动 物 营 养 学 报 卷 7)+ "# 阶段生长猪营养需要配制 基础日粮营养水平和饲粮原料组成见表 猪只每隔, 饲喂一次 自由饮水 管理按常规进行 表 基础日粮组成和营养水平 风干基础 0' +8%%('($(&%(9:''$% 项目 / 原料 /(#$%( 玉米 +( 膨化大豆 ;&$$'( 膨

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1 动物营养学报 不同氧化应激模式下仔猪血细胞参数变化的比较研究 袁施彬 陈代文 教育部动物抗病营养重点实验室 雅安 四川农业大学动物营养研究所 雅安 摘 要 本试验旨在研究不同氧化应激源对仔猪血细胞参数变化的影响 试验采用单因子试验设计共分 个处理 每个处理 个重复 每个重复 头仔猪 处理 为基础日粮组 含有 新鲜鱼油 处理 的日粮中添加 的过氧化物值 为! "# 的氧化鱼油 处理 的仔猪在饲喂基础日粮的同时 于腹腔注射 # "# 的敌快死 $%!&' 结果表明 试验第 天 处理 的红细胞记数 $$ &()*+ 和处理 的血红蛋白含量, #%(-.* 显著低于处理 处理 的 -.* 和处理 的 )*+ 极显著低于处理 试验第 天 处理 和处理 的 )*+-.* 均较处理 极显著下降 处理 在第 天和处理 在第 天时血小板数量分别较处理 显著 和极显著 的下降 第 天时 处理 的白细胞数量比处理 显著上升 第 天时 处理 的白细胞数量和中性粒细胞相对百分比显著高于处理 综合分析认为 氧化鱼油和敌快死可使断奶仔猪红细胞参数 血小板参数和淋巴细胞数量下降 而中性粒细胞数量上升 与氧化鱼油引起的氧化应激程度相比 由 $%!&' 引起的应激程度更强一些 关键词 氧化应激 仔猪 血细胞参数 氧化鱼油 敌快死 随着我国畜牧业特别是现代养殖业集约化程度的提高及人们对动物福利意识的增强 动物应激医学已经成为动物医学的重要组成部分 在动物应激医学中 畜禽氧化应激是一个重要的组成部分 实际生产中 诱导畜禽产生氧化应激的因素很多 如日粮多不饱和脂肪酸含量过高 矿物元素硒 铜 锌或锰缺乏等 缺血 缺氧或化学试剂等 都可导致机体氧自由基过量生成和 或细胞内抗氧化防御系统受损而产生氧化应激 有研究指出 氧化油脂可提高动物体内的过氧化损伤 加速动物组织损伤的进 程 通过给大鼠或小鼠腹腔注射敌快死 $%!&' 的研究也发现 $%!&' 可以在动物体内利用分子氧 产生 和 - 诱导氧化应激的产生 血液通过循环系统与全身各组织器官密切联系 参与机体呼吸 运输 防御 调节体液渗透液和酸碱平衡等各项生理活动 维持机体正常新陈代谢和内外环境的平衡 病理情况下 各组织器官的病理变化可直接 或间接地通过血液学参数得到反应 然而 目前关于氧化应激对仔猪血液学参数影响的研究还未见报道 因此 本研究在前期工作的基础上 给断奶仔猪饲喂氧化鱼油和腹腔注射 $%!&' 诱导氧化应激 比较研究两种氧化应激诱导方式对断奶仔猪血细胞 参数的影响 为深入探讨畜禽氧化应激及抗氧化机制和寻求缓解氧化应激的有效措施提供试验依据 材料和方法 试验用氧化鱼油的制备 在新鲜鱼油中按比例添加 2 # "# +& 2 # "# - # "# 和 的水 充分混合后 不间断的通入空气 于 34 条件下搅拌氧化制取过氧化物值 为! "# 的氧化 鱼油 方法参见任泽林等 并作进一步的改进 试验动物及设计 挑选体重为 3"# 的长 5 大去势断奶公猪 头 随机分为 个处理 处理 和处理 饲喂含 新鲜鱼油的日粮 处理 饲喂含 氧化鱼油的日粮 处理 在试验开始时 腹腔注射敌快死 $%!