第 1 期 高 壮, 等. 海 参 脑 苷 脂 及 其 长 链 碱 基 对 肥 胖 小 鼠 脂 代 谢 和 糖 代 谢 的 影 响 61 [Keywords] Stichopus;Cerebrosides/pharmacology;Mice,obese/drugtherapy;Lipids/bloo

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1 第4 卷 第 期 年 浙 江 大 学 学 报 医 学 版 J OURNALOFZHEJ I ANGUNI VERS I TY MEDI CALS CI ENCES z j m www j V 4 N DOI 5 j 海参脑苷脂及其长链碱基对肥胖小鼠 脂代谢和糖代谢的影响 高 壮 周 鑫 胡晓倩 薛长湖 徐 杰 王玉明 中国海洋大学食品科学与工程学院 山东 青岛 66 摘 要 目的 研究海参脑苷脂 mb b S CC 及其长链碱基 b LCB 对营养性肥胖小鼠的脂质代谢的影响 方法 将 C5 BL6小鼠随机分为 4组 对照组 模型 5 SCC 和海参脑苷脂长链碱基组 5 LCB 每组 只 通过高脂 组 海参脑苷脂组 饲料建立肥胖模型 观察记录小鼠饮食及体重 喂食 4周后测定糖耐量 5周后测定脂肪组织重量 脏器指数 血清脂质及血糖含量 肝脏脂质含量 结果 经实验饲料喂食 4周后 SCC组和 LCB组 的糖耐量有明显改善 血糖浓度和脂肪组织重量降低 肝脏 TG的含量减少 与模型组比差异均有 P 5 结论 海参脑苷脂及其长链碱基对营养性肥胖小鼠糖代谢和脂 统计学意义 P 代谢具有明显的改善作用 关键词 海参 脑苷脂类 药理学 小鼠 肥胖 药物疗法 脂类 血液 体重 疾病模型 动物 中图分类号 R 5 文献标志码 A 文章编号 6 5 E mb b b m b m b m GAOZ ZHOU X HU X q XUE C XU j WANG Y m C F S T O U C Q 66 C Obj T mb b SCC Ab b LCB m b m b m M Tm b m w m b b T m w m 4 SCC LCB A 4w k w k A 5 w k b x m m x w m R C m w m S CC LCB P 5 m x P P w m P w P 5 P TGw P 5 P 5 C S mb b b m m b m b m 收稿日期 修回日期 基金项目 国家自然科学基金 5 国际科技合作项目 DFA 作者简介 高 壮 男 硕士研究生 通讯作者 王玉明 男 博士 教授 从事食品活性成分功效研究 E m w m

2 第 1 期 高 壮, 等. 海 参 脑 苷 脂 及 其 长 链 碱 基 对 肥 胖 小 鼠 脂 代 谢 和 糖 代 谢 的 影 响 61 [Keywords] Stichopus;Cerebrosides/pharmacology;Mice,obese/drugtherapy;Lipids/blood;Body weight;diseasemodels,animal [JZhejiangUniv(MedicalSci),2012,41(1):60 64.] 肥 胖 是 由 过 食 和 能 量 代 谢 紊 乱 所 引 发 的 体 内 脂 肪 过 度 蓄 积 的 疾 病, 研 究 证 实 肥 胖 与 血 脂 异 常 高 血 压 2 型 糖 尿 病 非 酒 精 性 脂 肪 肝 甚 至 肿 瘤 发 病 密 切 相 关, 是 代 谢 综 合 征 发 生 发 展 的 关 键 因 素 和 核 心 环 节, 已 成 为 人 类 健 康 的 重 大 威 胁 [1 4] 肥 胖 的 控 制 已 成 为 全 球 性 公 共 健 康 问 题 由 于 目 前 各 种 减 肥 药 都 有 一 定 的 不 良 反 应 [5], 因 此 寻 求 一 种 效 果 显 著 且 无 副 反 应 的 天 然 减 肥 的 降 脂 天 然 活 性 成 分 具 有 重 要 意 义 脑 苷 脂 又 称 酰 基 鞘 氨 醇 己 糖 苷, 是 一 种 神 经 鞘 脂 类 