吉林省科技发展计划项目申报书19808

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涎嵇
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1 计划类别 : 项目类别 : 支持重点 : 管理处室 : 科技创新人才培育计划青年科研基金项目医药科学计划处项目名称 : 申报主持单位 ( 盖章 ): 项目负责人 : 通讯地址 : 双展示噬菌体应用于白色念珠菌感染诊断的研究吉林大学第二医院王一存吉林长春市吉林大学第二医院研究中心固定电话 : 移动电话 : 传真 : 邮编 : 电子邮箱 : wangyc486@126.com 填报日期 : 吉林省科学技术厅二 O 一二年八月制

2 一申报项目基础信息项目名称双展示噬菌体应用于白色念珠菌感染诊断的研究项目所属学科临床医学项目所属专业临床检验诊断学经费预算总额 8.0 万元, 其中申请经费 8.0 万元起止年限至申报主持单位项目负责人申报参加单位 1 申报参加单位 2 名称吉林大学第二医院所在南关区地通讯地址吉林长春市吉林大学第二医院研究中心邮编单位类别企业科研机构高等院校事业单位其它隶属中直省直其它帐号开户银行吉林长春市中国银行姓名王一存性别女出生年月学历研究生学位博士身份证号职务讲师职称中级电话工作单位吉林大学第二医院邮箱 wangyc486@12 com 名称所在地联系人帐号电话开户银行名称所在地联系人帐号电话开户银行临床病人免疫力低下, 大剂量抗生素等的使用, 导致白色念珠菌大量繁殖, 入侵血液, 破项目简介 ( 研坏宿主细胞, 引发系统性念珠菌感染白色念珠菌感染已经成为导致临床患者死亡的重要发内容拟解原因之一且系统性白色念珠菌感染无显著临床特征, 目前用于临床诊断的血培养, 病原体检出需要一定时间, 难以早期诊断, 延误治疗导致患者死亡率增高, 开展针对白色念珠决关键技术感染诊断的研究对于提高癌症患者的生存率具有重要的意义, 本研究拟构建同时展示白色预期技术经念珠菌两种蛋白表位的双展示噬菌体, 将其作为诊断试剂, 创立新的噬菌体 ELISA 方法用济指标等于临床患者血清检测, 进行肿瘤患者的念珠菌感染早期诊断拟解决的关键问题是讲两个 )(400 字以内优势抗原 HSP90 和 SAP2 表位同时展示到噬菌体的不同外壳蛋白表面双展示噬菌体将实现 ) 癌症患者白色念珠菌感染早期诊断, 为诊断试剂的研究提供新的途径, 降低传统诊断方式的成本预期成果新产品新品种新工艺新装置新材料技术标准 ( 国际标准国家标准行业标准企业标准 ) 专利计算机软件论文论著研究报告其它预期专利授权获得国外发明专利 0 项, 国内专利 0 项, 其中发明专利 0 项成果预期作用形成自主研发能力突破关键技术试点示范规模生产推广应用提高经济效益其它第 1 页