&' 溶液 注射剂量 # "# 每个组 个重复 每个重复 头猪 饲养试验 $ 在试验第 天 第 天和第 天 分别采前腔静脉血 和 6 备测 试验日粮及饲养 以玉米 豆粕为基础配制日粮 营养水平参照 收稿日期 基金项目 教育部长江学者和创新团队发展计划 /)0 项目资助作者简介 袁施彬 女 四川南充人 博士 现在西华师范大学工作 主要从事营养与免疫调控方面的研究 '%,%%(%(' 通讯作者 陈代文 教授 博士生导师 '%,($%'&$&(

2 动 物 营 养 学 报 卷 7)+ "# 阶段生长猪营养需要配制 基础日粮营养水平和饲粮原料组成见表 猪只每隔, 饲喂一次 自由饮水 管理按常规进行 表 基础日粮组成和营养水平 风干基础 0' +8%%('($(&%(9:''$% 项目 / 原料 /(#$%( 玉米 +( 膨化大豆 ;&$$'( 膨化豆粕 ;&$$'( ' 鱼粉 %, ' 鱼油 %,% 乳糖 6' 统糠 )% '( 赖氨酸 盐酸盐 6-+ 固体蛋氨酸!" 磷酸氢钙 +'- 碳酸钙 +'+ 食盐 7'+ 预混料 %; 总计 0' 营养成分 7&%(9 消化能 "# 粗蛋白质 + 钙 +' 有效磷 赖氨酸 6 蛋氨酸 含硫氨基酸 苏氨酸 0, 色氨酸 08 '%$'% 含量 +(( 预混料可为每千克全价料提供 0, 8 %;89%$ :%(#:8"#$% ':&&:' # ('%(&:' # +&'88&:' # ( ''(#'( &:' # ''(%& # / '8'%&%$%$ # /< /</<=# *# * # *# * # 烟酸 (%%(%'%$ # 泛酸!8'(,(%'%$ # 叶酸 :%'%$ # 生物素 %%(# 胆碱,%( # 检测指标和方法 油脂过氧化指标油脂在混入饲料前的过氧化物值 8 ;%$ 9'& 值 酸价 '%$9'& 硫代巴比妥酸反应物,%'%&% '%$'%9 & '(0*) 碘价 %$%( 9'& / 和皂化价 '8(%:%'%(9'& 的检测方法分别参见.*0.*.*0 和.*00*) 检测方法参见黄伟坤 等 当鱼油混合到日粮中后 采用索氏脂肪抽提法提取日粮脂肪检测 和 / 检测方法同前 血细胞参数的检测取前腔静脉血 6 缓慢引入含 肝素钠抗凝剂的血细胞测定管中 上下轻轻颠转 次混匀 %( 内用全自动血液分析仪 $(%+ 9 瑞士产 进行分析 数据分析与处理用 ; 对数据进行处理后 采用 对数据进行多重比较 结果用平均值 3 标准差 '(3 表示 结果分析 试验用脂肪的氧化特性试验用油脂在混入饲料前后过氧化指标的检测结果见表 在混入饲料前 氧化鱼油 ;%$'%9 :%,% 中的 0*) 和 的值极显著高于新鲜鱼油 :,:%,% 中相应值 而 / 值极显著低于 中该值 在混入饲料后 的 和 分别极显著高于 中相应值 / 极显著低于 中该值 红细胞参数氧化应激对断奶仔猪红细胞参数的影响见表 由表 可以看出 在试验的第 天 与处理 新鲜鱼油组 :,:%,% 相比 处理 氧化鱼油组 ;%$'%9 :%,% 的红细胞记数 $ $ &()*+ 红细胞比容 '( 8&&'9& + 和血红蛋白含量, #%(-.* 分别下降 和 处理 $%!&' 组 的 )*++ 和 -.* 分别下降 和 试验第 天 与处理 相比 处理 的 )*++ 和 -.* 分别下降 和 处理 的 )*++ 和 -.* 分别下降 和

