我国237例HIV/AIDS患者的抗病毒治疗前后基因型耐药研究

Size: px

Start display at page:

Download "我国237例HIV/AIDS患者的抗病毒治疗前后基因型耐药研究"

堀歙臧
5 years ago
Views:

1 中国医学科学院北京协和医院十五攻关艾滋病临床治疗项目课题组韩扬匡季秋李太生 * 邱志峰谢静左玲燕李雁凌王爱霞

2 Deaths AIDS % on HAART /95-3/96 3/95-9/95 9/94-3/95 3/96-9/96 9/96-3/97 3/97-9/97 >9/99 3/99-9/99 9/98-3/99 3/98-9/98 9/97-3/98 Calendar period Incidence

3 HAART 的复杂性副作用治疗的依从性能否维持治疗怀孕费用药效 HAART 耐药性合并其他疾病同时服用其它药物获得药物的途径需终身用药早期发现评价 3

4 原发性耐药的流行 N=

5 我国 HIV-1 耐药的研究部分原发性耐药研究报道全国第二次流调例数全部 NRTIs NNRTIs 主要位点 PIs 次要位点 138 / 5.8% 1.5% 0.6% 93.4% 吉林安徽 91 / 1.1% 3.3% 广东 50 4% / / 河南 % 8.3% 13.9% 11.1% 上海 60 / 1.8% 1.8% 辽宁 91 / 3.3% 1.1% 5

6 随着 HIV 从高危人群向普通人群传播, 控制二代传播压力增大, 我国艾滋病患者分布广泛,HIV 毒株的亚型种类众多, 药物种类有限, 面临 HIV 耐药毒株流行的严峻挑战本研究了解我国不同地区不同亚型的原发性耐药的流行情况 326 例未接受 ARV 的 HIV/AIDS 患者, 来自全国 20 个省直辖市自治区严格筛选排除服用过抗病毒治疗药物的患者 6

7 既往病史和临床信息采集 T 淋巴细胞亚群检测 EPICS XL 流式细胞仪 :CD3+CD4+/CD3+CD8+ 细胞计数 bdna 法血浆 HIV-1 RNA 浓度检测 QUANTIPLEXTM bdna System 340 病毒载量检测仪基因型耐药检测 In-house RT-PCR 商业试剂盒 7

8 8

9 耐药评分标准 ~9 敏感 10~14 潜在耐药 15~29 低度耐药 30~59 中度耐药 60~ 高度耐药 9

10 326 例中获得 237 例 (72.7%): 其中 33 例由商业试剂盒完成 ;204 例由 in-house 法完成 12 例用 2 种方法重复检测 10

11 11

12 总体男女统计值 P 值性别例 (%) (48.5%) 122(51.5%) 年龄 ( 岁 ) x±s 37±10 38±10 36±9 t =1.454.>0.05 文化程度 [ 例 (%)] 小学及以下 71(30.0%) 20(17.6%) 51(41.4%) 初中 86(36.3%) 48(41.8%) 38(31.3%) χ2= <0.05 高中及以上 80(33.7%) 47(40.7%) 33(27.3%) 感染途径 [ 例 (%)] 性 117(49.4%) 55(47.8%) 62(50.8%) 血液 94(39.7%) 46(40.0%) 48(39.3%) χ2=0.409 >0.05 吸毒及原因不明 26(10.9%) 14(12.2%) 12(9.8%) 感染时间 1995 年及以前 83(35.0%) 38(33.0%) 45(36.9%) 年 98(41.4%) 53(46.1%) 45(36.9%) χ2=1.917 > 年及以后 46(19.4%) 20(17.4%) 26(21.3%) 不明 10(4.2%) 4(3.5%) 6(4.9%) 病毒载量 (lg 拷贝 /ml,x(_)±s) 4.55± ± ±0.72 t = >0.05 CD 4 + T 淋巴细胞计数 [ 个 /μl,x( 范围 )] CD 8 + T 淋巴细胞计数 [ 个 /μl,x( 范围 )] 219(47~536) 203(47~452) 229(96~536) Z = > (304~2 380) 881(314~2 183) 816(304~2 380) Z = >

