关系分析采用杂责藻葬则皂葬灶等级相关分析 悦赠糟造蚤灶阅员 ( 或孕缘猿 蛋白 ) 表达组与非表达组间 砸粤杂杂云员粤甲基化和非甲基化组合状态 的分布差异采用宰蚤造糟燥曾燥灶秩和检验 所有统计分析均使用杂贼葬贼葬员员援园软件进行 孕约园援园缘表示差异有统计学意义 圆摇结摇果 圆援员摇 结直肠癌组织中砸粤杂杂云员粤启动子甲基化分析 酝杂孕法检测结果 ( 图员 ) 显示, 猿苑例散发性结直肠癌组织中, 砸粤杂杂云员粤基因启动子甲基化有圆猿例, 甲基化率为远圆援员远豫 ; 员源例癌旁组织员圆例甲基化阳性, 甲基化率为愿缘援苑员豫 摇摇酝杂孕产物测序结果可见 :( 员 ) 甲基化比对结果 将甲基化产物纯化后构建到测序载体中测序, 碱基若发生了甲基化, 那么用亚硫酸盐处理时对应的碱基 悦 不会发生相应变化, 这就是对应的甲基化 悦责郧岛 区域 ; 而未甲基化的碱基, 在进行亚硫酸盐处理时, 悦 会变成对应的 栽 将甲基化处理的序列与还原后的原始序列比对会发现 悦责郧岛 区域 ( 图圆粤中用红色圆圈标注的区域 ) 还原后的序列经晕悦月陨中软件分析显示, 该序列为砸粤杂杂云员的序列, 完全符合实验设计 测序的结直肠癌标本的酝杂孕甲基化产物中, 砸粤杂杂云员粤基因启动子悦责郧岛的愿个位点均发生了甲基化 ( 圆 ) 非甲基化比对检测, 比较方法同甲基化比对 将甲基化处理的测序序列与还原后的原始序列比对, 会发现非甲基化区域无 悦责郧岛 区域 ( 图圆月 ) 图员摇酝杂孕法检测结直肠癌组织中砸粤杂杂云员粤基因启动子的甲基化云蚤早援员摇酝杂孕葬灶葬造赠扎藻凿砸粤杂杂云员粤责则燥皂燥贼藻则皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶蚤灶糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则贼蚤泽泽怎藻泽员 : 晕藻早葬贼蚤增藻糟燥灶贼则燥造燥枣怎灶皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 ; 圆, 猿 : 哉灶皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶鄄泽责藻糟蚤枣蚤糟责则燥凿怎糟贼泽 ; 源 : 酝葬则噪藻则 ; 缘, 远 : 酝藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶鄄泽责藻糟蚤枣蚤糟责则燥凿怎糟贼泽 ; 苑 : 晕藻早葬贼蚤增藻糟燥灶贼则燥造燥枣皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 云蚤早援圆摇 图圆摇 砸粤杂杂云员粤基因甲基化 ( 粤 ) 和非甲基化 ( 月 ) 样品的测序分析 杂藻择怎藻灶糟蚤灶早葬灶葬造赠泽蚤泽燥枣皂藻贼澡赠造葬贼藻凿 ( 粤 ) 葬灶凿怎灶皂藻贼澡赠造葬贼藻凿 ( 月 ) 砸粤杂杂云员粤早藻灶藻泽葬皂责造藻泽 圆援圆摇结直肠癌组织中悦赠糟造蚤灶阅员和孕缘猿蛋白的表达悦赠糟造蚤灶阅员和孕缘猿蛋白阳性染色位于细胞核, 表现为棕黄色颗粒 猿苑例结直肠癌中有员源例 ( 猿苑郾愿源豫 ) 悦赠糟造蚤灶阅员表达阳性, 有员缘例 ( 源园援缘源豫 ) 孕缘猿蛋白表达阳性 ( 图猿 ) 员源例癌周组织的悦赠糟造蚤灶 阅员和孕缘猿蛋白染色无明显阳性反应 不加一抗的阴性对照, 免疫组织化学染色为阴性 圆援猿摇结直肠癌组织中砸粤杂杂云员粤启动子甲基化 悦赠鄄糟造蚤灶阅员和孕缘猿蛋白表达与临床病理特征间的关系由表圆可见, 直肠癌砸粤杂杂云员粤甲基化阳性率高

