中国药典 年版 测定法第一法 ( 毛细管柱顶空进样等温法 ) 当需要检査有机溶剂的数量不多, 且极性差异较小时, 可采用此法 色谱条件柱温一般为 C ; 常以氮气为载气, 流速为每分钟 Oml; 以水为溶剂时顶空瓶平衡温度为 C, 顶空瓶
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- 清 尹
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1 中国药典 2015 年版 乙醇 对照溶液与供试品溶液的配制须用新开启的同一瓶无水 用外标法计算供试品中的含水量 计算时应扣除无水乙 醇中的含水量, 方法如下 : 对照溶液中实际加人的水的峰面积 = 对照溶液中总水峰 面积一 K X 对照溶液中乙醇峰面积 供试品中水的峰面积 = 供试品溶液中总水峰面积 _ K X 供试品溶液中乙醇峰面积 r, 无水乙醇中水峰面积无水乙醇中乙醇峰面积 炽灼残渣检查法 取供试品 g 或各品种项下规定的重量, 置已炽 灼至恒重的坩埚 ( 如供试品分子结构中含有碱金属或氟元素, 则应使用铂坩埚 ) 中, 精密称定, 缓缓炽灼至完全炭化, 放 冷 ; 除另有规定外, 加硫酸 0.5 l m l 使湿润, 低温加热至 硫酸蒸气除尽后, 在 C 炽灼使完全灰化, 移置干 燥器内, 放冷, 精密称定后, 再在 CTC 炽灼至恒 重, 即得 如需将残渣留作重金属检查, 则炽灼温度必须控制在 C 易炭化物检查法 取内径一致的比色管两支 : 甲管中加各品种项下规定的 对照溶液 5 m l ; 乙管中加硫酸 [ 含 H 2S % % (g /g )]5 m l 后, 分次缓缓加入规定量的供试品, 振摇 使溶解 除另有规定外, 静置 1 5 分钟后, 将甲乙两管同置 白色背景前, 平视观察, 乙管中所显颜色不得较甲管更深 供试品如为固体, 应先研成细粉 如需加热才能溶解 时, 可取供试品与硫酸混合均匀, 加热溶解后, 放冷, 再移 置比色管中 药品中的残留溶剂系指在原料药或辅料的生产中, 以及 在制剂制备过程中使用的, 但在工艺过程中未能完全去除的 有机溶剂 药品中常见的残留溶剂及限度见附表 1, 除另有 规定外, 第一 第二 第三类溶剂的残留限度应符合附表 1 中的规定 ; 对其他溶剂, 应根据生产工艺的特点, 制定相应 的限度, 使其符合产品规范 药品生产质量管理规范 (GMP) 或其他基本的质量要求 本法照气相色谱法 ( 通则 0521) 测定 色谱柱 1. 毛细管柱 除另有规定外, 极性相近的同类色谱柱之间可以互换 使用 (1 ) 固定液为 100% 的二甲基 聚硅氧烷的毛细管柱 (2 ) 固定液为聚乙二醇 (PEG-20M) 的毛细管柱 ( 3 ) 中固定液为 (35%) 二苯基 -(6 5 % ) 甲基聚硅氧烷 (50 % ) 二苯基 -(5 0 % ) 二甲基聚硅氧烷 (35%) 二苯基 -(6 5 % ) 二甲基聚硅氧烷 (14% ) 氰丙基苯基 -(86% ) 二甲基聚硅氧烷 (6 % ) 氰丙基苯基 -(9 4 % ) 二甲基聚硅氧烷的毛细管柱等 (4 ) 弱固定液为 (5 % ) 苯基 -(9 5 % ) 甲基聚硅氧烷 (5 % ) 二苯基 -(9 5 % ) 二甲基硅氧烷共聚物的毛细管柱等 2. 