的 中 性 鞘 糖 脂, 由 亲 脂 性 的 神 经 酰 胺 和 亲 水 性 的 糖 基 两 部 分 组 成 其 中, 神 经 酰 胺 是 由 长 链 脂 肪 酸 中 的 羧 基 与 神 经 鞘 氨 醇 ( 又 称 长 链 碱 基 ) 的 氨 基 经 脱 水 以 酰 氨 键 相 连 形 成 的 一 类 酰 胺 类 化 合 物 [6] 海 洋 生 物 体 内 脑 苷 脂 的 研 究 始 于 十 九 世 纪 五 十 年 代 [7], 目 前 发 现 其 具 有 抗 病 毒 抗 肿 瘤 免 疫 调 节 等 多 种 活 性 [8], 已 经 引 起 国 内 外 学 者 的 广 泛 关 注 海 参 是 我 国 传 统 的 营 养 保 健 食 品, 其 中 含 有 结 构 新 颖 的 脑 苷 脂, 我 们 前 期 研 究 发 现 其 对 急 性 肝 损 伤 以 及 脂 肪 肝 具 有 明 显 的 改 善 功 能 本 研 究 考 察 了 海 参 脑 苷 脂 及 其 长 链 碱 基 对 饮 食 诱 导 肥 胖 小 鼠 的 减 肥 作 用 1 材 料 和 方 法 1.1 材 料 主 要 试 剂 海 参 脑 苷 脂 (seacucumber cerebroside,scc) 和 长 链 碱 基 (long chainbase, LCB) 由 中 国 海 洋 大 学 食 品 学 院 食 品 科 学 与 人 类 健 康 实 验 室 提 供 ;TC TG 葡 萄 糖 试 剂 盒 购 自 北 京 中 生 北 控 生 物 科 技 股 份 有 限 公 司 ; 其 它 试 剂 为 国 产 分 析 纯 实 验 仪 器 血 糖 仪,onetouchsurestep, 美 国 强 生 公 司 产 品 ; 酶 标 仪,Model680 型, 美 国 BioRAD 产 品 ; 分 光 光 度 计,UV 2550 型, 日 本 岛 津 产 品 ; 台 式 离 心 机,TGL 16G 型, 上 海 安 亭 科 学 仪 器 厂 产 品 ; 旋 转 蒸 发 仪,LABOROTA 4000 型, 德 国 Heidolph 产 品 实 验 动 物 C57/BL6 小 鼠, 雄 性, 体 重 20~22g,7 周 龄, 购 自 北 京 维 通 利 华 实 验 动 物 技 术 有 限 公 司, 许 可 证 号 :SCXK( 京 ) 方 法 动 物 分 组 及 饲 料 配 制 将 C57/BL6 小 鼠 随 机 分 为 4 组 : 低 脂 对 照 组 (lowfat,lf) 高 脂 肥 胖 组 (highfat,hf) 海 参 脑 苷 脂 组 (SCC) 海 参 长 链 碱 基 组 (LCB), 每 组 8 只 动 物 饲 料 配 方 以 AIN 76 配 方 为 基 础, 具 体 成 分 如 表 1 所 示 表 1 四 组 动 物 实 验 饲 料 的 成 分 Table1 Compositionsofexperimentaldietsfor fourgroups (n=8,g kg -1 ) 饲 料 组 分 LF 组 HF 组 SCC 组 LCB 组 酪 蛋 白 淀 粉 蔗 糖 大 豆 油 猪 油 动 物 实 验 动 物 自 由 摄 食 和 饮 水, 每 天 记 录 食 量 连 续 喂 养 5 周 室 温 (23±2),12: 12h 明 暗 交 替, 末 次 喂 食 后, 禁 食 不 禁 水 10h, 眼 球 取 血 致 死 ; 仔 细 剥 离 肝 脏 肾 脏 心 脏 肾 周 脂 肪 组 织 精 巢 上 部 脂 肪 组 织, 称 重 后 经 液 氮 速 冻, 保 存 于 -80 备 用 糖 耐 测 定 在 饲 喂 4 周 时 进 行 口 服 葡 萄 糖 耐 量 实 验 动 物 禁 食 不 禁 水 10h, 经 口 灌 胃 葡 萄 糖 (2g/kg 体 重 ) 后, 在 0h 0.5h 2h 时 间 点 从 尾 静 脉 采 集 微 量 血 液, 使 用 血 糖 仪 进 行 血 糖 测 定, 绘 制 口 服 糖 耐 曲 线, 并 按 下 式 计 算 血 糖 曲 线 下 面 积 (AUC) 血 糖 曲 线 下 面 积 =0.25 (0h 血 糖 值 +4