3 期 袁施彬等 不同氧化应激模式下仔猪血细胞参数变化的比较研究 表 试验用油脂在混入饲料前后氧化特性 0' +,''%%:, $%':': '($':%(&%(%(, $% 指标 /($% 新鲜鱼油 氧化鱼油 混入日粮前 *: %(&%(%(, $% 过氧化物值! "# 以 计 3 3 * 酸价 # "# 以 =- 计 3 3 * 硫代巴比妥酸反应物 0*)# "# 以 计 3 3 * 皂化价 # "# 以 =- 计 3 3 * 碘价 / # # # # 3 3 * 混入日粮后 :%(&%(%(, $% 过氧化物值! "# 以 计 3 3 * 酸价 #=-"# 以 =- 计 3 3 * 硫代巴比妥酸反应物 0*)# "# 以 计 3 3 * 皂化价 # "# 以 =- 计 3 3 * 碘价 / # # # # 3 3 * 同行肩标不同小写字母表示差异显著 不同大写字母表示差异极显著 下表同 /(, ' 9'&%,$%::(' &8%8 '(%#(%:%'($%::( %,$%::( '8%' &8%8 '(%#(%:%'($%::( 0, ' ' 表 氧化应激对断奶仔猪红细胞参数的影响 0' :::;%$'%9 ($ 8'' : '(%(#8%# 指标 /($% 时间 '.&8.&8.&8 红细胞计数 )*+ 5 6 第 天, $ 3 ' 3 3 * 第 天, $ 3 3 * 3 * 红细胞比容 + :6 第 天, $ 第 天, $ 血红蛋白含量 -.* # 6 第 天, $ 3 ' 3 * 3 * 第 天, $ 3 3 * 3 * 血小板参数氧化应激对断奶仔猪血小板参数的影响见表 由表 可知 在试验的第 天 与处理 相比 处理 的血小板数量 8 '60 血小板比容 ', '%+0 和血小板平均体积 '( 8'9& 分别下降 和 处理 的 60+0 和 分别下降 和 第 天 与处理 相比 处理 的 60+0 和 分别下降 和 处理 的 60+0 和 分别下降 和 表 氧化应激对断奶仔猪血小板参数的影响 0' :::;%$'%9 (8'8'' : '(%(#8%# 指标 /($% 时间 '.&8.&8.&8 血小板数量 血小板比容 +0 :6 血小板平均体积 # 6 第 天, $ 3 ' 3 ' 3 * 第 天, $ 3 ' 3 3 ' 第 天, $ 3 ' 3 ' 3 第 天, $ 3 ' 3 3 第 天, $ 3 ' 3 * 3 * 第 天, $ 白细胞参数氧化应激对断奶仔猪白细胞参数的影响见表 由表 可以看出 在试验的第 天 与处理 相比 处理 和处理 的白细胞数量,% $

4 动 物 营 养 学 报 卷?*+ 分别上升 和 淋巴细胞相对百分比 分别下降 和 中性粒细胞相对百分比 (&8,%7<0 分别上升 单核细胞相对百分比 ( 7 分别上升 和 在试验的第 天 与处理 和处理 相比 处理 的?*+ 数量分别提高 和 处理 的 7<0 相对百分比分别提高 和 表 氧化应激对断奶仔猪白细胞参数的影响 0' :::;%$'%9 (& 8'' : '(%(#8%# 指标 /($% 时间 '.&8.&8.&8 白细胞数量?