4 胡佳乐, 等援结直肠癌中砸粤杂杂云员粤启动子甲基化与悦赠糟造蚤灶阅员和孕缘猿表达的关系 源源苑 图猿摇结直肠腺癌组织中悦赠糟造蚤灶阅员和孕缘猿蛋白的表达云蚤早援猿摇耘曾责则藻泽泽蚤燥灶泽燥枣悦赠糟造蚤灶阅员葬灶凿孕缘猿责则燥贼藻蚤灶蚤灶糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则贼蚤泽泽怎藻泽粤鄄阅 : 砸藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则贼蚤泽泽怎藻 ; 耘鄄匀 : 悦燥造燥灶糟葬灶糟藻则贼蚤泽泽怎藻 ; 粤 : 悦赠糟造蚤灶阅员 ( 原 )( 伊源园园 ); 月 : 悦赠糟造蚤灶阅员 ( 垣 )( 伊员园园 ); 悦 : 孕缘猿 ( 原 )( 伊圆园园 ); 阅 : 孕缘猿 ( 垣 )( 伊源园园 ); 耘 : 悦赠糟造蚤灶阅员 ( 原 )( 伊源园园 ); 云 : 悦赠糟造蚤灶阅员 ( 垣 )( 伊圆园园 ); 郧 : 孕缘猿 ( 原 )( 伊圆园园 ); 匀 : 孕缘猿 ( 垣 )( 伊圆园园 ) 表圆摇结直肠癌组织砸粤杂杂云员粤甲基化 悦赠糟造蚤灶阅员和孕缘猿表达与临床病理特征的关系栽葬遭援圆摇砸藻造葬贼蚤燥灶泽澡蚤责燥枣砸粤杂杂云员粤责则燥皂燥贼藻则皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶, 悦赠糟造蚤灶阅员葬灶凿孕缘猿憎蚤贼澡糟造蚤灶蚤糟燥责葬贼澡燥造燥早蚤糟糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽燥枣糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则贼蚤泽泽怎藻泽 悦造蚤灶蚤糟燥责葬贼澡燥造燥早蚤糟糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟 酝藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 垣原孕 悦赠糟造蚤灶阅员 垣原孕 孕缘猿 垣原孕 粤早藻 摇 约远园 远 远 园援源苑园 苑 缘 园援员源远 远 远 园援源愿愿 摇 远园 员苑 愿 苑 员愿 怨 员远 郧藻灶凿藻则 摇 酝葬造藻 员源 员员 园援猿园远 员员 员源 园援猿园远 员园 员缘 员援园园园 摇 云藻皂葬造藻 怨 猿 猿 怨 缘 苑 郧则燥泽泽杂责藻糟蚤皂藻灶 摇 酝葬泽泽贼赠责藻 苑 圆 园援源猿源 圆 苑 园援源猿源 猿 远 园援苑员员 摇 哉造糟藻则贼赠责藻 员远 员圆 员圆 员远 员圆 员远 阅蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶 摇 蕴燥憎 源 园 园援园怨缘 员 猿 园援缘员园 员 猿 园援缘员员 摇 酝蚤凿凿造藻 员苑 员源 员猿 员愿 员源 员苑 摇 匀蚤早澡 圆 园 园 圆 园 圆 阅藻责贼澡燥枣蚤灶增葬泽蚤燥灶 摇 酝怎糟燥泽葬 员 园 园援愿园圆 园 员 园援愿园圆 园 员 园援愿园远 摇 酝怎泽糟怎造葬则蚤泽 缘 圆 圆 缘 圆 缘 摇 粤凿增藻灶贼蚤贼蚤葬 员苑 员圆 员圆 员苑 员猿 员远 栽怎皂燥则造燥糟葬贼蚤燥灶 摇 砸藻糟贼怎皂 员远 缘 园援园源源 远 员缘 园援员愿猿 员园 员员 园援缘园园 摇 悦燥造燥灶 苑 怨 愿 愿 猿 源 陨灶枣蚤造贼则葬贼蚤灶早灶燥凿藻泽燥怎贼泽蚤凿藻燥枣糟燥造燥则藻糟贼怎皂 摇 垣 员 圆 园援缘源源 园 猿 园援圆苑缘 员 圆 员援园园园 摇 原 圆圆 员圆 员源 圆园 员源 圆园 蕴赠皂责澡葬贼蚤糟蚤灶增葬泽蚤燥灶 摇 垣 愿 猿 园援源苑苑 苑 源 园援园远猿 愿 猿 园援园圆缘 摇 原 员缘 员员 苑 员怨 苑 员怨 悦燥藻曾蚤泽贼蚤灶早葬凿藻灶燥皂葬 摇 垣 源 猿 员援园园园 猿 源 员援园园园 圆 缘 园援远苑苑 摇 原 员怨 员员 员员 员怨 员猿 员苑

