帕金森病相关蛋白 对人骨肉瘤细胞增殖 凋亡 侵袭和迁移能力的影响李宏维, 等 155 (MG-63, Saos-2, and U2OS) and human osteoblast cell line hfo1.19 with or without deficiency in phosphatase

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1 154 中南大学学报 ( 医学版 ) J Cent South Univ (Med Sci) 218, 43(1) DOI: /j.issn 帕金森病相关蛋白 对人骨肉瘤细胞增殖 凋亡 侵袭和迁移能力的影响 李宏维, 胡旭昌, 马兵, 张海鸿 ( 兰州大学第二医院脊柱外科, 甘肃省骨关节疾病研究重点实验室, 兰州 73 ) [ 摘要 ] 目的 : 研究帕金森病相关蛋白 对人骨肉瘤细胞增殖 凋亡 侵袭和迁移的影响及其作用机制 方法 : Western 印迹检测骨肉瘤细胞株 (MG-63,Saos-2 和 U2OS) 及正常人成骨细胞株 hfo1.19 中 和第 1 号染色体上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物 (phosphatase and tensin homolog deleted from chromosome 1,PTEN) 基因的表达 sirn 处理人骨肉瘤细胞后, 采用 Western 印迹检测 的蛋白表达水平 ; 细胞计数试剂盒 (cell counting kit-8,cck-8) 法检测细胞存活率 ; 膜联蛋白 V(annexin V)- 异硫氰酸荧光素 (fluorescein isothiocyanate,fitc)/ 碘化吡啶 (propidium iodide,pi) 双染检测细胞凋亡 ;Transwell 侵袭和迁移实验检测细胞侵袭和迁移水平 结果 : 与 hfo1.19 细胞比较, 骨肉瘤细胞 蛋白表达水平显著升高 ( 均 P<.5), 其中 U2OS 细胞升高最为显著 (P<.1) sirn 可显著降低 U2OS 细胞中 蛋白表达水平 降低细胞存活率 促进细胞凋亡 抑制细胞侵袭和迁移水平, 以及增加 PTEN 蛋白表达水平 ( 均 P<.5) 另外, 与 hfo1.19 细胞比较,PTEN 在骨肉瘤细胞中的蛋白表达水平显著降低 (P<.5) 结论: 可抑制人骨肉瘤细胞增殖, 促进细胞凋亡, 抑制细胞侵袭和迁移水平, 其机制可能与增加 PTEN 蛋白的表达水平有关 [ 关键词 ] 帕金森病相关蛋白 ; 人骨肉瘤细胞 ; 增殖 ; 凋亡 ; 侵袭和迁移 Effect of Parkinson s disease-relevant protein on cell proliferation, apoptosis, invasion and migration in human osteosarcoma cells LI Hongwei, HU Xuchang, M ing, ZHNG Haihong ( Department of Spine Surgery, Second Hospital of Lanzhou University; Key Laboratory of Osteoarticular Disease in Gansu Province, Lanzhou 73, China ) STRCT Objective: To investigate the effect of Parkinson s disease related protein on the cell proliferation, apoptosis, invasion and migration in human osteosarcoma cells and the underlying molecular mechanisms. Methods: The protein expression levels of were detected in human osteosarcoma cell lines 收稿日期 (Date of reception): 第一作者 (First author): 李宏维, hongwei_lilz@163.com, ORCID: 通信作者 (Corresponding author): 张海鸿, haihongzhlz@163.com, ORCID:

2 帕金森病相关蛋白 对人骨肉瘤细胞增殖 凋亡 侵袭和迁移能力的影响李宏维, 等 155 (MG-63, Saos-2, and U2OS) and human osteoblast cell line hfo1.19 with or without deficiency in phosphatase and tensin homolog deleted from chromosome 1 (PTEN) were detected by Western blot. Osteosarcoma cells were treated with sirn, and then the protein expression levels of were detected by Western blot. Cell survival rate of osteosarcoma cells was detected by cell counting kit-8 (CCK-8) assay. Cell apoptosis of osteosarcoma cells was measured