264 解放军医学杂志 2012 年 4 月 1 日第 37 卷第 4 期 肾小管上皮细胞 - 间充质转分化 (e p i t h e l i a l - mesenchymal transition, EMT) 在肾间质纤维化过程 中具有重要作用 [1-2] 转化生长因子 β 1 (transfo

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1 Med J Chin PLA, Vol. 37, No. 4, April 1, Wnt 阻滞剂 Dickkopf-1 对肾小管上皮细胞转分化的抑制作用 周宝尚, 张璟, 陶光利 [ 摘要 ] 目的研究 Wnt 阻滞剂 Dickkopf-1(Dkk-1) 对转化生长因子 β 1 (TGF-β 1 ) 诱导的肾小管上皮细胞 - 间充质转分化 的影响 方法 体外培养人近端肾小管上皮细胞 (HKC), 收集后分 3 组 : 对照组细胞以含 10% 胎牛血清的培养基常规培 养,TGF-β 1 组在常规培养基中加入 TGF-β 1 ( 终浓度 20ng/ml),TGF-β 1 +Dkk-1 组同时加入 TGF-β 1 ( 终浓度 20ng/ml) 和 Dkk- 1( 终浓度 100ng/ml) 培养 48h 后在倒置相差显微镜下进行形态观察, 分别采用 RT-PCR 和 Western blotting 检测 Wnt4 β-catenin E-cadherin α-sma mrna 及蛋白表达情况, 细胞免疫荧光染色观察 E-cadherin 和 α-sma 的表达 结果 与对照组比较,TGF-β 1 组和 TGF-β 1 +Dkk-1 组 Wnt4 mrna 和蛋白表达水平均显著增高 (P<0.05), 后两组间差异无统计 学意义 (P>0.05) β-catenin mrna 表达在各组之间差异无统计学意义 (P>0.05) β-catenin 蛋白在对照组呈低表达, TGF-β 1 组表达明显上调,TGF-β 1 +Dkk-1 组较 TGF-β 1 组表达下调 (P<0.05), 与对照组比较差异无统计学意义 (P>0.05) E-cadherin mrna 和蛋白在对照组呈高表达,TGF-β 1 组表达明显降低,TGF-β 1 +Dkk-1 组较 TGF-β 1 组表达显著增高 (P<0.05), 与对照组比较差异无统计学意义 (P>0.05) α-sma mrna 和蛋白表达在对照组和 TGF-β 1 +Dkk-1 组的表达 均较 TGF-β 1 组明显降低 (P<0.05) 细胞免疫荧光染色显示 E-cadherin 和 α-sma 表达与 RT-PCR 和 Western blotting 检测结 果一致 结论 Wnt 阻滞剂 Dickkopf-1 能抑制 TGF-β 1 诱导的肾小管上皮细胞转分化 [ 关键词 ] Wnt 信号通路 ;dickkopf-1 蛋白 ; 上皮细胞 - 间充质转分化 [ 中图分类号 ] R692 [ 文献标志码 ] A [ 文章编号 ] (2012) The inhibitory effect of Wnt antagonist Dickkopf-1 (Dkk-1) on transdifferentiation of renal tubular epithelial cells ZHOU Bao-shang, ZHANG Jing *, TAO Guang-li Department of Nephrology, Xinqiao Hospital, Third Military Medical University, Chongqing , China * Corresponding author, zjcqs@yahoo.com.cn [Abstract] Objective To investigate the effects of the Wnt antagonist Dickkopf-1(Dkk-1) on epithelial mesenchymal transdifferentiation in human proximal tubular epithelial cells induced by transforming growth factor-β 1 (TGF-β 1 ). Methods Human proximal tubular epithelial cells (HKC) were cultured in vitro and divided into three groups as follows: control group, TGF-β 1 group, and TGF-β 1 +Dkk-1 group. The cells in the control group underwent routine culture with medium containing 10% fetal