填充柱以直径为 m m 的二乙烯苯 - 乙基乙烯苯型高分子多孔小球或其他适宜的填料作为固定相 系统适用性试验 (1 ) 用待测物的色谱峰计算, 毛细管色谱柱的理论板数一般不低于 ; 填充柱的理论板数一般不低于 1000 (2 ) 色谱图中, 待测物色谱峰与其相邻色谱峰的分离度应大于 1.5 (3 ) 以内标法测定时, 对照品溶液连续进样 5 次, 所得待测物与内标物峰面积之比的相对标准偏差 (RSD) 应不大于 5 % ; 若以外标法测定, 所得待测物峰面积的 R SD 应不大于 10% 供试品溶液的制备 1. 顶空进样除另有规定外, 精密称取供试品 0.1 l g ; 通常以水为溶剂 ; 对于非水溶性药物, 可采用 iv,iv - 二甲基甲酰胺 二甲基亚砜或其他适宜溶剂 ; 根据供试品和待测溶剂的溶解度, 选择适宜的溶剂且应不干扰待测溶剂的测定 根据各品种项下残留溶剂的限度规定配制供试品溶液, 其浓度应满足系统定量测定的需要 2. 溶液直接进样精密称取供试品适量, 用水或合适的有机溶剂使溶解 ; 根据各品种项下残留溶剂的限度规定配制供试品溶液, 其浓度应满足系统定量测定的需要 对照品溶液的制备精密称取各品种项下规定检查的有机溶剂适量, 采用与制备供试品溶液相同的方法和溶剂制备对照品溶液 ; 如用水作溶剂, 应先将待测有机溶剂溶解在 50% 二甲基亚砜或 iv,n - 二甲基甲酰胺溶液中, 再用水逐步稀释 若为限度检查, 根据残留溶剂的限度规定确定对照品溶液的浓度 ; 若为定量测定, 为保证定量结果的准确性, 应根据供试品中残留溶剂的实际残留量确定对照品溶液的浓度 ; 通常对照品溶液色谱峰面积不宜超过供试品溶液中对应的残留溶剂色谱峰面积的 2 倍 必要时, 应重新调整供试品溶液或对照品溶液的浓度 105
2 中国药典 年版 测定法第一法 ( 毛细管柱顶空进样等温法 ) 当需要检査有机溶剂的数量不多, 且极性差异较小时, 可采用此法 色谱条件柱温一般为 C ; 常以氮气为载气, 流速为每分钟 Oml; 以水为溶剂时顶空瓶平衡温度为 C, 顶空瓶平衡时间为 分钟 ; 进样口温度为 200 C ; 如采用火焰离子化检测器 (F ID ), 温度为 250 C 测定法取对照品溶液和供试品溶液, 分别连续进样不少于 2 次, 测定待测峰的峰面积 对色谱图中未知有机溶剂的鉴别, 可参考附表 2 进行初筛 第二法 ( 毛细管柱顶空进样系统程序升温法 ) 当需要检査的有机溶剂数量较多, 且极性差异较大时, 可采用此法 色谱条件柱温一般先在 40 C 维持 8 分钟, 再以每分钟 8 1 的升温速率升至 C, 维持 1 0 分钟 ; 以氮气为载气, 流速为每分钟 2. Oml; 以水为溶剂时顶空瓶平衡温度为 C, 顶空瓶平衡时间为 分钟 ; 进样口温度为 200X:; 如采用 F ID 检测器, 进样口温度为 t: 具体到某个品种的残留溶剂检査时, 可根据该品种项下残留溶剂的组成调整升温程序 测定法取对照品溶液和供试品溶液, 分别连续进样不少于 2 次, 测定待测峰的峰面积 对色谱图中未知有机溶剂的鉴别, 可参考附表 3 进行初筛 第三法 { 溶液直接进样法广可采用填充柱, 亦可采用适宜极性的毛细管柱 测定法取对照品溶液和供试品溶液, 分别连续进样 2 3 次, 测定待测峰的峰面积 计算法 (1 ) 限度检查除另有规定外, 按各品种项下规定的供试品溶液浓度测定 以内标法测定时, 供试品溶液所得被测溶剂峰面积与内标峰面积之比不得大于对照品溶液的相应比值 以外标法测定时, 供试品溶液所得被测溶剂峰面积不得大于对照品溶液的相应峰面积 (2 ) 定量测定按内标法或外标法计算各残留溶剂的量 附注 *.