Y牙周防治2016-6zw

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晋优尚
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1 口腔疾病防治 2016 年 6 月第 24 卷第 6 期 325 膜炎 1 例报告 [J]. 上海口腔医学, 2006, 15(4): [11] 张俊, 李培华, 许学谷. 经食管镜取出成排义齿 1 例 [J]. 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志, 2013, 27(6): 336. [12] 植田浩志. 开胸摘除支气管牙科性异物 [J]. 日本口腔科学会杂志, 1993, 42(1): [13] 殷树勋. 口腔科治疗操作中异物误咽 9 例报告 [J]. 滨州医学院学报, 2000, 23(6): 597. [14] 王洪, 姬爱平, 白洁. 口腔科临床意外调查分析 [J]. 中国民族民间医药, 2010, 14(1): 18. [15] 钟永锋, 范利好. 食管异物刺入左肺动脉 1 例 [J]. 广东医药, 2014, 35(1): 24. [16] 罗会宴. 韭菜为主治疗胃内大型异物 [J]. 中国药学报, 1988, 4 (1): [17] Tamura N. Foreign bodies of dental origin in the air and food pas sages[j]. Int J Oral Maxillofac Surg, 1986, 15(6): [18] 李连勇, 袁群, 曹艳菊, 等. 经内镜治疗上消化道异物 178 例分析 [J]. 实用医技杂志, 2010, 17(8): [19] 郑绍军. 急诊胃镜检查在小儿误吞异物中的应用 [J]. 中国实用医药, 2013, 8(25): [20] Kato S. Double balloon enteroscopy to retrieve an accidentally swallowed dental reamer deep in the jejunum[j]. World J Gastroin test Endosc, 2011, 3(4): [21] 刘紫嫱, 李海群, 陈德健. 根管治疗护理的安全管理 [J]. 广东牙病防治, 2012, 20(12): [22] Noro A, Kameyama A, Asami M, et al. Clinical usefulness of Iso lite TM Plus for oral environment of Japanese people[j]. Bull Tokyo Dent Coll, 2009, 50(3): ( 编辑李梅, 全春天 ) [DOI] /j.issn 专栏论著 EB 病毒和牙龈卟啉单胞菌协同感染与妊娠期慢性牙周炎的相关性研究祝策, 陆海霞, 李飞, 冯希平上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔预防科, 上海市口腔医学重点实验室, 上海 (200011) 通讯作者简介冯希平, 男, 汉族 1959 年 1 月出生于上海, 籍贯浙江省慈溪县, 1978 年 3 月就读于上海第二医学院口腔系,1983 年 1 月进入上海第二医科大学口腔医学院攻读硕士学位 1995 年 11 月 12 月日本大阪齿科大学和 1999 年 3 月 9 月英国伦敦大学国王学院进修现任上海交通大学口腔医学院常务副院长, 上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔预防科主任主任医师中华口腔医学会口腔预防医学专业委员会主任委员中华预防医学会口腔卫生保健专业委员会副主任委员候任主任委员中国牙病防治基金会专家委员会主任委员国家医师资格考试口腔类别试题开发专家委员会副主任委员上海市口腔医学会常务理事主任委员上海市预防医学会口腔卫生保健专业委员会主任委员中华口腔医学会口腔医学伦理委员会副主任委员擅长于牙体牙髓病根尖周病的治疗和龋病的防治, 研究领域包括龋病和牙周病的预防方法以及口腔流行病学, 主要的论著有口腔临床流行病学, 参编国家执业医师资格考试口腔医师应试指导国家执业医师资格考试口腔助理医师应试指导老年口腔医学口腔预防医学口腔科学 Community Oral Health 等书籍研制 APFI 防龋凝胶含氟防龋护齿液绿茶多酚防龋涂膜等科研产品, 绿茶多酚防龋涂膜获国家发明专利并获上海市科技进步二等奖主持包括国家自然基金在内的课题 30 余项, 发表论文 100 余篇收稿日期 ; 修回日期基金项目国家自然科学基金青年项目 ( ); 高等学校博士学科点专项科研基金 ( ) 作者简介祝策, 医师, 硕士, zhuce_1991@126.com 通讯作者冯希平, 教授, 硕士, fengxipingqh@163.com