calf serum. For the TGF-β 1 group, TGF-β 1 (final concentration 20ng/ml) was added into the routine culture medium. For TGFβ 1 +Dkk-1 group, TGF-β 1 (final concentration 20ng/ml) and Dkk-1(final concentration 100ng/ml) were added at the same time. After cultured for 48h, we performed morphologic observation using an inverted contrast microscope. RT-PCR and Western blotting were adopted to detect the expressions of Wnt4, β-catenin, E-cadherin, and α-sma mrna. E-cadherin and α-sma expressions were detected by cell immunofluorescence. Results Compared with control group, the mrna expression of Wnt4 and the protein expression of Wnt4 were significantly increased in TGF-β 1 and TGF-β 1 +Dkk-1 groups (P<0.05). There was no significant difference between two groups (P>0.05). There was no obvious difference between each group in mrna expression of β-catenin (P>0.05). The β-catenin protein exhibited low expression in control group, whereas the expression significantly increased in TGF-β 1 group. The expression of β-catenin in TGF-β 1 +Dkk-1 group was lower than that in TGF-β 1 group (P<0.05), but there was no significant difference between TGF-β 1 +Dkk-1 group and control group (P>0.05). The mrna and protein expression of E-cadherin were high in control group, but were significantly decreased in TGF-β 1 group. Their expressions in the TGF-β 1 +Dkk-1 group were increased compared with that in TGF-β 1 group (P<0.05), however, there was no significant difference compared with control group (P>0.05). The mrna and protein expression of α-sma were decreased in control and TGF-β 1 +Dkk-1 groups, compared with TGF-β 1 group (P<0.05). Immune fluorescent staining showed that the expression of E-cadherin and α-sma were consistent with the results of RT-PCR and Western blotting. Conclusion Wnt antagonist Dickkopf-1(Dkk-1) can inhibit epithelial mesenchymal transdifferentiation induced by TGF-β 1. [Key words] Wnt signaling pathway; dickkopf-1 protein; epithelial-mesenchymal transition [ 作者简介 ] 周宝尚, 硕士研究生 主要从事肾脏纤维化方面的研究 [ 作者单位 ] 重庆第三军医大学新桥医院肾内科 全军肾脏病中心 重庆市肾病研究所 ( 周宝尚 张璟 陶光利 ) [ 通讯作者 ] 张璟, zjcqs@yahoo.com.cn