*+ 5 6 第 天, $ 3 ' 3 ' 3 第 天, $ 3 ' 3 ' 3 淋巴细胞相对百分比 6@- 第 天, $ 第 天, $ 中性粒细胞相对百分比 7<0 第 天, $ 第 天, $ 3 ' 3 ' 3 单核细胞相对百分比 7 第 天, $ 第 天, $ 血细胞直方图氧化应激对仔猪血细胞直方图的影响见图 在图 ' 中横坐标为白细胞体积大小 单位为飞升 :6 纵坐标为白细胞各亚群的百分比 单位为 图中峰 为淋巴细胞峰 峰 为单核细胞峰 峰 为中性粒细胞峰 图 $ 中横坐标为血小板的大小 单位为飞升 :6 纵坐标为血小板的百分比 单位为 直方图中峰值高低反映出细胞数量的多少 由图中可以看出 氧化应激使白细胞直方图发生了改变 即细胞数量发生了相应的改变 与处理 新鲜鱼油组 :,:%,% 相比 处理 氧化鱼油组 ;%$'%9 :%,% 和处理 $%!&' 组 的淋巴细胞数量降低 而中性粒细胞数量升高 与处理 新鲜鱼油组 :,:%,% 相比 处理 $%!&' 组 的血小板数量降低 讨 论 本实验根据前人研究成果 分别采用 和 $%!&' 作为氧化应激源 诱导动物氧化应激 又由于鱼油在加热氧化处理过程中产生的一系列的氧化产物不稳定 在加热和储藏过程中易分解 所以 可以通过检测 和 中的 0*)/ 和 对其氧化产物进行估计 在本试验条件下 在混入饲料前后的过氧化指标都显著提高 表明鱼油氧化形成了大量的脂质过 氧化产物 图 氧化应激对血细胞直方图的影响 %#:::;%$'%9 (,,%#':$ ' 处理 白细胞直方图 处理 白细胞直方图 处理 白细胞直方图 $ 处理 血小板直方图 处理 血小板直方图 '-%#':?*+:#&8-%#':?*+:#&8 -%#':?*+:#&8 $-%#':8':#&8 -%#':8':#&8

5 期 袁施彬等 不同氧化应激模式下仔猪血细胞参数变化的比较研究 %!&' 是一种中等毒性的化合物 其对大鼠的半数致死量 6 为 # "# 在给大鼠和仔 猪腹腔注射 # "# 的 $%!&' 溶液可诱导动物氧化应激并不会引起动物死亡 本试验采用该腹腔注射剂量诱导断奶仔猪氧化应激 在注射的第 天 所有的试验猪只都呕吐 厌食 但是在 $ 后都基本恢复采食 在试验结束后 未见猪只死亡 原因可能是腹腔注射的 $%!&' 通过肠系膜迅速吸收进入血 液内 引起了试猪发生胃肠反应 本研究发现 在试验第 天和第 天 与处理 新鲜鱼油组 :,:%,% 相比 处理 氧化鱼油组 ;%$'%9 :%, % 和处理 $%!&' 组 的 )*++ 和 -.* 都降低 表明氧化应激使断奶仔猪红细胞参数发生了改变 )*+ 和 -.* 的减少 是动物发生病理学贫血的标 志 这主要是由于红细胞是血液中数量最多的有形成分 血红蛋白是红细胞的重要组成成分 而 又是血红蛋白的组成成分 另外还是过氧化氢 酶 还加氧酶和脂加氧酶的共同组成成分 可通过机体酶促抗氧化系统起到清除体内代谢产生的自由基的作用 当动物遭受氧化应激时 这些抗氧化酶的需要量和合成相对增加 血红蛋白合成量相对减少 引起造血原料 的缺乏 诱导小红细胞 性贫血 同时 在氧化应激状态下 试验猪只营养物质消化吸收效率降低 影响红细胞和血红蛋白的合成 且因氧化应激状态 细胞内生成大量的自由基 破坏生物膜 引起红细胞密度增加 柔软性 渗透性和抗机械性减低及红细胞的生物学变化 从而 加速了红细胞的衰老和死亡 血小板 项参数与其功能有良好的相关性 可间接反映血小板的功能状况 研究认为 血小板体积和数量是由巨核细胞所决定的 血小板平均体积 '(8'9& 从一个侧面反映了巨核细胞的增生代谢和血小板的生成情况 血小板分布宽度 8 '$%%&%(%$,? 是反 映血小板体积差异程度的一个参数 有研究指出 血小板生成低下时 和? 