2 326 口腔疾病防治 2016 年 6 月第 24 卷第 6 期摘要目的研究妊娠期女性 EB 病毒 (Epstein Barr virus,ebv) 和牙龈卟啉单胞菌 (Porphyromonas gingivalis, Pg) 的协同感染情况和牙周炎严重程度的关系方法收集 36 例患慢性牙周炎 ( 妊娠期慢性牙周炎组 ) 的妊娠期女性和 36 例牙周健康 ( 妊娠期牙周健康组 ) 的妊娠期女性唾液样本, 应用巢式 PCR 技术检测 EBV 感染率, 应用 16S rrna 为基础的 PCR 技术检测 Pg 感染率, 结合口腔临床检查收集的牙周临床指标, 对 EBV 和 Pg 的协同感染与牙周炎严重程度的相关性加以分析结果妊娠期慢性牙周炎组和妊娠期牙周健康组 EBV Pg 感染率的检出率差异无统计学意义 (P>0.05),2 组 EBV 和 Pg 协同感染的检出率差异具有统计学意义 (χ 2 = 4.800,P = 0.028) EBV 和 Pg 协同感染与探诊出血指数相关 (t = 3.058,P = 0.003), 与牙周袋深度和附着丧失无关 (P>0.05) 结论 EBV 和 Pg 协同感染与妊娠期慢性牙周炎的相关性仍需进一步研究中图分类号 R781.4 文献标志码 A 文章编号 (2016) 引用著录格式祝策, 陆海霞, 李飞, 等. EB 病毒和牙龈卟啉单胞菌协同感染与妊娠期慢性牙周炎的相关性研究 [J]. 口腔疾病防治,2016,24(6): 关键词妊娠期女性 ; 慢性牙周炎 ; EB 病毒 ; 牙龈卟啉单胞菌 ; 协同感染 Relationship between maternal chronic periodontitis and coinfection of Epstein Barr virus and Porphyromonas gingivalis ZHU Ce, LU Hai xia, LI Fei, FENG Xi ping. Department of Preventive Dentistry, Ninth People s Hospital, School of Medicine, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai Key Laboratory of Stomatology, Shanghai , China Corresponding author: FENG Xi ping, fengxipingqh@163.com, Tel: Abstract Objective To study the correlation between coinfection of Epstein Barr virus (EBV) and Porphyromon as gingivalis(pg) and severity of maternal chronic periodontitis in pregnant women. Methods Saliva samples were collected from 36 pregnant women with chronic periodontitis and 36 pregnant women with healthy periodontal status. EBV was detected using nested polymerase chain reaction (PCR), Pg was detected using 16S rrna based PCR. Clini cal periodontal indices were recorded through periodontal