by annexin V-fluorescein isothiocyanate (FITC)/propidium iodide (PI) double staining method. Cell invasive and migration ability of osteosarcoma cells were examined by transwell invasion and migration assay. Results: Compared with that of human osteoblast cell line (hfo1.19), the protein expression level of was significantly upregulated in human osteosarcoma cell lines (MG-63, Saos-2, and U2OS) (all P<.5), and U2OS had the highest level of when compared with the other three cell lines (P<.1). sirn could significantly down-regulate the protein expression in U2OS cells, and also diminish the cell survival rate. Moreover, down-regulation of could promote cell apoptosis, suppress the ability of cell invasion and migration, and increase the PTEN protein expression level (all P<.5). In addition, the protein expression level of PTEN was markedly up-regulated in human osteosarcoma cell lines when compared with that in the hfo1.19 cells (P<.5). Conclusion: can promote the cell proliferation, inhibit cell apoptosis, and decrease the ability of cell invasion and migration, and the potential underlying mechanisms may be associated with the up-regulation of PTEN protein expression. KEY WORDS Parkinson s disease-relevant protein ; human osteosarcoma cells; proliferation; apoptosis; invasion and migration 骨肉瘤是骨科常见的原发性恶性骨肿瘤, 在儿 童和青少年中最为常见 [1] 骨肉瘤以保肢治疗为主, 包括肿瘤切除术 生物治疗和新辅助化学治疗 ( 以下 简称化疗 ) 技术, 然而目前尚无有效的治疗手段将之 [2-3] 完全治愈 研究表明 : 骨肉瘤中基因的差异性表 达不但与骨肉瘤的发生 发展和预后有关, 而且也 影响其最终治疗的效果 因此, 寻找与骨肉瘤相关 的新基因治疗靶点, 对于更好地选择治疗方法具有 极其重要的意义 癌症和帕金森病相关蛋白 是 1997 年由日本 [4] 学者 Nagakubo 等发现的一类丝裂原依赖性的癌基 因, 参与了机体内多种生理 病理活动, 包括 RN 结合功能 分子伴侣 神经保护作用 雄性不育症 和肿瘤生成过程 [5] 与人体多个部位的恶性肿瘤 的发生与发展密切相关 [6], 如肝癌 [7] 卵巢癌 [8] 肺 [9] 癌和乳腺癌 [1] [8, 11-12] 此外, 大量研究表明 : 是第 1 号染色体上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物 (phosphatase and tensin ho-molog deleted from chromosome 1,PTEN) 基因主要的抑制因子, 两者都参与了细胞 凋亡 分化和迁移 但在人骨肉瘤中, 的表达 生物学特性以及分子机制未见报道 本文拟通过研 究 对人骨肉瘤细胞增殖 凋亡 侵袭以及迁移的 影响, 探讨其分子机制 1 材料与方法 1.1 材料骨肉瘤细胞株 (MG-63,Saos-2,U2OS) 购于美国菌种保藏中心细胞库 (merican Type Culture Collection,TCC); 正常人成骨细胞株 (hfo1.19) 购买于上海中国科学院细胞库 ; 膜联蛋白 V(annexin V)- 异硫氰酸荧光素 (fluorescein isothiocyanate,fitc)/ 碘化吡啶 (propidium iodide,pi) 双染细胞凋亡检测试剂盒购自北京宝赛生物技术有限公司 ;sirn 和阴性对照 (negative control) sirn (si-nc) 购自美国 Qiagen 公司 ;Lipofectamine-2 购自美国 Invitrogen 公司 ; 青霉素 链霉素 DMEM 培养液 胰蛋白酶培养基和胎牛血清购自美国 Gibco 公司 ; 细胞计数 (cell counting kit-8,cck-8) 试剂盒 放射性免疫沉淀 (radioimmunoprecipitation,rip) 裂解液和二喹啉甲酸 (bicinchoninic acid,c) 蛋白定量试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司 ;Transwell 小室购自美国 Corning 公司 ; 兔抗人,PTEN, 甘油醛 -3- 磷酸脱氢酶 (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,