3 62 浙 江 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) 第 41 卷 0.5h 血 糖 值 +3 2h 血 糖 值 ) [9] 血 清 脂 质 及 血 糖 浓 度 测 定 血 液 室 温 静 置 30min 后,7000r/min 离 心 获 得 血 清, 按 试 剂 盒 说 明 测 定 TC TG 葡 萄 糖 浓 度 肝 脏 脂 质 浓 度 测 定 称 取 0.2g 肝 脏, [10] 按 Folch 等 的 方 法 提 取 总 脂 质, 参 照 试 剂 盒 以 酶 法 分 别 测 定 肝 脏 TC TG 含 量, 肝 脏 总 磷 脂 [11] (phospholipid,pl) 参 照 Bartlet 等 方 法 测 定 1.3 统 计 学 处 理 数 据 以 珋 x±s 表 示, 采 用 SPSS13.0 软 件 进 行 处 理, 多 组 间 差 异 分 析 采 用 Fisher splsd 检 验, 以 P<0.05 为 有 统 计 学 显 著 性 差 异 2 结 果 2.1 海 参 脑 苷 脂 及 长 链 碱 基 对 小 鼠 摄 食 量 体 重 及 体 脂 肪 重 量 的 影 响 高 脂 饮 食 组 体 重 增 加 量 和 内 脏 脂 肪 组 织 重 量 明 显 高 于 低 脂 饮 食 组 (P=0.0001) 同 模 型 组 相 比, 高 脂 饮 食 中 添 加 0.025% 海 参 脑 苷 脂 并 未 对 小 鼠 的 体 重 增 长 产 生 抑 制 作 用 ; 但 是, 高 脂 饮 食 中 添 加 0.025% 的 长 链 碱 基 喂 食 18d 后, 小 鼠 的 体 重 增 长 受 到 抑 制 ( 图 1) SCC 组 和 LCB 组 小 鼠 的 肾 周 脂 肪 精 巢 脂 肪 和 总 脂 肪 重 量 均 显 著 降 低, 其 中 添 加 海 参 脑 苷 脂 组 效 果 更 为 显 著 ( 表 2) 表 2 海 参 脑 苷 脂 及 长 链 碱 基 对 小 鼠 摄 食 量 和 体 重 及 体 脂 肪 重 量 的 影 响 Table2 Efectsonfoodintake,bodyweightgainandadiposeweightofSSCandLCBinmice (n=8, x±s) 珋 组 别 摄 食 量 / 体 重 肝 脏 / 体 脂 肪 /(mg g -1 体 重 ) (g d -1 ) 增 加 量 /g (mg g -1 体 重 ) 肾 脏 周 围 脂 肪 精 巢 上 部 脂 肪 内 脏 脂 肪 LF 2.86± ± ± ± ± ±0.96 HF 2.53±0.12 # 8.54±0.51 ## 37.15±0.20 ## 15.83±0.58 ## 26.10±1.09 ## 41.94±1.66 ## LCB 2.48± ± ± ± ± ±1.54 SCC 2.58± ± ± ± ± ±0.44 与 LF 组 比 较, # P<0.05, ## P<0.01; 与 HF 组 比 较, P<0.05, P<0.01. 均 有 所 上 升 给 予 海 参 脑 苷 脂 和 长 链 碱 基 基 后, 均 可 以 明 显 降 低 血 清 中 血 糖 含 量 (P= 0 001,P=0 002), 在 降 低 血 清 TG 含 量 方 面, 只 有 长 链 碱 基 组 产 生 了 明 显 的 降 低 效 果 (P= 0 019), 但 两 组 均 无 明 显 降 低 TC 的 效 果 ( 表 3) 与 HF 组 比 较, P<0.05, P<0.01(n=8). 