5 源源愿 中国肿瘤生物治疗杂志, 圆园员园年愿月, 员苑 ( 源 ) 于结肠癌 ( 孕约园援园缘 ) 杂责藻葬则皂葬灶等级相关显示 : 年龄与悦赠糟造蚤灶阅员表达量间呈负相关 ( 杂责藻葬则皂葬灶等级相关系数为原园援猿远圆远, 孕越园援园圆苑源 ), 即年龄越高, 悦赠糟造蚤灶阅员表达量越低 ; 孕缘猿表达与淋巴结转移间相关系数为园援猿怨愿缘 ( 孕越园援园员源远 ), 孕缘猿表达与淋巴结转移呈正相关, 有淋巴结转移者孕缘猿的阳性率高 砸粤杂杂云员粤甲基化与病人的性别 大体分类 病理分化 浸润程度 伴发息肉等均无关 圆援源摇人结直肠癌组织砸粤杂杂云员粤基因启动子甲基化与悦赠糟造蚤灶阅员和孕缘猿蛋白表达的关系 砸粤杂杂云员粤基因启动子甲基化表达阳性与否和 悦赠糟造蚤灶阅员 孕缘猿的表达经云蚤泽澡藻则忆泽确切概率法分析, 分别孕越员援园园 孕越园援猿员源 杂责藻葬则皂葬灶相关分析结果显示, 砸粤杂杂云员粤甲基化和悦赠糟造蚤灶阅员的相关系数为 园援园猿源 ( 孕越园援愿源员 ), 与孕缘猿的相关系数为园援员怨园圆 ( 孕 越园郾圆远园 ) 故砸粤杂杂云员粤甲基化水平与悦赠糟造蚤灶阅员和 孕缘猿两者的表达均无关 经宰蚤造糟燥曾燥灶秩和检验, 砸粤杂杂云员粤基因启动子甲基化和非甲基化的阳性与否的三种组合状态的等级分布, 在悦赠糟造蚤灶阅员表达组与未表达组间无差异 ( 孕越园援苑源 ), 在孕缘猿蛋白表达组与未表达组间亦无差异 ( 孕越园援员园 ) 本组猿苑例肿瘤病例有猿例甲基化和非甲基化反应均阴性, 剔除猿例后的猿源例统计分析结果基本一致 猿摇讨摇论 随着肿瘤研究的深人, 人们发现除了阅晕粤突变等遗传学改变外, 基因甲基化和组蛋白乙酰化等不涉及阅晕粤序列改变的表观遗传学机制在部分肿瘤 [ 猿鄄源的发生中可能起着至关重要的作用 ] [ 缘 ] 载怎等研究了结直肠癌猿员种基因启动子悦责郧岛的甲基化状态, 结果有员苑种基因的甲基化与其早期发生有关 砸粤杂杂云员粤表达的缺失是人类恶性肿瘤中最常见的 [ 远一个分子事件 据报道 ], 目前至少有猿苑种肿瘤存在该基因的启动子甲基化 本组散发性结直肠癌组织中, 砸粤杂杂云员粤基因启动子甲基化频率为远圆援员远豫, 直肠癌发生率高于结肠癌 文献报道结直肠癌 砸粤杂杂云员粤甲基化率从员圆援园豫耀耀耀耀耀耀耀愿员援猿豫 宰葬早灶藻则 [ 苑 ] 等发现, 结直肠癌细胞系及原发性结直肠癌中存在的砸粤杂杂云员粤甲基化, 与责员远陨晕运源粤甲基化无关联 [ 愿 ] 增葬灶耘灶早藻造葬灶凿等研究圆圆圆例散发性结直肠癌的 砸粤杂杂云员粤甲基化, 大部分伴运鄄则葬泽突变的结直肠癌标本缺乏砸粤杂杂云员粤甲基化, 认为是运鄄则葬泽野生型结直肠癌的常见事件 砸粤杂杂云员粤甲基化与结直肠癌发生过程中的一些其他重要基因如月砸粤云 澡酝蕴匀员 粤孕悦等的关系也受到关注 [ 怨鄄员园 ] 砸粤杂杂云员粤蛋白在凋亡的信号转导 微管稳定性 [ 员员和细胞周期循环方面有潜在的作用 ] 砸粤杂杂云员粤 可以抑制悦赠糟造蚤灶阅员的积聚, 使细胞周期停滞在郧员辕 [ 员圆杂期 ] 悦赠糟造蚤灶阅员的过度表达可使细胞持续增殖, 从而导致细胞失控生长, 多种肿瘤组织中都普遍存在该现象 本组结直肠癌中悦赠糟造蚤灶阅员蛋白即有较高的表达率, 且与年龄有关联 在结直肠癌的发生发展过程中, 孕缘猿基因突变被认为是一个晚期事件, 其突变率各家报道不一, 从圆圆豫耀耀耀耀耀耀耀苑园豫 本组研究 孕缘猿阳性率源园援缘源豫, 与文献平均值相近 此外, 本组有淋巴结转移者孕缘猿的阳性率高, 说明孕缘猿过度表达的结直肠癌预后不佳 由于孕缘猿基因的突变与肿瘤的浸润行为关联, 说明其直接或间接促进了结直肠癌的进一步发展 悦赠糟造蚤灶阅员和孕缘猿都是结 [ 员猿直肠癌形成过程中的重要基因 ] 本组砸粤杂杂云员粤 甲基化及与非甲基化的不同组合状态与悦赠糟造蚤灶阅员 和孕缘猿基因表达无关联, 有待从转录和蛋白表达水平及增加病例研究之 [ 员源, 圆 ] 国外的一些研究揭示, 结直肠的腺瘤 增生性息肉 异常隐窝病灶 ( 粤悦云 ) 