3 156 中南大学学报 ( 医学版 ), 218, 43(1) GPDH) 的一抗及二抗购自美国 bcam 公司 1.2 方法 人骨肉瘤细胞培养 骨肉瘤细胞株 (MG-63,Saos-2,U2OS) 和正常 人成骨细胞株 (hfo1.19) 采用含 1% 胎牛血清 1% 青 霉素和链霉素的 DMEM 培养基, 置于 37,5%CO 2 以及饱和湿度的培养箱中培养 待细胞汇合度达 9% 时, 用胰蛋白酶消化并传代 CCK-8 法检测 低表达对 U2OS 细胞增殖的 影响 本实验分为空白对照组 阴性对照组 (si-nc 组 ) 及 sirn 组 将人 U2OS 细胞 ( 每孔 个 /2 μl) 接种于 96 孔板, 每组设 5 个复孔,8~12 h 后按说 明书使用 lipofectamine-2 转染试剂转染细胞, 其中 sirn 组转染 sirn( 引物序列为 5'-GGTCCCGTTGCGGCCTG-3'),si-NC 组转染 阴性对照 sirn( 引物序列为 5'-GCGCTGGCT- CTTGGC-3') 另外, 空白对照组只加细胞和培养 基 细胞培养 24 h 后加入 2 μl CCK-8,37 孵育 3 h, 充分震荡 1 min 后, 在 45 nm 处测定吸光度值 实验 重复 3 次, 取平均值, 细胞活力以实验组除以对照组 的百分比表示 nnexin V-FITC/PI 双染检测 U2OS 细胞凋亡 将 U2OS 细胞 ( 每孔 个 /2 ml) 接种于 6 孔 板, 实验分组及细胞处理与 完全相同 待细胞生 长 24 h 后收集细胞, 用 PS 清洗并离心 (1 r/min, 5 min); 接着用 4 μl 1 结合缓冲液制备细胞悬浮, 细胞浓度调整为 个 /ml; 将 5 μl annexin V-FITC 加入细胞悬液 15 min 后, 再加入 1 μl PI 孵育 1 h; 最后 用流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞凋亡情况 Transwell 小室侵袭和迁移实验 在侵袭实验中,Transwell 小室背面均匀地铺上 细胞外基质胶 Matrigel 的培养液, 使小室滤膜 ( 直径 6.5 mm, 孔径 8 μm) 内表面包被细胞外基质胶 实 验分组及细胞处理与 完全相同 取细胞悬液 个 /2 μl 加入至已铺 Matrigel 胶小室的上室, 下室加入 6 μl 含 1% 胎牛血清的 DMEM 培养基 37,5% CO 2 培养 16 h, 取出 Transwell 小室, 棉签擦 去室内未转移细胞,95% 酒精固定 5 min, 结晶紫溶液 染色,PS 洗 3 遍, 显微镜下观察, 随机取 6 个视野, 细胞计数并统计结果 迁移实验的 Transwell 小室不进 行 Matrigel 胶包被, 其余实验步骤与上述侵袭实验完 全一致 每组侵袭和迁移的细胞数的相对值用实验 组除以空白对照组的百分数表示 Western 印迹检测细胞中蛋白表达 将每孔 个 /2 ml 骨肉瘤细胞 (MG-63, Saos-2,U2OS) 和 个 /2 ml hfo1.19 细胞接种 于 6 孔板, 加入含 1% 胎牛血清的 DMEM 培养 48 h 后收 集细胞, 另外收集 各组细胞 将收集到的细胞用 RIP 细胞裂解液裂解细胞并离心 ;C 法测定蛋白 浓度并定量 ; 按常规方法进行电泳 转膜 封闭, 然后分别加入 和 PTEN, 以 GPDH 一抗抗体孵育 过夜 然后加入辣根过氧化物酶标记的二抗 利用 免疫反应化学发光剂检测蛋白的表达, 以 GPDH 作 为内参 采用 Image J 软件进行蛋白定量 目的蛋白 的相对含量用目的蛋白灰度值除以内参 β-acin 灰度值 表示 1.3 统计学处理 采用 SPSS 16. 软件包对数据进行处理, 数据以 均数 ± 标准差 (x±s) 表示, 并使用单因素方差分析, 以 P<.5 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 在骨肉瘤细胞中的表达 Western 印迹结果显示 : 与 hfo1.19 细胞比较, 骨肉瘤细胞 蛋白表达水平均显著升高 ( 均 P<.5), 其中 U2OS 细胞升高的最为明显 (P<.1, 图 1) 2.2 低表达抑制 U2OS 细胞增殖 Western 印迹结果显示 : 与 si-nc 组比较, sirn 组 蛋白水平显著降低 (P<.5; 图 2,2) CCK-8 法检测结果显示 : 与 si-nc 组比较, sirn 降低 U2S 细胞存活率 (P<.5, 图 2C) 2.3 低表达促进 U2S 细胞凋亡 nnexin V-FITC/PI 双染 U2S 细胞, 流式细胞仪 检测结果显示 :si-nc 组与空白对照组细胞死亡率 基本保持不变 (P>.5) sirn 组与其他两组比 较, 细胞死亡率上升至 32%(P<.5, 图 3) 2.4 低表达抑制 U2S 细胞的侵袭和迁移水平 Transwell 侵袭和迁移实验结果显示 :si-nc 组与 空白对照组之间无明显差别 (P>.5) sirn 组 与其他两组比较, 细胞的侵袭和迁移能力明显下降 (P<.5, 图 4) 2.5 低表达促进 PTEN 蛋白表达 Western 印迹结果显示 : 空白对照组和 si-nc 组 PTEN 蛋白表达水平无明显差别 (P>.5); 而与上述 两组比较, sirn 组 PTEN 蛋白表达水平显著增 加 (P<.5, 图 5)