2 264 解放军医学杂志 2012 年 4 月 1 日第 37 卷第 4 期 肾小管上皮细胞 - 间充质转分化 (e p i t h e l i a l - mesenchymal transition, EMT) 在肾间质纤维化过程 中具有重要作用 [1-2] 转化生长因子 β 1 (transforming growth factor-β 1,TGF-β 1 ) 是引起肾小管上皮发生 转分化最重要的细胞因子之一 [3] Wnt 信号转导通 路在调控细胞的黏附 迁移 上皮 - 间质转化 生 长 分化 凋亡, 以及胚胎发育 器官发生和维 持组织器官内环境稳定中具有重要作用 [4] 近年 来研究表明,Wnt 信号通路在肾间质纤维化的发生 发展中起着重要作用 [5], 但 Wnt 信号通路是否参与 TGF-β 1 诱导的肾小管上皮转分化目前未见报道 本 研究利用 Wnt 阻滞剂 Dickkopf-1(Dkk-1) 处理 TGF-β 1 诱导的肾小管上皮细胞, 观察其对 TGF-β 1 诱导的肾 小管上皮转分化的作用 1 材料与方法 1. 1 材料人近端肾小管上皮细胞株 ( h u m a n proximal tubular epithelial cells,hkc) 由协和医科大学郑法雷教授惠赠 TGF-β 1 Dkk-1(PeproTech, 美国 ),DME M/F12(1:1) 培养基 标准胎牛血清 (Hyclone, 美国 ) RNA 提取试剂盒 RT-PCR 试剂和引物 (TaKaRa, 日本 ) 引物序列和扩增长度如下 Wnt4: 上游 5'-CTTCGTGTACGCCATCTCTTC-3', 下游 5'-AACTTCTCCTTCAGTGCGTGAC-3', 扩增长度 384bp;β-catenin: 上游 5'-GTGGATACCTCCCAAGTC CTGTA-3', 下游 5'-CTGGTCCTCGTCATTTAGCAG T-3', 扩增长度 327bp;E-cadherin: 上游 5'-CCACATA CACTCTCTTCTCTCACG-3', 下游 5'-TGACCACAC TGATGACTCCTG T-3', 扩增长度 312bp;α-SMA: 上游 5'-AGGCGGTGCTGTCTCTCTATG -3', 下游 5'-CCATCAGGCAACTCGTAACTCT-3', 扩增长度 325bp;β-actin: 上游 5'-CGGGAAATCGTGCGTGAC- 3', 下游 5'-GAAGGAAGGCTGGAAGAGTG-3', 扩增长度 184bp Wnt4 E-cadherin 一抗 (Santa Cruz, 美国 ),β-catenin α-sma 一抗 ( 博奥森, 北京 ),Cy3 Cy5 标记二抗 ( 碧云天, 北京 ),ECL 蛋白印迹试剂盒 (Pierce, 美国 ) 1.2 细胞培养及分组用含 10% 胎牛血清的 DMEM/ F12(1:1) 培养基在 37 5%CO 2 条件下培养 HKC 细胞, 每 2~3d 换液, 至 80% 融合时消化传代 ; 实验前正常传代至 60% 密度 实验分 3 组 (n=5): 对照组, 细胞用含 10% 胎牛血清的培养基常规培养至实验结束 ; TGF-β 1 组, 在常规培养基中加入 TGF-β 1, 使其终浓度为 20ng/ml [6] ;TGF-β 1 +Dkk-1 组, 在常规培养基中同时加入 TGF-β 1 和 Dkk-1, 终浓度分别为 20ng/ml 和 100ng/ml [7] 各组细胞培养 48h 后在倒置相差显微镜下观察形态, 随后进行后续检测 1.3 RT-PCR 检测 Wnt4 β-catenin E-cadherin 和 α- SMA 的 mrna 表达取各组细胞, 按 RNA 提取试剂说明书提取总 RNA, 检测浓度及 A 260 /A 280, 取 1μg 进行反转录, 取转录后 cdna 进行扩增 反应条件 :94 3min;94 30s 55~58 30s 72 45s,30 个循环 ;72 5min 取扩增产物 5μl 行 1.5% 琼脂糖凝胶电泳, 凝胶成像系统成像并对电泳条带进行分析, 相对表达量用各基因 mrna 条带密度与 β-actin 的密度值之比计算 1.4 细胞免疫荧光染色检测 E-cadherin 和 α-sma 的表达取状态良好的 HKC 细胞传代接种于铺有盖玻片的 12 孔培养板中, 至 60% 密度时按各分组预设条件处理 继续培养 48h 后,PBS 清洗 2~3 次,4% 多聚甲醛固定 20min, 含 TritonX-100 洗涤液漂洗 3 次后血清封闭,E-cadherin 一抗 37 孵育 4h, 漂洗 3 次后 Cy5 标记二抗 37 孵育 2h, 同样条件孵育 α-sma 及其 Cy3 标记二抗, 漂洗 3 次后 DAPI 染核 5min, 漂洗 3 次, 抗荧光淬灭封片剂封片, 激光共聚焦显微镜观察荧光 E-cadherin 阳性表达为绿色荧光,α-SMA 阳性表达为红色荧光 1. 