图 1 海 参 脑 苷 脂 及 长 链 碱 基 对 小 鼠 体 重 变 化 的 影 响 Fig.1 Efectson bodyweightofscc and LCBinmice 2.2 海 参 脑 苷 脂 及 长 链 碱 基 对 小 鼠 血 清 脂 质 及 血 糖 浓 度 的 影 响 与 低 脂 饮 食 组 相 比, 高 脂 饮 食 饲 喂 的 小 鼠 血 清 中 TG TC 以 及 血 糖 含 量 表 3 海 参 脑 苷 脂 及 长 链 碱 基 对 小 鼠 血 清 脂 质 及 血 糖 含 量 的 影 响 Table3 Efects on serum lipid levels and glycemic index ofscc and LCB in mice (n=8, x±s,mmol L 珋 -1 ) 组 别 TG TC 血 糖 LF 1.15± ± ±0.36 HF 1.35±0.09 # 4.59±0.19 # 9.91±0.41 ## LCB 1.19± ± ±0.50 SCC 1.41± ± ±0.12 与 LF 组 比 较, # P<0.05, ## P<0.01; 与 HF 组 比 较, P<0.05, P<0.01.

4 第 1 期 高 壮, 等. 海 参 脑 苷 脂 及 其 长 链 碱 基 对 肥 胖 小 鼠 脂 代 谢 和 糖 代 谢 的 影 响 海 参 脑 苷 脂 及 长 链 碱 基 对 小 鼠 肝 脏 脂 质 含 量 的 影 响 高 脂 饮 食 明 显 提 高 肝 脏 中 脂 质 积 累, 肝 脏 TG 水 平 较 低 脂 对 照 组 明 显 上 升 (P= 0.032) 海 参 脑 苷 脂 和 长 链 碱 基 喂 食 后, 肝 脏 TG 水 平 均 降 至 正 常 水 平 (P=0.023,P= 0 032), 但 是 肝 脏 TC 的 含 量 没 有 发 生 明 显 变 化 ( 表 4) 表 4 海 参 脑 苷 脂 及 长 链 碱 基 对 小 鼠 肝 脏 脂 质 含 量 的 影 响 Table4 Efectsonhepaticlipidsconcentration ofsccandlcbinmice (n=8, x±s,mg g 珋 -1 ) 组 别 TG TC PL LF 28.10± ± ±0.07 HF 35.86±2.31 # 4.23± ±0.13 LCB 25.40± ± ±0.09 SCC 26.78± ± ±0.09 与 LF 组 比 较, # P<0.05; 与 HF 组 比 较, P< 海 参 脑 苷 脂 及 长 链 碱 基 对 口 服 糖 耐 的 影 响 在 灌 胃 葡 萄 糖 后 0.5h 时 血 糖 浓 度 达 到 峰 值, 其 中 高 脂 饮 食 组 海 参 脑 苷 脂 组 和 长 链 碱 基 组 小 鼠 的 血 糖 浓 度 均 明 显 高 于 低 脂 对 照 组, 而 脑 苷 脂 组 和 长 链 碱 基 组 小 鼠 血 糖 浓 度 要 低 于 高 脂 饮 食 组,2h 时 低 脂 对 照 组 海 参 脑 苷 脂 组 和 长 链 碱 基 组 的 血 糖 水 平 基 本 恢 复 正 常 低 脂 对 照 组 高 脂 模 型 组 海 参 脑 苷 脂 组 和 长 链 碱 组 糖 耐 AUC 分 别 为 (19 5±1 1)mmol/L (28 0± 1 5)mmol/L (22 5±1 9)mmol/L 和 (21 2± 1 4)mmol/L, 表 明 高 脂 饮 食 导 致 糖 耐 量 受 损, 而 饮 食 中 添 加 0 025% 海 参 脑 苷 脂 和 0 025% 长 链 碱 基 则 可 以 明 显 改 善 糖 耐 量 受 损 (P= 0 018,P=0 005), 见 图 2 3 讨 论 代 谢 综 合 征 以 脂 质 代 谢 和 糖 代 谢 异 常 为 特 征, 其 与 心 脑 血 管 疾 病 糖 尿 病 脂 肪 肝 肿 瘤 等 疾 病 的 发 生 发 展 密 切 相 关 本 实 验 利 用 高 脂 高 糖 饮 食 诱 导 的 代 谢 综 合 征 小 鼠 模 型, 评 价 了 海 参 脑 苷 脂 的 改 善 效 果, 结 果 表 明 其 具 有 明 显 的 与 LF 组 比 较, ## P<0.01; 与 HF 组 比 较, P< 0.05, P<0.01(n=8). 