减小 60 降低 本研究发现 血小板的 项参数都降低 原因可能是氧化应激引起全身微血管病理损害使血小 板过多消耗而降低 白细胞是周围血的有核细胞 其数量显著少于红细胞 根据细胞形态 可将白细胞分为淋巴细胞 中性粒细胞和单核细胞 白细胞通过不同方式 不同机制消灭病原体 消除过敏原和参加免疫反应 产生抗体 是机体抵抗病原微生物等异物入侵的主要 防线 在本研究中 与处理 新鲜鱼油组 :, :%,% 相比 处理 氧化鱼油组 ;%$'%9 :%,% 和处理 $%!&' 组 的 6@- 降低?*+7<0 和 7 升高 对白细胞直方图分析也发现 处理 氧化鱼油组 ;%$'%9 :%,% 和处理 $%!&' 组 白淋巴细胞数量下降 中性粒细胞数量上升 淋巴细胞主要参与机体特异性免疫 本研究中淋巴细胞数量的下降 原因可能是氧化应激通过下丘脑 垂体 肾上腺轴引起肾上腺皮质激素和儿茶酚胺类物质的分泌 抑制淋巴细胞增殖和抗体的产生 从而降低了机体特异性免疫能力 但其具体作用机制还有待于进一步研究 中性粒细胞主要参与机体的非特异性免疫 它占白细胞总数的 左右 其增高与降低直接影响?*+ 的变化 中性粒细胞具有趋化 变形和黏附作用以及吞噬 杀菌等功能 在本试验中 当机体遭受氧化应激时 中性粒细胞增多 发挥非特异性免 疫 可有效的防御和抵抗病原菌的侵袭 在本试验中同时发现 7 的上升 说明单核 A 吞噬细胞系统在净化由氧化应激引起的炎性反应和外源性抗 原物质过程中发挥了一定的防御作用 脾脏是人体最大的免疫器官 具有重要的免疫功能 脾脏 功能亢进 吞噬和破坏血细胞的能力增强 本试验血细胞减少可能与脾肿大致脾功能亢进相关 还有待于进一步研究 结 论 在断奶仔猪日粮中添加 的过氧化物值 为! "# 的氧化鱼油或者于腹腔注射 # "# 的敌快死 $%!&' 都可使断奶仔猪血相发生改变 表现为红细胞参数和血小板参数下降 中性粒细胞峰上升 淋巴细胞峰下降 说明日粮中的氧化油脂或外源性的氧化剂都可诱导仔猪产生氧化应激 参考文献 $== <-%, 0,';%$%$$% ':'%(', &8%%%:'66 %8%$8;%$'%(&(,%&8'" '8,' ## & -%, $=0,';%$%$$% ':'&8#&', ;8 %(:'##( :) %('%9# *&" ) -%= '$ ',#(%:

6 动 物 营 养 学 报 卷 $%!&'%($&$%9(%%((%& $:%%( '' (:, :%8%$ 8;%$'%( '($(8%( $%&' 熊立凡 李树仁 临床检验基础 北京 人民卫生出版社 任泽林 霍启光 曾虹 氧化鱼油对鲤鱼生产性能和肌肉组织结构的影响 动物营养学报 7)+?',%(#( +7'%(''$ 黄伟坤 食品检验与分析 北京 '% (,'(# *%(#:::;%$'%9 (#,8: '( (&%($%#%%%%'($'%9%%:'(%;% $'( ( : '(%(#8%#( )) 袁施彬 陈代文 韩 飞 氧化时长对不同油脂过氧化指标的影响研究 饲料工业 袁施彬 陈代文 余 冰 韩 飞 氧化应激对断奶仔猪生产性能和养分利用率的影响 中国饲料 "&:'*'($,+-%, :::'$%',';%$%$:'(,%$8,&'($ )7(('%(:,%$'%$%$ '(8 '($,%$8;%$' %('( * +, &@+,(#? -=("&: &' #&',%( 8;%$' #( ($% &8% $%!&'%($&$;%$'%9 -).