5 We s t e r n b l o t t i n g 检测 Wn t 4 β - c a t e n i n E-cadherin 和 α-sma 的蛋白表达取细胞用 PBS 清洗 3 次, 按说明书步骤提取细胞总蛋白 取少量用 BCA 法测定蛋白浓度, 剩余蛋白加上样缓冲液煮沸 5min, 每孔 50μg 上样, 半干电转法转移至 PVDF 膜,5% 脱脂牛奶封闭 1h,TBST 漂洗 3 次,Wnt4 β-catenin E-cadherin α-sma 一抗按说明书比例稀释后 4 孵育过夜,TBST 漂洗 3 次,HRP 标记抗兔或抗鼠二抗 37 孵育 2h,TBST 漂洗 3 次,ECL 试剂盒于凝胶成像系统曝光 采集图像, 测定积分光密度值 (IOD), 以各蛋白 IOD 与 β-actin IOD 的比值作为蛋白的相对含量 1.6 统计学处理采用 SPSS 13.0 软件进行统计分析, 计量数据以 x±s 表示, 多组间比较采用单因素方差分析, 两组间比较采用 LSD-t 法,P<0.05 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 细胞形态对照组细胞间连接紧密, 呈鹅卵石样生长 TGF-β 1 组中细胞间隙明显增加, 部分细胞与周围细胞脱离, 形态由鹅卵石形转变为梭形 TGFβ 1 +Dkk-1 组细胞大部分恢复为鹅卵石样, 但仍有少部分为梭形, 细胞脱离黏附的现象也有所减少 ( 图 1) 2. 2 Wnt4 β-catenin E - cad her in 和 α- SM A 的 m R N A 表达情况 Wn t 4 m R N A 在对照组几乎没有表达 ( ±0.009), 而在 TG F -β 1 组和 TG F - β 1 +Dkk-1 组显著上调 (0.836±0.028,0.805±0.021,

3 Med J Chin PLA, Vol. 37, No. 4, April 1, P<0.05), 后两组间差异无统计学意义 (P>0.05) β-catenin mrna 表达在对照组 TGF-β 1 组和 TGFβ 1 +Dkk-1 组间差异无统计学意义 (0.739±0.031, 0.741±0.047,0.794±0.036,P>0.05) E - c a d h e r i n m R N A 在对照组呈高表达 ( ± ), 在 T G F - β 1 组表达显著降低 (0.372±0.018,P<0.05), 而在 TGF-β 1 +Dkk-1 组的表 达较 TGF-β 1 组明显上调 (0.871±0.033,P<0.05), 与对照组比较差异无统计学意义 ( P > ) α-sma mrna 在对照组表达很低 (0.113±0.016), TGF-β 1 组表达显著上调 (0.715±0.041,P<0.05), T G F - β 1 + D k k - 1 组表达较 T G F - β 1 组明显下调 (0.193±0.014,P<0.05), 与对照组比较差异无统 计学意义 (P>0.05, 图 2) 2.3 免疫荧光染色检测 E-cadherin 和 α-sma 表达情 况 细胞免疫荧光结果显示 :E-cadherin 在对照组 呈现明亮的绿色荧光,TGF-β 1 组绿色荧光表达显 著降低, 而在 TGF-β 1 +Dkk-1 组绿色荧光的表达较 TGF-β 1 组明显增强 ;α-sma 在对照组则几乎没有 荧光,TGF-β 1 组呈现明亮的红色荧光, 而在 TGFβ 1 +Dkk-1 组红色荧光明显减弱 ( 图 3) 2.4 Wnt4 β-catenin E-cadherin 和 α-sma 蛋白表 达情况 Western blotting 结果显示,Wnt4 蛋白在对 照组几乎没有表达, 而在 TGF-β 1 组和 TGF-β 1 +Dkk-1 组表达显著上调 (P<0.05, 图 4) β-catenin 在对照 组呈低水平表达, 在 TGF-β 1 组表达显著升高, 而 在 TGF-β 1 +Dkk-1 组表达明显下降 ( 与 TGF-β 1 组比, P<0.05, 图 4) E-cadherin 在对照组呈高表达, 在 TGF-β 1 组表达显著下降, 在 TGF-β 1 +Dkk-1 组表达显 著升高 ( 与 TGF-β 1 组比较,P<0.05, 图 4) α-sma 蛋白表达趋势与 E-cadherin 相反, 在对照组呈低水 平表达, 在 TGF-β 1 组表达上调, 在 TGF-β 1 +Dkk-1 组 表达明显降低 ( 与 TGF-β 1 组比较,P<0.05, 图 4) 3 讨论 肾脏纤维化是各种不同病因的慢性肾脏疾病进 行性发展的共同通路, 也是导致终末期肾病的主要病 理基础 肾脏纤维化是指在各种致病因子作用下, 间 