图 2 海 参 脑 苷 脂 及 长 链 碱 基 对 口 服 糖 耐 量 的 影 响 Fig.2 Efectson blood glucoselevelafter treatmentofsccandlcbinmice 降 低 血 糖 减 少 内 脏 脂 肪 蓄 积 的 作 用 通 过 对 肥 胖 人 群 的 研 究 发 现, 体 内 脂 肪 含 量 减 少 可 以 降 低 代 谢 综 合 征 的 发 生 风 险, 可 以 推 测, 海 参 脑 苷 脂 可 以 通 过 抑 制 体 脂 肪 含 量, 预 防 和 改 善 代 谢 综 合 征 白 色 脂 肪 组 织 过 度 蓄 积 会 产 生 炎 症 反 应, 释 放 出 大 量 炎 症 细 胞 因 子, 并 由 此 促 进 胰 岛 素 抵 抗 甚 至 代 谢 综 合 征 的 发 生 [12] 肥 胖 常 与 2 型 糖 尿 病 合 并 存 在, 表 现 为 胰 岛 素 抵 抗 和 糖 耐 量 减 低 本 研 究 发 现, 经 过 4 周 的 高 脂 高 糖 饮 食 诱 导 后, 可 观 察 到 肥 胖 小 鼠 产 生 糖 耐 量 受 损, 饮 食 中 添 加 海 参 脑 苷 脂 可 以 改 善 糖 耐 受 损 现 象, 从 而 可 有 效 降 低 2 型 糖 尿 病 的 发 病 几 率 高 脂 饮 食 还 能 引 起 小 鼠 发 生 肝 脂 肪 变 性, 据 调 查, 肥 胖 者 发 生 脂 肪 肝 的 危 险 性 较 一 般 人 群 高 4.6 倍, 而 2 型 糖 尿 病 患 者 无 论 体 重 指 数 多 少, 其 患 非 酒 精 性 脂 肪 肝 的 概 率 及 严 重 程 度 均 明 显 增 加 [13] 喂 食 海 参 脑 苷 脂 可 以 明 显 减 少 肝 脏 中 脂 质 积 累, 显 示 其 具 有 显 著 的 改 善 脂 [14] 肪 肝 活 性, 张 蓓 等 证 实, 海 参 脑 苷 脂 对 乳 清 酸 诱 导 的 非 酒 精 性 脂 肪 肝 有 着 很 好 的 预 防 和 治 疗 效 果, 这 与 本 研 究 的 结 果 是 相 一 致 的 本 研 究 还 比 较 了 长 链 碱 基 段 与 脑 苷 脂 在 活 性 方 面 的 差 异, 结 果 表 明 LCB 同 样 能 有 效 地 降 低 脂 肪 组 织 的 重 量, 甚 至 在 降 低 血 糖 改 善 糖 耐 以 及 降 低 肝 脂 方 面 的 活 性 较 脑 苷 脂 更 为 显 著,

5 64 浙 江 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) 第 41 卷 这 说 明 去 除 脑 苷 脂 中 的 脂 肪 酸 并 未 降 低 其 活 性 由 此 推 断, 脑 苷 脂 的 活 性 结 构 可 能 在 其 长 链 碱 基 段 本 研 究 为 分 析 脑 苷 脂 的 结 构 与 活 性 的 关 系 提 供 了 参 考 依 据 References: [1] GASTALDELLIA,CUSIK,PeETITIM,etal. Relationship between hepatic/visceral fat and hepaticinsulinresistanceinnondiabeticandtype2 diabeticsubjects[j].gastroenterology,2007,133 (2): [2] JEE S H,KIM H J,LEE J.Obesity,insulin resistanceandcancerrisk[j].yonseimed J, 2005,46(4): [3] FERREIRA J S,AYDOS R D.Prevalence of hypertensionamongobesechildrenandadolescents [J].CienSaudeColet,2010,15(1): [4] HOLVOET P. Relations between metabolic syndrome,oxidative stresand inflammation and cardiovascular disease [J]. Verh K Acad GeneeskdBelg,2008,70(3): [5] LIUJie,HEGuang