(1 ) 除另有规定外, 顶空条件的选择 : 1 应根据供试品中残留溶剂的沸点选择顶空平衡温度 对沸点较髙的残留溶剂, 通常选择较高的平衡温度 ; 但此时应兼顾供试品的热分解特性, 尽量避免供试品产生的挥发性热分解产物对测定的干扰 2 顶空平衡时间一般为 分钟, 以保证供试品溶液的气 - 液两相有足够的时间达到平衡 顶空平衡时间通常不宜过长 i 如超过 6 0 分钟, 可能引起顶空瓶的气密性变差, 导致定量准确性的降低 3 对照品溶液与供试品溶液必须使用相同的顶空条件 (2 ) 定量方法的验证当采用顶空进样时, 供试品与对照品处于不完全相同的基质中, 故应考虑气液平衡过程中的基质效应 ( 供试品溶液与对照品溶液组成差异对顶空气 - 液平衡的影响由于标准加人法可以消除供试品溶液基质与对照品溶液基质不同所致的基质效应的影响, 故通常采用标准加人法验证定量方法的准确性 ; 当标准加人法与其他定量方法的结果不一致时, 应以标准加入法的结果为准 (3 ) 干扰峰的排除供试品中的未知杂质或其挥发性热降解物易对残留溶剂的测定产生干扰 干扰作用包括在测定的色谱系统中未知杂质或其挥发性热降解物与待测物的保留值相同 ( 共出峰 ); 或热降解产物与待测物的结构相同 ( 如甲氧基热裂解产生甲醇 ) 当测定的残留溶剂超出限度, 但未能确定供试品中是否有未知杂质或其挥发性热降解物对测定有干扰作用时, 应通过试验排除干扰作用的存在 对第一类干扰作用, 通常采用在另一种极性不同的色谱柱系统中对相同供试品再进行测定, 比较不同色谱系统中测定结果的方法 如两者结果一致, 则可以排除测定中有共出峰的干扰 ; 如两者结果不一致, 则表明测定中有共出峰的干扰, 对第二类干扰作用, 通常要通过测定已知不含该溶剂的对照样品来加以判断 (4) 含氮碱性化合物的测定普通气相色谱仪中的不锈钢管路 进样器的衬管等对有机胺等含氮碱性化合物具有较强的吸附作用, 致使其检出灵敏度降低, 应采用惰性的硅钢材料或镍钢材料管路 ; 采用溶液直接进样法测定时, 供试品溶液应不呈酸性, 以免待测物与酸反应后不易汽化 通常采用弱极性的色谱柱或其填料预先经碱处理过的色谱柱分析含氮碱性化合物, 如果采用胺分析专用柱进行分析, 效果更好 对不宜采用气相色谱法测定的含氮碱性化合物, 如 N- 甲基吡咯烷酮等, 可采用其他方法如离子色谱法等测定 (5 ) 检测器的选择对含卤素元素的残留溶剂如三氣甲烷等, 采用电子捕获检测器 (E C D ), 易得到髙的灵敏度 (6) 由于不同的实验室在测定同一供试品时可能采用了不同的实验方法, 当测定结果处于合格与不合格边缘时, 以采用内标法或标准加人法为准 (7 ) 顶空平衡温度一般应低于溶解供试品所用溶剂的沸点 10 C 以下, 能满足检测灵敏度即可 ; 对于沸点过髙的溶剂, 如甲酰胺 2- 甲氧基乙醇 2- 乙氧基乙醇 乙二醇 N - 甲基吡咯烷酮等, 用顶空进样测定的灵敏度不如直接进样, 