3 二申报项目内容概况 (1) ( 一 ) 立项的必要性 (150 字以内 ) 癌症患者免疫力低下, 大剂量抗生素激素免疫抑制剂的使用, 容易引发系统性白念菌感染, 其成为导致临床患者死亡的重要原因之一且系统性白色念珠菌感染无显著临床特征, 目前用于临床诊断的血培养, 难以早期诊断, 延误治疗导致患者死亡率增高因此开展针对白念菌感染诊断的研究对于提高癌症患者的生存率具有重要的意义 ( 二 ) 相关技术国内外发展现状与趋势 (150 字以内 ) 目前用于临床诊断白念菌的金标准血培养, 敏感性差, 检出率仅低, 且难以早期诊断, 延误治疗导致患者死亡率增高因此发展了多种新的非血培养的检测方式来检测真菌感染但是都存在着敏感性或特异性不足可重复性差费用昂贵难以标准化或者检测周期时长等问题, 而不能的满足治疗要求 ( 三 ) 前期工作基础 1 申报单位和项目负责人前期所开展的相关研究工作(200 字内 ); 本人从 2008 年开始进行外源多肽的噬菌体展示及其产物的免疫学研究本主要包括白色念珠菌诊断和疫苗预防的两个方面 :1) 利用重组蛋白, 展示 Hsp90 表位或者 Sap2 表位的噬菌体和噬菌体纳米线进行白色念珠菌感染诊断的相关研究 ;2) 利用重组蛋白和展示 Sap2 表位的噬菌体进行针对白色念珠菌的免疫保护研究 2 前期研究所取得的进展和阶段性成果(200 字以内 ) 成功地将多种外源表位基因插入到噬菌体表达载体的基因 8 结构基因中, 实现了正常表达展示白色念珠菌 HSP90,SAP2 表位, 并证明了展示蛋白表位的杂合噬菌体具有很好的免疫原性, 可以应用于白色念珠菌感染的诊断和疫苗的研究 ( 发表在 human Vaccine 等 ), 作为新型的生物载体, 噬菌体与化学技术相结合于抗体的检测具有广泛的应用意义 ( 研究结果于 2015 年发表在 ACS nano) 说明研究结果得到学术界的肯定, 工作受到国际同行的关注 ( 四 ) 研究 ( 开发 ) 内容和拟解决的关键技术问题 1 研究( 开发 ) 内容 (400 字以内 ) 本项目拟采用噬菌体展示技术, 开展白色念珠菌诊断研究 : 1.1 构建同时展示 HSP90 和 SAP2 蛋白表位的双展示噬菌体背景 :Smith G P 创建了噬菌体展示技术 ;geneviii 展示系统曾用来展示 SAP2 等表位利用基因工程技术, 改造野生噬菌体的 geneiii 和 geneviii, 在噬菌体的不同外壳蛋白上分别展示 HS SAP2 两种表位, 简称双展示噬菌体 1.2 双展示噬菌体的免疫学基础研究背景 : 分别展示有白色念珠菌 HSP90 和 SAP2 表位的噬菌体能够特异性识别 HSP90 和 SAP2 抗体 1) 利用 HSP90 和 SAP2 分别免疫小鼠, 获得多克隆抗体 2) 验证双展示噬菌体特异性识别 HSP90 和 SAP2 多克隆抗体的能力 3) 构建白色念珠菌感染小鼠模型 4) 利用双展示抗原表位噬菌体检验感染小鼠模型血清中抗体 1.3 双展示噬菌体应用于癌症患者血清检测背景 : Hsp90 和 Sap2 以及展示 HSP90 和 SAP2 表位的噬菌体可应用于白念菌感染患者血清的检测 1) 验证双展示双展示噬菌体可以和血清中的 Hsp90 和 Sap2 抗体同时特异性结合 2) 分别取健康人血清, 癌症患者血清以及系统性白色念珠菌感染患者血清, 将双展示噬菌体应用于血清检测 2 拟解决的关键技术(400 字以内 ) 作为诊断试剂应该是对机体无害的物质, 多数已研究的诊断试检测效果较差, 不能应对形态多变的病原体, 而多表位联合检测可以增强检测效果, 研究表明, 分别展示的与 HSP90 和 SAP2 表位的噬菌体具有与天然抗原相似的特性为了研制更理想的诊断试剂候选, 本项研究拟将与白色念珠菌的两个优势抗原 HSP90 和 SAP2 的结合多肽同时展示到噬菌体的不同外壳蛋白表面, 制备噬菌体, 进行血清抗体检测研究验证这些噬菌体是否可以同时识别血清中的不同抗体如果能够达到预期效果, 将为白色念珠菌诊断试剂的研究提供新的途径第 2 页