4 帕金森病相关蛋白 对人骨肉瘤细胞增殖 凋亡 侵袭和迁移能力的影响李宏维, 等 PTEN 在骨肉瘤细胞中的表达 Western 印迹结果显示 : 与 hfo1.19 细胞比 较, 骨肉瘤细胞中的 PTEN 蛋白表达水平显著降低 (P<.5, 图 6) GPDH hfo1.19 cells U2S cells 图 1 蛋白在骨肉瘤细胞中的表达 Figure 1 Expression of protein in osteosarcoma cells : Expression of protein by Western blot in osteosarcoma cells; : Quantitative analysis of expression of protein by Image J software. P<.5, P<.1 vs the hfo1.19 cells /GPDH hfo1.19 cells U2S cells GPDH /GPDH C Ratio of cell viability/% 图 2 低表达抑制 U2OS 细胞增殖 Figure 2 down-regulation inhibits cell proliferation in U2OS cells : Expression of ptotein by Western blot in U2OS cells transfected with sirn; : Quantitative analysis of expression of protein by Image J software; C: Cell survival of U2OS cells by CCK-8 assay. P<.5 vs the PI nnexin V Ratio of cell viability/% 图 3 低表达促进 U2S 细胞凋亡 Figure 3 down-regulation promotes U2S cell apoptosis : Cell apoptosis by flow cytometry. nnexin V/PI double staining method was used to examine cell apoptosis in U2OS cells transfected with sirn. : Quantitative analysis of cell apoptosis. P<.5 vs the

5 158 中南大学学报 ( 医学版 ), 218, 43(1) Ratio of invasion cells/% 1 5 Ratio of migration cells/% 1 5 图 4 低表达抑制 U2S 细胞的侵袭和迁移水平 Figure 4 down-regulation suppressed the cell invasive and migration ability in U2OS cells : Cell invasion by transwell invasion assay; : Cell migration by transwell migration assay. P<.5 vs the 2. GPDH PTEN/GPDH 图 5 低表达促进 U2S 细胞 PTEN 蛋白表达 Figure 5 down-regulation increases the expression of PTEN protein in U2OS cells : Protein expression level of PTEN by Western blot in U2OS cells transfected with sirn; : Quantitative analysis of expression level of PTEN protein by Image J software. P<.5 vs the 1..8 GPDH hfo1.19 cells U2S cells PIEN/GPDH hfo1.19 cells U2S cells 图 6 PTEN 在骨肉瘤细胞中的表达 Figure 6 Expression of PTEN protein in osteosarcoma cells : Expression of PTEN protein by Western blot in osteosarcoma cells; : Quantitative analysis of expression of PTEN protein by Image J software. P<.5 vs the hfo1.19 cells