质细胞及细胞基质增多, 基质降解受抑制, 造成细胞 外基质 (extracellular matrix,ecm) 大量堆积, 导致肾小 球硬化和小管间质纤维化 ECM 主要由系膜细胞和成 纤维细胞激活以及肾小管上皮细胞 EMT 而来 [1-2], 其 中肾小管上皮细胞 EMT 占 30%~50%, 说明 EMT 在肾 小管间质纤维化中发挥重要作用 [8] 近年来的研究表 图 1 HKC 细胞的形态 ( 倒置相差显微镜 200) Fig. 1 Morphology of HKC cells (Inverted phase contrast microscope 200) A, B and C represents control group, TGF-β 1 group and TGF-β 1 +Dkk-1 group, respectively Wnt4 (384bp) β-catenin (327bp) E-cadherin(312bp) α-sma (325bp) 图 2 Wnt4 β-catenin E-cadherin 和 α-sma 的 mrna 表达情况 Fig. 2 mrna expressions of Wnt4, β-catenin, E-cadherin and α-sma A, B, C and D represents mrna expression of Wnt4, β-catenin, E-cadherin and α-sma, respectively; 1, 2 and 3 represents control group, TGF-β 1 group and TGF-β 1 +Dkk-1 group, respectively

4 266 解放军医学杂志 2012 年 4 月 1 日第 37 卷第 4 期 E-cadherin α-sma Nuclear Merge TGF-β 1 +DKK-1 group TGF-β 1 group Control group Relative integrating optical density 图 3 细胞免疫荧光检测 E-cadherin 和 α-sma 的表达情况 ( 激光共聚焦显微镜 200) Fig. 3 Intracellular immunofluorescence images of E-cadherin and α-sma (Confocal laser scanning microscope 200) Wnt4 Control TGF-β 1 TGF+β 1 +Dkk-1 Control TGF-β 1 TGF+β 1 +Dkk-1 40kD E-cadherin 120kD β-catenin 92kD α-sma 42kD β-actin 42kD β-actin 42kD Relative integrating optical density 图 4 Fig. 4 Wnt4 β-catenin E-cadherin α-sma 2.0 (2) Relative integrating optical density 0 Control TGF-β 1 TGF+β 1 +Dkk-1 Control TGF-β 1 TGF+β 1 +Dkk-1 Wnt4 β-catenin E-cadherin 和 α-sma 的蛋白表达情况 Protein expressions of Wnt4, β-catenin, E-cadherin and α-sma P<0.05 compared with control group; (2)P<0.05 compared with TGF-β 1 group (2) (2) 明,TGF-β 1 是肾脏纤维化的核心诱导因子之一, 主要 通过 TGF-β 1 /Smad 信号启动并调节肾小管上皮转分化 为肌成纤维细胞, 进入间质形成 ECM, 导致肾间质纤 维化的进行性发展 [3] 因此, 研究肾小管上皮细胞转 分化的机制具有重要意义 [9] Nusse 等在用小鼠乳头瘤病毒 (mouse mammary tumor virus,mmtv) 诱导小鼠乳腺癌的过程 中发现了 Wnt 基因 Wnt 信号通路是一条在生物进 化中极为保守的通路, 调控机体的许多生命过程, 其主要成员包括 Wnt 蛋白家族 Frizzled/ 低密度脂蛋白受体相关蛋白 (Fz/LRP) 胞质内的 Dishevelled 蛋白 (Dsh) β- 环连蛋白 (β-catenin) 糖原合成激酶 -3β(glycogen synthase kinase-3β,gsk-3β) 支架蛋白 axin/conductin 结肠腺瘤性息肉病基因蛋白 (adenomatous polyposis coli,apc) 和 T 细胞因子 / 淋巴增强因子 (T cell factor/lymphoid enhancer factor, TCF/LEF) 转录因子家族 [10] Wnt 信号被激活后, 分泌到胞外的 Wnt 与跨膜受体 Lrp5/Lrp6 以及 Fz 结合