4 二申报项目内容概况 (2) ( 五 ) 实施方案 1 技术路线 (600 字以内 ) 1.1 实验材料的制备 : 双展示噬菌体的构建 ; 重组蛋白 SAP2,HSP90 的制备酶切双展示噬菌体载体 f , 分子克隆手段分别将 VKYTS 和 LKVIRK 多肽 DNA 序列克段制备重组蛋白 1.2 双展示噬菌体, 重组蛋白免疫原性的鉴定双展示噬菌体, 重组蛋白免疫小鼠, 制备多克隆抗体 ;westblot 和 ELISA 验证双展示噬菌体是否与体结合 1.3 噬菌体 ELISA 方法的建立构建感染动物模型, 获得念珠菌感染血清 ;westblot 验证双展示噬菌体可以用于感染血清检测 ; 利用双展示噬菌体重组蛋白建立检测血清的 ELISA 方法 1.4 双展示噬菌体应用于白色念珠菌感染的检测双展示噬菌体, 重组蛋白应用于癌症患者, 健康人, 白色念珠菌感染患者血清检测, 数据分析 2 实施方案( 组织方式产学研合作机制等 )(200 字以内 ) 1) 分子克隆手段分别将 VKYTS 和 LKVIRK 多肽 DNA 序列连接在双展示噬菌体载体 f 上 2) 常规手段制备双展示噬菌体和重组蛋白 Hsp90 以及 Sap2 3) 利用大耳白兔制备重组蛋白 Hsp90 以及 Sap2 的多克隆抗体 4) 利用 western blot 和 ELISA 验证双展示噬菌体与多克隆抗体特异性结合的能力 5) 构建白色念珠菌感染鼠模型 6) 摸索双展示噬菌体用于血清检测的 ELISA 条件 7) 分别利用重组蛋白和双展示噬菌体检测感染动物模型血清, 健康人血清, 癌症患者血清 8) 数据分析 ( 六 ) 预期成果及指标 1 预期技术指标(200 字以内 ) 1) 构建同时展示 Hsp90 和 SAP2 表位的双展示噬菌体 2) 建立双展示噬菌体用于血清检测的 ELISA 方法 3) 双展示噬菌体应用于不同类型人群血清检测, 筛查白色念珠菌感染患者 2 预期经济指标 (100 字以内 ) 无 3 预期产业应用前景和社会生态效益 (100 字以内 ) 第 3 页

5 指导白色念珠菌感染诊断的预防研究 4 成果提供形式( 授权专利技术标准新技术新产品新装置论文专著的数量等 )(100 字以内 ) 1) 建立双展示噬菌体检测白色念珠菌感染的 ELISA 方法 2) 发表论文 2-3 篇, 其中 SCI 论文 1-2 篇 5 人才队伍建设 ( 培养博士硕士数等 )(100 字以内 ) 培养硕士 1-2 名第 4 页

6 三项目团队构成项目负责人简介 ( 参与过的主要研究开发和成果转化项目及任务分工, 授权发明专利, 在国内外核心期刊上发表的代表性学术论文等研究成果情况 )(350 字以内 ): 东北师范大学理学博士, 博士期间从事噬菌体展示技术以及白色念珠菌感染诊断预防和治疗相关的研究工作利用噬菌体展示技术开展真菌免疫学研究方向, 发表与噬菌体展示相关的研究论文近十篇, 第一作者文章 3 篇, 参与 5 个基金项目研究,2015 年利用噬菌体纳米材料诊断白色念珠菌感染的研究成果发表在国际主流刊物 ACS nano 上, 并且申请专利一项代表作 : Ultrasensitive rapid detection of human serum a nanofibers. ACS Nano. 2015;9(4): IF=12.88 项目负责人姓名性别年龄王一存女 30 主要参加人张广鑫男 28 李馨女 32 参加人员所在单位及部门吉林大学第二医院研究中心吉林大学第二医院吉林大学第二医院研究中心职称现从事专业在本项目中承担的主要工作讲师真菌免疫学实验设计, 指导, 攥写文章讲师癌症的诊断治疗癌症患者真菌感染检测讲师真菌治疗真菌感染动物模型构建第 5 页