以及息肉型和扁平型的早期结直肠癌中均存在一定的砸粤杂杂云员粤甲基化 本组研究中砸粤杂杂云员粤甲基化与肿瘤的浸润深度 肠外浸润结节 淋巴结转移等恶性生物学行为关系不密切, 表明它不是结直肠癌发生 发展的晚期事件 [ 员缘 ] 有文献认为, 结直肠癌砸粤杂杂云员粤甲基化与临床指标间的关系不是很大 ; 组织学分类一 二期的甲基 [ 员远化频率高于三期 ] [ 员苑 ] 阅藻则噪泽等报道, 非进展期结直肠腺瘤中未出现染色体改变, 但已表现许多基因 [ 员愿 ] 的甲基化 杂葬噪葬皂燥贼燥等检测了源愿例早期扁平性结直肠肿瘤 ( 猿怨例早期癌, 怨例黏膜内高级别不典型增生 ) 及对应的猿怨例正常黏膜, 砸粤杂杂云员粤甲基化率, 肿瘤为愿员援猿豫 ( 猿怨辕源愿 ), 正常结肠黏膜为源怨豫 ( 员怨辕猿怨 ), 认为砸粤杂杂云员粤甲基化是非常早期的一种变化, 可发生于正常结肠黏膜上 国内外一些研究认为许多癌旁非肿瘤组织砸粤杂杂云员粤甲基化为阴性, 转录表达明显高于肿瘤组 ; 但也有报道注意到癌旁 [ 员怨耀耀耀耀耀耀耀圆猿组织有一定量的砸粤杂杂云员粤甲基化表达 ], 这可能与癌旁组织的取材范围不一致或组织反应性不同有关 结直肠癌旁 移行黏膜 系指癌旁具有黏液性质异常的黏膜, 被认为是一种癌前病变, 分布的范 [ 圆源围平均距癌猿援源糟皂左右 ] 根据致癌物作用于肠黏膜后结直肠病变呈弥漫 多灶性的观察, 有学 [ 圆缘鄄圆远 ] 者提出了结直肠黏膜癌变 场效应 理论 本组取材员源例癌周组织, 有员圆例出现砸粤杂杂云员粤甲基化, 对应的肿瘤组织也同样为砸粤杂杂云员粤甲基化, 与

6 胡佳乐, 等援结直肠癌中砸粤杂杂云员粤启动子甲基化与悦赠糟造蚤灶阅员和孕缘猿表达的关系 源源怨 场效应 理论吻合 砸粤杂杂云员粤甲基化在一些肿瘤旁及癌前病变的表达支持其参与了肿瘤早期形成的 [ 圆猿假说 ] 结直肠癌及癌周组织砸粤杂杂云员粤甲基化的同步出现对于结直肠癌防治具有一定的指示意义 ( 致谢 : 南通大学公共卫生学院流行病与医学统计学教研室荀鹏程博士帮助分析数据 ; 第二军医大学长海医院病理科提供结直肠癌组织标本 ) [ 参考文献 ] [ 员 ] 摇匀藻泽泽燥灶蕴月, 悦燥燥责藻则宰晕, 蕴葬贼蚤枣云援栽澡藻则燥造藻燥枣砸粤杂杂云员粤皂藻贼澡赠造葬鄄贼蚤燥灶蚤灶糟葬灶糟藻则 [ 允 ] 援阅蚤泽藻葬泽藻酝葬则噪藻则泽, 圆园园苑, 圆猿 ( 员辕圆 ): 苑猿鄄愿苑援 [ 圆 ] 摇郧则藻藻灶泽责葬灶耘允, 允葬遭造燥灶泽噪蚤酝粤, 砸葬躁葬灶栽灾, 蕴藻增蚤灶藻允, 月藻造蚤灶泽噪赠郧杂, 砸燥泽藻灶遭藻则早阅宰援耘责蚤早藻灶藻贼蚤糟葬造贼藻则葬贼蚤燥灶泽蚤灶砸粤杂杂云员粤蚤灶澡怎皂葬灶葬遭藻则则葬灶贼糟则赠责贼枣燥糟蚤 [ 允 ] 援悦葬则糟蚤灶燥早藻灶藻泽蚤泽, 圆园园远, 圆苑 ( 苑 ): 员猿员远鄄员猿圆圆援 [ 猿 ] 摇孕则葬遭澡怎允杂, 运燥则造蚤皂葬则造葬粤, 月葬灶藻则躁藻藻粤, 宰葬灶蚤杂, 杂葬澡燥燥孕运砸援郧藻灶藻鄄泽责藻糟蚤枣蚤糟皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 : 孕燥贼藻灶贼蚤葬造皂葬则噪藻则泽枣燥则糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则 [ 允 ] 援陨灶贼允月蚤燥造酝葬则噪藻则泽, 圆园园怨, 圆源 ( 员 ): 缘苑鄄远圆援 [ 源 ] 摇晕燥凿葬匀, 酝葬泽澡蚤皂葬砸, 运葬皂蚤赠葬皂葬匀, 韵噪葬凿葬杂再, 运葬憎葬皂怎则葬允, 运燥灶蚤泽澡蚤云援孕则燥皂燥贼藻则澡赠责藻则皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶燥枣贼怎皂燥则鄄则藻造葬贼藻凿早藻灶藻泽蚤灶泽责燥则葬凿蚤糟糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则蚤灶赠燥怎灶早责葬贼蚤藻灶贼泽 [ 允 ] 援允耘曾责悦造蚤灶悦葬灶糟藻则砸藻泽, 圆园园苑, 圆远 ( 源 ): 缘圆员鄄缘圆远援 [ 缘 ] 摇载怎载蕴, 再怎允, 在澡葬灶早匀再, 杂怎灶酝匀, 郧怎允, 阅怎载, 藻贼葬造援酝藻贼澡赠造葬鄄贼蚤燥灶责则燥枣蚤造藻燥枣贼澡藻责则燥皂燥贼藻则悦责郧蚤泽造葬灶凿泽燥枣猿员早藻灶藻泽贼澡葬贼皂葬赠糟燥灶鄄贼则蚤遭怎贼藻贼燥糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬则糟蚤灶燥早藻灶藻泽蚤泽 [ 允 ] 援宰燥则造凿允郧葬泽贼则燥藻灶贼藻则燥造, 圆园园源, 员园 ( 圆猿 ): 猿源源员鄄猿源缘源援 [ 远 ] 摇增葬灶凿藻则宰藻赠凿藻灶蕴, 粤凿葬皂泽阅允援栽澡藻砸葬泽鄄葬泽泽燥糟蚤葬贼蚤燥灶凿燥皂葬蚤灶枣葬皂蚤造赠 ( 砸粤杂杂云 ) 皂藻皂遭藻则泽葬灶凿贼澡藻蚤则则燥造藻蚤灶澡怎皂葬灶贼怎皂燥怎则蚤早藻灶藻泽蚤泽 [ 允 ] 援月蚤燥糟澡蚤皂月蚤燥责澡赠泽粤糟贼葬, 圆园园苑, 员苑苑远 ( 员 ): 缘愿鄄愿缘援 [ 苑 ] 摇宰葬早灶藻则运允, 悦燥燥责藻则宰晕, 郧则怎灶凿赠砸郧, 悦葬造凿憎藻造造郧, 允燥灶藻泽悦, 宰葬鄄凿藻赠砸月, 藻贼葬造援云则藻择怎藻灶贼砸粤杂杂云员粤贼怎皂燥怎则泽怎责责则藻泽泽燥则早藻灶藻责则燥鄄皂燥贼藻则皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶蚤灶宰蚤造皂泽 贼怎皂燥怎则葬灶凿糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则 [ 允 ] 援韵灶糟燥早藻灶藻, 圆园园圆, 圆员 ( 源苑 ): 苑圆苑苑鄄苑圆愿圆援 [ 愿 ] 摇增葬灶鄄耘灶早藻造葬灶凿酝, 酝允酝砸燥藻皂藻灶郧, 月则蚤灶噪酝, 孕葬糟澡藻灶酝酝, 宰藻蚤鄄躁藻灶遭藻则早酝孕, 凿藻月则怎觙灶藻粤孕, 藻贼葬造援运鄄则葬泽皂怎贼葬贼蚤燥灶泽葬灶凿砸粤杂杂云员粤责则燥皂燥贼藻则皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶蚤灶糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则 [ 允 ] 援韵灶糟燥早藻灶藻, 圆园园圆, 圆员 ( 圆猿 ): 猿苑怨圆鄄猿苑怨缘援 [ 怨 ] 摇粤澡造择怎蚤泽贼栽, 月燥贼贼蚤造造燥陨, 阅葬灶蚤藻造泽藻灶杂粤, 酝藻造蚤灶早郧陨, 砸燥早灶怎皂栽韵, 蕴蚤灶凿郧耘, 藻贼葬造援砸葬泽泽蚤早灶葬造蚤灶早蚤灶糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬则糟蚤灶燥皂葬泽贼澡则燥怎早澡葬造贼藻则葬贼蚤燥灶燥枣砸粤杂, 砸粤云, 晕云员, 葬灶凿辕燥则砸粤杂杂云员粤 [ 允 ] 援晕藻燥责造葬泽蚤葬, 圆园园愿, 员园 ( 苑 ): 远愿园鄄远愿远援 [ 员园 ] 阅藻则噪泽杂, 孕燥泽贼皂葬悦, 悦葬则增葬造澡燥月, 增葬灶凿藻灶月燥泽糟澡杂酝, 酝燥藻则噪藻则噪孕栽, 匀藻则皂葬灶允郧, 藻贼葬造援陨灶贼藻早则葬贼藻凿葬灶葬造赠泽蚤泽燥枣糟澡则燥皂燥泽燥皂葬造, 皂蚤糟则燥鄄泽葬贼藻造造蚤贼藻葬灶凿藻责蚤早藻灶藻贼蚤糟蚤灶泽贼葬遭蚤造蚤贼赠蚤灶糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻泽泽责藻糟蚤枣蚤糟葬泽泽燥糟蚤葬贼蚤燥灶泽遭藻贼憎藻藻灶责则燥皂燥贼藻则皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶燥枣责蚤增燥贼葬造贼怎皂燥怎则泽怎责责则藻泽泽燥则葬灶凿阅晕粤则藻责葬蚤则早藻灶藻泽葬灶凿泽责藻糟蚤枣蚤糟糟澡则燥皂燥泽燥皂葬造葬造贼藻则葬贼蚤燥灶泽 [ 允 ] 援悦葬则糟蚤灶燥早藻灶藻泽蚤泽, 圆园园愿, 圆怨 ( 圆 ): 源猿源鄄源猿怨援 [ 员员 ] 孕枣藻蚤枣藻则郧孕, 阅葬皂皂葬灶灶砸援酝藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶燥枣贼澡藻贼怎皂燥则泽怎责责则藻泽泽燥则早藻灶藻砸粤杂杂云员粤蚤灶澡怎皂葬灶贼怎皂燥则泽 [ 允 ] 援月蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠 ( 酝燥泽糟 ), 圆园园缘, 苑园 ( 缘 ): 缘苑远鄄缘愿猿援 [ 员圆 ] 郧怎燥宰, 阅燥灶早在, 悦澡藻灶在, 再葬灶早在, 宰藻灶阅, 运怎葬灶早郧, 藻贼葬造援粤遭鄄藻则则葬灶贼悦责郧蚤泽造葬灶凿澡赠责藻则皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶燥枣砸粤杂杂云员粤蚤灶早葬泽贼则蚤糟糟葬则凿蚤葬葬凿藻灶燥糟葬则糟蚤灶燥皂葬 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则陨灶增藻泽贼, 圆园园怨, 圆苑 ( 源 ): 源缘怨鄄源远缘援 [ 员猿 ] 悦澡藻灶宰悦, 蕴蚤灶酝杂, 在澡葬灶早月云, 云葬灶早允, 在澡燥怎匝, 匀怎再, 藻贼葬造援杂怎则增藻赠燥枣皂燥造藻糟怎造葬则责则燥枣蚤造蚤灶早凿怎则蚤灶早澡怎皂葬灶糟燥造燥灶糟葬灶糟藻则凿藻增藻造燥责鄄皂藻灶贼葬灶凿责则燥早则藻泽泽蚤燥灶遭赠蚤皂皂怎灶燥澡蚤泽贼燥糟澡藻皂蚤糟葬造泽贼葬蚤灶蚤灶早燥灶贼蚤泽泽怎藻皂蚤糟则燥葬则则葬赠 [ 允 ] 援宰燥则造凿允郧葬泽贼则燥藻灶贼藻则燥造, 圆园园苑, 员猿 ( 缘 ): 远怨怨鄄苑园愿援 [ 员源 ] 晕燥凿葬匀, 运葬贼燥再, 再燥泽澡蚤噪葬憎葬匀, 粤则葬蚤酝, 栽燥早葬泽澡蚤运, 晕葬早葬蚤匀, 藻贼葬造援云则藻择怎藻灶贼蚤灶增燥造增藻皂藻灶贼燥枣砸葬泽鄄泽蚤早灶葬造造蚤灶早责葬贼澡憎葬赠泽蚤灶遭燥贼澡责燥造鄄赠责燥蚤凿鄄贼赠责藻葬灶凿枣造葬贼鄄贼赠责藻藻葬则造赠鄄泽贼葬早藻糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则泽 [ 允 ] 援允耘曾责悦造蚤灶悦葬灶糟藻则砸藻泽, 圆园园远, 圆缘 ( 圆 ): 圆猿缘鄄圆源圆援 [ 员缘 ] 运藻藻杂运, 蕴藻藻允再, 运蚤皂酝允, 蕴藻藻杂酝, 允怎灶早再宰, 运蚤皂再允, 藻贼葬造援匀赠责藻则皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶燥枣贼澡藻砸葬泽葬泽泽燥糟蚤葬贼蚤燥灶凿燥皂葬蚤灶枣葬皂蚤造赠员粤 ( 砸粤杂杂云员粤 ) 早藻灶藻蚤灶早葬造造遭造葬凿凿藻则糟葬灶糟藻则 [ 允 ] 援酝燥造悦藻造造泽, 圆园园苑, 圆源 ( 猿 ): 猿远源鄄猿苑员援 [ 员远 ] 孕葬造造葬则藻泽允, 灾藻造葬泽糟燥粤, 耘则蚤贼躁葬晕, 杂葬灶贼葬糟葬灶葬酝, 阅燥造糟藻贼载, 悦怎葬鄄贼则藻糟葬泽葬泽酝, 藻贼葬造援孕则燥皂燥贼藻则澡赠责藻则皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶葬灶凿则藻凿怎糟藻凿藻曾责则藻泽鄄泽蚤燥灶燥枣砸粤杂杂云员粤葬则藻枣则藻择怎藻灶贼皂燥造藻糟怎造葬则葬造贼藻则葬贼蚤燥灶泽燥枣藻灶凿燥皂藻贼则蚤葬造糟葬则糟蚤灶燥皂葬 [ 允 ] 援酝燥凿孕葬贼澡燥造, 圆园园愿, 圆员 ( 远 ): 远怨员鄄远怨怨援 [ 员苑 ] 阅藻则噪泽杂, 孕燥泽贼皂葬悦, 酝燥藻则噪藻则噪孕栽, 增葬灶凿藻灶月燥泽糟澡杂酝, 悦葬则增葬造澡燥月, 匀藻则皂泽藻灶酝粤, 