13 湖南 6.3% 福建 6.8% 广东 8.4% 北京 3.0% 河北 2.1% 上海 9.3% 云南 21.9% 河南 32.1% 河南云南上海广东福建湖南北京河北江西山西安徽广西黑龙江辽宁四川浙江湖北江苏内蒙古陕西 237 例患者地区分布示意图 13

14 例数 NK 年 237 例患者可能感染时间分布示意图 14

15 例数河南云南上海广东福建湖南其它地区不同地区患者 HIV-1 亚型分布 B' CRF01_AE CRF07_BC CRF08_BC Others 15

16 例数异性性传播有偿献血静脉吸毒输血 B' CRF01_AE CRF07_BC CRF08_BC Others 不同感染途径的患者人群 HIV-1 亚型分布 16

17 原发性基因型耐药检测结果 237 例患者中仅有 3 例患者出现原发性基因型耐药原发耐药率为 1.3% 17

18 患者编号 CRF No.200 CRF No.208 CRF No.601 性别男男男年龄 ( 岁 ) 可能感染时间 ( 年 ) 发现 HIV+ 时间 ( 年 ) 可能感染途径同性异性不明 HIV-1 亚型 B CRF 01_AE CRF 01_AE VL( 拷贝 /ml) CD 4+ T 淋巴细胞计数 ( 个 /μl) 耐药位点突变 PR 区无 M46I L33F RT 区 M184V A62V K103N,V179T,Y181C 耐药种类 ( 耐药程度 ) NRTIs 3TC/FTC ( 高 ) / / NNRTIs / / DLV,NVP,EFV( 高 ) PIs / ATV&SQV( 低 ) / 18

19 Resistance Mutations Major Minor NRTI M184V None NNRTI None None Other Mutations (polymorphism) V106I, I135V, S162C, T200A, Q207E, A272S, V276I, K277R, Q278E, E297K PI None None E35D, L63P, I72V, V77I, I93L NRTI 3TC ABC AZT D4T DDI FTC TDF M184V Total NNRTI DLV EFV ETR NVP Total PI Atazanavir (ATV) Darunavir (DRV) Fosamprenavir (FPV) Indinavir (IDV) Lopinavir (LPV) Nelfinavir (NFV) Saquinavir (SQV) Tipranavir (TPV) Total

20 Resistance Mutations Major Minor NRTI A62V* None NNRTI None None Other Mutations (polymorphism) E6D, K11T, V35T, T39K, K43E, K122E, D123S, S162C, K173R, Q174K, D177E, I178M, Q207A, R211S, K238R, V245Q, T286A, E291D, V292I, I293V PI M46I None E35D, M36I, R41K, H69K, L89M, I93L NRTI 3TC ABC AZT D4T DDI FTC TDF A62V Total NNRTI DLV EFV ETR NVP Total PI Atazanavir (ATV) Darunavir (DRV) Fosamprenavir (FPV) Indinavir (IDV) Lopinavir (LPV) Nelfinavir (NFV) Saquinavir (SQV) Tipranavir (TPV) M46I Total

21 Resistance Mutations Major Minor NRTI None None NNRTI K103N, V179T, Y181C Y181C PI None L33F Other Mutations (polymorphism) E6D, K20R, V35T, T39K, K43E, D123E, I142V, S162C, K173I/V, Q174K, D177E, T200A, E203D, Q207A, R211S, V245E, E248V, I257I/V, A272G, V276I/V, T286A, I293V, E312T, I326V, I329V, G335D T12P, I13V, E35D, M36I, R41K, K45R, R57K, H69K, L89M NRTI 3TC ABC AZT D4T DDI FTC TDF Total NNRTI DLV EFV ETR NVP K103KN Y181CY Total PI Atazanavir Darunavir Fosamprenavir Indinavir Lopinavir Nelfinavir Saquinavir Tipranavir (ATV) (DRV) (FPV) (IDV) (LPV) (NFV) (SQV) (TPV) L33F Total