xing,aili,etal( 刘 洁, 何 光 星, 艾 丽, 等 ).Reducingobeseroleofxindikang onfatmice[j].modernmedicine& Health( 现 代 医 药 卫 生 ),2006,22(3): (in Chinese) [6] HUAHui ming;peiyue hu( 华 会 明, 裴 月 湖 ).A surveyofthestudyoncerebrosides[j].journalof ShenyangPharmaceuticalUniversity( 沈 阳 药 科 大 学 学 报 ),2001,18(4): (inChinese) [7] CHENYing,LU Jie li,duan Jin ao,etal( 陈 颖, 吕 洁 丽, 段 金 廒, 等 ).Distribution of cerebrosidefrom aviewpointoforganicevolution andadvancesofitsbiologicalactivity[j].journal ofinternationalpharmaceuticalresearch( 国 际 药 学 研 究 ),2009,436(2): (inChinese) [8] SANGYi shu,min Zhi da( 桑 已 曙, 闵 知 大 ). Advancesinresearchofcerebroside[J].Chinese JournalofBiochemicalPharmaceutics( 中 国 生 化 药 物 ),2000,21(4): (inChinese) [9] XIAOAn hong,lushi guang( 肖 安 红, 陆 世 广 ). Efectofsuperfinedietaryfiberfrom soybeanbran onbloodglucosetoleranceindiabeticmice[j]. FoodScience( 食 品 科 学 ),2010,31(21): (inChinese) [10] KADOWAKIT,YAMAUCHIT,KUBOTA N,et al.adiponectin and adiponectin receptors in obesity linkedinsulin resistance[j].novartis FoundSymp,2007,286: [11] KADOWAKIT,YAMAUCHIT,KUBOTA N,et al.diponectinandadiponectinreceptorsininsulin resistance,diabetes,andthemetabolicsyndrome [J].JClinInvest,2006,116(7): [12] FANTUZZIG.Adipose tisue,adipokines,and inflammation[j].j Alergy Clin Immunol, 2005,115: [13] FAN Jian gao( 范 建 高 ).Metabolism Syndrome andfatyliver[j].foreignmedicalsciences EndocrineSection( 国 外 医 学 内 分 泌 分 册 ), 2002,22(5): (inChinese) [14] ZHANGBei,XUEChang hu,fengting yu,etal ( 张 蓓, 薛 长 湖, 冯 婷 玉, 等 ).Efectofsea cucumbercerebrosideonthelipidmetabolism in faty liver rats [J].Journal of Zhejiang University:MedicalSciences( 浙 江 大 学 学 报 : 医 学 版 ),2010,39(5): (inChinese) [ 责 任 编 辑 黄 晓 花 ]

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