examination. Correlation between the coinfection and severity of maternal chronic periodontitis were analyzed. Results The results showed no significant differences in prevalence of infection of EBV or Pg between pregnant women with chronic periodontitis and with healthy periodontal status (P> 0.05). Contemporaneously, coinfection prevalence of EBV and Pg showed significant differences between two groups (P = 0.028). Coinfection of EBV and Pg showed significant association with bleeding on probing index (BOP) (P = 0.003). No significant associations were found between the coinfection and periodontal depth(pd) or clinical attachment loss (CAL) (P>0.05). Conclusion Relationship between coinfection of EBV and Pg and maternal chronic periodonti tis needs further investigation. Key words Pregnant women; Chronic periodontitis; Epstein Barr virus; Porphyromonas gingivalis; Coinfection 现代牙周医学对妊娠与牙周炎的认识包括妊娠期易患牙周炎和牙周炎影响妊娠结局两个方 [1 2] 面牙周炎不仅危害女性自身健康, 更可能对胎儿的发育带来不利影响传统的牙周病病因研究认为特定种类的细菌及其代谢产物是引发牙周炎的始动因子, 始动因子和宿主相互作用导致牙周支持组织的破坏然而研究显示患有牙周炎的人可能检测不到这些特定种类的致病菌或者这些细菌在口腔中的分布和未患牙周炎的人群没有差 [3 4] 异细菌致病理论并不能完整地解释牙周病的各种临床特征, 病毒作为另一种潜在的牙周病致病因素逐渐受到关注研究表明疱疹病毒和可疑牙周致病菌共同感染的致病能力强于两者单独致病能力的总和, 现代牙周炎的微生物致病机制模型应 [5] 当是基于病毒和牙周可疑致病菌的协同感染 EB 病毒 (Epstein Barr virus,ebv) 和牙龈卟啉单胞菌 (Porphyromonas gingivalis,pg) 的协同感染是近来的研究热点 EBV 为 DNA 病毒, 可侵入口腔上皮细胞和 B 淋巴细胞, 并能在 B 细胞中形成持续的潜 [6] 伏感染 Pg 是慢性牙周炎病变区或活动部位最 [7 8] 主要的优势菌研究表明 Pg 有可能通过调控 EBV 活化的关键蛋白从而活化 EBV [9] 本研究检测患慢性牙周炎和牙周健康的妊娠期女性唾液中 EBV 和 Pg 的协同感染情况, 并分析其和牙周炎严重程度的关系 1 材料和方法 1.1 研究对象本研究邀请 2012 年 10 月 2013 年 3 月在上海市 3 所妇幼保健院建卡的妊娠期女性参加, 上海交

3 口腔疾病防治 2016 年 6 月第 24 卷第 6 期 327 通大学医学院附属第九人民医院伦理委员会批准此项研究, 所有研究对象需以自愿参加为原则并签署知情同意书妊娠期慢性牙周炎组纳入标准 :1 患有慢性牙周炎的妊娠期女性, 孕周不限 ;2 年龄 20~40 岁 ;3 口腔内至少有 20 颗天然恒牙 ( 除第三磨牙 ); 4 全口至少有 4 颗牙齿有 1 个位点的牙周袋深度 4 mm, 同时这些位点的临床附着丧失 4 mm, 同 [10] 时有探诊出血排除标准:1 存在全身系统性疾病 ;2 近 3 个月内做过牙周治疗 ;3 近 3 个月内服用过抗生素 ;4 存在明显咬合关系异常妊娠期牙周健康组纳入标准 : 牙周健康的妊娠期女性, 其牙周健康的诊断标准为全口牙齿没有牙周炎症, 其探诊出血比例小于 25%, 其余纳入和排除标准同妊娠期慢性牙周炎组 1.2 问卷调查采用设计的问卷了解所有研究对象的社会人口学背景 ( 包括户籍所在地居住地婚姻状况生育年龄妊娠时间家庭人均月收入受教育程度 ) 以及口腔健康行为 ( 包括刷牙牙线漱口水看牙医行为 ), 由问卷调查员解释说明后采用参加者自填的方式回答问卷 1.3 样本采集临床检查前先收集受试者的非刺激性全唾液 2 ml, 冰盒保存,4 h 内移回实验室取 0.5 ml 唾液样本 ( r/min) 离心 5 min, 余留沉淀再用磷酸盐缓冲液反复荡洗至少 5 次,-20 冻存, 用于 DNA 的提取另外取 0.5 ml 唾液样本 (4 000 r/ min) 离心 10 min, 取上清,-20 冻存, 用于激素水平的测量 1.4 口腔临床检查对所有研究对象进行口腔临床检查, 包括探诊出血 (bleeding on probe,bop) 牙周袋深度 (peri odontal depth,pd) 附着丧失 (clinical attachment loss,cal) PD 和 CAL 检查全口牙齿 ( 除去第三磨牙 ) 唇颊面和舌腭面的近中正中远中 6 个位点,BOP 的检查在 PD 检查的同时进行, 记录唇颊面和舌腭面的出血情况 BOP PD 和 CAL 的诊断标准参照世界卫生组织 2013 年出版的口腔健康 [11] 调查基本方法第 5 版 BOP 的结果以记录为出血即 BOP 记录代码为 1 的牙面占所有检查牙面的百分比表示, 即 BOP( = 1)%;PD 的结果以记录有牙周袋的位点即 PD 记录代码为 1 占所有检查位点的百分比表示, 即 PD( 4 mm)%,cal 的结果以记录有明显的附着丧失的位点即 CAL 记录代码为 1 占所有检查位点的百分比表示, 即 CAL ( 4 mm)% 1.5 激素水平的测量唾液上清解冻后采用唾液黄体酮试剂盒 (Demeditec, 德国 ) 来测量黄体酮的浓度, 每个样本设置 2 个复孔, 浓度单位为 Pg/mL; 唾液上清用生理盐水稀释 100 倍, 采用唾液雌二醇 ELISA 试剂盒 (Demeditec, 德国 ) 来测量雌二醇的浓度, 每个样本设置 2 个复孔, 浓度单位为 Pg/mL 1.6 PCR 反应应用 QIAamp DNA Mini 试剂盒 (QIAGEN, 德国 ) 进行唾液基因组 DNA 的提取, 提取方法参照试剂盒操作手册应用巢式 PCR 技术检测 EBV, 应用 16S rrna 为基础的 PCR 技术检测 Pg, 通过参考 [12 13] 相关文献和 NCBI BLAST 确定 3 组引物, 由生工生物工程 ( 上海 ) 股份有限公司合成, 引物序列如下 Pg 上游引物序列 :5 AGGCAGCTTGC CATACTGCG 3,Pg 下游引物序列 :5 ACTGTTAG CAACTACCGATGT 3, 扩增产物 404 bp;ebv 外套上游引物序列 :5 GCGGGTGGAGGGAAAGG 3, EBV 外套下游引物序列 :5 GTCAGCCAAGGGAC GCG 3, 扩增产物 237 bp;ebv 内套上游引物序列 :5 AGGCTGCCCACCCTGAGGAT 3,EBV 内套下游引物序列 :5 GCCACCTGGCAGCCCTAAAG 3, 扩增产物 168 bp PCR 总反应体系 25 μl, 其中 DNA 模板 2 μl (EBV 内套模板 0.5 μl),2 Utaq PCR Mix 12.5 μl, 上下游引物终浓度为 0.4 μmol/l, 去离子水补足至 25 μl EBV 外套和内套均是 94 预变性 3 min 后, 进入主循环, 包括 35 个循环 :94 变性 30 s, 63 退火 15 s,72 延伸 30 s, 主循环结束后再 72 延伸 l min Pg 的反应条件是 94 预变性 3 min 后, 进入主循环, 包括 30 个循环 :94 变性 30 s,55 退火 30 s,72 延伸 30 s, 最后 72 延伸 3 min 取扩增产物 5 μl,1.5% 琼脂糖凝胶电泳, DNA 染料为 EB 替代物 ExGreen Plus(1 000 ), Marker 为 DL 2000,DNA 紫外灯下观察结果每批 PCR 扩增均设置阴性对照, 空白对照采用灭菌去离子水 20% 的样本经过重复检测, 结果不一致样本再进行第 3 次检测 1.7 统计学分析本研究使用 SPSS 21.0 软件进行数据分析, 计量资料采用独立样本 t 检验 ; 计数资料采用卡方检