22 * 其中 PR 区位点的 E35D L63P I72V 与 HBX2 和 B 亚型均不同 22

23 本项研究是从临床治疗角度迄今国内样本量大覆盖范围广的原发性耐药研究我国 HIV/AIDS 患者人群中, 原发性 HIV-1 耐药毒株发生比例仅为 1.3%; 低于预期, 我国原发性基因型耐药还处于较低水平 23

24 参与本研究的患者和健康志愿者中国医学科学院北京协和医院艾滋病诊疗中心北京市佑安医院感染性疾病科福州市传染病医院第一病区北京市地坛医院艾滋病科中南大学湘雅二医院艾滋病研究室复旦大学附属华山医院传染病科上海市公共卫生中心感染科浙江大学传染病研究所郑州大学医学院第一附院感染科广州市第八人民医院感染病科第四军医大学唐都医院感染疾病科深圳市疾控预防控制中心云南省艾滋病关爱中心北京大学第一医院感染科实验室中国协和医科大学基础医学院流行病与统计学系北京普林格医药技术有限公司 24

25 25

26 PR RT IN 26

27 引物名称引物序列位置扩增长度扩增引物测序引物 MAW26 -TTGGAAATGTGGAAAGGAAGGAC RT21 -CTGTATTTCTGCTATTAAGTCTTTTGATGGG PRO-1 -CAGAGCCAACAGCCCCACCA RT20 -CTGCCAGTTCTAGCTCTGCTTC RT4R -CTTCTGTATATCATTGACAGTCCAGCT PRO-1 -CAGAGCCAACAGCCCCACCA ProC-down -CCCTGCTGGGTGTGGTATTCC RTA -GTTGACTCAGATTGGTTGCAC RTB -CCTAGTATAAACAATGAGACAC PR 全长和 RT 1~304(RT2 0) /1~251(RT 4R) kb RT20 -CTGCCAGTTCTAGCTCTGCTTC RT4R -CTTCTGTATATCATTGACAGTCCAGCT

28 亚型 A B C D F H J K CRF01_AE CRF02_AG CRF07_BC CRF08_BC 编号 AF1.UG.98.98UG57136 AF2.CD.97.97CDKTB48 AY B.US _11 K03455 B.FR.83.HXB2-LAI-IIIB-BRU AY B.TH.90.BK132 AF.IN AY D.CM._4412HAL AJ1.FR.96.MP411 AF H.BE.93.VI991 AF J.SE.94.SE7022 AJ K.CD.97.EQTB U _AE.TH.90.CM240 L _AG.NG.-.IBNG AX _BC.CN.97.CN54 AY _BC.CN.97.97CNGX_ CRF12_BF AF _BF.AR.99.ARMA159 表 2 HIV-1 参考毒株名称注 : 参考序列引自 28

29 相关生物学软件 Bioedit ( ) 序列比对构建共享序列 ; MEGA(3.0) 绘制系统发生树 29

30 正态数据 t 检验或 χ 2 检验非正态数据 Fisher 精确概率 / 秩和检验 (Kruskal-Wallis) 多因素分析 Logistic 回归分析方法基线数据存在差异的区组比较协方差或者 Binary Logistic 的方法 p 值小于 0.05: 有统计学差异 30

31 31

32 HIV-1 亚型 32

33 采用 Homebrew 和 ViroSeq 两种方法进行基因型耐药检测基因序列比对结果 33

34 34

35 35

公务员版 B 河北公务员版 B 河北公务员版 C 河北公务员版 C 河北公务员版 C 河北

公务员版 B 河北公务员版 B 河北公务员版 C 河北公务员版 C 河北公务员版 C 河北操作代码问卷编号问卷类型调查地 ( 省 / 直辖市 / 自治区 ) 访问员编号 2013202305 10101 公务员版 A 北京 101 2013202305 10102 公务员版 A 北京 101 2013202305 10103 公务员版 A 北京 101 2013202305 10104 公务员版 B 北京 101 2013202305 10105 公务员版 B 北京 101 2013202305

我国237例HIV/AIDS患者的 抗病毒治疗前后基因型耐药研究

我国237例HIV/AIDS患者的抗病毒治疗前后基因型耐药研究