一般不宜用顶空进样方式测定 (8 ) 利用保留值定性是气相色谱中最常用的定性方法 色谱系统中载气的流速 载气的温度和柱温等的变化都会使保留值改变, 从而影响定性结果 校正相对保留时间 (RART) 只受柱温和固定相性质的影响, 以此作为定性分析参数较可靠 应用中通常选用甲烷测定色谱系统的死体积 U ) : R AR T = 艺 R 一 tq 式中 h 为组分的保留时间 ; A 为参比物的保留时间 106
3 中国药典 年版 附表 1 药品中常见的残留溶剂及限度 溶剂名称 限度 / % 溶剂名称 限度 / % 溶剂名称 限度 / % 溶剂名称 限度 / % 第一类溶剂 第二类溶剂 第三类溶剂 ( 药品 G M P 或 第三类溶剂 ( 药品 G M P 或 ( 应该避免使用 ) ( 应该限制使用 ) 其他质最要求限制使用 ) 其他质量要求限制使用 ) 苯 二氧六环 醋酸 0. 5 甲基异丁基酮 乙氧基乙醇 丙酮 0. 5 异丁醇 0. 5 四氣化碳 乙二醇 甲氧基苯 0. 5 正戊烷 ,2- 二氣乙烷 正丁醇 0. 5 正戊醇 0. 5 甲酰胺 ,1- 二氣乙烯 仲丁醇 0. 5 正丙酵 0. 5 正己院 乙酸丁蘼 0.5 异丙醇 ,1,1 - 三氣乙烷 甲醇 0. 3 叔丁基甲基醚 0. 5 乙酸丙酯 0. 5 第二类溶剂 2- 甲氧基乙醇 异丙基苯 0. 5 第四类溶剂 ( 尚无足够毒 ( 应该限制使用 ) 甲基丁基酮 二甲基亚砜 0. 5 理学资料 ) 乙腈 甲基环己烷 乙醇 0. 5 iv- 甲基吡咯烷酮 乙酸乙酯 ,1 - 二乙氧基丙烷氣苯 硝基甲烷 乙醚 二甲氧基甲烷三氣甲烷 吡啶 甲酸乙酯 二甲氧基丙烷环己烷 甲酸 0. 5 四氢睡吩 异辛烷 1,2- 二氣乙烯 四氢化萘 正庚烷 0. 5 异丙醚 二氣甲烷 乙酸异丁酯 0. 5 甲基异丙基酮四氢呋喃 ,2 - 二甲氧基乙烷 乙酸异丙酯 0. 5 甲基四氢呋喃甲苯 乙酸甲酯 0. 5 石油醚 N, A K T 甲基乙酰胺 ,1,2- 三氣乙烯 甲基 -1- 丁醇 0. 5 三氣醋酸 N,N - 二甲基甲酰胺 二甲苯 丁酮 0. 5 三氟醋酸 1 通常含有 6 0 % 间二甲苯 1 4 % 对二甲苯 9 % 邻二甲苯和 1 7 % 乙苯 2 药品生产企业在使用时应提供该类溶剂在制剂中残留水平的合理性论证报告 附表 2 常见有机溶剂在等温法测定时相对于丁酮的保留值参考值 溶剂名称 fr /m in R A R T 溶剂名称 ir /m in R A R T 柱滬 4 0 t : 柱温 40X: 甲酵 正戊烷 乙醇 正己烷 乙腈 乙醚 两酮 异辛烷 异丙醉 异丙醚 正戊烷 叔丁基甲基醚 乙醚 正庚烷 甲酸乙酯 环己烷 二甲氧基甲烷 ,1- 二氣乙烯 ,1_ 二氣乙烯 二甲氧基甲烷 , 259 乙酸甲酯 甲基环己烷 二氣甲烷 丙酮 硝基甲烷 甲酸乙酯 正丙醇 乙酸甲酯 ,2- 二氣乙烯 ,2 - 二氣乙烯 叔丁基甲基醚 四氢呋喃 丁酮 甲基四氢呋喃 仲丁醇 四氣化碳 正己烷 ,1,1 - 三氯乙烷 异丙醚 乙酸乙酯 乙醸乙酯 乙酸异丙酯 三氣甲烷 甲醇 四氢呋喃 丁酮 异丁醇 ,2- 二甲氧基乙烷