藻贼葬造援孕则燥皂燥贼藻则皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶责则藻糟藻凿藻泽糟澡则燥皂燥鄄泽燥皂葬造葬造贼藻则葬贼蚤燥灶泽蚤灶糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 [ 允 ] 援悦藻造造韵灶鄄糟燥造, 圆园园远, 圆愿 ( 缘辕远 ): 圆源苑鄄圆缘苑援 [ 员愿 ] 杂葬噪葬皂燥贼燥晕, 栽藻则葬蚤栽, 粤躁蚤燥噪葬再, 粤遭藻杂, 运燥遭葬赠葬泽蚤韵, 匀蚤则葬蚤杂, 藻贼葬造援云则藻择怎藻灶贼澡赠责藻则皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶燥枣砸粤杂杂云员粤蚤灶藻葬则造赠枣造葬贼鄄贼赠责藻糟燥造燥则藻糟贼葬造贼怎皂燥则泽 [ 允 ] 援韵灶糟燥早藻灶藻, 圆园园源, 圆猿 ( 缘缘 ): 愿怨园园鄄愿怨园苑援 [ 员怨 ] 许承弼, 滕摇博, 李长青, 金春顺援喉鳞状细胞癌中砸粤杂杂云员粤基因启动子区甲基化及蛋白表达 [ 允 ] 援吉林大学学报 : 医学版, 圆园园远, 猿圆 ( 圆 ): 猿圆远鄄猿圆怨援 [ 圆园 ] 叶摇梅, 夏摇冰, 郭秋莎, 周摇峰, 章晓联援胃癌组织砸粤杂杂云员粤甲基化对其皂砸晕粤及蛋白表达的影响 [ 允 ] 援中华内科杂志, 圆园园远, 源缘 ( 员圆 ): 员园园愿鄄员园员圆援 [ 圆员 ] 周晓俊, 薛万江, 秦摇磊, 钱海鑫援原发性肝癌中砸粤杂杂云员粤基因表达失活及其临床意义 [ 允 ] 援江苏医药, 圆园园苑, 猿猿 ( 员 ): 圆源鄄圆苑援 [ 圆圆 ] 余宗涛, 袁亚莉, 张吉才, 高摇琼, 吕摇军援肺癌患者砸葬泽相关区域家族员粤基因启动子异常甲基化的检测 [ 允 ] 援临床内科杂志, 圆园园苑, 圆源 ( 员 ): 圆猿鄄圆缘援 [ 圆猿 ] 孕藻贼藻则泽陨, 砸藻澡皂藻贼运, 宰蚤造噪藻晕, 运怎糟扎赠噪酝粤, 匀藻灶灶藻灶造燥贼贼藻则允, 耘蚤造藻则泽栽, 藻贼葬造援砸粤杂杂云员粤责则燥皂燥贼藻则皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶葬灶凿藻曾责则藻泽泽蚤燥灶葬灶葬造赠泽蚤泽蚤灶灶燥则皂葬造葬灶凿灶藻燥责造葬泽贼蚤糟噪蚤凿灶藻赠蚤灶凿蚤糟葬贼藻泽葬则燥造藻蚤灶藻葬则造赠贼怎皂燥则蚤早藻灶藻泽蚤泽 [ 允 ] 援酝燥造悦葬灶糟藻则, 圆园园苑, 远 : 源怨援 [ 圆源 ] 刘复生, 刘彤华援肿瘤病理学 [ 酝 ] 援北京 : 北京医科大学 中国协和医科大学联合出版社, 员怨怨苑 : 愿远圆援 [ 圆缘 ] 张亚历, 张振书, 杨希山援大肠癌的基础与临床 [ 酝 ] 援上海 : 上海科学技术文献出版社, 员怨怨怨 : 圆怨缘援 [ 圆远 ] 杂糟燥贼贼晕, 杂葬早葬则孕, 杂贼藻憎葬则贼允, 月造葬蚤则郧耘, 阅蚤曾燥灶酝云, 匝怎蚤则噪藻孕援责缘猿蚤灶糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则 : 悦造蚤灶蚤糟燥责葬贼澡燥造燥早蚤糟葬造糟燥则则藻造葬贼蚤燥灶葬灶凿责则燥早灶燥泽贼蚤糟泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶糟藻 [ 允 ] 援月则允悦葬灶糟藻则, 员怨怨员, 远猿 ( 圆 ): 猿员苑鄄猿员怨援 [ 收稿日期 ] 摇圆园员园原园源原员员 [ 修回日期 ] 摇圆园员园原园远原圆圆 [ 本文编辑 ] 摇王摇莹

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20100904.FIT) 窑696窑 中国骨伤 圆园员园 年 怨 月第 圆猿 卷第 怨 期 悦澡蚤灶葬 允 韵则贼澡燥责 驭 栽则葬怎皂葬袁杂藻责援圆园员园袁灾燥造援圆猿袁晕燥援怨 系统评价 手法治疗腰椎间盘突出症临床随机对照试验 系统评价 李林袁詹红生袁张明才袁陈博袁元唯安袁石印玉 渊上海中医药大学附属曙光医院骨伤科 上海市中医药研究院骨伤科研究所袁上海 揖摘要铱 圆园园园圆员冤 目的院评价手法治疗腰椎间盘突出症的有效性和安全性袁分析目前临床研究的现状遥方法院检索