6 帕金森病相关蛋白 对人骨肉瘤细胞增殖 凋亡 侵袭和迁移能力的影响李宏维, 等 讨论 本研究发现 在骨肉瘤细胞 (MG-63,Saos-2 和 U2OS) 中的蛋白表达水平显著升高, 其中在 U2OS 细 胞中升高得最为明显 (P<.1); 抑制 表达可以显 著降低 U2OS 细胞的存活率, 促进细胞凋亡, 抑制细 胞的侵袭和迁移水平, 并能增加 PTEN 蛋白表达水平 ( 均 P<.5); 另外,PTEN 在骨肉瘤细胞中的蛋白表 达水平显著降低 (P<.5), 提示 促进人骨肉瘤细 胞凋亡, 抑制增殖, 细胞侵袭以及迁移水平, 其机 制可能是与增加 PTEN 蛋白的表达水平相关 近年来 作为一种多功能蛋白, 与肿瘤的关 [13] 系引起了研究者的极大关注 研究证实 : 蛋白 在多种肿瘤组织中呈高表达, 参与肿瘤发生 发展 过程, 在临床诊断与治疗中有望成为恶性肿瘤的一 个潜在的标志物或治疗靶点 然而, 在骨肉瘤中 的表达情况未见报道 于是, 本研究采用 Western 印 迹检测了 3 种骨肉瘤细胞株 (MG-63,Saos-2 和 U2OS) 和 1 种正常人成骨细胞株 hfo1.19 中 的表达, 结果 发现 在骨肉瘤中的蛋白表达水平显著升高, 提示 差异性表达也与骨肉瘤的发生 发展有关 与许多肿瘤细胞的增殖和凋亡密切相关 Hod [14] 发现 基因在前列腺癌研究中参与调节细胞 [15] 凋亡, 并促进细胞增殖 ;Wang 等发现 过表达可 以促进喉鳞状癌细胞 SNU-46 的增殖, 并减少细胞凋 [16] 亡 ; 肖仲清等报道 : 沉默 基因表达可抑制子宫 内膜癌 Ishikawa 细胞增殖, 并促进细胞凋亡 但到目 前为止, 在骨肉瘤中的作用未见报道 因此, 作 者从检测 3 种骨肉瘤细胞系中 的表达情况分析, 发现与正常人成骨细胞株 hfo1.19 比较,U2OS 细胞 中 高表达极显著 (P<.1), 于是选取此细胞系开 展后续实验 首先采用 sirn 技术成功降低了 U2OS 细胞中 的蛋白表达水平, 然后在此基础上使用 CCK-8 和 annexin V/PI 双染研究 低表达对 U2OS 细 胞增殖和凋亡的作用 低表达不仅抑制 U2OS 细 胞增殖 (P<.5), 而且促进 U2OS 细胞凋亡 此外, 骨 肉瘤侵袭性生长和转移是大多数患者治疗失败和死 亡的最主要原因之一 [17] [18] 有研究证实 : 差异性 表达与结肠癌侵袭转移密切相关 ; 沉默 可以降低 胰腺癌细胞侵袭和迁移 [19] ; 过表达可以提高喉鳞 状癌细胞 SNU-46 的侵袭和迁移能力 [15] 同样, 作者 也发现 低表达可抑制骨肉瘤 U2OS 细胞的侵袭能 力 以上结果说明 低表达在骨肉瘤发生 发展中 发挥了重要的抑癌作用 PTEN 是最早发现的具有双重磷酸酶活性的抑 癌蛋白, 具有脂质磷酸酶和蛋白质磷酸酶双重活 性, 能够维持正常的物质代谢和内环境自稳态 在 多数恶性肿瘤中,PTEN 缺失 突变或者被抑制 [2] [21-22] 其主要功能是调节磷脂酰肌醇 3- 激酶 / 蛋白激酶 (PI3K/kt) 信号通路, 阻止细胞过度增殖, 诱导细 胞凋亡 抑制细胞迁移以及血管生成等 骨肉瘤中 PTEN 基因呈低表达 然而,PTEN 在骨肉瘤中的研 [23] 究很少 Nielsen-Preiss 等发现抑制 PTEN 可通过增 [24] 强 kt 的磷酸化水平而促进骨肉瘤细胞增殖 ;Hu 等 发现 PTEN 过表达可以减缓骨肉瘤细胞的黏附 侵袭 [8, 11-12] 与迁移能力 大量研究表明 : 是 PTEN 主要 的抑制因子, 在许多肿瘤发生 发展的过程中负调 控 PTEN, 如肝癌 卵巢癌以及膀胱癌 因此, 为了 探索 低表达抑制骨肉瘤细胞增殖, 诱导凋亡以及 抑制侵袭的分子机制, 作者检测了骨肉瘤细胞 U2OS [8, 11-12] 中 对 PTEN 蛋白表达的影响 与前人的研究 结果类似, 低表达可以上调骨肉瘤细胞 U2OS 中 PTEN 蛋白水平 此外, 还发现 PTEN 在 3 种骨肉瘤细 胞株 (MG-63,Saos-2 和 U2OS) 中呈低表达, 这与蒋正 [25] 辉等发现 PTEN 在骨肉瘤组织中呈低表达的结果类 似 以上结果提示 低表达可抑制骨肉瘤细胞增 殖 诱导凋亡以及抑制细胞侵袭, 其分子机制可能 与上调 PTEN 的蛋白表达有关 综上所述, 本研究发现 在骨肉瘤细胞中呈 高表达 低表达可通过上调骨肉瘤细胞 U2OS 中 PTEN 的表达, 进而抑制细胞增殖 诱导细胞凋亡以 及抑制细胞侵袭 相信通过对 在骨肉瘤中的功能 及其分子机制的更深入研究, 有望使其成为骨肉瘤 治疗的新靶点 参考文献 [1] 王威, 毕文志. 骨肉瘤治疗现状与展望 [ J]. 解放军医学院学报, 213, 34(2): WNG Wei, I Wenzhi. Status quo in treatment of osteosarcoma and its prospect[ J]. cademic Journal of Chinese PL Medical School, 213, 34(2): [2] Dai H, Huang Y, Li Y, et al. TSSC3 overexpression associates with growth inhibition, apoptosis induction and enhances chemotherapeutic effects in human osteosarcoma[ J]. Carcinogenesis, 212, 33(1): 3-4. [3] 沈荣凯, 林建华. 骨肉瘤基因治疗研究进展 [ J]. 中国骨肿瘤骨 病, 28, 7(3): SHNG Rongkai, LIN Jianhua. The advances of current human osteosarcoma gene therapy research[ J]. Chinese Journal of one Tumor & one Disease, 28, 7(3): [4] Nagakubo D, Taira T, Kitaura H, et al., a novel oncogene which transforms mouse NIH3T3 cells in cooperation with ras[ J].

