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1 Study on the action and its mechanisms of estrogen effective cell-targeting active components in Chinese medicine 中药活性成分靶向雌激素效应细胞作用机制研究 Jianzhao Niu Beijing University of Traditional Chinese Medicine

2 Beijing University of Traditional Chinese Medicine 北京中医药大学是中国重点大学 ; 拥有充足的教学科研设施和附属医院

3 Many kinds of Chinese medicine have been widely applied in women health protection and treatment of gynecological diseases. Their effects on the target points and the consequent molecular changes inside human body account mainly for their pharmacological functions. 中药广泛应用于妇科保健和疾病的治疗 ; 中药疗效是药物作用于体内靶细胞, 并通过一定的分子机制实现的 Estrogen receptor is essential target point for Chinese medicine in estrogen effective cells. The expression level and ratio of different estrogen receptor subtypes are key factors that determine the function of Chinese medicine. 雌激素受体是中药作用于效应细胞的重要靶点, 雌激素受体不同亚型表达及其比例是影响药物作用的重要因素

4 17β-Estradiol(E 2 ) 17β- 雌二醇 genistein 金雀黄素 daidzein 大豆甙元 C 3 F F S F F F CN ICI182,780 雌激素受体拮抗剂 DPN 雌激素受体激动剂 Molecular structure of β-estradiol and some kind of estrogen receptor modulators 雌二醇及部分植物雌激素的分子结构

5 3 C C 3 C 2 C 3 C 3 psoralen 补骨脂素 isopsoralen 异补骨脂素 ecdysterone 蜕皮甾酮 C 2 R Tanshinone I 丹参酮 I Molecular structure of some kind of active components in Chinese medicine 部分中药活性成分的分子结构 Tanshinone IIA 丹参酮 IIA C 2 红花黄色素 A ydroxysafflower yellow A

6 ERα 1 DBD LBD A/B C D E F 595 Protein Synthesis AF-1 SP90 结合位点 AF-2 二聚化 二聚化 ER dimer (α/β) ERβ 1 NLS NLS NLS A/B C D E F % 97% 30% 59% 18% E 2 E 2 -ER complex combine to the specific sequence in the promotor of estrogen target genes mrna DBD DBD ERE TATA Target gene DNA Pathway of estrogen or estrogenic substances play their roles on target genes 雌激素或类雌激素发挥作用的基本途径 ( 启动效应开关 )

7 红花 丹参 川牛膝 补骨脂 Four kinds of Chinese medicine promoting blood circulation to remove blood statis and tonifying the kidney 研究选取的四种妇科常用中药 ( 活血化瘀和补益类 )

8 Immuno-histochemistry results in animal models 正常 control 己烯雌酚 diethylstilbestrol 红花 flos carthami 川牛膝 radix cyathulae 丹参 radix salviae miltiorrhizae 补骨脂 fructus psoraleae Effects of four kinds of chinese medicine on ERα expression of uterus in rats 红花等四种中药对性未成熟小鼠子宫组织 ER-α 表达的影响

9 Immuno-histochemistry results in animal models 正常 control 己烯雌酚 diethylstilbestrol 红花 flos carthami 川牛膝 radix cyathulae 丹参 radix salviae miltiorrhizae 补骨脂 fructus psoraleae Effects of four kinds of chinese medicine on ERβ expression of uterus in rats 红花等四种中药对性未成熟小鼠子宫组织 ER-β 表达的影响

10 0.80 A 24hr 48hr 72hr 72hr+ICI182, treatment Effects of six active components in chinese medicine on proliferation rate of MCF7 cells by MTT assay in vitro 1.control 2.estrodial (10-8 M) 雌二醇 3. ecdysterome(10-6 M) 蜕皮甾酮 4.saffcomin A (10-6 M) 红花黄色素 A 5.psoralen (10-6 M) 补骨脂素 6. isopsoralen (10-6 M) 异补骨脂素 7.tanshinone I(10-6 M) 丹参酮 I 8.tanshinone IIA(10-6 M) 丹参酮 IIA For control : P<0.01, : P<0.05. 六种中药活性成分对 MCF7 细胞增殖的影响及 ICI182,780 的干预作用

11 A ptical density at 570nm 正常对照正常对照 0.1%Eto 0.1%Eto 0.1%Eto 雌二醇雌二醇 E M 异补骨脂素异补骨脂素 isopsoralen isopsoralen isopsoralen M 异补骨脂素异补骨脂素 isopsoralen isopsoralen isopsoralen M 异补骨脂素异补骨脂素 isopsoralen isopsoralen isopsoralen M 异补骨脂素异补骨脂素 isopsoralen isopsoralen isopsoralen M 异补骨脂素异补骨脂素 isopsoralen isopsoralen isopsoralen M 24h 48h 72h Treatment 组别 Treatment For control, : P<0.01, : P<0.05., Effects of isopsoralen on proliferation rate of T47D cells Fig8. effects of isopsoralenon proliferation rate of T47D cells by MTT assay in vitro 异补骨脂素对 T47D 细胞增殖的影响

12 ptical density at 570nm 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 Et 0.2% Estradiol control estrodial 810 mol L-1-8 M Isopsoralen isopsoralen mol L-1 M Isopsoralen isopsoralen mol L-1 M 24 h 48 h Effects of isopsoralen on proliferation rate of MDA- MB231 cells 异补骨脂素对 MDA-MB231 细胞增殖的影响

13 The estrogen receptors in target cells and their related signal pathway are essential mechanism by which Chinese medicine and its active components realize their parmacological functions. 靶细胞雌激素受体及相关信号转导途径是中药及其活性成分发挥效应的重要机制 Chinese medicine and their active components also show the effects on regulating the expression level and ratio of specific ER subtypes 中药及其活性成分可通过影响雌激素受体不同亚型表达及其比例发挥临床疗效

14 Research Team Leader: Jianzhao Niu Xiaoou Xue Piwen Zhao Jian Li Yu Li Yadong Li Shiying Tao Fujian Zhao Laboratory of cell and biochemistry

15 Thank you!

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