4 328 口腔疾病防治 2016 年 6 月第 24 卷第 6 期验所有统计学分析均为双侧检验,P<0.05 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 牙周炎混杂因素的控制本研究共纳入妊娠期慢性牙周炎组和妊娠期牙周健康组各 36 例妊娠期女性 2 组妊娠期女性社会人口学背景和口腔健康行为的比较见表 1 2 组在年龄孕周等社会人口学背景和刷牙次数牙线使用等口腔健康行为上及激素水平的差异均无统计学意义 (P > 0.05) 2 组之间牙周炎混杂因素控制得当, 人群匹配良好表 1 2 组牙周炎混杂因素的比较例 (%) 年龄 ( 岁 ) 孕周 ( 周 ) 婚姻状况户籍所在地居住地已生育孩子数量本人学历看牙支费途径家庭平均月收入每天刷牙的次数牙线使用漱口水使用定期看牙医情况吸烟喝酒黄体酮雌二醇混杂因素已婚未婚上海其他市区郊区没有一个及以上高中及以下大学及大专硕士及以上有报销没有报销元及以下元以上一次及一次以下两次三次及以上使用不使用使用不使用有没有吸烟不吸烟喝不喝妊娠期慢性牙周炎组 (n = 36) 27.2 ± ± (94.4) 2(5.6) 9(25.0) 27(75.0) 5(13.9) 31(86.1) 23(63.9) 13(36.1) 23(63.9) 13(36.1) 19(52.8) 17(47.2) 29(80.6) 7(19.4) 7(19.4) 27(75.0) 2(5.6) 1(2.8) 35(97.2) 15(41.7) 21(58.3) ± ± 妊娠期牙周健康组 (n = 36) 26.9 ± ± (91.7) 10(27.8) 26(72.2) 5(13.9) 31(86.1) 25(69.4) 11(30.6) 23(63.9) 10(27.8) 18(50.0) 18(50.0) 33(91.7) 10(27.8) 25(69.4) 1(2.8) 1(2.8) 35(97.2) 12(33.3) 24(66.7) 33(91.7) ± ± t 值或 χ 2 值 < < < P 值组 EBV 和 Pg 协同感染的检出情况妊娠期慢性牙周炎组和妊娠期牙周健康组 EBV Pg 及两者协同感染检出情况的比较见表 2 由表 2 可见 2 组 EBV 和 Pg 的检出率分布差异均无统计学意义 (P > 0.05),EBV 和 Pg 协同感染的检出率分布差异有统计学意义 (P = 0.028) 电泳阳性条带见图 1 表 2 2 组 EBV 和 Pg 协同感染的检出情况例 (%) 组别妊娠期慢性牙周炎组妊娠期牙周健康组 χ 2 值 P 值例数 EBV 检出未检出 31(86.1) 5(13.9) 25(69.4) 11(30.6) Pg 检出未检出 31(86.1) 5(13.9) 24(66.7) 12(33.3) EBV + Pg 检出未检出 27(75.0) 9(25.0) 18(50.0) 18(50.0) 注 :EBV:EB 病毒 ;Pg: 牙龈卟啉单胞菌

5 口腔疾病防治 2016 年 6 月第 24 卷第 6 期 329 EBV:EB 病毒 ;Pg: 牙龈卟啉单胞菌图 1 电泳阳性条带 2.3 EBV 和 Pg 协同感染和牙周炎程度的关系妊娠期慢性牙周炎组和牙周健康组 EBV 和 Pg 协同感染和牙周炎程度的关系见表 3 由表 3 可见 EBV 和 Pg 协同感染与探诊出血指数相关 (P = 0.003), 与牙周袋深度和附着丧失无关 (P>0.05) 表 3 EBV 和 Pg 协同感染和牙周炎程度的关系 x ± s 检出结果 EBV+Pg 阴性 EBV+Pg 阳性 t 值 P 值 3 讨论 BOP(=1)% 26.13± ± 注 :BOP( = 1)%: 即 BOP 记录代码为 1 的牙面占所有检查牙面的百分比 ;PD( 4 mm)%:pd 记录代码为 1 占所有检查位点的百分比 ;CAL( 4 mm)%:cal 记录代码为 1 占所有检查位点的百分比 ;PD: 牙周袋深度 ;BOP: 探诊出血 ;CAL: 附着丧失 ;EBV: EB 病毒 ;Pg: 牙龈卟啉单胞菌 PD( 4 mm)% 24.48± ± CAL( 4 mm)% 5.17± ± 目前各类疾病的病因研究已从单纯的生物医学模型转变为更宽广的多维度多因素的立体模型, 涵盖生物行为社会等多种因素微生物是妊娠期慢性牙周炎发病过程中必不可少的因素, 但其单独存在并不意味着疾病的必然发生, 牙周病的危险因素还包括了社会人口因素口腔和全身保健行为饮食习惯等 [14 15] 本研究不仅对 2 组妊娠期女性的社会行为等因素进行匹配, 更考虑了其雌孕激素水平在本研究中 2 组慢性牙周炎的社会人口学背景口腔健康相关行为等危险因素及雌孕激素水平等方面均衡性良好, 在此基础上开展微生物致病机理的研究更有意义本研究妊娠期慢性牙周炎组中 EBV 的检出率为 86.1% 以往的研究表明在一般慢性牙周炎人群中 EBV 的检出率为 50% 左右 [16 17], 本研究 EBV 检出率较高而另一项针对患妊娠期慢性牙龈炎的研究中 EBV 的检出率为 38.6%, 远低于本研究 [18] 本研究中妊娠期慢性牙周炎组 Pg 的检出率为 86.1%, 和以往的研究检出率相近 [19] 本研究中 EBV 和 Pg 协同感染在慢性牙周炎和牙周健康的妊娠期女性中的检出率差异具有统计学意义,EBV 和 Pg 协同感染可能促进妊娠期慢性牙周炎发生发展 EBV 和 Pg 协同感染的具体致病机制研究目前尚不完全清楚牙周炎作为一种感染性疾病, 其进展伴随着免疫细胞的堆积 [19] EBV 和 Pg 协同感染对牙周炎的促进机制可能是 EBV 通过活化作用影响免疫细胞从而降低宿主对 [20 21] [9] 致病菌毒力因子的抵抗能力 Imai 等的研究揭示 Pg 有可能通过调控 EBV 活化的关键蛋白从而干扰免疫调节系统加重牙周病本研究以出血牙面的百分比 (BOP( = 1)%) 有牙周袋位点的百分比 (PD( 4 mm)%) 和有附着丧失位点的百分比 (CAL( 4 mm)%) 表示牙周炎的程度通过分析 EBV 和 Pg 协同感染和牙周炎严重程度的关系, 结果表明 EBV 和 Pg 协同感染与 BOP 相关, 与 PD 和 CAL 无关, 这一结果提示 EBV 和 Pg 协同感染可能和妊娠期慢性牙周炎已经发生的牙周损害关系不大, 但是和妊娠期慢性牙周炎的活跃程度有所关联, 具体的机制仍需进一步的研究总之, 本研究结果虽不能证实 EBV 和 Pg 协同感染和妊娠期慢性牙周炎之间的因果关系, 但提示了在妊娠期慢性牙周炎的发病中可能起着重要作用虽然本研究样本量较小, 但是国内外首次在妊娠期女性中开展的关于牙周可疑致病菌和疱疹病毒感染的研究了解疱疹病毒与妊娠期慢性牙周炎的关系不仅有助于理解疾病的发病机制, 而且对疾病的诊断监测和治疗都有重要意义在妊娠期慢性牙周炎的发展中, 疱疹病毒与牙周致病菌之间的具体相互作用机制还需进一步的研究参考文献 [1] Penova Veselinovic B, Keelan JA, Wang CA, et al. Changes in in fla mmatory mediators in gingival crevicular fluid following peri odontal disease treatment in pregnancy: relationship to adverse pregnancy outcome[j]. J Reprod Immunol, 2015, 112: [2] Chambrone L, Guglielmetti MR, Pannuti CM, et al. Evidence grade associating periodontitis to preterm birth and/or low birth weight: I. A systematic review of prospective cohort studies[j]. J

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综合报道

综合报道 55 doi:10.3969j.issn.1000-3606.2014.01.01 论著不同围生因素对妊娠的影响赵玉祥岳虹霓杨占华江苏省淮安市保健院新生儿科 ( 江苏淮安 223002) 摘要 : 目的探讨妊娠期高血压疾病胎膜早破等围生因素对妊娠的影响方法回顾性