5 Med J Chin PLA, Vol. 37, No. 4, April 1, 形成复合物并激活受体, 进而激活胞内的 Dsh, 导 致 GSK-3β 活性受抑制, 使其从 a x in 上脱落, 阻止 β-catenin 降解复合体 ( 主要由 axin APC GSK-3β 构成 ) 的形成, 从而阻止 β-catenin 磷酸化和降解, β-catenin 在胞质大量堆积并入核, 与 TCF/LEF 转录 因子家族结合发挥作用 [11] 虽然 Wnt 信号通路在胚胎发育 器官形成等过 程中发挥重要作用, 但正常机体肾脏 Wnt 信号通路 处于沉默状态, 胞质中仅有少量 β-catenin 表达, 且 绝大部分在胞膜处与 E-cadherin 形成复合体, 对维 持同型细胞黏附 防止细胞迁移发挥作用 [12] 在本 研究中,Wnt4 mrna 和蛋白表达水平检测结果均提 示, 正常体外培养的肾小管上皮细胞中 Wnt 基因是 沉默的 虽然 β-catenin mrna 表达较高, 但其蛋白 表达却很低, 说明在 Wnt 信号通路未被激活的情况 下,β-catenin 蛋白的表达水平可能不是取决于合成 水平, 而是依赖于正常发挥功能的降解途径 当 Wnt 信号通路被激活后,β-catenin 降解复合 体功能不能正常发挥作用, 从而导致 β-catenin 在胞 质堆积 入核, 激活下游靶基因, 致使纤维化基 [4] 因表达 Surendran 等利用单侧输尿管结扎的方法 制作大鼠小管间质性肾纤维化模型, 发现 Wnt4 在 集合管中有表达, 伴随集合管周围纤维化形成, 间 质成纤维细胞的 Wnt4 高表达与 Ⅰ 型胶原及 α-sma [5] 的高表达一致 ;He 等在单侧输尿管结扎大鼠肾 脏纤维化模型中发现多种 Wnt 信号通路及靶基因 蛋白 Wnt(1,2,2b,3,3a,4,5a,6,7a,7b, 8a,9a,16) FZD(3,10) Twist β-catenin TCF/LEF 纤连蛋白 (fibronectin) MMP-7 等均有 不同程度升高 本研究证明, 用 TGF-β 1 刺激人肾 小管上皮细胞, 不但能诱导 Wnt4 mrna 和蛋白表 达升高, 而且可进一步引起 β-catenin 在细胞质内堆 积 本研究同时检测了两个肾小管上皮转分化的 重要指标 E-cadherin 和 α-sma, 在对照组 E-cadherin 呈高表达,α-SMA 表达量很低, 而用 TGF-β 1 刺激 后,β-catenin 表达升高,E-cadherin 表达明显降低, α-sma 表达明显升高 说明 Wnt 信号通路激活后, β-catenin 在胞质内堆积 入核, 能够影响下游基因 转录, 从而引起肾小管上皮细胞转分化 Dkk s 蛋白是 Wnt 辅助受体 LRP5/6 的阻滞剂, 具有抗肾脏纤维化的潜能 因此, 运用阻滞剂阻 滞 Wnt 信号通路对抑制下游靶基因具有重要意义 [ 7 ] Z h u 等研究发现, 培养的间充质干细胞释放的 Dkk-1 可明显降低肿瘤细胞的侵袭和运动能力, 并 可诱导 β-catenin 表达及定位发生改变及增加细胞间 [13] 黏附 Dai 等研究发现 Dkk-1 可明显抑制阿霉素处 理大鼠的 Wnt/β-catenin 信号通路, 减轻蛋白尿及肾 脏纤维化 本研究应用 Dkk-1 处理 TGF-β 1 诱导的人肾小管上皮细胞, 结果显示阻滞后 β-catenin 表达明显下调, 提示 Wnt 信号被阻断后 β-catenin 降解复合体恢复生物学功能, 维持 β-catenin 的低水平表达 同时, 本研究检测发现 E-cadherin 表达显著上升, 而 α-sma 表达明显下降, 提示 Dkk-1 阻滞后人肾小管上皮细胞的转分化受到抑制 综上, 应用 TGF-β 1 诱导肾小管上皮细胞转分化时,Wnt 信号通路相关蛋白表达增加,Dkk-1 阻滞 Wnt 信号通路能抑制肾小管上皮细胞转分化 但 Wnt 信号通路激活后引起的 β-catenin 大量堆积是如何引起下游靶基因表达及其作用机制仍不清楚, 下一步我们将继续研究 参考文献 [1] Wang LH, Wu GL, Zhang LX, et al. p38 MAPK pathway in highglucose induced activation of rat mesangial cells[ J]. Med J Chin PL A, 2009, 34(2): [ 王丽晖, 吴广礼, 张丽霞, 等. p38mapk 信号途径在高糖诱导的大鼠肾系膜细胞中激活的意义 [ J]. 