4 中国药典 年版 续表 溶剂名称 ^ R /m in R A R T 溶剂名称 fr /m in R A R T 柱温 4 0 忙 柱温 401C 1,2- 二氣乙烷 甲基异丙基酮 ,1,1 - 三氧乙烷 二氯甲烷 甲基异丙基酮 异丙醇 ,2 * 二甲氧基乙烷 乙醇 苯 苯 乙酸异丙酯 乙酸丙酯 正丁醇 三氣乙烯 四氣化碳 甲基异丁基酮 环己烷 乙腈 甲基四氢呋喃 乙酸异丁酯 三氣乙烯 三氯甲烷 7, 二氧六环 仲丁醇 异辛烷 甲苯 正庚烷 正丙醇 乙酸丙酯 二氧六环 甲基环己烷 ,2 - 二氯乙烷 甲基异丁基酮 乙酸丁酯 甲基 -1 - 丁醇 甲基丁基酮 吡啶 甲烷 甲苯 柱温 8 0 t : 正戊醇 异丁醇 甲烷 正丁醇 柱温 8 0 t 硝基甲烷 乙酸异丁酯 异丙基苯 甲基丁基酮 吡啶 乙酸丁酯 甲基 -1- 丁醇 氣苯 氯苯 甲氧基苯 正戊醇 异丙基苯 丁酮 丁酮 甲烷 甲烷 柱温 1201C 柱温 120X: 甲氧基苯 四氢化萘 四氢化萘 丁酮 丁酮 甲烷 甲烷 附表 3 常见有机溶剂在程序升温法测定时相对于丁酮的保留值参考值 溶剂名称 ir /m in R A R T 溶剂名称 ;K /m in R A R T 甲醇 正戊烷 乙醇 正己镔 乙膪 乙醚 丙酮 异辛烷 异丙醇 异丙醚 正戊烷 叔丁基甲基醚 乙醚 正庚烷 甲酸乙酯 环己烷 二甲氧基甲烷 ,1_ 二氣乙烯 ,1- 二氣乙烯 二甲氧基甲烷
5 中国药典 年版 甲醇量检查法 % 续表 溶剂名称 «R /m in R A R T 溶剂名称 ^R /m in R A R T 乙酸甲酯 甲基环己烷 二氣甲烷 丙酮 硝基甲烷 甲酸乙酯 正丙醉 乙酸甲酯 ,2 - 二氣乙烯 ,2- 二氣乙烯 叔丁基甲基醚 四氢呋喃 丁酮 甲基四氢呋喃 仲丁醉 四氣化碳 正己烷 ,1,1_ 三氣乙烷 异丙醚 乙酸乙酯 乙酸乙酯 乙酸异丙酯 三氣甲烷 甲醇 四氢呋喃 丁醣 异丁醉 ,2- 二甲氧基乙烷 ,2 - 二氣乙烷 甲基异丙基酮 ,1,1_ 三氣乙烷 二氣甲烷 甲基异丙基酮 异丙醇 ,2- 二甲氧基乙烷 乙醇 苯 苯 乙酸异丙醋 乙酸丙酯 正丁醇 三氣乙烯 四氣化碳 甲基异丁基酮 环己烷 乙腈 甲基四氢呋喃 乙酸异丁酯 三氣乙烯 三氣甲烷 异辛烷 仲丁酵 二氧六环 甲苯 正庚烷 正丙醇 乙酸丙酯 二氧六环 甲基环己烷 ,2- 二氣乙烷 甲基异丁基酮 乙酸丁酯 甲基 -1- 丁醇 甲基丁基酮 吡啶 异丁醇 甲苯 正丁酵 正戊醉 异丙基苯 乙酸异丁酯 硝基甲烷 甲基丁基酮 吡啶 乙酸丁酯 甲基 -1- 丁醇 氣苯 氣苯 甲氧基苯 正戊醇 异丙基苯 甲氧基苯 四氢化萘 四氢化萘 甲烷 甲烷 注 : 附表 2 3 中数据为非极性的 S P B ^ l 柱 ( 3 0 m X 0,3 2 m m,1. 0 Mm ) 和极性的 H P - IN N O W A X 柱 ( 3 0 m X m m,0. 5 p m ) 测定的结果 甲醇量检查法第 - 法 ( 毛细管柱法 ) 乙醇制剂中甲醇的含量 除另有规定外, 按下列方法测定 色谱条件与系统适用性试验采用 (6 % ) 氰丙基苯基 - 本法系用气相色谱法 ( 通则腿 ) 测定酒剂或 s r 剂 等 含 (94 % ) 二甲基聚桂氧焼为固定液的毛细管柱 ; 起始温度为 109
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