7 16 中南大学学报 ( 医学版 ), 218, 43(1) iochem iophys Res Commun, 1997, 231(2): [5] 王娟, 谭晖, 苏埼. 在肿瘤中作用的研究进展 [ J]. 国际病理科学与临床杂志, 211, 31(6): WNG Juan, TN Hui, SU Qi. Role of gene in tumors[ J]. International Journal of Pathology and Clinical Medicine, 211, 31(6): [6] Cao J, Lou S, Ying M, et al. as a human oncogene and potential therapeutic target[ J]. iochem Pharmacol, 215, 93(3): [7] Liu S, Long G, Wei H, et al. knockdown inhibits growth and xenograftinduced tumor generation of human hepatocellular carcinoma cells[ J]. Oncol Rep, 215, 33(1): [8] Davidson, Hadar R, Schlossberg, et al. Expression and clinical role of, a negative regulator of PTEN, in ovarian carcinoma[ J]. Hum Pathol, 28, 39(1): [9] Vavougios G, Kerenidi T, Tsilioni I, et al. Pleural effusion levels of are increased in elderly lung cancer patients with malignant pleural effusions[ J]. Redox Rep, 215, 2(6): [1] Zhang GQ, He C, Tao L, et al. Role of sirn in reverse sensitivity of breast cancer cells to chemotherapy and its possible mechanism[ J]. Int J Clin Exp Pathol, 215, 8(6): [11] Kim RH, Peters M, Jang Y, et al., a novel regulator of the tumor suppressor PTEN[ J]. Cancer Cell, 25, 7(3): [12] Lee H, Choi SK, Ro JY. Overexpression of and HSP9alpha, and loss of PTEN associated with invasive urothelial carcinoma of urinary bladder: Possible prognostic markers[ J]. Oncol Lett, 212, 3(3): [13] 罗文, 董琳, 苏琦. 异常表达与肿瘤的研究进展 [ J]. 中南医学科学杂志, 213, 41(1): LUO Wen, DONG Lin, SU Qi. Research progress of abnormal expression of and Tumor[ J]. Medical Science Journal of Central South China, 213, 41(1): [14] Hod Y. Differential control of apoptosis by in prostate benign and cancer cells[ J]. J Cell iochem, 24, 92(6): [15] Wang, Qin H, Wang Y, et al. Effect of overexpression on the proliferation, apoptosis, invasion and migration of laryngeal squamous cell carcinoma SNU-46 cells through PI3K/KT/ mtor[ J]. Oncol Rep, 214, 32(3): [16] 肖仲清, 龙生根, 朱其舟, 等. 沉默 基因表达对子宫内膜癌 Ishikawa 细胞增殖及凋亡的影响 [ J]. 肿瘤, 214, 34(1): XIO Zhongqing, LONG Shenggen, ZHU Qizhou, et al. Effects of gene silencing on proliferation and apoptosis of the endometrial carcinoma cell line Ishikawa[ J]. Tumor, 214, 34(1): [17] Kubo T, Shimose S, Fujimori J, et al. Quantitative (21)thallium scintigraphy for prediction of histological response to neoadjuvant chemotherapy in osteosarcoma; systematic review and metaanalysis[ J]. Surg Oncol, 215, 24(3): [18] Lei Y, Huang K, Gao C, et al. Proteomics identification of ITG3 as a key regulator in reactive oxygen species-induced migration and invasion of colorectal cancer cells[ J]. Mol Cell Proteomics, 211, 1(1): M [19] He X, Zheng Z, Li J, et al. promotes invasion and metastasis of pancreatic cancer cells by activating SRC/ERK/uP[ J]. Carcinogenesis, 212, 33(3): [2] 沈存思, 范方田, 陶丽, 等. 抑癌基因 PTEN 与肿瘤血管生成研究进展 [ J]. 中国药理学通报, 213, 29(5): SHEN Cunsi, FN Fangtian, TO Li, et al. Research progress of Tumor Suppressor Gene PTEN and tumor angiogenesis[ J]. Chinese Pharmacological ulletin, 213, 29(5): [21] 赵欣楠, 于兆进, 魏敏杰. PTEN 与肿瘤研究进展 [ J]. 现代肿瘤医学, 212, 2(7): ZHO Xinnan, YU Zhaojin, WEI Minjie. dvances in researches of PTEN and carcinoma[ J]. Journal of Modern Oncology, 212, 2(7): [22] 颜晓静, 杨烨, 高静, 等. 基于 PTEN 信号通路的中药抗肿瘤研究进展 [ J]. 中华中医药杂志, 215, 3(9): YN Xiaojing, YNG Ye, GO Jing, et al. Progress in anti-tumor effect of traditional Chinese medicine based on PTEN signaling pathway[ J]. China Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy, 215, 3(9): [23] Nielsen-Preiss SM, Silva SR, Gillette JM. Role of PTEN and kt in the regulation of growth and apoptosis in human osteoblastic cells[ J]. J Cell iochem, 23, 9(5): [24] Hu Y, Xu S, Jin W, et al. Effect of the PTEN gene on adhesion, invasion and metastasis of osteosarcoma cells[ J]. Oncol Rep, 214, 32(4): [25] 蒋正辉, 张维康, 邵金祥, 等. Skp2 p27 和 PTEN 在骨肉瘤中表达及调控 [ J]. 临床骨科杂志, 212, 15(3): JING Zhenghui, ZHNG Weikang, SHO Jinxiang, et al. Expression and regulation of Skp2, p27 and PTEN in osteosarcoma[ J]. Journal of Clinical Orthopaedics, 212, 15(3): ( 本文编辑傅希文 ) 本文引用 : 李宏维, 胡旭昌, 马兵, 张海鸿. 帕金森病相关蛋白 对人骨肉瘤细胞增殖 凋亡 侵袭和迁移能力的影响 [ J]. 中南大学学报 ( 医学版 ), 218, 43(1): DOI: / j.issn Cite this article as: LI Hongwei, HU Xuchang, M ing, ZHNG Haihong. Effect of Parkinson s disease-relevant protein on cell proliferation, apoptosis, invasion and migration in human osteosarcoma cells[ J]. Journal of Central South University. Medical Science, 218, 43(1): DOI: /j.issn

12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL

12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL ( )2017 57 5JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2017,Vol.57No.5 11 LY294002, (, 330006) : LY294002 PI3K/AKT 0 10 15 20 25 30μmol L -1 LY294002(LY294002 ) A549,PBS CCK8 LY294002 A549 ; Westernblot

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