( &'+) 童一秋 医院体检化验检验技术标准规范与数据解读实用手册 吉林 吉林音像出版社,('&. )+,'( +#/0 % 吴建设 呙于明 周毓平 日粮铁缺乏对肉仔鸡机体抗氧化功能影响的研究 中国畜牧杂志 程薇莉 丁茗敏 何 嫱 老年高血压 冠心病和糖尿病患者血细胞参数的分析 中国疗养医学 赵 颖 魏 军 王志伟 脑梗塞患者 )*++ 及血小板参数变化的临床意义 临床检验杂志 )'"&'( =+%&% 7'&%( 0, ::: ' (%, $ +%(,%%'($$% &% ((' %9'&'& %("8( 8('(&,8(%9 '+)0) 张明珠 何广元 朱 红 恶性肿瘤患者放化疗前后白细胞参数变化的探讨 现在肿瘤医学 王永向 高 亮 李国成 脾脏巨噬细胞对门脉高压症脾亢及脾脏免疫功能的影响 西安医科大学学报

7 期 袁施彬等 不同氧化应激模式下仔猪血细胞参数变化的比较研究!"#$%&' +-7 '% ( '",'!()+') )&)0' ($!:::;%$'%9 ($ 8'' : '(%(#8%# &$%$': '(%(#8%# $%9%$$%(, ' (%#,8%# '($'%#($( :,, ' ( :,:%,%#&8 ;%$'%9 :%,%#&8 $%!&'#&8 0, ;8% ('$:$'0, &, $,'$ $&( %(#&8 '($, #%(%(#&8 %#(%:%'(,'(,'%(#&8/(,, $', #%( %(#&8 '($$$ &(%(#&8 %#(%:%'(,'(,'%(#&8/(,, $' $ $ &('($, #%(%(#&8 '($#&8 %#(%:%'(,'(,'%(#&8/(,, $' 0, (&:8'%(#&8 (,, $''($%(#&8 (,, $' %#(%:%'( '($%#(%:%'(,'(,'%(#&8 0, (&:,% $ %(#&8 '%#(%:%'(,%#,,'(,'(#&8 (,, $', '%9 8('# :(&8,%'($, (&:,% $ %(#&8 %#(%:%'(,%#,,'(,'(#&8 (,, $' /((&%($ 8' ' 8'8'' '($, (&:8, $'$' (:;%$%$:%,%'($$%!&' &, (&:(&8,%'%('$, ' (+8'$%,, :::;%$%$:%,%, : $%!&' (#))*)++,+ -./$;%$'%9 %#*$ 8'' ;%$'%9 :%,%%!&' +8($%(#'&, 8: '%,($%'&$&( 编辑 姚 琨

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动 物 营 养 学 报 卷! 的生物素 共 种试验日粮 表 基础日粮组成和营养水平 风干基础 8),..((.---(,-),,).98)(, 项目 #, 原料 #-,(,- 玉米.- 大豆油 4.18,-.() 膨化豆粕 :,.18,-,) 膨化大豆 :,.18,- (18(6 含 动物营养学报 圆环病毒攻击下日粮中生物素的添加水平及其对仔猪部分免疫指标及生产性能的影响 陈 宏 张克英 丁雪梅 徐志文 陈代文 四川农业大学动物营养研究所 雅安 教育部动物抗病营养重点实验室 雅安 四川农业大学生物技术中心 雅安 摘 要 本试验旨在确定猪圆环病毒 型 攻击下 玉米 豆粕型日粮中生物素的适宜添加水平及其对仔猪部分免疫指标及生产性能的影响 将 日龄断奶 抗体检测阴性的 杜 长 大 三元杂交仔猪

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