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DWZZ1103.mps 摇 动物学杂志悦澡蚤灶藻泽藻允燥怎则灶葬造燥枣在燥燥造燥早赠摇圆园员员袁源远渊猿冤院苑愿耀愿源 长白山自然保护区猫科动物种群数量变化及现状 淤朴正吉摇 淤睢亚臣摇 于崔志刚摇 淤淤张国利摇王摇群摇 淤吉林省长白山科学研究院动物研究所摇 安图摇员猿猿远员猿曰 于吉林省长白山国家级自然保护区管理局摇 安图摇员猿猿远员猿 淤傅学魁 摘要院员怨愿缘耀圆园园怨年袁在长白山自然保护区及其周边地区采用野外样线调查和社会访问调查的方法袁对猫科动物种群数量变化及影响因素进行了研究遥结果表明袁长白山自然保护区记载的东北虎渊孕葬灶贼澡藻则葬贼蚤早则蚤泽冤尧远东豹渊孕援责葬则凿怎泽冤尧猞猁渊云藻造蚤泽造赠灶曾冤和豹猫渊云援遭藻灶早葬造藻灶泽蚤泽冤源种猫科动物中袁野外调查仅统计到猞猁和豹猫圆种袁调查总次数中袁猞猁出现率为猿郾园怨豫依圆郾猿园豫袁平均遇见个体数为渊园郾园员园依园郾园园苑冤只辕噪皂曰豹猫的出现率为苑郾远远豫依远郾员怨豫袁平均遇见个体数为渊园郾园猿依园郾园圆冤只辕噪皂遥访问调查结果显示袁圆员怨远园耀员怨愿园年期间袁在长白山自然保护区及周边远园园园噪皂范围内捕杀东北虎员猿只袁捕杀远东豹圆只遥圆根据被猎杀东北虎的分布范围袁估计其领域面积为缘远园噪皂遥东北虎和远东豹的历史分布密度为园郾圆圆圆圆只辕员园园噪皂和园郾园猿只辕员园园噪皂遥目前袁猞猁和豹猫的种群数量非常稀少袁已处于区域性濒危状态遥这说明了猫科动物对区域环境变化比较敏感袁表明栖息地破坏和过度捕猎动物是导致濒危的重要原因遥关键词院猫科动物曰种群数量变化曰长白山自然保护区中图分类号院匝怨缘愿摇文献标识码院粤摇文章编号院园圆缘园鄄猿圆远猿渊圆园员员冤园猿鄄苑愿鄄园苑

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私营企业与市场经济 主编院张厚义明立志何侠安责任编辑院潘小平范广伟责任校对院刘玉霞责任印制院同非 出版发行院社会科学文献出版社 经排印 穴北京建国门内大街缘号电话远缘员猿怨怨远员邮编员园园苑猿圆雪网址院澡贼贼责押辕辕憎憎憎援泽泽凿责澡援糟燥皂援糟灶销院新华书店总店北京发行所版院东远先行彩色图文中心刷

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人 士 待于探测性调查的检验袁同样由于篇幅原因袁不再罗列遥渊二冤李克特量表的采纳设计量表的一个重要考虑因素就是权重的设计问题遥在探讨高校教育质量的影响因素时可以采咱 6 用因子分析方法遥暂但是袁进行因子旋转后使得评价结果难以直观的解释袁指标权重也不具有可继承性袁在不同阶段中袁若评价指标值变化袁则各指 现代教育管理窑 2012 年第 4 期 教育督导与评价 譹訛 贾新明 渊浙江外国语学院袁浙江杭州 310012 冤 摘要院高校软环境评估工作具有历史和现实意义袁但是软环境的评估研究比较缺乏遥以学生为中心袁通过测评学生感知来对高校软环境进行指数化评估具有可行性遥在高校软环境的研究初期袁可通过开放式的专家调查法袁提出针对公办普通高等本科学院的高校软环境评价的李克特调查量表袁并运用配额抽样和封闭式调查问卷执行该量表袁采用权重具有可继承性的主观赋权法给出量表的权重遥在对具体高校的软环境进行测评时袁应当采纳分层等比例抽样方法对本科三年级全日制学生进行问卷调查袁并依据高校软环境评价的指数计算公式给出评估结果遥关键词院高校软环境曰学生感知曰李克特量表曰指数化评价中图分类号院郧

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