解放军医学杂志, 2009, 34(2): ] [2] Eddy AA. Molecular basis of renal fibrosis[ J]. Pediatr Nephrol, 2000, 15(3/4): [3] Rhyu DY, Yang Y, Ha H, et al. Role of reactive oxygen species in TGF-betal-induced mitogen-activated protein kinase activation and epithelial-mesenchymal transition in renal tubular epithelial cells[ J]. J Am Soc Nephrol, 2005, 16(3): [4] Surendran K, Schiavi S, Hruska KA. Wnt-dependent betacatenin signaling is activated after unilateralureteral obstruction and recombinant secreted frizzledrelated protein 4 alters the progression of renal fibrosis[ J]. J Am Soc Nephrol, 2005, 16(8): [5] He W, Dai C, Li Y, et al. Wnt/beta-catenin signaling promotes renal interstitial fibrosis[ J]. J Am Soc Nephrol, 2009, 20(4): [6] Zhang J, Zhuo WL, Wang Y, et al. Inhibitory effects of RNAi targeting thymosin β4 on human renal tubular epithelialmyofibroblast transdifferentiation induced by TGF-β1[ J]. Med J Chin PLA, 2008, 33(9): [ 张璟, 卓文磊, 王彦, 等. RNA 干扰阻滞胸腺素 β 4 表达对 TGF-β 1 诱导人肾小管上皮 - 肌成纤维细胞转分化的抑制作用 [ J]. 解放军医学杂志, 2008, 33(9): ] [7] Zhu Y, Sun Z, Han Q, et al. Human mesenchymal stem cells inhibit cancer cel l proliferation by secreting DKK-1[ J]. Leukemia, 2009, 23(5): [8] Zeisberg EM, Potenta SE, Sugimoto H, et al. Fibroblasts in kidney f ibrosis emerge via epithelial to mesenchy mal transition[ J]. J Am Soc Nephrol, 2008, 19(12): [9] Nusse R, Varmus HE. Many tumors induced by the mouse mammary tumor virus contain a provirus integrated in the same region of the host genome [ J]. Cell, 1982, 31 : [10] Gordon MD, Nusse R. Wnt signaling : multiple pathways, multiple receptors, and multiple transcription factors[ J]. J Biol Chem, 2006, 281 (32): [11] Mi K, Dolan PJ, Johnson GV. The low density lipoprotein receptor related protein 6 interacts with glycogen synthase

6 268 解放军医学杂志 2012 年 4 月 1 日第 37 卷第 4 期 kinase 3 and attenuates activity[ J]. J Biol Chem, 2006, 281(8): [12] He X. Cilia put a brake on Wnt signaling [ J]. Nat Cell Biol, 2008, 10: [13] Dai C, Stolz DB, Kiss LP, et al. Wnt/beta-catenin signaling promotes podocyte dysfunction and albuminuria[ J]. J Am Soc Nephrol, 2009, 20(7): ( 收稿日期 : ; 修回日期 : ) ( 责任编辑 : 张小利, 沈宁 )

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