7 四经费预算表单位 : 万元序号科目名称合计申请经费自筹经费申报单位参加单位 1 一经费支出合计 ( 一 ) 直接费用设备费 (1) 购置设备费用 (2) 原设备升级改造费用 (3) 设备租赁费 (4) 非标设备 ( 试验装置 ) 试制费材料费测试化验检验试验加工费燃料动力费差旅费会议费国际合作与交流费出版/ 文献 / 信息传播 / 知识产权事务费劳务费专家咨询费其它支出 ( 二 ) 间接费用房屋租赁费水电费暖消耗费绩效支出其它支出二经费来源合计申请专项经费资助 / / 26 2 自筹经费来源 0.0 / (1) 其它财政拨款 0.0 / (2) 单位自有资金 0.0 / (3) 其它资金 0.0 / 第 6 页

8 五年度计划安排 (1) 年月项目计划完成的内容及目标 1 内容: 制备重组蛋白 HSP90,SAP2 目标 : 成功制备重组蛋白 2016 年 01 月至 2016 年 06 月 1 内容: 构建同时展示 HSP90 和 SAP2 表位的双展示噬菌体载体目标 : 成功将两个蛋白表位基因连接与噬菌体载体上 2016 年 07 月至 2016 年 12 月 1 内容: 制备双展示噬菌体目标 : 成功表达制备大量双展示噬菌体 2017 年 01 月至 2017 年 06 月第 7 页

9 五年度计划安排 (2) 年月项目计划完成的内容及目标 1 内容: 将重组蛋白双展示噬菌体免疫动物,western blot 验证其免疫原性目标 : 验证双展示噬菌体可以和 HSP90,SAP2 抗体特异性结合 2017 年 07 月至 2017 年 12 月 2018 年 01 月至 2018 年 06 月 1 内容: 构建感染动物模型, 获得感染动物血清, 将双展示噬菌体等检测血清目标 : 建立双展示噬菌体应用于血清检测的 ELISA 方法 1 内容: 双展示噬菌体和重组蛋白应用癌症患者, 健康人, 念珠菌感染患者血清检测目标 : 建立双展示噬菌体应用于癌症患者念珠菌感染检测的方法, 指导癌症患者的真菌治疗 2018 年 07 月至 2018 年 12 月第 8 页

10 六任务分工及申请经费分配项目申报形式 : 独立合作产学研合作申报主持单位单位吉林大学第二医院任务构建双展示噬菌体应用于癌症患者血清检测, 指导癌症患者的真菌治疗, 提高癌症患者的生存率申请经费 ( 万元 ) 参与方式 8.0 万元 / 合作技术承接技术依托合作技术承接技术依托申报参加单位合作技术承接技术依托合作技术承接技术依托合作技术承接技术依托第 9 页

11 七申报单位与推荐部门意见申报主持单位意见 : 申报参加单位意见 : 盖章年月日盖章盖章年月日年月日盖章年月日盖章年月日盖章年月日推荐部门意见 : 盖章盖章年月日年月日第 10 页

吉林省科技发展计划项目申报书21847

吉林省科技发展计划项目申报书21847 计划类别 : 项目类别 : 管理处室 : 自然科学基金自然科学基金基础处项目名称 : 申报主持单位 ( 盖章 ): 项目负责人 : 通讯地址 : 三焦辨证法对过敏性紫癜兔模型的 IgA T 细胞及 TNF-a 表达水平影响的研究 ( 白求恩专项 ) 长春中医药大学原晓风吉林长春市长春市工农大路 1478 号固定电话 : 0431-81953837 移动电话 : 15948000812 传真